Sonication لتحلل الخلية: تعطيل الخلايا واستخراجها
التحلل الخلوي بالموجات فوق الصوتية هو تقنية مطبقة على نطاق واسع لتحضير العينات في مختبرات التكنولوجيا الحيوية الحديثة. والغرض الأساسي منها هو تعطيل الأغشية الخلوية أو الخلايا بأكملها من أجل إطلاق مكونات داخل الخلايا مثل البروتينات أو الأحماض النووية أو العضيات. وهذا يعني في العمل المخبري اليومي أن الصوتيات هي طريقة قياسية لتعطيل الخلايا المتحكم فيه واستخلاص الجزيئات الحيوية بكفاءة. تكمن الميزة الرئيسية لأجهزة الصوتيات في قدرتها على تعديل معلمات العملية الحرجة بدقة، بما في ذلك شدة الموجات فوق الصوتية والنبض والتحكم في درجة الحرارة. ويسمح هذا التحكم للباحثين بتحقيق تحلل موثوق مع تقليل الضرر الحراري أو الميكانيكي للجزيئات الحيوية الحساسة، مما يؤدي إلى عملية استخلاص لطيفة وفعالة للغاية.
تحلل الخلايا باستخدام الصوتيات
يستخدم تحلل الخلايا بالموجات فوق الصوتية التجويف الصوتي لتعطيل الأغشية الخلوية وإطلاق الجزيئات داخل الخلايا. تقدم شركة Hielscher Ultrasonics جهاز الموجات فوق الصوتية Hielscher Ultrasonics جهاز الموجات فوق الصوتية الكلاسيكي من النوع المسباري بالإضافة إلى أجهزة الموجات الصوتية متعددة العينات للمعالجة المعقمة: جهاز VialTweeter للأنابيب والقوارير المتعددة وجهاز الموجات الصوتية للصفائح 96-بئر UIP400MTP للألواح الدقيقة القياسية.
Hielscher الفوق صوتيات توفر صوتيات قوية عدم الاتصال لإعداد العينات والتحليل السريري. الصوتنة لوحة متعددة الآبار UIP400MTP, فيال تويتر, ذا كوبهورن وجهاز قياس التدفق الصوتي GDmini2 معالجة العينات في ظروف معقمة.
المجانسات بالموجات فوق الصوتية UP100H (100 واط) و UP400St (400 واط): Sonication لتحلل الخلية واستخراجها.
المجانسات بالموجات فوق الصوتية لتحلل الخلايا واستخراجها
| نوع الجهاز بالموجات فوق الصوتية | تركيز التطبيق | حجم العينة | حالة الاستخدام النموذجي | مزايا | أمثلة على النماذج |
|---|---|---|---|---|---|
| مسبار نوع Sonicators | صوتنة العينة الواحدة | 0.1 مل إلى 1000 مل تقريباً | تحلل الخلايا، استخلاص البروتين، تجزئة الحمض النووي/الحمض النووي الريبي (DNA/RNA) | تحكم دقيق في الطاقة؛ أقطاب صوتية متنوعة؛ مثالية للعينات الصغيرة إلى المتوسطة | UP100H, UP200St, UP400St |
| فيال تويتير / كوب هورن | معالجة متوازية لقوارير متعددة محكمة الغلق | 8-10 قوارير (حوالي 1-20 مل لكل منها) | تحلل موحد لمعلقات الخلايا المتعددة | صوتنة موحدة؛ تجنب التلوث المتبادل؛ نتائج قابلة للتكرار | VialTweeter, كوبهورن |
| صفيحة 96-بئر سونيكاتور | صَوْننة الصفائح متعددة الآبار والميكروتيترية | تنسيق الصفيحة المجهرية | الفحص عالي الإنتاجية والبروتيوميات ومقايسات الخلايا | صوتنة متزامنة ومتساوية عبر الآبار؛ مثالية لسير العمل متعدد العينات | UIP400MTP |
| مفاعلات خلايا التدفق | صوتنة مستمرة لأحجام أكبر | >1 لتر، قابل للتطوير | تعطيل الخلايا على نطاق صناعي وإنتاج المستخلصات | معالجة مستمرة؛ قابلة للتطوير؛ تحكم كامل في العملية (السعة والضغط ودرجة الحرارة) | UIP1000hdT, UIP2000hdT + خلية التدفق |
| أنظمة الصوتيات المعقمة/غير المباشرة | معالجة العينات الخالية من التلوث | قارورة/أنبوب/صفيحة مجهرية تعتمد على | العينات الحساسة، والبيئات المعقمة، والإعدادات التنظيمية | لا يوجد تلامس مع المجس؛ يتجنب الترحيل؛ جهد تنظيف أقل ما يمكن | VialTweeter, كوبهورن, UIP400MTP |
مزايا استخدام Sonication لتحلل الخلية
بالمقارنة مع طرق تحلل واستخراج الخلايا الأخرى ، فإن تحلل الخلايا بالموجات فوق الصوتية له العديد من المزايا:
- سرعة: تحلل الخلايا بالموجات فوق الصوتية واستخراجها هو طريقة سريعة يمكنها كسر الخلايا المفتوحة في غضون ثوان. هذا أسرع بكثير من الطرق الأخرى مثل التجانس أو ذوبان الجليد أو طحن الخرز.
