حلول عازلة أعدت مع الموجات فوق الصوتية
يمكن تحضير مخازن التحلل بكفاءة وسرعة باستخدام مجانسات الأنسجة بالموجات فوق الصوتية. نظرا لأن الموجات فوق الصوتية هي أداة حلم للخلط والذوبان والتشتيت ، فإنها تسمح بإعداد موثوق وسهل الاستخدام لمخازن التحلل.
إعداد بالموجات فوق الصوتية من المخازن المؤقتة التحلل
مجانسات الأنسجة بالموجات فوق الصوتية هي أداة شائعة لتعطيل الخلايا وتحليلها واستخراجها ، وبالتالي فهي متوفرة في معظم المختبرات. تطبيق ثانوي للموجات فوق الصوتية من نوع التحقيق هو إعداد مخازن التحلل.
المخزن المؤقت للتحلل هو حل يستخدم لكسر الخلايا المفتوحة (lyse) وإطلاق محتوياتها لتحليل المصب. يمكن أن يختلف التركيب المحدد للمخزن المؤقت للتحلل اعتمادا على نوع الخلايا التي يتم تحليلها وتطبيق المصب. ومع ذلك ، يحتوي مخزن التحلل النموذجي على مكونات مثل المنظفات والأملاح ومثبطات الأنزيم البروتيني. تستخدم أملاح التخزين المؤقت (مثل Tris-HCl) والأملاح الأيونية (مثل كلوريد الصوديوم) بشكل شائع لتنظيم درجة الحموضة والأسمولية للمحلل.
لعمل مخزن مؤقت للتحلل ، يتم خلط المكونات معا في التركيزات المناسبة ودرجة الحموضة. عادة ما يتم تقليب الخليط أو رجه حتى تذوب المكونات ويكون المحلول متجانسا.
التجانس بالموجات فوق الصوتية هو طريقة يمكن استخدامها للمساعدة في إنشاء مخزن مؤقت جيد للتحلل عن طريق تحسين خلط المكونات وانحلالها. في هذه الطريقة ، الموجات فوق الصوتية – عادة في حدود 20 إلى 30 كيلو هرتز – يتم تطبيقها على الخليط ، مما يخلق فقاعات تجويف تنهار وتولد طاقة محلية مكثفة ، مما يؤدي إلى القص الميكانيكي وخلط المكونات.
يمكن أن تساعد عملية التجانس بالموجات فوق الصوتية في تفكيك أي كتل أو مجاميع للمكونات ، والتأكد من خلط المحلول بشكل موحد. وبالتالي ، يمكن أن يؤدي هذا المخزن المؤقت المحسن للتحلل إلى تعطيل أكثر كفاءة للخلايا وزيادة إنتاجية المواد المستخرجة. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن أن يقلل التجانس بالموجات فوق الصوتية من الوقت اللازم لعمل مخزن مؤقت للتحلل مقارنة بطرق التحريك أو الاهتزاز التقليدية.
بشكل عام ، يعد التجانس بالموجات فوق الصوتية أداة قوية لتحسين جودة وكفاءة إعداد المخزن المؤقت للتحلل.
الخالط مختبر بالموجات فوق الصوتية UP200Ht شائع في مختبرات الأبحاث لإعداد العينات ، والتحلل ، والاستخراج ، وتجزئة الحمض النووي ، والذوبان.
بروتوكول لإعداد المخزن المؤقت للتحلل بالموجات فوق الصوتية
هذا هو بروتوكول عام لجعل العازلة تحلل باستخدام الموجات فوق الصوتية من نوع المسبار:
المواد:
- المنظفات المفضلة (مثل Triton X-100 و SDS و CHAPS)
- الملح (الملحات) المفضل (مثل كلوريد الصوديوم ، KCl)
- مثبطات الأنزيم البروتيني (مثل PMSF ، أبروتينين ، ليوبتين)
- أوبومنتالتور
- التقليب
- ماء منزوع الأيونات
- مقياس الأس الهيدروجيني أو شرائط الأس الهيدروجيني
إرشادات خطوة بخطوة:
- حدد تكوين المخزن المؤقت للتحلل بناء على الخلايا أو الأنسجة التي ستقوم بتحليلها ، والتطبيقات النهائية التي ستستخدم المحللة من أجلها. تحضير محاليل المخزون من المنظفات والأملاح ومثبطات الأنزيم البروتيني بالتركيزات المطلوبة.
