التحلل بالموجات فوق الصوتية للخلايا المهندسة بيولوجيا في الإنتاج الصناعي
تستخدم أنواع البكتيريا المهندسة بيولوجيا مثل الإشريكية القولونية وكذلك أنواع الثدييات والخلايا النباتية المعدلة وراثيا على نطاق واسع في التكنولوجيا الحيوية للتعبير عن الجزيئات. من أجل إطلاق هذه الجزيئات الحيوية المركبة ، يلزم وجود تقنية موثوقة لتعطيل الخلايا. الموجات فوق الصوتية عالية الأداء هي طريقة مجربة لتحلل الخلايا بكفاءة وموثوقية – قابلة للتطوير بسهولة إلى الإنتاجية الكبيرة. Hielscher الفوق صوتيات يقدم لك معدات الموجات فوق الصوتية عالية الأداء لتحلل الخلايا فعالة من أجل إنتاج كميات كبيرة من الجزيئات الحيوية عالية الجودة.
استخراج الجزيئات من مصانع الخلايا
لإنتاج مجموعة واسعة من الجزيئات الحيوية ، يمكن استخدام العديد من الميكروبات والخلايا النباتية المهندسة كمصانع للخلايا الميكروبية ، بما في ذلك الإشريكية القولونية ، العصوية الرقيقة ، الزائفة بوتيدا ، العقديات ، الوتدية الجلوتامية ، المكورات اللبنية ، البكتيريا الزرقاء ، Saccharomyces cerevisiae ، Pichia pastoris ، Yarrowia lipolytica ، Nicotiana benthamiana والطحالب ، من بين أشياء أخرى كثيرة. يمكن لمصانع الخلايا هذه إنتاج البروتينات والدهون والمواد الكيميائية الحيوية والبوليمرات والوقود الحيوي والمواد الكيميائية الزيتية ، والتي تستخدم كغذاء أو مواد خام للتطبيقات الصناعية. يتم استزراع الخلايا المستخدمة كمصانع للخلايا في مفاعلات حيوية مغلقة ، حيث يمكنها تحقيق كفاءة عالية وخصوصية ومتطلبات طاقة منخفضة.
لعزل الجزيئات المستهدفة عن مزارع الخلايا المهندسة بيولوجيا ، يجب تعطيل الخلايا بحيث يتم إطلاق المادة داخل الخلايا. تم تأسيس معرقلات الخلايا بالموجات فوق الصوتية كتقنية موثوقة وفعالة للغاية لتفكك الخلايا وإطلاق المركب.
مفككات الخلايا بالموجات فوق الصوتية مثل UIP2000hdT تستخدم لعزل المركبات من مصانع الخلايا الميكروبية.
مصانع الخلايا الميكروبية هي خلايا معدلة أيضيا تستخدم لتخليق مركبات قيمة مختلفة. تعطيل الخلايا بالموجات فوق الصوتية هو وسيلة فعالة وموثوقة لإطلاق المركبات القيمة من داخل الخلية.
الدراسة والرسم: ©فيلافيردي ، 2010.
مزايا اضطرابات الخلايا بالموجات فوق الصوتية
كتقنية غير حرارية وخفيفة ولكنها عالية الكفاءة ، تستخدم أجهزة التعطيل بالموجات فوق الصوتية في المختبر والصناعة لتحلل الخلايا ولإنتاج مستخلصات عالية الجودة ، على سبيل المثال تستخدم لعزل الجزيئات من مصانع الخلايا.
