حلول عازلة أعدت مع الموجات فوق الصوتية
يمكن تحضير مخازن التحلل بكفاءة وسرعة باستخدام مجانسات الأنسجة بالموجات فوق الصوتية. نظرا لأن الموجات فوق الصوتية هي أداة حلم للخلط والذوبان والتشتيت ، فإنها تسمح بإعداد موثوق وسهل الاستخدام لمخازن التحلل.
إعداد بالموجات فوق الصوتية من المخازن المؤقتة التحلل
مجانسات الأنسجة بالموجات فوق الصوتية هي أداة شائعة لتعطيل الخلايا وتحليلها واستخراجها ، وبالتالي فهي متوفرة في معظم المختبرات. تطبيق ثانوي للموجات فوق الصوتية من نوع التحقيق هو إعداد مخازن التحلل.
المخزن المؤقت للتحلل هو حل يستخدم لكسر الخلايا المفتوحة (lyse) وإطلاق محتوياتها لتحليل المصب. يمكن أن يختلف التركيب المحدد للمخزن المؤقت للتحلل اعتمادا على نوع الخلايا التي يتم تحليلها وتطبيق المصب. ومع ذلك ، يحتوي مخزن التحلل النموذجي على مكونات مثل المنظفات والأملاح ومثبطات الأنزيم البروتيني. تستخدم أملاح التخزين المؤقت (مثل Tris-HCl) والأملاح الأيونية (مثل NaCl) بشكل شائع لتنظيم درجة الحموضة والأسمولية للمحلل.
لعمل مخزن مؤقت للتحلل ، يتم خلط المكونات معا في التركيزات المناسبة ودرجة الحموضة. عادة ما يتم تقليب الخليط أو رجه حتى تذوب المكونات ويكون المحلول متجانسا.
التجانس بالموجات فوق الصوتية هو طريقة يمكن استخدامها للمساعدة في إنشاء مخزن مؤقت جيد للتحلل عن طريق تحسين خلط المكونات وانحلالها. في هذه الطريقة ، الموجات فوق الصوتية – عادة في حدود 20 إلى 30 كيلو هرتز – يتم تطبيقها على الخليط ، مما يخلق فقاعات تجويف تنهار وتولد طاقة محلية مكثفة ، مما يؤدي إلى القص الميكانيكي وخلط المكونات.
يمكن أن تساعد عملية التجانس بالموجات فوق الصوتية في تفكيك أي كتل أو مجاميع للمكونات ، والتأكد من خلط المحلول بشكل موحد. وبالتالي ، يمكن أن يؤدي هذا المخزن المؤقت المحسن للتحلل إلى تعطيل أكثر كفاءة للخلايا وزيادة إنتاجية المواد المستخرجة. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن أن يقلل التجانس بالموجات فوق الصوتية من الوقت اللازم لعمل مخزن مؤقت للتحلل مقارنة بطرق التحريك أو الاهتزاز التقليدية.
بشكل عام ، يعد التجانس بالموجات فوق الصوتية أداة قوية لتحسين جودة وكفاءة إعداد المخزن المؤقت للتحلل.
الخالط مختبر بالموجات فوق الصوتية UP200Ht شائع في مختبرات الأبحاث لإعداد العينات ، والتحلل ، والاستخراج ، وتجزئة الحمض النووي والذوبان.
بروتوكول لإعداد المخزن المؤقت للتحلل بالموجات فوق الصوتية
هذا هو بروتوكول عام لجعل العازلة تحلل باستخدام الموجات فوق الصوتية من نوع المسبار:
المواد:
- المنظفات المفضلة (مثل Triton X-100 و SDS و CHAPS)
- الملح (الملحات) المفضل (مثل كلوريد الصوديوم ، KCl)
- مثبطات الأنزيم البروتيني (مثل PMSF ، أبروتينين ، ليوبتين)
- الموجات فوق الصوتية
- النمام
- ماء منزوع الأيونات
- مقياس الأس الهيدروجيني أو شرائط الأس الهيدروجيني
إرشادات خطوة بخطوة:
- حدد تكوين المخزن المؤقت للتحلل بناء على الخلايا أو الأنسجة التي ستقوم بتحليلها ، والتطبيقات النهائية التي ستستخدم المحللة من أجلها. تحضير محاليل المخزون من المنظفات والأملاح ومثبطات الأنزيم البروتيني بالتركيزات المطلوبة.