- كفاءة: يمكن استخدام تحلل الخلايا بالموجات فوق الصوتية واستخراجها لمعالجة العينات الصغيرة أو الكبيرة أو المتعددة في وقت واحد ، مما يجعلها أكثر كفاءة من الطرق الأخرى التي تتطلب معالجة فردية للعينات الصغيرة.
- خالية من المواد الكيميائيةتحلل الخلايا بالموجات فوق الصوتية واستخراجها هو طريقة غير جراحية لا تتطلب استخدام مواد كيميائية أو إنزيمات قاسية.: هذا يجعلها مثالية للتطبيقات التي تحتاج إلى الحفاظ على سلامة محتويات الخلية. يمكن تجنب التلوث غير المرغوب فيه للعينات.
- غلة عالية: يمكن لتحلل الخلايا بالموجات فوق الصوتية واستخراجها استخراج غلة عالية من المحتويات الخلوية ، بما في ذلك الحمض النووي والحمض النووي الريبي والبروتينات. وذلك لأن الموجات الصوتية عالية التردد تفتح الجدران الخلوية وتطلق المحتويات في المحلول المحيط.
- التحكم في درجة الحرارة: تسمح الموجات فوق الصوتية المتطورة بالتحكم الدقيق في درجة حرارة العينة. وقد تم تجهيز صوتيات Hielscher الرقمية مع جهاز استشعار درجة الحرارة للتوصيل وبرنامج مراقبة درجة الحرارة.
- استنساخه: يمكن إعادة إنتاج بروتوكولات تحلل الخلايا بالموجات فوق الصوتية بسهولة وحتى مطابقتها مع أحجام عينات مختلفة أكبر أو أصغر من خلال توسيع نطاق خطي بسيط.
- تنوعا: يمكن استخدام تحلل الخلايا بالموجات فوق الصوتية واستخراجها لاستخراج مجموعة واسعة من أنواع الخلايا ، بما في ذلك البكتيريا والخميرة والفطريات والخلايا النباتية والثدييات. يمكن استخدامه أيضا لاستخراج أنواع مختلفة من الجزيئات ، بما في ذلك البروتينات والحمض النووي والحمض النووي الريبي والليبيدات.
- التحضير المتزامن للعديد من العينات: Hielscher الفوق صوتيات يقدم العديد من الحلول لمعالجة مريحة العديد من العينات تحت نفس ظروف العملية بالضبط. هذا يجعل خطوة تحضير العينة للتحلل والاستخراج عالية الكفاءة وموفرة للوقت.
- سهل الاستخدام: معدات تحلل واستخراج الخلايا بالموجات فوق الصوتية سهلة الاستخدام وتتطلب الحد الأدنى من التدريب. المعدات اقتصادية أيضا لأنها استثمار واحد دون الحاجة إلى إعادة شراء التخلصات. هذا يجعلها جذابة لمجموعة واسعة من الباحثين والمختبرات.
بشكل عام ، يعد تحلل الخلايا بالموجات فوق الصوتية واستخراجها طريقة سريعة وفعالة ويمكن التحكم فيها بدقة ومتعددة الاستخدامات لاستخراج المحتويات الخلوية. مزاياها على الطرق البديلة تجعلها خيارا جذابا لمجموعة واسعة من التطبيقات البحثية والصناعية.