- كفاءة عالية
- غير حراري ، مثالي للمواد الحساسة لدرجة الحرارة
- نتائج موثوقة وقابلة للتكرار
- تحكم دقيق في المعالجة
- خطي قابل للتطوير إلى إنتاجية أكبر
- متاح للطاقات الإنتاجية الصناعية
الموجات فوق الصوتية للطاقة لتعطيل فعال لمصانع الخلايا الميكروبية
آلية وآثار اضطرابات الخلايا بالموجات فوق الصوتية:
يستخدم تعطيل الخلايا بالموجات فوق الصوتية قوة الموجات فوق الصوتية. تم تجهيز الخالط بالموجات فوق الصوتية / تعطيل الخلية مع مسبار (المعروف أيضا باسم sonotrode) مصنوعة من سبائك التيتانيوم التي تتذبذب بتردد عال من حوالي 20 كيلو هرتز. وهذا يعني أن المسبار بالموجات فوق الصوتية يجمع بين 20000 اهتزاز في الثانية في السائل الصوتي. تتميز الموجات فوق الصوتية المقترنة بالسائل بالتناوب بين دورات الضغط العالي / الضغط المنخفض. خلال دورة الضغط المنخفض ، يتمدد السائل وتنشأ فقاعات فراغ دقيقة. تنمو هذه الفقاعات الصغيرة جدا على مدى عدة دورات ضغط متناوبة حتى لا تتمكن من امتصاص أي طاقة إضافية. في هذه المرحلة ، تنفجر فقاعات التجويف بعنف وتخلق محليا بيئة غير عادية كثيفة الطاقة. تعرف هذه الظاهرة باسم التجويف الصوتي وتتميز بدرجات حرارة عالية جدا محليا وضغوط عالية جدا وقوى قص. تعمل ضغوط القص هذه على كسر جدران الخلايا بكفاءة وزيادة نقل الكتلة بين داخل الخلية والمذيب المحيط. كتقنية ميكانيكية بحتة ، يتم استخدام قوى القص المولدة بالموجات فوق الصوتية على نطاق واسع والإجراء الموصى به لتعطيل الخلايا البكتيرية ، وكذلك لعزل البروتين. كطريقة بسيطة وسريعة لتعطيل الخلايا ، تعتبر الصوتنة مثالية لعزل الأحجام الصغيرة والمتوسطة والكبيرة الحجم. وقد تم تجهيز الموجات فوق الصوتية الرقمية Hielscher مع قائمة واضحة من الإعدادات للتحكم الصوتنة بدقة. يتم تخزين جميع بيانات الصوتنة تلقائيا على بطاقة SD مدمجة ويمكن الوصول إليها ببساطة. خيارات متطورة لتبديد الحرارة مثل التبريد الخارجي ، صوتنة في وضع النبض وما إلى ذلك أثناء عملية التفكك بالموجات فوق الصوتية تضمن الحفاظ على درجة حرارة العملية المثالية وبالتالي سلامة المركبات الحساسة للحرارة المستخرجة.
تؤكد الأبحاث على نقاط القوة في تعطيل الخلايا بالموجات فوق الصوتية واستخراجها
يستأنف البروفيسور شيمات وآخرون (2017) في دراستهم أن "الاستخراج بمساعدة الموجات فوق الصوتية هو بديل أخضر وقابل للتطبيق اقتصاديا للتقنيات التقليدية للمنتجات الغذائية والطبيعية. الفوائد الرئيسية هي تقليل وقت الاستخراج والمعالجة ، وكمية الطاقة والمذيبات المستخدمة ، وعمليات الوحدة ، وثاني أكسيد الكربون2 الانبعاثات".
استخدم Gabig-Ciminska et al. (2014) خالط الضغط العالي وخلية بالموجات فوق الصوتية dsintegrator في دراستهم لتحلل الجراثيم من أجل إطلاق الحمض النووي. بمقارنة كلتا الطريقتين لتعطيل الخلايا ، خلص فريق البحث إلى أنه فيما يتعلق بتحلل الخلية للحمض النووي للجراثيم ، "تم إجراء التحليل عن طريق استخدام محللات الخلايا من التجانس عالي الضغط. بعد ذلك ، أدركنا أن تعطيل الخلايا بالموجات فوق الصوتية له مزايا بارزة لهذا الغرض. إنه سريع إلى حد ما ويمكن معالجته لأحجام عينات صغيرة ". (غابيغ-سيمينسكا وآخرون، 2014)
تفكك الخلايا بالموجات فوق الصوتية الصناعية UIP4000hdT (4000 واط ، 20 كيلو هرتز) للعزل المضمن المستمر وتنقية المركبات المركبة من مصانع الخلايا الميكروبية.
الجزيئات الحيوية من مصانع الخلايا لإنتاج الأغذية
مصانع الخلايا الميكروبية هي منهجية إنتاج قابلة للتطبيق وفعالة باستخدام الكائنات الميكروبية لإنتاج غلات عالية من المستقلبات المحلية وغير الأصلية عن طريق الهندسة الحيوية الأيضية للكائنات الحية الدقيقة الميكروبية مثل البكتيريا والخمائر والفطريات وما إلى ذلك. على سبيل المثال ، يتم إنتاج الإنزيمات السائبة باستخدام الكائنات الحية الدقيقة مثل Aspergillus oryzae والفطريات والبكتيريا. وتستخدم هذه الإنزيمات السائبة لإنتاج الأغذية والمشروبات، وكذلك في الزراعة والطاقة الحيوية والرعاية المنزلية.