- أضف محاليل مخزون المنظفات والأملاح ومثبطات الأنزيم البروتيني إلى كأس زجاجية أو دورق.
- أضف الماء منزوع الأيونات لرفع مستوى الصوت إلى الكمية المطلوبة من المخزن المؤقت.
- امزج المكونات باستخدام محرك من أجل الحصول على محلول ما قبل الخلط.
- قم بقياس الرقم الهيدروجيني للمخزن المؤقت باستخدام مقياس الأس الهيدروجيني أو شرائط الأس الهيدروجيني ، واضبط الأس الهيدروجيني حسب الضرورة بكميات صغيرة من الحمض أو القاعدة.
- استخدم الموجات فوق الصوتية من نوع المسبار لتجانس محلول الخلط المسبق بحيث يتم الحصول على محلول متجانس للغاية. لذلك ، صوتنة الحل لبضع ثوان حتى يتم خلط الحل تماما ويتم تكسير أي كتل أو مجاميع. يمكن تحسين مدة وقوة صوتنة على أساس العازلة تحلل محددة والموجات فوق الصوتية المستخدمة.
- بعد الموجات فوق الصوتية ، أعد قياس درجة الحموضة في المخزن المؤقت واضبطها حسب الضرورة.
- قم بتصفية المخزن المؤقت من خلال مرشح 0.2 ميكرون لإزالة أي حطام أو مجاميع قد تكون تشكلت أثناء صوتنة.
- المخزن المؤقت للتحلل جاهز الآن للاستخدام.
ملاحظة: يمكن أن يختلف التركيب الدقيق ودرجة الحموضة للمخزن المؤقت للتحلل اعتمادا على الخلايا أو الأنسجة التي يتم تحليلها والتطبيقات النهائية. البروتوكول أعلاه هو مبدأ توجيهي عام وقد يحتاج إلى تحسين لتطبيقات محددة.
تستخدم المجانسات بالموجات فوق الصوتية بشكل شائع لتعطيل الخلايا واستخراج الجزيئات داخل الخلايا. لذلك تستخدم العديد من تطبيقات التحلل صوتنة من نوع المسبار ليس فقط لإعداد المخزن المؤقت للتحلل ، ولكن أيضا لتعطيل الخلية الميكانيكية واستخراجها.
وهذا يجعل مجانسات الأنسجة بالموجات فوق الصوتية أداة متعددة الاستخدامات للمختبرات ويفسر الاستخدام الواسع للموجات فوق الصوتية في علم الأحياء الدقيقة والتكنولوجيا الحيوية وعلوم الحياة.
المجانسة مختبر بالموجات فوق الصوتية
Hielscher Ultrasonics بتصنيع وتوريد المجانسات بالموجات فوق الصوتية وتحقيقات (sonotrodes) في مختلف تصنيفات الطاقة وأحجام العينات. هذا يسمح لنا أن نقدم لك أنسب معطل بالموجات فوق الصوتية لإعداد عينتك. نحن نركز على أعلى مستويات الجودة وراحة المستخدم المتميزة ونتائج صوتنة موثوقة. جميع الموجات فوق الصوتية الرقمية ميزة البرمجيات الذكية، والبرمجة والإعداد المسبق لبروتوكولات صوتنة، والتحكم عن بعد في المتصفح، والتحكم في درجة الحرارة، وإضاءة العينة، فضلا عن تسجيل البيانات التلقائي على المدمج في بطاقة SD.
التصميم والتصنيع والاستشارات – جودة صنع في ألمانيا
Hielscher الموجات فوق الصوتية معروفة بأعلى معايير الجودة والتصميم. تسمح المتانة والتشغيل السهل بالتكامل السلس لأجهزة الموجات فوق الصوتية لدينا في المنشآت الصناعية. يتم التعامل بسهولة مع الظروف القاسية والبيئات الصعبة من قبل الموجات فوق الصوتية Hielscher.