مبدأ عمل تحلل الخلايا بالموجات فوق الصوتية
يستخدم تحلل الخلايا بالموجات فوق الصوتية واستخراجها موجات صوتية عالية التردد لتعطيل الخلايا واستخراج محتوياتها. تخلق الموجات الصوتية تغيرات في الضغط في السائل المحيط ، مما يتسبب في تكوين فقاعات صغيرة وانهيارها في عملية تعرف باسم التجويف. تولد هذه الفقاعات قوى ميكانيكية موضعية شديدة الكثافة يمكنها كسر الخلايا المفتوحة وإطلاق محتوياتها في المحلول المحيط.
يتضمن تحلل الخلايا باستخدام الموجات فوق الصوتية عادة الخطوات التالية:
- يتم وضع العينة في أنبوب أو حاوية مع عازلة سائلة.
- يتم إدخال مسبار بالموجات فوق الصوتية في العينة ، ويتم تطبيق موجات صوتية عالية التردد مع حوالي 20-30 كيلو هرتز.
- تسبب الموجات فوق الصوتية التذبذب والتجويف في السائل المحيط ، مما يولد قوى موضعية تكسر الخلايا المفتوحة وتطلق محتوياتها.
- يتم طرد العينة أو تصفيتها لإزالة أي حطام خلوي ، ويتم جمع المحتويات المستخرجة لتحليلها في اتجاه مجرى النهر.
عيوب طرق التحلل الشائعة
أثناء عملك في المختبرات ، ربما تكون قد واجهت بالفعل متاعب تحلل الخلايا باستخدام بروتوكولات التحليل الميكانيكية أو الكيميائية التقليدية.
- التحلل الميكانيكي: غالبا ما تفتقر طرق التحليل الميكانيكي ، مثل الطحن بالملاط والمدقة أو التجانس باستخدام مكبس فرنسي أو مطحنة خرزة أو نظام الجزء الثابت الدوار إلى خيارات التحكم والضبط الدقيقة. هذا يعني أن استخدام الطحن والطحن يمكن أن يولد بسرعة قوى الحرارة والقص التي يمكن أن تلحق الضرر بالعينة وتشوه البروتينات. يمكن أن تستغرق وقتا طويلا وتتطلب كميات كبيرة من مواد البداية.
- التحلل الكيميائي: يمكن أن تؤدي طرق التحلل الكيميائي ، مثل التحلل القائم على المنظفات ، إلى إتلاف العينة عن طريق تعطيل طبقة الدهون المزدوجة وتغيير طبيعة البروتينات. كما يمكن أن تتطلب خطوات متعددة وقد تترك ملوثات متبقية تتداخل مع التطبيقات النهائية. يعد العثور على الجرعة المثلى من المنظفات تحديا إضافيا.
- دورات التجميد والذوبان: يمكن أن تتسبب دورات التجميد والذوبان في تمزق أغشية الخلايا ، لكن الدورات المتكررة يمكن أن تسبب أيضا تمسخ البروتين وتدهوره. يمكن أن تتطلب هذه الطريقة أيضا دورات متعددة ، والتي يمكن أن تستغرق وقتا طويلا وغالبا ما تؤدي إلى انخفاض الغلة.
- التحلل الأنزيمي: يمكن أن تكون طرق التحلل الأنزيمي خاصة بأنواع معينة من الخلايا وتتطلب خطوات متعددة ، مما يجعلها تستغرق وقتا طويلا. كما أنها تولد نفايات وتتطلب تحسينا دقيقا لتجنب تدهور العينة. غالبا ما تكون مجموعات التحلل الأنزيمي باهظة الثمن. إذا كان إجراء التحلل الأنزيمي الحالي يعطي نتائج غير كافية ، فيمكن تطبيق صوتنة كطريقة تآزرية لتكثيف اضطراب الخلايا.
على النقيض من طرق تحلل الخلايا الميكانيكية والكيميائية التقليدية ، فإن صوتنة هي أداة فعالة وموثوقة للغاية لتفكك الخلايا التي تسمح بالتحكم الكامل في معلمات الصوتنة. هذا يضمن انتقائية عالية في إطلاق المواد ونقاء المنتج. [راجع بالاسوندارام وآخرون ، 2009]
إنه مناسب لجميع أنواع الخلايا وقابل للتطبيق بسهولة على نطاق صغير وكبير – دائما في ظل ظروف خاضعة للرقابة. الموجات فوق الصوتية سهلة التنظيف. يتميز الخالط بالموجات فوق الصوتية دائما بوظيفة التنظيف المكاني (CIP) والتعقيم في المكان (SIP). يتكون sonotrode من قرن ضخم من التيتانيوم يمكن مسحه أو شطفه في الماء أو المذيب (اعتمادا على وسيط العمل). صيانة الموجات فوق الصوتية يرجع إلى متانتها مهملة تقريبا.