تنتج بعض البكتيريا مثل Acetobacter xylinum و Gluconacetobacter xylinus السليلوز أثناء عملية التخمير ، حيث يتم تصنيع الألياف النانوية في عملية من أسفل إلى أعلى. السليلوز البكتيري (المعروف أيضا باسم السليلوز الميكروبي) يعادل كيميائيا السليلوز النباتي ، ولكنه يتمتع بدرجة عالية من التبلور والنقاء العالي (خال من اللجنين والهيميسيلولوز والبكتين والمكونات الحيوية الأخرى) بالإضافة إلى بنية فريدة من السليلوز النانوية المنسوجة ثلاثية الأبعاد (3D) شبكة شبكية. (راجع تشونغ ، 2020) بالمقارنة مع السليلوز المشتق من النباتات ، فإن السليلوز البكتيري أكثر استدامة والسليلوز المنتج نقي ولا يتطلب خطوات تنقية معقدة. الموجات فوق الصوتية واستخراج المذيبات باستخدام NaOH أو SDS (كبريتات دوديسيل الصوديوم) فعالة جدا لعزل السليلوز البكتيري من الخلايا البكتيرية.
الجزيئات الحيوية من مصانع الخلايا لإنتاج الأدوية واللقاحات
أحد أبرز المنتجات الصيدلانية المشتقة من مصانع الخلايا هو الأنسولين البشري. لإنتاج الأنسولين المهندسة بيولوجيا ، يتم استخدام الإشريكية القولونية في الغالب و Saccharomyces cerevisiae. نظرا لأن الجزيئات ذات الحجم النانوي المركب حيويا توفر توافقا حيويا عاليا ، فإن الجسيمات النانوية البيولوجية مثل الفيريتين مفيدة للعديد من تطبيقات التصنيع الحيوي. بالإضافة إلى ذلك ، غالبا ما يكون الإنتاج في الميكروبات المهندسة الأيضية أكثر فعالية بشكل ملحوظ في الغلة التي تم الحصول عليها. فعلى سبيل المثال، زاد إنتاج حمض الأرتيميسينيك والريسفيراترول والليكوبين عشرة أضعاف ليصل إلى عدة مئات من الأضعاف، وهو قائم بالفعل أو قيد التطوير للإنتاج على نطاق صناعي. (راجع ليو وآخرون؛ ميكروب. حقيقة الخلية. 2017)
على سبيل المثال ، تعتبر الجزيئات الحيوية ذات الحجم النانوي القائمة على البروتين ذات خصائص التجميع الذاتي مثل الفيريتين والجسيمات الشبيهة بالفيروسات مثيرة للاهتمام بشكل خاص لتطوير اللقاح لأنها تحاكي حجم وهيكل مسببات الأمراض وقابلة للاقتران السطحي للمستضدات لتعزيز التفاعل مع الخلايا المناعية. يتم التعبير عن هذه الجزيئات في ما يسمى بمصانع الخلايا (على سبيل المثال ، سلالات الإشريكية القولونية المهندسة) ، والتي تنتج جزيئا مستهدفا معينا.
