Provberedning med ultraljud för THC-analys
- Ultraljudsextraktion är en beprövad metod för framställning av THC, men kan också användas för analytiska ändamål.
- Ultraljudsbehandling är en vanlig provberedningsmetod för analys av den totala halten THC i cannabisprodukter.
- Proverna extraheras med ultraljud före TLC-, GC- och HPLC-analys.
THC-extraktion med ultraljud
THC, eller tetrahydrocannabinol (delta-9-tetrahydrocannabinol), är det kemiska ämne som orsakar de flesta av marijuanans psykiska effekter. För cannabisarten är fler än 400 olika sorter kända. Beroende på den specifika cannabissorten kan cannabis innehålla så lite som 0,3 vikt% THC. I andra sorter kan THC-halten nå upp till 20 vikt%.
Även de olika cannabisprodukterna varierar avsevärt: den genomsnittliga THC-koncentrationen i marijuana ligger mellan 1 och 5%; i hasch är THC-halten mellan 5 och 15%, och i hascholja är den i genomsnitt 20%. THC-innehållet i marijuanadoser för rekreationsbruk varierar kraftigt, och ju lägre THC-halten i marijuanan är, desto mer måste användaren konsumera för att uppleva de önskade effekterna.
Provberedning med ultraljud används för att analysera THC-halten
- för kvalitetskontroll av THC-produkter för rekreationsbruk,
- för kvalitetsbestämning av farmaceutiska THC-produkter,
- för att skilja mellan droghampa och fiberhampa.
För THC-analys används vanligen följande kromatografiska metoder: tunnskiktskromatografi (TLC), gaskromatografi (GC) och högpresterande vätskekromatografi (HPLC)
Protokoll för provberedning med ultraljud för TLC-analys
Provberedning: Vid beredning av proverna måste det torkade växtmaterialet macereras och malas till ett homogent pulver. För ultraljudsextraktionen blandas 500mg cannabisväxtpulver och 5mL metanol-kloroformblandning (förhållande 9 : 1) i en provflaska. Ultraljudsbehandling kan utföras med en ultraljudsprocessor med mikrospets, med VialTweeter eller med ultraljudssystemet CupHorn. Ultraljudsbehandlingen tar cirka 5 min. Låt därefter provet vila i minst 5 min. Späd den klara supernatanten med extraktionsblandningen (v/v: 1 : 10). Fritt THC: 1μL på TLC-plattan
Dekarboxylering: 100μL av extraktet indunstas till torrhet. Återstoden värms vid 180℃ i 4 min. Tillsätt 500μL metanol-kloroform (v/v 9 : 1). Behandla med ultraljud i 5 min. Späd den klara supernatanten med extraktionsblandningen (v/v: 1 : 10).
Kalibrering: 20ng, 60ng, 100ng, 140ng
HPTLC:
TLC-kiselgel F-254, Merck 5729
TLC-skanner II, programvara CATS3, Camag Muttenz Eluent:
Etylacetat : Toluen : Kloroform = 3 : 17 : 0,25 (v/v/v)
Postkromatografisk derivatisering: Fast Blue-salt 0,1% i 0,1 M NaOH
Densitometri vid 550 nm
Tetrahydrocannabinol (Δ9-THC) för analys och extraktion
Protokoll för provberedning med ultraljud för GC-analys
Provberedning: Det torkade växtmaterialet macereras och mals till ett homogent pulver. För extraktionen blandas 500mg cannabisväxtpulver och 10mL metanol-hexanblandning (förhållande 9 : 1) i en provflaska. Ultraljudsbehandling kan utföras med en ultraljudsapparat med sond med mikrospets, med VialTweeter eller med ultraljudssystemet CupHorn. Behandla provet med ultraljud i 15–20 min. Skaka provet och låt det vila i minst 5 min. Späd den klara supernatanten med extraktionsblandningen (v/v 1: 20).
Dekarboxylering: i insatsen
Injektortemperatur 250℃
Kalibrering: 5 ng/μL till 250 ng/μL
GC: HP 6890 med 5973 MSD och 7683 automatisk provtagare, injektion: 1μL, splitless-tid: 2 min.
Kolonn: HP-5 MS, 30m, diameter 250 μm, filmtjocklek 0,25 μm
Bärgas: He, 35 psi, konstant flöde: 4 mL/min.