تحلل بالموجات فوق الصوتية وتعطيل الخلايا
بشكل عام ، سيستغرق تحلل العينات في المختبر ما بين 15 ثانية و 2 دقيقة. نظرا لأنه من السهل جدا ضبط شدة الصوتنة عن طريق ضبط السعة لوقت الصوتنة وكذلك عن طريق اختيار المعدات المناسبة ، فمن الممكن تعطيل أغشية الخلايا بلطف شديد أو فجأة ، اعتمادا على بنية الخلية والغرض من التحلل (على سبيل المثال استخراج الحمض النووي يتطلب صوتنة أكثر ليونة ، يتطلب استخراج البروتين الكامل للبكتيريا علاجا بالموجات فوق الصوتية أكثر كثافة). يمكن مراقبة درجة الحرارة أثناء العملية بواسطة مستشعر درجة حرارة مدمج ويمكن التحكم فيها بسهولة عن طريق التبريد (حمام جليدي أو خلايا تدفق مع سترات تبريد) أو عن طريق صوتنة في الوضع النبضي. أثناء صوتنة وضع النبض ، تسمح دورات انفجار الصوتنة القصيرة من 1-15 ثانية بتبديد الحرارة والتبريد خلال الفترات المتقطعة الأطول.
جميع العمليات التي تعتمد على الموجات فوق الصوتية قابلة للتكرار تماما وقابلة للتطوير خطيا.
فيال تويتر هو الخالط بالموجات فوق الصوتية لإعداد معقم متزامن وموحد وسريع للعديد من العينات.
- تحضير تعليق الخلية: يجب تعليق كريات الخلايا بالكامل في محلول عازل عن طريق التجانس (اختر محلول المخزن المؤقت الخاص بك المتوافق مع التحليل التالي, على سبيل المثال طريقة كروماتوغرافيا محددة). أضف الليزوزيمات و / أو إضافات أخرى ، إذا لزم الأمر (يجب أن تكون متوافقة أيضا مع وسائل الفصل / التنقية). خلط / تجانس الحل بلطف تحت صوتنة خفيفة حتى يتم تحقيق تعليق كامل.
اقرأ المزيد عن أوجه التآزر بين الليزوزيمات الليزوزيمية والصوتنة! - التحلل بالموجات فوق الصوتية: ضع العينة في حمام جليدي. لتعطيل الخلية ، صوتنة التعليق في رشقات نارية 60-90 ثانية (باستخدام وضع النبض من صوتي الخاص بك).
- الفصل: أجهزة الطرد المركزي المحللة (على سبيل المثال 10 دقائق عند 10000 × جم ؛ عند 4 درجات مئوية). افصل المادة الطافية عن حبيبات الخلية بعناية. المادة الطافية هي الخلية الكلية المحللة. بعد ترشيح المادة الطافية ، تحصل على سائل واضح من بروتين الخلية القابل للذوبان.
التطبيقات الأكثر شيوعا للموجات فوق الصوتية في علم الأحياء والتكنولوجيا الحيوية هي:
- إعداد استخراج الخلية
- اضطراب الخميرة والبكتيريا والخلايا النباتية وأنسجة الخلايا الرخوة أو الصلبة والمواد النووية
- استخراج البروتين
- تحضير وعزل الانزيمات
- إنتاج المستضدات
- استخراج الحمض النووي و / أو التجزئة المستهدفة
- إعداد الجسيمات الشحمية
اضطراب الخلايا مع الموجات فوق الصوتية من نوع التحقيق هو وسيلة فعالة لإعداد العينة.
تتفرع التطبيقات المتعددة للموجات فوق الصوتية في قطاعات التكنولوجيا الحيوية ، والهندسة الحيوية ، وعلم الأحياء الدقيقة ، والبيولوجيا الجزيئية ، والكيمياء الحيوية ، وعلم المناعة ، وعلم الجراثيم ، وعلم الفيروسات ، والبروتينات ، وعلم الوراثة ، وعلم وظائف الأعضاء ، والبيولوجيا الخلوية ، وأمراض الدم ، وعلم النبات.
