تجزئة ألفا سينوكلين باستخدام جهاز VialTweeter Sonicator
يتم تجزئة ألياف وشرائط α-synuclein في البحث العلمي لتوليد قصاصات ليفية أصغر أو حتى جزيئات بروتين فردية ، والتي يمكن تحليلها بسهولة أكبر باستخدام تقنيات تجريبية مختلفة. يعد VialTweeter Sonicator أحد أكثر أجهزة الموجات فوق الصوتية استخداما لتجزئة ألفا سينوكلين بكفاءة وموثوقية.
α-سينوكلين في البحوث
ألياف ألفا سينوكلين هي مجاميع بروتينية ترتبط ارتباطا وثيقا بالاضطرابات التنكسية العصبية مثل مرض باركنسون وأشكال معينة من الخرف ، بما في ذلك الخرف مع أجسام ليوي. تهدف الأبحاث التي تركز على ألياف ألفا سينوكلين إلى فهم دورها في تطور المرض وتطوير التدخلات العلاجية المحتملة. من خلال تكسير ألياف ألفا سينوكلين إلى أجزاء أصغر ، يمكن للباحثين التحقيق في سماتها الهيكلية المحددة. على سبيل المثال ، يمكن تفتيت ألياف ألفا سينوكلين الباحثين من التحقيق في تفاعلاتها مع جزيئات أخرى ، مثل البروتينات أو الدهون أو الجزيئات الصغيرة. من خلال إنتاج شظايا أصغر ، يمكن فحص مواقع الربط والتقارب لهؤلاء الشركاء المتفاعلين بشكل أكثر فعالية. قد تظهر الرتوش والأشرطة الأصغر α-Syn أيضا سمية متغيرة وتأثيرات كيميائية حيوية. لذلك ، فإن تقنية التجزئة الموثوقة والفعالة ، والتي تنتج نتائج قابلة للتكرار في معالجة عينة سريعة وبسيطة ، أمر بالغ الأهمية.
تجزئة ألفا سين بالموجات فوق الصوتية: جهاز الصوتنة VialTweeter هو نظام إعداد العينات بالموجات فوق الصوتية الذي يقوم بصوتنة ما يصل إلى 10 قوارير في وقت واحد في ظل نفس الظروف بالضبط. تسمح الإعدادات القابلة للبرمجة بإعادة التشغيل البسيط والسريع لنفس التجارب ، مما يعطي نتائج موثوقة للغاية وقابلة للتكرار في تجزئة ألياف ألفا سينوكلين.
فيال تويتر سونيكاتور للتجزئة بالموجات فوق الصوتية في وقت واحد من عينات ألفا سينوكلين متعددة.
تحضير عينة α-سينوكلين باستخدام جهاز سونيكاتور
تتضمن إحدى طرق دراسة ألياف ألفا سينوكلين استخراجها وتجزئتها باستخدام تقنيات مثل الصوتنة. Sonication هي عملية تستخدم موجات فوق صوتية عالية الكثافة ومنخفضة التردد لتعطيل وتكسير مجاميع البروتين ، مما يؤدي إلى إطلاق ألياف أصغر أو جزيئات بروتين فردية. جهاز الصوتيات VialTweeter هو جهاز شائع الاستخدام في الدراسات البحثية المتعلقة ب α-synuclein لهذا الغرض.
تصف العديد من الدراسات البحثية بروتوكولات تحضير العينات الدقيقة لصوتنة ألياف ألفا سينوكلين ، والتي تستخدم Hielscher VialTweeter لتجزئة ألياف α-synuclein بكفاءة وموثوقية. من خلال تجزئة الألياف بالموجات فوق الصوتية ، يمكن للباحثين تحليل المنتجات الناتجة وفحص هيكلها وسميتها وتفاعلاتها مع الجزيئات الأخرى. يقدم هذا البحث رؤى مهمة حول الآليات الكامنة وراء التنكس العصبي وربما تحديد أهداف علاجية جديدة. تسمح بروتوكولات صوتنة α-synuclein الراسخة باستخدام جهاز صوتنة VialTweeter بنتائج موثوقة وقابلة للتكرار.
الصور العلوية: ألياف ألفا سينوكلين غير مجزأة
تجزئة بالموجات فوق الصوتية من الألياف α سينوكلين – البروتوكولات
نظرا لأن العديد من الباحثين يستخدمون صوتي VialTweeter كتقنية تجزئة مفضلة لإنتاج شظايا ليفية موحدة α-synuclein ، فإن البروتوكولات المعمول بها متاحة بسهولة. أدناه يمكنك العثور على بعض بروتوكولات التجزئة المثالية.