Hielscher الفوق صوتيات هي شركة حاصلة على شهادة الأيزو وتركز بشكل خاص على الموجات فوق الصوتية عالية الأداء التي تتميز بأحدث التقنيات وسهولة الاستخدام. بطبيعة الحال، Hielscher الموجات فوق الصوتية هي CE المتوافقة وتلبية متطلبات ماي، وكالة الفضاء الكندية وبنفايات.
The table below gives you an overview of our various lab ultrasonicators:
| VialTweeter في UP200St | 200واط | 26 كيلو هرتز | ultrasonication من قارورة صغيرة، على سبيل المثال إيبندورف 1.5mL |
| UP50H | 50 واط | 30 كيلو هرتز | يده أو standmounted الخالط المختبر |
| UP100H | 100واط | 30 كيلو هرتز | يده أو standmounted الخالط المختبر |
| Uf200 ः ر | 200واط | 26 كيلو هرتز | يده أو standmounted الخالط المختبر |
| UP200St | 200واط | 26 كيلو هرتز | standmounted الخالط المختبر |
| UP400St | 400واط | 24kHz و | standmounted الخالط المختبر |
| SonoStep | 200واط | 26 كيلو هرتز | مفاعل مختبر الجمع، ultrasonication، المضخات، والنمام وسفينة |
| GDmini2 | 200واط | 26 كيلو هرتز | خلية تدفق خالية من التلوث |
| كوبهورن | 200واط | 26 كيلو هرتز | حمام مكثف بالموجات فوق الصوتية للقوارير والأكواب |
| UIP400MTP | 400واط | 24kHz و | نظام الموجات فوق الصوتية للوحات متعددة الآبار / لوحات microtiter |
cuphorn بالموجات فوق الصوتية لصوتنة مكثفة من الأنابيب المغلقة وقوارير للتجانس المعقم للعينات.
اتصل بنا! / اسألنا!
مختبر الخالط بالموجات فوق الصوتية UP400St يستخدم عادة لإعداد المخزن المؤقت للتحلل وتعطيل الخلية اللاحق.
الأدب / المراجع
- Fernandes, Luz; Santos, Hugo; Nunes-Miranda, J.; Lodeiro, Carlos; Capelo, Jose (2011): Ultrasonic Enhanced Applications in Proteomics Workflows: single probe versus multiprobe. Journal of Integrated OMICS 1, 2011.
- Priego-Capote, Feliciano; Castro, María (2004): Analytical uses of ultrasound – I. Sample preparation. TrAC Trends in Analytical Chemistry 23, 2004. 644-653.
- Welna, Maja; Szymczycha-Madeja, Anna; Pohl, Pawel (2011): Quality of the Trace Element Analysis: Sample Preparation Steps. In: Wide Spectra of Quality Control; InTechOpen 2011.
- Nico Böhmer, Andreas Dautel, Thomas Eisele, Lutz Fischer (2012): Recombinant expression, purification and characterisation of the native glutamate racemase from Lactobacillus plantarum NC8. Protein Expr Purif. 2013 Mar;88(1):54-60.
- Brandy Verhalen, Stefan Ernst, Michael Börsch, Stephan Wilkens (2012): Dynamic Ligand-induced Conformational Rearrangements in P-glycoprotein as Probed by Fluorescence Resonance Energy Transfer Spectroscopy. J Biol Chem. 2012 Jan 6;287(2): 1112-27.
- Claudia Lindemann, Nataliya Lupilova, Alexandra Müller, Bettina Warscheid, Helmut E. Meyer, Katja Kuhlmann, Martin Eisenacher, Lars I. Leichert (2013): Redox Proteomics Uncovers Peroxynitrite-Sensitive Proteins that Help Escherichia coli to Overcome Nitrosative Stress. J Biol Chem. 2013 Jul 5; 288(27): 19698–19714.
- Elahe Motevaseli, Mahdieh Shirzad, Seyed Mohammad Akrami, Azam-Sadat Mousavi, Akbar Mirsalehian, Mohammad Hossein Modarressi (2013): Normal and tumour cervical cells respond differently to vaginal lactobacilli, independent of pH and lactate. ed Microbiol. 2013 Jul; 62(Pt 7):1065-1072.
Hielscher الفوق صوتيات بتصنيع عالية الأداء المجانسة بالموجات فوق الصوتية من مختبر إلى حجم الصناعية.