بروتوكول التحلل بالموجات فوق الصوتية والإشريكية القولونية BL21 لإطلاق الفيريتين
الفيريتين هو بروتين وظيفته الأساسية هي تخزين الحديد. يظهر الفيريتين قدرات واعدة كجسيمات نانوية ذاتية التجميع في اللقاحات ، حيث يتم استخدامه كوسيلة لتوصيل اللقاح (مثل بروتينات ارتفاع SARS-Cov-2). البحث العلمي لصن وآخرون. (2016) أنه يمكن إطلاق الفيريتين المؤتلف كشكل قابل للذوبان من الإشريكية القولونية بتركيزات منخفضة من كلوريد الصوديوم (≤50 مليمول / لتر). من أجل التعبير عن الفيريتين في E. coli BL21 وإطلاق ferrtin ، تم تطبيق البروتوكول التالي بنجاح. تم تحويل بلازميد pET-28a / ferritin المؤتلف إلى سلالة E coli BL21 (DE3). تمت زراعة خلايا الفيريتين E coli BL21 (DE3) في وسائط نمو LB مع 0.5٪ كاناميسين عند 37 درجة مئوية ومستحثة عند OD600 من 0.6 مع 0.4٪ isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside لمدة 3 ساعات عند 37 درجة مئوية. ثم تم حصاد المزرعة النهائية عن طريق الطرد المركزي عند 8000 جرام لمدة 10 دقائق عند 4 درجات مئوية ، وتم جمع الحبيبات. بعد ذلك ، تم إعادة تعليق الحبيبات في وسط LB (1٪ كلوريد الصوديوم ، 1٪ Typone ، 0.5٪ مستخلص الخميرة) / محلول التحلل (20 مليمول / لتر Tris ، 50 مليمول / لتر كلوريد الصوديوم ، 1 مليمول / لتر EDTA ، درجة الحموضة 7.6) وتركيزات مختلفة من محلول كلوريد الصوديوم (0 ، 50 ، 100 ، 170 ، و 300 مليمول / لتر) ، على التوالي. بالنسبة لتحلل الخلايا البكتيرية ، تم تطبيق صوتنة في وضع النبض: على سبيل المثال ، باستخدام الموجات فوق الصوتية UP400St بسعة 100٪ مع دورة عمل مدتها 5 ثوان ON ، 10 ثوان إيقاف ، لمدة 40 دورة) ثم يتم الطرد المركزي عند 10000 جم لمدة 15 دقيقة عند 4 درجات مئوية. تم تحليل المادة الطافية والراسبة بواسطة الرحلان الكهربائي لكبريتات دوديسيل الصوديوم بولي أكريلاميد جل (SDS-PAGE). تم فحص جميع المواد الهلامية الملطخة بكبريتات دوديسيل الصوديوم باستخدام ماسح ضوئي عالي الدقة. تم تحليل صور الجل باستخدام برنامج Magic Chemi 1D. للحصول على الوضوح الأمثل ، تم الكشف عن نطاقات البروتين عن طريق ضبط المعلمات. تم إنشاء بيانات النطاقات من ثلاث نسخ تقنية. (راجع صن وآخرون ، 2016)
اضطرابات الخلايا بالموجات فوق الصوتية للتحلل الصناعي لمصانع الخلايا
التحلل بالموجات فوق الصوتية والاستخراج هو وسيلة موثوقة ومريحة لإطلاق المستقلبات من مصانع الخلايا وبالتالي المساعدة في إنتاج فعال للجزيئات المستهدفة. تتوفر أجهزة تعطيل الخلايا بالموجات فوق الصوتية من المختبر إلى الحجم الصناعي ويمكن تحجيم العمليات بشكل خطي تماما.
Hielscher Ultrasonics هو شريكك المختص لتعطيل الموجات فوق الصوتية عالية الأداء ولديه خبرة طويلة في مجال زرع أنظمة الموجات فوق الصوتية في أعلى مقاعد البدلاء والإعدادات الصناعية.
عندما يتعلق الأمر الأجهزة والبرامج المتطورة، Hielscher الفوق صوتيات أنظمة تعطيل الخلايا يلبي جميع متطلبات التحكم الأمثل في العملية، وسهولة التشغيل وسهولة الاستخدام. العملاء والمستخدمين من الموجات فوق الصوتية Hielscher قيمة الفائدة التي Hielscher تعطيل الخلايا بالموجات فوق الصوتية والمستخلصات تسمح لرصد عملية دقيقة والتحكم – عبر شاشة اللمس الرقمية وجهاز التحكم عن بعد في المتصفح. يتم تخزين جميع بيانات الصوتنة الهامة (مثل الطاقة الصافية والطاقة الكلية والسعة والمدة ودرجة الحرارة والضغط) تلقائيا كملف CSV على بطاقة SD مدمجة. وهذا يساعد على الحصول على نتائج قابلة للتكرار وقابلة للتكرار ويسهل توحيد العملية وكذلك الوفاء بممارسات التصنيع الجيدة (cGMP).
