تحضير عينة FFPE عالية الإنتاجية: استخراج البروتين وقص الحمض النووي

مع الموجات فوق الصوتية عالية الإنتاجية UIP400MTP، Hielscher Ultrasonics يعالج تحديات تثبيت الفورمالين والبارافين جزءا لا يتجزأ من إعداد الأنسجة (FFPE). تعلم كيف يعالج الموجات فوق الصوتية عينة FFPE بأعداد كبيرة لإزالة FFPE ، تحلل الأنسجة ، التجانس ، استخراج البروتين وقص الحمض النووي / الحمض النووي الريبي! استفد من تحضير أنسجة FFPE بالموجات فوق الصوتية – معالجة أعداد العينات الكبيرة في لوحات متعددة الآبار! احصل على عينات عالية الجودة واحصل على أعداد عينات عالية للحصول على نتائج بحثية موثوقة! وأخيرا وليس آخرا توفير الوقت والمال!

يتم تسهيل تحضير عينة FFPE من خلال Sonication عالي الإنتاجية

تثبيت الفورمالين وتضمين البارافين (FFPE) هو الطريقة الأكثر شيوعا للحفاظ على الأنسجة الصلبة وأرشفتها. غالبا ما يمثل استخراج الجزيئات الحيوية من عينات أنسجة FFPE تحديات كبيرة بسبب جودة العينات المخزنة. توفر هذه العينات ، التي تعد أصولا لا تقدر بثمن في البيولوجيا الجزيئية والبحوث السريرية ، مصدرا غنيا للمعلومات البيولوجية للدراسات بأثر رجعي والتحقق من صحة العلامات الحيوية التشخيصية. ومع ذلك ، فإن عملية تثبيت الفورمالين وتضمين البارافين ، مع الحفاظ على بنية الأنسجة ومورفولوجيا ، تعقد استخراج الأحماض النووية والبروتينات عالية الجودة. يحفز الفورمالين الترابط المتقاطع للأحماض النووية والبروتينات ، مما يؤدي إلى التجزئة الجزيئية والتعديلات الكيميائية. تعلم كيف يتغلب UIP400MTP الموجات فوق الصوتية عالي الإنتاجية على تحديات إعداد عينة FFPE!

الموجات فوق الصوتية لإعداد عينة FFPE بكفاءة

  • سير عمل سهل الاستخدام: عمليات مبسطة سهلة الاستخدام.
  • إزالة البارافين، استخراج البروتين، قص الحمض النووي / الحمض النووي الريبي
  • معالجة سريعة عالية الإنتاجية: معالجة فعالة للألواح متعددة الآبار.
  • إزالة البارافين الفعالة: تحسين ذوبان البروتينات.
  • المذيبات غير السامة: يتجنب استخدام المذيبات العضوية الضارة مثل الزيلين.

 

The UIP400MTP multiwell plate ultrasonicator can process FFPE samples in high-throughput for protein extraction and DNA and RNA shearing

UIP400MTP صوتي عالي الإنتاجية لمعالجة عينات FFPE عالية الإنتاجية في لوحات متعددة الآبار

طلب معلومات




لاحظ لدينا سياسة الخصوصية.


 
FFPE إعداد عينة باستخدام الموجات فوق الصوتية - UIP400MTP صوتنة لوحة multwell بواسطة Hielscher
 

التطورات في تقنيات استخراج البروتين من أنسجة FFPE

Hielscher الفوق صوتيات يعالج التحديات في إعداد عينة FFPE عالية الإنتاجية. يستخدم Sonication الموجات فوق الصوتية لتوليد اهتزازات ميكانيكية وتجويف مركز ، مما يؤدي إلى تعطيل الهياكل الخلوية بشكل فعال وتعزيز ذوبان الجزيئات الحيوية. اكتسبت هذه التقنية شعبية لقدرتها على زيادة كفاءة وإنتاجية استخراج الحمض النووي والبروتين من أنسجة FFPE وكذلك قص الحمض النووي والحمض النووي الريبي لإعداد المكتبة. من المهم جدا تسليط الضوء على أن الموجات فوق الصوتية باستخدام صوتنة لوحة متعددة الآبار UIP400MTP يحافظ على سلامة هذه الجزيئات الحيوية للتطبيقات النهائية.