إعداد بذور كليرتاو: تم تخفيف ألياف ClearTau إلى 10 ميكرومتر في dH2O وصوتنة بسعة 70٪ لمدة 50 ثانية مع دورة 1 ثانية ON 1 s OFF في الأنبوب باستخدام جهاز الصوتنة UP200St مع VialTweeter. تميزت البذور بالمجهر الإلكتروني.
قياس مضان ThS: تم تخفيف ألياف ClearTau إلى 2.5 ميكرومتر في dH2O وصوتنة بسعة 70٪ لمدة 50 ثانية مع دورة 1 s ON 1 s OFF في الأنبوب باستخدام UP200St مع VialTweeter. تم استخدام مونومر Tau 4R2N كامل الطول 2.5 ميكرومتر كعنصر تحكم. إلى تفاعل 100 ميكرولتر ، تمت إضافة 100 ميكرولتر من ThS (10 ميكرومتر) ، مما أدى إلى تركيزات البروتين النهائية البالغة 1.25 ميكرومتر. تم قياس مضان ThS في نقطة زمنية واحدة باستخدام 96 لوحة سفلية واضحة جيدا تم إعدادها في قارئ FLUOstar Omega microplate مع الإثارة عند 445 نانومتر وتم تسجيل الانبعاث عند 485 نانومتر.
(راجع ليمورينكو وآخرون ، 2023)
طول موحد α-synuclein باستخدام صوتنة: تم تقليل عدم تجانس طول الألياف والشرائط α-syn عن طريق الصوتنة لمدة 20 دقيقة على الجليد في أنابيب Eppendorf سعة 2 مل في VialTweeter مضبوط بسعة 75٪ ، نبضات 0.5 ثانية.
(راجع بوسيت وآخرون ، 2013)
تم إجراء مراقبة جودة الأحادي المؤتلف البشري WT أو S129A a-Syn والأشكال المتعددة الليفية التي تولدها بالإضافة إلى a-Syn 1-110. في وقت لاحق ، تم تجزئة الأشكال الليفية عن طريق صوتنة لمدة 20 دقيقة في أنابيب Eppendorf 2 مل في الموجات فوق الصوتية VialTweeter لتوليد جزيئات ليفية بمتوسط حجم 42-52 نانومتر مناسبة للداخل الخلوي.
(راجع شريفاستافا وآخرون ، 2020)
توصيف خمسة أشكال ليفية α-سين. (أ) الصور المجهرية الإلكترونية الناقلة للأشكال متعددة الأشكال الليفية α-Syn الملطخة سالبا ، والشرائط ، والألياف -91 ، والألياف -65 ، والألياف -110 قبل (الممر العلوي) وبعد التجزئة باستخدام VialTweeter (الممر السفلي). (ب) يوضح التوزيع الطولي للأشكال المتعددة الليفية المجزأة. يشار إلى عدد (n) من التجميعات الليفية التي اشتقت منها الرسوم البيانية.
تم تجزئة ألياف α-Syn بواسطة صوتنة لمدة 20 دقيقة في أنابيب Eppendorf سعة 2 مل في VialTweeter لتوليد جزيئات ليفية بمتوسط حجم 42-52 نانومتر كما تم تقييمه بواسطة تحليل TEM.
(راجع نيجريني وآخرون ، 2022)
تم تجزئة الألياف المعاد تعليقها 91 (في PBS) قبل إضافتها إلى مزارع الخلايا عن طريق الصوتنة لمدة 20 دقيقة في أنابيب Eppendorf سعة 2 مل باستخدام جهاز صوتي Vial Tweeter ، المقتبس ، المجمد في النيتروجين السائل وتخزينه حتى الاستخدام عند -80 درجة مئوية.
(راجع فاجوج وآخرون ، 2021)
UIP400MTP Sonicator لتجزئة ألياف ألفا سينوكلين في ألواح متعددة الآبار.
VialTweeter و Lab Sonicators لتجزئة α-Syn
Hielscher الفوق صوتيات معترف بها في جميع أنحاء العالم باعتبارها الشركة الرائدة في مجال الموجات فوق الصوتية المتطورة. موثوق بها وراسخة في مختبرات البحوث الكبرى في جميع أنحاء العالم، لدينا الموجات فوق الصوتية تقدم جودة لا مثيل لها والأداء لتجاربك الهامة.
مع Hielscher VialTweeter وأي صوتنة Hielscher أخرى، سوف تواجه راحة المستخدم لا مثيل لها، كما أنها مصممة بعناية للحصول على نتائج قابلة للتكرار، وسهولة الاستخدام والتشغيل السلس. مع ميزات تسجيل البيانات التلقائية ، يمكنك التركيز على البحث الخاص بك بينما تقوم الموجات فوق الصوتية لدينا بتسجيل البيانات المهمة بدقة من أجل التكاثر والدقة.