وبطبيعة الحال، تم تصميم المعالجات بالموجات فوق الصوتية Hielscher لعملية 24/7 تحت الحمل الكامل، وبالتالي يمكن تشغيلها بشكل موثوق في إعدادات الإنتاج الصناعي. نظرا للمتانة العالية والصيانة المنخفضة ، فإن وقت تعطل معدات الموجات فوق الصوتية منخفض حقا. تقلل ميزات التنظيف المكاني (التنظيف في المكان) و SIP (التعقيم في المكان) من التنظيف الشاق ، خاصة وأن جميع الأجزاء الرطبة عبارة عن أسطح معدنية ناعمة (بدون فتحات أو فوهات مخفية).
يمنحك الجدول أدناه مؤشرا على قدرة المعالجة التقريبية لأجهزة الموجات فوق الصوتية لدينا:
| حجم الدفعة | معدل التدفق | الأجهزة الموصى بها |
|---|---|---|
| 1 إلى 500 مل | 10 إلى 200 مل / دقيقة | UP100H |
| 10 إلى 2000 مل | 20 إلى 400 مل / دقيقة | UP200Ht, UP400St |
| 0.1 إلى 20 لتر | 0.2 إلى 4 لتر / دقيقة | UIP2000hdT |
| 10 إلى 100 لتر | 2 إلى 10 لتر / دقيقة | UIP4000hdT |
| ن.أ. | 10 إلى 100 لتر / دقيقة | UIP16000 |
| ن.أ. | أكبر | مجموعة من UIP16000 |
اتصل بنا! / اسألنا!
Hielscher Ultrasonics بتصنيع المجانسات بالموجات فوق الصوتية عالية الأداء لخلط التطبيقات، والتشتت، والاستحلاب والاستخراج على المختبر، التجريبية والصناعية النطاق.
الأدب / المراجع
- Sun, W., Jiao, C., Xiao, Y., Wang, L., Yu, C., Liu, J., Yu, Y., Wang, L. (2016):Salt-Dependent Aggregation and Assembly of E Coli-Expressed Ferritin. Dose-Response, March 2016.
- Rodrigues, M.Q.; Alves, P.M.; Roldão, A. (2021): Functionalizing Ferritin Nanoparticles for Vaccine Development. Pharmaceutics 2021, 13, 1621.
- Farid Chemat, Natacha Rombaut, Anne-Gaëlle Sicaire, Alice Meullemiestre, Anne-Sylvie Fabiano-Tixier, Maryline Abert-Vian (2017): Ultrasound assisted extraction of food and natural products. Mechanisms, techniques, combinations, protocols and applications. A review. Ultrasonics Sonochemistry, Volume 34, 2017. 540-560.
- Villaverde, Antonio (2010): Nanotechnology, bionanotechnology and microbial cell factories. Microbial Cell Factories 2010 9:53.
حقائق تستحق المعرفة
سونو المفاعلات الحيوية
يستخدم الموجات فوق الصوتية من ناحية لتعطيل الخلايا من أجل إطلاق المركبات داخل الخلايا ، ولكن يتم تطبيقها بسعات أكثر اعتدالا و / أو رشقات نارية نابضة بالموجات فوق الصوتية ، يمكن أن تعزز صوتنة بشكل كبير الإنتاجية الأيضية للخلايا الميكروبية والنباتية والحيوانية في المفاعلات الحيوية وبالتالي تعزيز عمليات التكنولوجيا الحيوية. يمكن دمج مجسات الموجات فوق الصوتية ببساطة في المفاعلات الحيوية (ما يسمى المفاعلات الحيوية سونو) من أجل تكثيف كفاءة المحفزات الحيوية الحية. الموجات فوق الصوتية Hielscher تسمح لظروف الموجات فوق الصوتية التي تسيطر عليها بدقة، والتي يمكن ضبطها على النحو الأمثل لتحويل الحفاز عالية من الخلايا الحية. معرفة المزيد عن تحقيقات الموجات فوق الصوتية Hielscher للمفاعلات sonobioreactors وآثار التحفيز الحيوي المحسن بالموجات فوق الصوتية!
مصانع الخلايا وتوليف المستقلبات
يمكن للكائنات الحية الدقيقة المختلفة توليف مستقلبات مماثلة ، على سبيل المثال ، لإنتاج الأحماض الأمينية Corynebacterium و Brevibacterium و Escherichia coli تم استخدامها بنجاح. تم تصنيع الفيتامينات hae باستخدام البروبيونية و Pseudomonas. الأحماض العضوية مشتقة من الرشاشيات ، Lactobacillus ، Rhizopus. في حين أن الإنزيمات يمكن أن تصنعها الرشاشيات والعصوية. يمكن إنتاج المضادات الحيوية بواسطة Streptomyces والبنسليوم. بينما لإنتاج المواد الخافضة للتوتر السطحي الحيوي التي تتشكل عادة تستخدم الزائفة والعصوية و Lactobacillus كمصانع للخلايا.