 

The video shows the ultrasonic sample preparation system UIP400MTP, which allows for the reliable sample preparation of any standard multi-well plates using high-intensity ultrasound. Typical applications of the UIP400MTP include cell lysis, DNA, RNA, and chromatin shearing as well as protein extraction.

Ultrasonicator UIP400MTP for multi-well plate sonication

صورة مصغرة للفيديو

 

قص الحمض النووي باستخدام الموجات فوق الصوتية عالية الإنتاجية

من الأفضل معالجة لوحات 96 بئرا ولوحات أخرى متعددة الآبار باستخدام UIP400MTP Sonicator. هذا النظام بالموجات فوق الصوتية مثالي للتحلل وتجزئة الحمض النووي وعينات معالجة ذوبان الخلايا في الإنتاجية العالية.الموجات فوق الصوتية متعددة الآبار UIP400MTP للاستخدام في إعدادات عالية الإنتاجية يجلب إعداد عينات FFPE إلى مستوى جديد. توفر طريقة صوتنة اللوحة المتعددة هذه حلا فعالا وموثوقا للمعالجة المتزامنة لعينات متعددة. إنه يسهل الاستخراج السريع والقابل للتكرار للحمض النووي والحمض النووي الريبي والبروتينات ، والتي تعتبر ضرورية لمختلف التقنيات التحليلية ، بما في ذلك تسلسل الجيل التالي (NGS) ، وتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي ، والتحليلات البروتينية. تحسين معلمات الصوتنة ، مثل السعة والمدة ودرجة الحرارة ، يعزز جودة وكمية الجزيئات الحيوية المستخرجة.

يوفر جهاز الصوتي UIP400MTP للوحات متعددة الآبار مزايا كبيرة لتجزئة وقص الحمض النووي والحمض النووي الريبي من أنسجة FFPE. واحدة من السمات البارزة لهذا النظام هي قدرته على تحقيق أحجام شظايا ضيقة من الحمض النووي والحمض النووي الريبي ، مما يوفر قابلية ضبط دقيقة لشدة الصوتنة للحصول على شظايا قصيرة من 150-200 زوج قاعدة (bp) أو شظايا أطول من 15-20 كيلو قاعدة أزواج (kbp). هذا التنوع يجعل UIP400MTP لا غنى عنه لكل من تطبيقات تسلسل القراءة القصيرة والقراءة الطويلة ، مما يضمن نتائج عالية الجودة لتسلسل الجيل التالي (NGS) وتسلسل الجينوم الكامل (WGS). يعد التحكم الدقيق في حجم الشظايا أمرا بالغ الأهمية للباحثين في جميع مجالات علم الجينوم ، لأنه يسمح بإعداد العينات وفقا للمواصفات.

اتصل بنا للحصول على حلول متقدمة في أنسجة FFPE

اكتشف صوتنة اللوحة متعددة الآبار UIP400MTP لاستعادة الجزيئات الحيوية بكفاءة من عينات FFPE ، والحفاظ على سلامة الأحماض النووية والبروتينات المستخرجة وضمان استنساخ النتائج. تتكامل هذه التقنية بسلاسة مع تدفقات العمل التحضيرية والتحليلية الأخرى ، مما يبسط ويعزز التحقيقات الجزيئية باستخدام أرشيفات أنسجة FFPE.

طلب معلومات




لاحظ لدينا سياسة الخصوصية.