حقق نتائج متسقة وقابلة للتكرار بثقة!
لدينا الموجات فوق الصوتية هي هندستها وتصنيعها في ألمانيا. الدقة الألمانية وأعلى جودة هندسية لضمان تحضير عينة موثوقة ودقيقة مثل تجزئة ألياف ألفا سينوكلين في كل مرة. لا مزيد من القلق بشأن النتائج غير المتسقة - تضمن تقنية الموجات فوق الصوتية لدينا بقاء بحثك في طليعة التقدم العلمي.
لكن ليس هذا كل شيء! يمتد التزامنا بالتميز إلى ما هو أبعد من منتجاتنا. نحن نفخر بخدمة العملاء الاستثنائية لدينا ، حيث نقدم دعم الخبراء لمعالجة أي استفسارات أو مخاوف قد تكون لديكم. فريقنا المتخصص موجود هنا لمساعدتك في كل خطوة من رحلتك البحثية ، مما يضمن لك الحصول على أقصى استفادة من الموجات فوق الصوتية لدينا.
اختر الابتكار والموثوقية وتجربة المستخدم الاستثنائية - اختر صوتيات مختبرنا مثل VialTweeter لتجزئة ألياف ألفا سينوكلين. استفد من البروتوكولات المعمول بها بالفعل وانضم إلى صفوف كبار الباحثين الذين يثقون في تقنيتنا في دراساتهم النقدية. ارتق بأبحاثك واستكشف آفاقا جديدة في أبحاث الخرف والأمراض التنكسية العصبية باستخدام أحدث أجهزة الموجات فوق الصوتية.
- كفاءة عالية
- أحدث التقنيات
- موثوقيه & متانه
- التكاثر
- تحكم دقيق وقابل للتعديل في العملية
- لأي وحدة تخزين
- برنامج ذكي
- الميزات الذكية (على سبيل المثال ، قابلة للبرمجة ، وبروتوكول البيانات ، والتحكم عن بعد)
- سهل وآمن للعمل
- صيانة منخفضة
- التنظيف المكاني (التنظيف المكاني)
التصميم والتصنيع والاستشارات – جودة صنع في ألمانيا
Hielscher الموجات فوق الصوتية معروفة جيدا لأعلى معايير الجودة والتصميم. المتانة والتشغيل السهل تسمح بالتكامل السلس للموجات فوق الصوتية لدينا في المنشآت الصناعية. يتم التعامل بسهولة مع الظروف القاسية والبيئات الصعبة بواسطة الموجات فوق الصوتية Hielscher.
Hielscher Ultrasonics هي شركة حاصلة على شهادة الأيزو وتركز بشكل خاص على الموجات فوق الصوتية عالية الأداء التي تتميز بأحدث التقنيات وسهولة الاستخدام. بطبيعة الحال، صوتيات Hielscher هي CE المتوافقة وتلبية متطلبات UL، وكالة الفضاء الكندية وبنفايات.
يمنحك الجدول أدناه مؤشرا على قدرة المعالجة التقريبية لأجهزة الموجات فوق الصوتية بحجم المختبر:
| الأجهزة الموصى بها | حجم الدفعة | معدل التدفق |
|---|---|---|
| UIP400MTP | لوحات متعددة الآبار? microtiter | ن.أ. |
| كوب بالموجات فوق الصوتيةهورن | CupHorn للقوارير أو الدورق | ن.أ. |
| جي دي ميني2 | مفاعل التدفق الجزئي بالموجات فوق الصوتية | ن.أ. |
| VialTweeter | 0.5 إلى 1.5 مل | ن.أ. |
| UP100H | 1 إلى 500 مل | 10 إلى 200 مل? دقيقة |
| UP200Ht, UP400St | 10 إلى 2000 مل | 20 إلى 400 مل? دقيقة |
اتصل بنا!? اسألنا!
فيال تويتر يستخدم عادة لتفتيت ألياف ألفا سينوكلين كخطوة لإعداد العينة قبل التحليل
الأدب? المراجع
- Emil Dandanell Agerschou, Marie P. Schützmann, Nikolas Reppert, Michael M. Wördehoff, Hamed Shaykhalishahi, Alexander K. Buell, Wolfgang Hoyer (2021): β-Turn exchanges in the α-synuclein segment 44-TKEG-47 reveal high sequence fidelity requirements of amyloid fibril elongation. Biophysical Chemistry, Volume 269, 2021.
- Bousset, L., Pieri, L., Ruiz-Arlandis, G. et al. (2013): Structural and functional characterization of two alpha-synuclein strains. Nature Communications 4, 2575 (2013).
