Ultrazvočna priprava vzorcev za analizo THC
- Ultrazvočna ekstrakcija je preizkušena metoda za pridobivanje THC, uporablja pa se lahko tudi za analitične namene.
- Sonikacija je običajna metoda priprave vzorcev za analizo skupne vsebnosti THC v izdelkih iz konoplje.
- Ultrazvočna ekstrakcija se izvaja na vzorcih pred analizo s TLC, GC in HPLC.
Ultrazvočna ekstrakcija THC
THC ali tetrahidrokanabinol (delta-9-tetrahidrokanabinol) je kemijska snov, ki povzroča večino psiholoških učinkov marihuane. Pri konoplji je znanih več kot 400 različnih sort. Odvisno od posamezne sorte lahko konoplja vsebuje le 0,3 wt% THC. Pri drugih sortah lahko vsebnost THC doseže do 20 wt%.
Tudi različni izdelki iz konoplje se precej razlikujejo: povprečna koncentracija THC v marihuani tako znaša od 1 do 5%; v hašišu je vsebnost THC od 5 do 15%, v hašiševem olju pa v povprečju znaša 20%. Vsebnost THC v odmerkih marihuane za rekreativno uporabo je zelo spremenljiva; nižja kot je vsebnost THC v marihuani, več je mora uporabnik zaužiti, da doseže želene učinke.
Ultrazvočna priprava vzorcev se uporablja za analizo vsebnosti THC
- za nadzor kakovosti izdelkov s THC za rekreativno uporabo,
- za določanje kakovosti farmacevtskih izdelkov s THC,
- za razlikovanje med konopljo za uporabo kot droga in konopljo za pridobivanje vlaken.
Za analizo THC se običajno uporabljajo naslednje kromatografske metode: tankoplastna kromatografija (TLC), plinska kromatografija (GC) in tekočinska kromatografija visoke ločljivosti (HPLC)
Protokol ultrazvočne priprave vzorcev za analizo s TLC
Priprava vzorcev: Za pripravo vzorcev je treba posušeni rastlinski material macerirati in zmleti v homogen prah. Za ultrazvočno ekstrakcijo v viali zmešamo 500mg prahu rastlinskega materiala konoplje in 5mL mešanice metanola in kloroforma (v razmerju 9 : 1). Sonikacijo lahko izvedemo z ultrasonikatorjem z mikrokonico, napravo VialTweeter ali ultrazvočno napravo CupHorn. Sonikacija traja približno 5 min. Nato pustite vzorec mirovati vsaj 5 min. Bistri supernatant razredčite z ekstrakcijsko mešanico (v/v: 1 : 10). Prosti THC: 1μL na TLC-ploščo
Dekarboksilacija: 100μL ekstrakta uparimo do suhega. Ostanek segrevamo pri 180℃ 4 min. Dodajte 500μL mešanice metanola in kloroforma (v/v 9 : 1). Sonicirajte 5 min. Bistri supernatant razredčite z ekstrakcijsko mešanico (v/v: 1 : 10).
Umerjanje: 20ng, 60ng, 100ng, 140ng
HPTLC:
Silikagel za TLC F-254, Merck 5729
TLC-skener II, programska oprema CATS3, Camag Muttenz Eluent:
Etil acetat : toluen : kloroform = 3 : 17 : 0,25 (v/v/v)
Postkromatografska derivatizacija: sol Fast Blue 0,1% v 0,1 M NaOH
Denzitometrija pri 550 nm
Tetrahidrokanabinol (Δ9-THC) za analizo in ekstrakcijo
Protokol ultrazvočne priprave vzorcev za analizo z GC
Priprava vzorcev: Posušeni rastlinski material maceriramo in zmeljemo v homogen prah. Za ekstrakcijo v viali zmešamo 500mg prahu rastlinskega materiala konoplje in 10mL mešanice metanola in heksana (v razmerju 9 : 1). Sonikacijo lahko izvedemo z ultrazvočno napravo s sondo z mikrokonico, napravo VialTweeter ali ultrazvočno napravo CupHorn. Vzorec sonicirajte 15–20 min. Vzorec pretresite in ga pustite mirovati vsaj 5 min. Bistri supernatant razredčite z ekstrakcijsko mešanico (v/v 1: 20).
Dekarboksilacija: v vložku
Temperatura injektorja 250℃
Umerjanje: od 5 ng/μL do 250 ng/μL
GC: HP 6890 z 5973 MSD in samodejnim vzorčevalnikom 7683; injiciranje: 1μL, čas brez delitve toka: 2 min.
Kolona: HP-5 MS, 30m, premer 250 μm, debelina filma 0,25 μm
Nosilni plin: He, 35 psi, konstantni pretok: 4 mL/min.