Ugn: 100℃ i 1min.; temperaturökning med 15℃ /min. till 280℃; 280℃ i 5 min. MSD: SCAN: m/e 35 – 550
Protokoll för provberedning med ultraljud för HPLC-analys
Provberedning (motsvarande GC-beredning): Det torkade växtmaterialet macereras och mals till ett homogent pulver. För extraktionen blandas 500mg cannabisväxtpulver och 10mL metanol-hexanblandning (förhållande 9 : 1) i en provflaska. Ultraljudsbehandling kan utföras med en ultraljudsprocessor med sond med mikrospets, med VialTweeter eller med ultraljudssystemet CupHorn. Behandla provet med ultraljud i 15–20 min. Skaka provet och låt det vila i minst 5 min. Späd den klara supernatanten med extraktionsblandningen (v/v 1: 20).
VialTweeter för provberedning med ultraljud
Förkolonn: LiChrospher 60, RP-Select B, 5μm (Merck 50963)
Kolonn: LiChroCart 125-4, Lichrospher 60, RP-Select B, 5 μm (Merck 50829)
Eluent: isokratisk, 36% TEAP 25 mmol/L, 64% acetonitril, kvantifiering vid 210nm
Kalibrering: 0,001 – 0,10 μg/μL
Kalibrering: 0,01 – 0,50 μg/μL
Retentionstid: för CBD: 6,2 min.; för CBN: 8,0 min.; för THC: 9,4 min.; för THC-A: 11,0 min
LOD: CBD 0,5%, CBN 0,5%, THC 0,15%, THC-A 1%
UP200St med mikrospets för ultraljudsbehandling av prover
Litteratur/Referenser
- Werner Bernhard, Franziska Penitschka, Alain Broillet, Prisma Regenscheit (2006): Forensiska kemiska analyser av THC-haltig hampa. Från TLC via GC till HPLC-metoden. Applica 2006.
Fakta värda att känna till
Marijuana består av de torkade blommorna och de blad och stjälkar som sitter under blommorna på den honliga cannabisplantan. Detta är den mest konsumerade formen och den innehåller cirka 3% till 20% THC. Vissa starkt förädlade former av marijuana når en THC-halt på mer än 30%. Marijuana är utgångsmaterialet för alla andra typer av THC-haltiga cannabisprodukter. För att omvandla den mest förekommande cannabinoiden, tetrahydrocannabinolsyra (THCA), till psykoaktivt THC måste en dekarboxyleringsprocess initieras. Därför måste cannabis och dess extrakt värmas upp eller dehydreras för att åstadkomma dekarboxylering.
Kief avser ett trikomrikt pulver som siktas från cannabisens blad och blommor. Det konsumeras antingen i pulverform eller pressas och används i haschkakor.
Haschisch eller hasch är en kaka eller boll av koncentrerad kåda som framställs antingen av pressad kief eller av kåda som skrapas från växtens yta och rullas till bollar. Det förekommer i olika färger från svart till gyllenbrunt beroende på renhet och ursprung. Det kan konsumeras oralt eller rökas, till exempel i pipa, vattenpipa, bong, bubbler eller förångare, med hjälp av en het kniv, rökas i jointar, blandas med cannabisknoppar eller tobak, rökas med flaskmetoden eller användas som ingrediens i mat.
Cannabistinktur avser ett extrakt av cannabinoider i alkohol. Cannabinoiderna extraheras ur cannabisplantan med hjälp av starksprit (oftast spannmålsalkohol) för att framställa tinkturen.
Hascholja är en kådartad matris av cannabinoider som framställs genom lösningsmedelsextraktion och formas till en härdad eller trögflytande massa. Hascholja är en av de mest potenta cannabisprodukterna på grund av sin höga halt av psykoaktiv substans. Användningen av hascholja som extraherats med butan och superkritisk koldioxid har på senare tid blivit allt populärare.
Infusioner avser olika typer av cannabisinfusioner som skiljer sig åt genom det stora utbud av icke-flyktiga lösningsmedel som kan användas för att framställa en cannabisinfusion. För att bereda en sådan infusion blandas cannabisväxtmaterial med ett lösningsmedel och pressas och filtreras sedan för att överföra oljorna från växten till lösningsmedlet. Kakaosmör, mjölksmör, matolja, glycerin och fuktkrämer för huden är vanliga lösningsmedel.
Medicinsk marijuana avser användning av cannabisplantan som en växtbaserad behandling rekommenderad av läkare samt användning av syntetiskt THC och cannabinoider. Denna användning kräver i allmänhet recept, och distributionen sker vanligtvis inom ramar som fastställs av lokal lagstiftning. Flera forskningsstudier har visat att användning av cannabis eller dess derivat har effekt mot exempelvis cytostatikainducerat illamående och kräkningar, neuropatisk smärta och multipel skleros.