التحلل: تكسير هياكل الخلايا
تتم حماية الخلايا بواسطة غشاء بلازما شبه نافذ يتكون من طبقة ثنائية فوسفو دهنية (أيضا طبقة ثنائية البروتين والدهون ؛ تتكون من دهون كارهة للماء وجزيئات الفوسفور المحبة للماء مع جزيئات البروتين المضمنة) ويخلق حاجزا بين الأجزاء الداخلية للخلية (السيتوبلازم) والبيئة خارج الخلية. الخلايا النباتية والخلايا بدائية النواة محاطة بجدار خلوي. بسبب وجود جدار خلوي سميك متعدد الطبقات من السليولوز ، يصعب تحلل الخلايا النباتية من الخلايا الحيوانية. يتم تثبيت الجزء الداخلي للخلية ، مثل العضيات والنواة والميتوكوندريا ، بواسطة الهيكل الخلوي.
عن طريق تحلل الخلايا ، فإنه يهدف إلى استخراج وفصل العضيات والبروتينات والحمض النووي والحمض النووي mRNA أو الجزيئات الحيوية الأخرى.
الطرق التقليدية لتحلل الخلايا وعيوبها
هناك عدة طرق لتحلل الخلايا ، والتي يمكن تقسيمها إلى طرق ميكانيكية وكيميائية ، والتي تشمل استخدام المنظفات أو المذيبات ، أو تطبيق الضغط العالي ، أو استخدام مطحنة الخرز أو المكبس الفرنسي. العيب الأكثر إشكالية لهذه الأساليب هو صعوبة التحكم وتعديل معلمات العملية وبالتالي التأثير.
يعرض الجدول أدناه العيوب الرئيسية لطرق التحلل الشائعة:
الجدول: الطرق التقليدية لتحلل الخلايا لها عيوب كبيرة
إجراء التحلل
التحلل عملية حساسة. أثناء التحلل ، يتم تدمير حماية غشاء الخلية ، ولكن يجب منع تعطيل البروتينات المستخرجة وتمسخها وتدهورها بواسطة بيئة غير فسيولوجية (الانحراف عن قيمة الأس الهيدروجيني). لذلك ، بشكل عام يتم التحلل في محلول عازل. تنشأ معظم الصعوبات من اضطراب الخلايا غير المنضبط مما يؤدي إلى إطلاق غير مستهدف لجميع المواد داخل الخلايا و / وتغيير طبيعة المنتج المستهدف.
أسئلة يتكرر طرحها عن Sonication و Cell Lysis
- يمكنك lyse الخلايا مع صوتنة؟ نعم ، صوتنة تحلل الخلايا بشكل فعال باستخدام الموجات فوق الصوتية عالية التردد التي تحفز التجويف ، وهي ظاهرة تتشكل فيها فقاعات بخار صغيرة وتنهار بعنف داخل تعليق الخلية. القوى الميكانيكية الناتجة تعطل أغشية الخلايا وتسهل إطلاق المكونات داخل الخلايا في السائل.
- كيفية استخدام صوتي لتحلل الخلية؟ يتضمن استخدام صوتنة لتحلل الخلايا غمر مسبار الصوتنة في تعليق الخلية وضبط المعلمات مثل السعة ومدة النبض. يجب مراقبة العملية عن كثب لتحسين اضطراب الخلايا مع تقليل تمسخ البروتين وتعطيل الإنزيم.
- ما هو مبدأ صوتنة لتحلل الخلية؟ Sonication تعمل على مبدأ التجويف الصوتي. تنتقل الطاقة فوق الصوتية إلى الوسط السائل ، مما يتسبب في تقلبات الضغط السريعة التي تؤدي إلى تكوين وانفجار الفقاعات الدقيقة. تولد هذه الانفجارات الداخلية قوى قص شديدة ودرجات حرارة عالية موضعية ، مما يعطل الهياكل الخلوية ويعزز تجانس المحللات.
- كم من الوقت يستغرق صوتنة تحلل الخلية؟ يمكن أن تختلف مدة صوتنة تحلل الخلية اختلافا كبيرا اعتمادا على عوامل مثل نوع الخلية وكثافة الخلية وقوة الصوتنة والبروتوكول المحدد المستخدم. قد تتراوح الإجراءات النموذجية من عدة ثوان إلى بضع دقائق ، وغالبا ما يتم إجراؤها في دورات لإدارة توليد الحرارة وضمان اضطراب موحد للخلايا.