Pečica: 100℃ 1min.; zviševanje temperature s hitrostjo 15℃ /min. do 280℃; 280℃ 5 min. MSD: SCAN: m/e 35 – 550
Protokol ultrazvočne priprave vzorcev za analizo s HPLC
Priprava vzorcev (analogno pripravi za GC): Posušeni rastlinski material maceriramo in zmeljemo v homogen prah. Za ekstrakcijo v viali zmešamo 500mg prahu rastlinskega materiala konoplje in 10mL mešanice metanola in heksana (v razmerju 9 : 1). Sonikacijo lahko izvedemo z ultrasonikatorjem s sondo z mikrokonico, napravo VialTweeter ali ultrazvočno napravo CupHorn. Vzorec sonicirajte 15–20 min. Vzorec pretresite in ga pustite mirovati vsaj 5 min. Bistri supernatant razredčite z ekstrakcijsko mešanico (v/v 1: 20).
VialTweeter za ultrazvočno pripravo vzorcev
Predkolona: LiChrospher 60, RP-Select B, 5μm (Merck 50963)
Kolona: LiChroCart 125-4, Lichrospher 60, RP-Select B, 5 μm (Merck 50829)
Eluent: izokratsko 36% TEAP 25 mmol/L, 64% acetonitrila; kvantifikacija pri 210nm
Umerjanje: 0,001 – 0,10 μg/μL
Umerjanje: 0,01 – 0,50 μg/μL
Retencijski čas: za CBD: 6,2 min.; za CBN: 8,0 min.; za THC: 9,4 min.; za THC-A: 11,0 min
LOD: CBD 0,5%, CBN 0,5%, THC 0,15%, THC-A 1%
UP200St z mikrokonico za sonikacijo vzorcev
Literatura/viri
- Werner Bernhard, Franziska Penitschka, Alain Broillet, Prisma Regenscheit (2006): Forenzične kemijske analize rastlinskega materiala konoplje, ki vsebuje THC. Od tankoplastne kromatografije prek GC do metode HPLC. Applica 2006.
Koristna dejstva
Marihuana je sestavljena iz posušenih cvetov ter listov in stebel pod njimi pri ženski rastlini konoplje. To je najpogosteje uporabljana oblika in vsebuje približno od 3% do 20% THC. Posebne, intenzivno žlahtnjene oblike marihuane dosegajo vsebnost THC nad 30%. Marihuana je izhodiščni material za vse druge vrste izdelkov iz konoplje, ki vsebujejo THC. Za pretvorbo najbolj zastopanega kanabinoida, tetrahidrokanabinolne kisline (THCA), v psihoaktivni THC je treba sprožiti proces dekarboksilacije. Zato je treba konopljo in njene ekstrakte segreti ali dehidrirati, da pride do dekarboksilacije.
Kief označuje prah, bogat s trihomi, ki se s presejanjem pridobi iz listov in cvetov konoplje. Uporablja se bodisi v obliki prahu bodisi stisnjen v hašiševe ploščice.
Hašiš oziroma haš je ploščica ali kroglica koncentrirane smole, izdelana iz stisnjenega kiefa ali iz smole, postrgane s površine rastline in oblikovane v kroglice. Pojavlja se v različnih barvah, od črne do zlato rjave, odvisno od čistosti in izvora. Lahko se zaužije peroralno ali kadi, na primer v pipi, vodni pipi, bongu, pipi z vodnim mehurčenjem ali uparjalniku, z uporabo vročega noža, v džojntih, pomešan s cvetovi konoplje ali tobakom, z vdihavanjem dima iz steklenice ali kot sestavina hrane.
Tinktura konoplje označuje ekstrakt kanabinoidov v alkoholu. Za pripravo tinkture kanabinoide ekstrahiramo iz rastline konoplje z žganimi pijačami z visoko vsebnostjo alkohola (večinoma z žitnim alkoholom).
Hašiševo olje je smolnata matrica kanabinoidov, pridobljena z ekstrakcijo s topilom in oblikovana v strjeno ali viskozno maso. Hašiševo olje je zaradi visoke vsebnosti psihoaktivne spojine eden najmočnejših izdelkov iz konoplje. Uporaba hašiševega olja, ekstrahiranega z butanom in superkritičnim ogljikovim dioksidom, je v zadnjem času vse bolj priljubljena.
Infuzije označujejo različne vrste infuzij konoplje, ki se med seboj razlikujejo po širokem naboru nehlapnih topil, ki se lahko uporabljajo za njihovo pripravo. Za pripravo takšne infuzije rastlinski material konoplje zmešamo s topilom, nato pa ga stisnemo in filtriramo, da olja iz rastline preidejo v topilo. Običajno uporabljena topila so kakavovo maslo, mlečno maslo, jedilno olje, glicerin in vlažilna sredstva za kožo.
Medicinska marihuana označuje uporabo rastline konoplje kot zeliščne terapije po zdravnikovem priporočilu ter uporabo sintetičnega THC in kanabinoidov. Za takšno uporabo je praviloma potreben recept, distribucija pa običajno poteka v okviru, določenem z lokalno zakonodajo. Več raziskovalnih študij je pokazalo, da uporaba konoplje ali njenih derivatov deluje proti na primer slabosti in bruhanju zaradi kemoterapije, nevropatski bolečini in multipli sklerozi.