- أضف محاليل مخزون المنظفات والأملاح ومثبطات الأنزيم البروتيني إلى كأس زجاجية أو دورق.
- أضف الماء منزوع الأيونات لرفع مستوى الصوت إلى الكمية المطلوبة من المخزن المؤقت.
- امزج المكونات باستخدام محرك من أجل الحصول على محلول الخلط المسبق.
- قم بقياس الرقم الهيدروجيني للمخزن المؤقت باستخدام مقياس الأس الهيدروجيني أو شرائط الأس الهيدروجيني ، واضبط الأس الهيدروجيني حسب الضرورة بكميات صغيرة من الحمض أو القاعدة.
- استخدم الموجات فوق الصوتية من نوع المسبار لتجانس محلول الخلط المسبق بحيث يتم الحصول على محلول متجانس للغاية. لذلك ، صوتنة الحل لبضع ثوان حتى يتم خلط الحل تماما ويتم تكسير أي كتل أو مجاميع. يمكن تحسين مدة وقوة صوتنة على أساس العازلة تحلل محددة والموجات فوق الصوتية المستخدمة.
- بعد الموجات فوق الصوتية ، أعد قياس درجة الحموضة في المخزن المؤقت واضبطها حسب الضرورة.
- قم بتصفية المخزن المؤقت من خلال مرشح 0.2 ميكرون لإزالة أي حطام أو مجاميع قد تكون تشكلت أثناء صوتنة.
- المخزن المؤقت للتحلل جاهز الآن للاستخدام.
ملاحظة: يمكن أن يختلف التركيب الدقيق ودرجة الحموضة للمخزن المؤقت للتحلل اعتمادا على الخلايا أو الأنسجة التي يتم تحليلها والتطبيقات النهائية. البروتوكول أعلاه هو مبدأ توجيهي عام وقد يحتاج إلى تحسين لتطبيقات محددة.
تستخدم المجانسات بالموجات فوق الصوتية بشكل شائع لتعطيل الخلايا واستخراج الجزيئات داخل الخلايا. لذلك تستخدم العديد من تطبيقات التحلل صوتنة من نوع المسبار ليس فقط لإعداد المخزن المؤقت للتحلل ، ولكن أيضا لتعطيل الخلية الميكانيكية واستخراجها.
وهذا يجعل مجانسات الأنسجة بالموجات فوق الصوتية أداة متعددة الاستخدامات للمختبرات ويفسر الاستخدام الواسع للموجات فوق الصوتية في علم الأحياء الدقيقة والتكنولوجيا الحيوية وعلوم الحياة.
مختبر الخالطات بالموجات فوق الصوتية
Hielscher Ultrasonics بتصنيع وتوريد المجانسات بالموجات فوق الصوتية وتحقيقات (sonotrodes) في مختلف تصنيفات الطاقة وأحجام العينات. هذا يسمح لنا أن نقدم لك أنسب معطل بالموجات فوق الصوتية لإعداد عينتك. نحن نركز على أعلى مستويات الجودة وراحة المستخدم المتميزة ونتائج صوتنة موثوقة. تتميز جميع الموجات فوق الصوتية الرقمية بالبرامج الذكية والبرمجة والإعداد المسبق لبروتوكولات الصوتنة ، والتحكم عن بعد في المتصفح ، والتحكم في درجة الحرارة ، وإضاءة العينة ، فضلا عن تسجيل البيانات التلقائي على بطاقة SD مدمجة.
التصميم والتصنيع والاستشارات – جودة صنع في ألمانيا
Hielscher الموجات فوق الصوتية معروفة جيدا لأعلى معايير الجودة والتصميم. المتانة والتشغيل السهل تسمح بالتكامل السلس للموجات فوق الصوتية لدينا في المنشآت الصناعية. يتم التعامل بسهولة مع الظروف القاسية والبيئات الصعبة بواسطة الموجات فوق الصوتية Hielscher.
Hielscher Ultrasonics هي شركة حاصلة على شهادة الأيزو وتركز بشكل خاص على الموجات فوق الصوتية عالية الأداء التي تتميز بأحدث التقنيات وسهولة الاستخدام. بطبيعة الحال، الموجات فوق الصوتية Hielscher هي CE المتوافقة وتلبية متطلبات UL، وكالة الفضاء الكندية وبنفايات.