- ما هو الغرض من صوتنة في استخراج البروتين؟ في استخراج البروتين ، يعمل صوتنة على تمزيق أغشية الخلايا بكفاءة وإذابة البروتينات. هذه الطريقة مفيدة بشكل خاص لإطلاق البروتينات من داخل الحجيرات الخلوية ، مما يجعلها ضرورية لإعداد المحللات التي سيتم تنقية البروتينات أو تحليلها منها.
- لماذا يتم استخدام صوتنة لاستخراج؟ يفضل Sonication للاستخراج نظرا لعمله السريع وقدرته على تطبيق الطاقة المستهدفة ، وتحطيم الهياكل الخلوية لإطلاق جزيئات نشطة بيولوجيا دون استخدام المعالجات الكيميائية القاسية ، وبالتالي الحفاظ على السلامة الوظيفية للمركبات المستخرجة.
- هل صوتنة تعطيل تفاعلات البروتين والبروتين؟ في حين أن صوتنة يمكن أن تعطل بشكل فعال أغشية الخلايا ، إلا أنها قد تعطل أيضا تفاعلات البروتين والبروتين. يعتمد مستوى الاضطراب على شدة الصوتنة ومدة التعرض ، مما قد يؤدي إلى تمسخ أو تفكك مجمعات البروتين ، مما قد يؤثر على الدراسات التحليلية أو الوظيفية اللاحقة.
- هل يمكن استخدام صوتنة لتحلل الإشريكية القولونية؟ صوتيات Hielscher فعالة بشكل خاص لتحلل الخلايا البكتيرية مثل الإشريكية القولونية ، التي لها جدران خلايا قوية. توفر هذه التقنية طريقة فيزيائية لقص جدار الخلية والغشاء ، مما يجعلها طريقة مفضلة لتحضير المحللات البكتيرية في مختبرات البيولوجيا الجزيئية والكيمياء الحيوية.
- ما هي العمليات اللاحقة التي تلي خطوة الصوتنة؟
عادةً ما تتضمن الخطوات النهائية بعد التحلل بالموجات فوق الصوتية تجزئة المحللة وعزل العضيات المستهدفة واستخلاص المزيد من البروتين أو تنقيته.
ثم يتم بعد ذلك فصل اللايسات المعالجة وتحضيرها للتطبيقات التحليلية أو الوظيفية، مثل البروتيوميات عالية الدقة أو النسخ النسخية أو دراسات ارتباط المستقبلات.
الأدب / المراجع
- Balasundaram, B.; Harrison, S.; Bracewell, D. G. (2009): Advances in product release strategies and impact on bioprocess design. Trends in Biotechnology 27/8, 2009. pp. 477-485.
- Vilkhu, K.; Manasseh, R.; Mawson, R.; Ashokkumar, M. (2011): Ultrasonic Recovery and Modification of Food ingredients. In: Feng/ Barbosa-Cánovas/ Weiss (2011): Ultrasound Technologies for Food and Bioprocessing. New York: Springer, 2011. pp. 345-368.
- Nico Böhmer, Andreas Dautel, Thomas Eisele, Lutz Fischer (2012): Recombinant expression, purification and characterisation of the native glutamate racemase from Lactobacillus plantarum NC8. Protein Expr Purif. 2013 Mar;88(1):54-60.
- Brandy Verhalen, Stefan Ernst, Michael Börsch, Stephan Wilkens (2012): Dynamic Ligand-induced Conformational Rearrangements in P-glycoprotein as Probed by Fluorescence Resonance Energy Transfer Spectroscopy. J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2): 1112-27.
- Claudia Lindemann, Nataliya Lupilova, Alexandra Müller, Bettina Warscheid, Helmut E. Meyer, Katja Kuhlmann, Martin Eisenacher, Lars I. Leichert (2013): Redox Proteomics Uncovers Peroxynitrite-Sensitive Proteins that Help Escherichia coli to Overcome Nitrosative Stress. J Biol Chem. 2013 Jul 5; 288(27): 19698–19714.
- Elahe Motevaseli, Mahdieh Shirzad, Seyed Mohammad Akrami, Azam-Sadat Mousavi, Akbar Mirsalehian, Mohammad Hossein Modarressi (2013): Normal and tumour cervical cells respond differently to vaginal lactobacilli, independent of pH and lactate. ed Microbiol. 2013 Jul; 62(Pt 7):1065-1072.