المثبتات وآثارها

التثبيت هو خطوة حاسمة في تحضير العينات التي تحافظ على الهياكل الخلوية ، وتوقف التفاعلات الكيميائية الحيوية ، وتمنع التدهور. يتم استخدام المثبتات المختلفة اعتمادا على المتطلبات التجريبية المحددة. المثبتان الأكثر شيوعا هما الفورمالديهايد والبارافورمالدهايد ، اللذان يربطان البروتينات والأحماض النووية ، ويحافظان على مورفولوجيا ومستضدات الخلايا والأنسجة. تستخدم المثبتات الأخرى ، مثل الإيثانول والميثانول والجلوتارالدهيد ، لتطبيقات محددة.

تشكل مثبتات الفورمالديهايد والبارافورمالدهايد جسور الميثيلين بين المجموعات الأمينية ، مما يؤدي إلى تشابك البروتين. تعمل هذه العملية على تثبيت المكونات الخلوية بشكل فعال ، مع الحفاظ على سلامتها أثناء خطوات التحليل اللاحقة. يمكن أن تتأثر تأثيرات هذه المثبتات بعوامل مثل التركيز ودرجة الحموضة ودرجة الحرارة ، وتحسين هذه المعلمات أمر بالغ الأهمية لضمان الحفاظ الأمثل على الهياكل الخلوية.

 
مزايا إعداد FFPE بالموجات فوق الصوتية
 

الموجات فوق الصوتية هي تقنية قوية لتعطيل الخلايا والأنسجة المثبتة التي تتفوق على التقنيات التقليدية. يوفر العديد من المزايا البارزة على طرق التحلل التقليدية:

  • السرعة والكفاءة: يوفر التحلل بالموجات فوق الصوتية اضطرابا سريعا للخلايا والأنسجة ، مما يقلل بشكل كبير من وقت المعالجة مقارنة بطرق التحلل الميكانيكية أو الكيميائية. تخلق الموجات الصوتية عالية التردد الناتجة عن المسبار بالموجات فوق الصوتية قوى قص ميكانيكية ، مما يتسبب في تعطيل الهياكل الخلوية المثبتة. يمكن هذا الاضطراب السريع والفعال الباحثين من معالجة كميات كبيرة من العينات في إطار زمني قصير.
  • لطيف وقابل للتعديل: يوفر التحلل بالموجات فوق الصوتية آلية تعطيل لطيفة تقلل من تلف الجزيئات الحيوية الحساسة مثل البروتينات والأحماض النووية والإنزيمات. على عكس الطرق الميكانيكية التي تولد حرارة زائدة أو قوى القص ، يستخدم التحلل بالموجات فوق الصوتية التجويف المتحكم فيه لتعطيل الخلايا مع الحفاظ على سلامة ووظائف المكونات داخل الخلايا.
  • براعه: يمكن تطبيق التحلل بالموجات فوق الصوتية على العديد من المثبتات ، مما يسمح للباحثين بالعمل مع مجموعة واسعة من العينات المثبتة. سواء كنت تستخدم الفورمالديهايد أو البارافورمالدهايد أو المثبتات البديلة ، فإن التحلل بالموجات فوق الصوتية يوفر باستمرار اضطرابا فعالا ، مما يضمن الاسترداد الأمثل للمكونات الخلوية.
  • عالية الغلة والجودة: يسهل التحلل بالموجات فوق الصوتية غلة عالية من المكونات الخلوية السليمة بسبب قدرته على تعطيل الخلايا والأنسجة المثبتة بشكل موحد. يتيح ذلك تطبيقات المصب مثل تحليل البروتين واستخراج الحمض النووي والمقايسات الأنزيمية لتحقيق نتائج موثوقة وقابلة للتكرار.
  • توافق الأتمتة: يمكن دمج التحلل بالموجات فوق الصوتية بسهولة في الأنظمة الآلية ، مما يسمح بمعالجة العينات عالية الإنتاجية. يمكن هذا التوافق الباحثين من تبسيط سير عملهم وزيادة الإنتاجية ، لا سيما في الدراسات واسعة النطاق.
96-Well Plate Sonicator UIP400MTP لتحلل الخلايا واستخراج الحمض النووي وتجزئة الحمض النووي وإذابة الخلايا وتنقية البروتين.