الجدول أدناه يعطيك لمحة عامة عن الموجات فوق الصوتية مختبر مختلف لدينا:
| VialTweeter في UP200St | 200 واط | 26 كيلو هرتز | الموجات فوق الصوتية من قوارير صغيرة ، على سبيل المثال Eppendorf 1.5mL |
| UP50H | 50 واط | 30 كيلو هرتز | خالط مختبر محمول أو مثبت على حامل |
| UP100H | 100 واط | 30 كيلو هرتز | خالط مختبر محمول أو مثبت على حامل |
| UP200Ht | 200 واط | 26 كيلو هرتز | خالط مختبر محمول أو مثبت على حامل |
| UP200St | 200 واط | 26 كيلو هرتز | الخالط مختبر الوقوف |
| UP400St | 400 واط | 24 كيلو هرتز | الخالط مختبر الوقوف |
| سونوستيب | 200 واط | 26 كيلو هرتز | مختبر مفاعل الجمع ، الموجات فوق الصوتية ، مضخة ، النمام والسفينة |
| جي دي ميني2 | 200 واط | 26 كيلو هرتز | خلية تدفق خالية من التلوث |
| كوبهورن | 200 واط | 26 كيلو هرتز | حمام مكثف بالموجات فوق الصوتية للقوارير والأكواب |
| UIP400MTP | 400 واط | 24 كيلو هرتز | نظام الموجات فوق الصوتية لألواح الآبار المتعددة / لوحات المعايرة الدقيقة |
كوب بالموجات فوق الصوتيةهورن لصوتنة مكثفة من الأنابيب المغلقة وقوارير لتجانس معقمة من العينات.
اتصل بنا! / اسألنا!
مختبر الخالط بالموجات فوق الصوتية UP400St يستخدم عادة لإعداد المخزن المؤقت للتحلل وتعطيل الخلية اللاحق.
الأدب / المراجع
- Fernandes, Luz; Santos, Hugo; Nunes-Miranda, J.; Lodeiro, Carlos; Capelo, Jose (2011): Ultrasonic Enhanced Applications in Proteomics Workflows: single probe versus multiprobe. Journal of Integrated OMICS 1, 2011.
- Priego-Capote, Feliciano; Castro, María (2004): Analytical uses of ultrasound – I. Sample preparation. TrAC Trends in Analytical Chemistry 23, 2004. 644-653.
- Welna, Maja; Szymczycha-Madeja, Anna; Pohl, Pawel (2011): Quality of the Trace Element Analysis: Sample Preparation Steps. In: Wide Spectra of Quality Control; InTechOpen 2011.
- Nico Böhmer, Andreas Dautel, Thomas Eisele, Lutz Fischer (2012): Recombinant expression, purification and characterisation of the native glutamate racemase from Lactobacillus plantarum NC8. Protein Expr Purif. 2013 Mar;88(1):54-60.
- Brandy Verhalen, Stefan Ernst, Michael Börsch, Stephan Wilkens (2012): Dynamic Ligand-induced Conformational Rearrangements in P-glycoprotein as Probed by Fluorescence Resonance Energy Transfer Spectroscopy. J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2): 1112-27.
- Claudia Lindemann, Nataliya Lupilova, Alexandra Müller, Bettina Warscheid, Helmut E. Meyer, Katja Kuhlmann, Martin Eisenacher, Lars I. Leichert (2013): Redox Proteomics Uncovers Peroxynitrite-Sensitive Proteins that Help Escherichia coli to Overcome Nitrosative Stress. J Biol Chem. 2013 Jul 5; 288(27): 19698–19714.
- Elahe Motevaseli, Mahdieh Shirzad, Seyed Mohammad Akrami, Azam-Sadat Mousavi, Akbar Mirsalehian, Mohammad Hossein Modarressi (2013): Normal and tumour cervical cells respond differently to vaginal lactobacilli, independent of pH and lactate. ed Microbiol. 2013 Jul; 62(Pt 7):1065-1072.
Hielscher الفوق صوتيات بتصنيع الخالط بالموجات فوق الصوتية عالية الأداء من المختبر ل الحجم الصناعي.