الإشريكية القولونية كمصانع للخلايا الميكروبية
تستخدم بكتيريا E. coli وسلالاتها العديدة على نطاق واسع في البيولوجيا الجزيئية وقد أصبحت واحدة من أولى نماذج الخلايا الفعالة المستخدمة كمصانع للخلايا الميكروبية لإنتاج البروتينات المؤتلفة والوقود الحيوي والمواد الكيميائية الأخرى المختلفة. تتميز الإشريكية القولونية بقدرة طبيعية على إنتاج العديد من المركبات ، والتي تم تحسينها عن طريق الهندسة الحيوية والتعديلات الوراثية. على سبيل المثال ، عن طريق نقل الإنزيمات غير المتجانسة ، تم تعديل قدرة E.coli على إنتاج العديد من المنتجات من أجل تطوير مسارات جديدة للتخليق الحيوي.
(Antonio Valle, Jorge Bolívar: Chapter 8 – Escherichia coli, the workhorse cell factory for the production of chemicals. In: Editor(s): Vijai Singh, Microbial Cell Factories Engineering for Production of Biomolecules, Academic Press, 2021. 115-137.)
Streptomyces كمصانع للخلايا الميكروبية
Streptomyces هي أكبر مجموعة من الفطريات الشعاعية. تنتشر أنواع Streptomyces على نطاق واسع في النظم الإيكولوجية المائية والبرية. أعضاء جنس Streptomyces ذات أهمية تجارية بسبب قدرتهم على إنتاج عدد هائل من الجزيئات الحيوية والمستقلبات الثانوية النشطة بيولوجيا. وتنتج المضادات الحيوية المفيدة سريريا مثل التتراسيكلين ، أمينوغليكوزيدات ، الماكروليدات ، الكلورامفينيكول ، والريفاميسينات. بالإضافة إلى المضادات الحيوية ، تنتج Streptomyces أيضا منتجات صيدلانية أخرى ذات قيمة عالية بما في ذلك مضادات السرطان ، والمحفزات المناعية ، والمثبطة للمناعة ، والعوامل المضادة للأكسدة ، والمبيدات الحشرية ، والأدوية المضادة للطفيليات ، والتي لها تطبيقات طبية وزراعية واسعة.
تنتج أنواع Streptomyces مجموعة من الإنزيمات المهمة طبيا ، بما في ذلك L-asparaginase و uricase و cholesterol oxidase. يمكن أن تنتج العديد من الفطريات الشعاعية إنزيمات مهمة صناعيا مثل السليولاز والكيتيناز والشيتوزاناز والأميليز α والبروتياز والليباز. يمكن أن تنتج العديد من الفطريات الشعاعية أصباغ مختلفة يحتمل أن تكون بديلا جيدا للألوان الاصطناعية. تتمتع أنواع Streptomyces بقدرة كبيرة على إنتاج جزيئات حيوية سطحية نشطة بما في ذلك المستحلبات الحيوية والمواد الخافضة للتوتر السطحي الحيوي. تم إنتاج الأكاربوز المضاد لمرض السكر بواسطة سلالات Streptomyces عن طريق التخمير الميكروبي. أظهرت أنواع Streptomyces القدرة على توليف مثبطات تخليق الكوليسترول ، مثل برافاستاتين. في الآونة الأخيرة ، يمكن استخدام أنواع Streptomyces ك "مصانع نانوية" صديقة للبيئة لتخليق الجسيمات النانوية. بعض أنواع Streptomyces واعدة لإنتاج فيتامين ب 12.
(Noura El-Ahmady El-Naggar: Chapter 11 – Streptomyces-based cell factories for production of biomolecules and bioactive metabolites, In: Editor(s): Vijai Singh, Microbial Cell Factories Engineering for Production of Biomolecules, Academic Press, 2021. 183-234.)
Hielscher الفوق صوتيات بتصنيع الخالط بالموجات فوق الصوتية عالية الأداء من المختبر ل الحجم الصناعي.