96 لوحة حسنا صوتي UIP400MTP لصوتنة لوحات microtiter و multiwell

أحدث التحلل بالموجات فوق الصوتية ثورة في تعطيل الخلايا والأنسجة المثبتة ، مما يوفر العديد من المزايا مقارنة بطرق التحلل التقليدية. إن سرعتها وكفاءتها وانتقائيتها وتعدد استخداماتها وعائدها العالي وتوافقها مع الأتمتة تجعلها أداة لا غنى عنها في البيولوجيا الجزيئية وأبحاث التكنولوجيا الحيوية. تقدم صوتيات عدم الاتصال وكذلك صوتنة من نوع المسبار، Hielscher الفوق صوتيات يقدم الخالط بالموجات فوق الصوتية الأنسب لتطبيق علوم الحياة الخاصة بك. سواء كنت ترغب في معالجة عينات واحدة أو عينات متعددة أو أعداد عينات عالية جدا في وقت واحد ، سوف نقدم لك أفضل صوتي يتوافق مع متطلبات البحث والتشخيص الخاصة بك.
قراءة المزيد عن Hielscher صوتيات عدم الاتصال لإعداد عينة متعددة وعالية الإنتاجية!

تحضير عينة FFPE باستخدام جهاز Sonicator متعدد الألواح UIP400MTP

  • استثمار لمرة واحدة
  • استخدم المواد الاستهلاكية الخاصة بك
  • لا توجد تكاليف متكررة للملحقات والمواد الاستهلاكية المسجلة الملكية
  • إنتاجية عالية
  • تحكم دقيق
  • أحدث التقنيات
  • موثوقيه & متانه
  • تحكم دقيق وقابل للتعديل في العملية
  • الصف الصناعي: يمكن تشغيلها بشكل مستمر 24/7
  • سهل وآمن للعمل
  • صيانة منخفضة

 
اقرأ المزيد عن تطبيقات الصوتيات في علوم الحياة!

Sonicator لإعداد عينة عالية الإنتاجية! يسهل صوتنة لوحة UIP400MTP التحلل واستخراج البروتين وتجزئة الحمض النووي وإذابة الخلايا للعينات البيولوجية في 96 لوحة جيدة.

لوحة صوتي UIP400MTP لأي لوحات 96 بئر ، لوحات microtiter ولوحات متعددة الآبار.

التصميم والتصنيع والاستشارات – جودة صنع في ألمانيا

Hielscher الموجات فوق الصوتية معروفة جيدا لأعلى معايير الجودة والتصميم. المتانة والتشغيل السهل تسمح بالتكامل السلس للموجات فوق الصوتية لدينا في المنشآت الصناعية. يتم التعامل بسهولة مع الظروف القاسية والبيئات الصعبة بواسطة الموجات فوق الصوتية Hielscher.

Hielscher Ultrasonics هي شركة حاصلة على شهادة الأيزو وتركز بشكل خاص على الموجات فوق الصوتية عالية الأداء التي تتميز بأحدث التقنيات وسهولة الاستخدام. بطبيعة الحال، الموجات فوق الصوتية Hielscher هي CE المتوافقة وتلبية متطلبات UL، وكالة الفضاء الكندية وبنفايات.

اتصل بنا! / اسألنا!

اطلب المزيد من المعلومات

يرجى استخدام النموذج أدناه لطلب معلومات إضافية حول الموجات فوق الصوتية لوحة متعددة الآبار UIP400MTP ، وتطبيقاتها في إعداد عينة FFPE والأسعار. سنكون سعداء لمناقشة طلبك في علم الجينوم والبروتينات معك!









يرجى ملاحظة سياسة الخصوصية.


تسلسل الحمض النووي الريبي عالي الإنتاجية في ألواح الآبار المتعددة

UIP400MTP الموجات فوق الصوتية: تحضير عينة FFPE عالي الإنتاجية في لوحة متعددة الآبار



الأسئلة المتداولة
أدناه ، نجيب على الأسئلة المتداولة ، والتي لها صلة بإعداد أنسجة FFPE والموجات فوق الصوتية لعينات FFPE.