- Vajhøj, Charlott; Schmid, Benjamin; Alik, Ania; Melki, Ronald; Fog, Karina; Holst, Bjørn; Stummann, Tina (2021): Establishment of a human induced pluripotent stem cell neuronal model for identification of modulators of A53T α-synuclein levels and aggregation. PLOS ONE 16, 2021.
- Dieriks B.V.; Highet B.; Alik A.; Bellande T.; Stevenson T.J.; Low V.; Park T.I.; Correia J.; Schweder P.; Faull R.L.M.; Melki R.; Curtis M.A.; Dragunow M. (2022): Human pericytes degrade diverse α-synuclein aggregates. PLoS One, Nov 18;17(11), 2022.
- Amulya Nidhi Shrivastava, Luc Bousset, Marianne Renner, Virginie Redeker, Jimmy Savistchenko, Antoine Triller, Ronald Melki (2020): Differential Membrane Binding and Seeding of Distinct α-Synuclein Fibrillar Polymorphs. Biophysical Journal, Volume 118, Issue 6, 2020. 1301-1320.
- Negrini M, Tomasello G, Davidsson M, Fenyi A, Adant C, Hauser S, Espa E, Gubinelli F, Manfredsson FP, Melki R, Heuer A. (2022): Sequential or Simultaneous Injection of Preformed Fibrils and AAV Overexpression of Alpha-Synuclein Are Equipotent in Producing Relevant Pathology and Behavioral Deficits. Journal of Parkinsons Disease 12(4), 2022. 1133-1153.
- Limorenko G, Tatli M, Kolla R, Nazarov S, Weil MT, Schöndorf DC, Geist D, Reinhardt P, Ehrnhoefer DE, Stahlberg H, Gasparini L, Lashuel HA (2023): Fully co-factor-free ClearTau platform produces seeding-competent Tau fibrils for reconstructing pathological Tau aggregates. Nature Communications 4;14(1), July 2023.
أسئلة مكررة
هل ألفا سينوكلين أميلويد؟
Yes, alpha-synuclein can form amyloid-like fibrils. It is a key component of Lewy bodies, the pathological hallmark of Parkinson’s disease and other synucleinopathies. Its aggregation follows a nucleation-dependent polymerization process similar to classical amyloids.
ما هو الفرق بين الأميلويد بيتا وألفا سينوكلين؟
Amyloid-beta (Aβ) and alpha-synuclein (α-syn) are distinct proteins that form pathological aggregates in neurodegenerative diseases. Aβ, derived from the amyloid precursor protein (APP), is primarily associated with Alzheimer’s disease and forms extracellular plaques. In contrast, α-syn is a presynaptic neuronal protein that aggregates intracellularly in Parkinson’s disease and related disorders. While both exhibit β-sheet-rich amyloid structures, they differ in their sequences, aggregation pathways, and disease-specific pathology.
ما نوع البروتين هو الأميلويد؟
الأميلويد هو بروتين ليفي غير مطوي يتبنى بنية متقاطعة β ويتجمع في ألياف غير قابلة للذوبان. عادة ما يتم اشتقاق هذه البروتينات من سلائف قابلة للذوبان بشكل طبيعي تخضع لتغييرات توافقية ، مما يؤدي إلى التجميع الذاتي والترسيب. ترتبط الأميلويدات بالعديد من الأمراض التنكسية العصبية والجهازية ، حيث يساهم تجميعها في السمية الخلوية وتلف الأنسجة. تعرف على كيفية مساعدة UIP400MTP الصوتنة ذات 96 بئرا على تكوين ألياف الأميلويد القياسية بسرعة لأغراض البحث!
ما هي الأمراض التي تسببها الأميلويدات؟
تتورط الأميلويد في العديد من الأمراض ، والتي يطلق عليها مجتمعة الأميلويدوز. وتشمل هذه:
- الأمراض التنكسية العصبية: Alzheimer’s disease (Aβ), Parkinson’s disease (α-syn), Huntington’s disease (mutant huntingtin), and prion diseases (PrPSc). (اقرأ المزيد عن PMCA بمساعدة الصوتنة للكشف عن البريون عالي الإنتاجية!)
- الأميلويدوز الجهازي: الداء النشواني ذو السلسلة الخفيفة (AL) ، والداء النشواني ترانسثيريتين (ATTR) ، والداء النشواني الثانوي (AA).
- الأميلويدوز الموضعي: جزيرة الأميلويد عديد الببتيد (IAPP) في مرض السكري من النوع 2.
يتميز كل مرض مرتبط بالأميلويد بسوء طي البروتين وتجميعه وترسيبه ، مما يؤدي إلى خلل وظيفي خلوي وسميته.
Hielscher الفوق صوتيات بتصنيع الخالط بالموجات فوق الصوتية عالية الأداء من المختبر ل الحجم الصناعي.