كيف يتم تحضير أنسجة FFPE؟

خطوات تحضير أنسجة FFPE: تعد المعالجة الدقيقة للأنسجة الطازجة ومعالجتها أمرا بالغ الأهمية لتوليد عينات FFPE عالية الجودة. يعد ضمان الحفاظ على البنية الخلوية والأحماض النووية والبروتينات أمرا ضروريا للتحليل الدقيق للمصب. تتطلب كل خطوة - من التجميع إلى التضمين - الدقة للحفاظ على سلامة العينة لمختلف التحليلات ، بما في ذلك الفحص النسيجي والكيمياء المناعية والدراسات الجزيئية. تضمن عملية التثبيت والتضمين هذه ، التي يتم تنفيذها بشكل صحيح ، أن الأنسجة المحفوظة تعكس بدقة الحالة في الجسم الحي ، مما يتيح نتائج تشخيصية وبحثية موثوقة.
نرشدك خلال 6 خطوات رئيسية لعملية تضمين عينات أنسجة FFPE.

  • جمع الأنسجة
    الخزعات من الثدييات الحية ومزارع الأنسجة هي مصادر قابلة للتطبيق للحصول على أنسجة جديدة لإعداد عينة FFPE.
    من المهم استخدام تقنية معقمة: استخدم أدوات وقفازات معقمة لتجنب التلوث. من الناحية المثالية ، اجمع الأنسجة في بيئة معقمة ، مثل جناح جراحي أو غطاء تدفق رقائقي.
    نظرا لأن العينة هشة للغاية ، فإن التعامل معها الحساس ضروري: تقليل التأخير في المعالجة والبدء فورا في معالجة الأنسجة بعد الاستئصال. هذا أمر بالغ الأهمية لمنع التحلل الذاتي والتدهور. الحفاظ على الأنسجة في درجة حرارة الغرفة. تجنب التجمد لأنه يمكن أن يسبب تكوين بلورات الجليد وتلف الأنسجة.
  • تثبيت الأنسجة
    أولا ، يتم معالجة الأنسجة بمحلول مثبت: استخدم 10٪ فورمالين محايد (NBF) ، وهو ما يعادل 4٪ فورمالديهايد في الماء ، مخزنة إلى درجة حموضة محايدة.
    اغمر الأنسجة بالكامل في الفورمالين. تأكد من أن نسبة حجم المثبت إلى الأنسجة لا تقل عن 10: 1. يتراوح وقت التثبيت عادة من 6 إلى 24 ساعة ، حسب نوع الأنسجة وحجمها. من المهم أن المثبت يمكن أن تخترق الأنسجة تماما. ومع ذلك ، يمكن أن يؤدي التثبيت المفرط إلى الربط المتقاطع الذي يعقد استرجاع المستضد ، في حين أن التثبيت الناقص يمكن أن يؤدي إلى ضعف حفظ الأنسجة.
  • تقليم الأنسجة
    ثانيا ، قم بقص الأنسجة بسمك حوالي 3-5 مم للسماح باختراق مناسب للمثبت. ضمان التوجيه السليم للأنسجة لالتقاط الهياكل النسيجية ذات الصلة. هذا يسهل عملية الاستخراج عندما يتم استخدام الأنسجة لاحقا للتحليل.
  • معالجة العينة المثبتة
    الآن ، يجب تجفيف الأنسجة الثابتة: بعد التثبيت ، يجب تجفيف الأنسجة لضمان اختراق شامل بواسطة شمع البارافين. مرر الأنسجة عبر سلسلة متدرجة من الإيثانول (70٪ و 80٪ و 90٪ و 100٪) لإزالة الماء.
    المقاصة باستخدام الزيلين: شمع البارافين غير قابل للذوبان في الماء ، ولكنه قابل للذوبان في الزيلين. لذلك ، يجب استبدال الماء الموجود في الأنسجة بالزيلين. ومع ذلك ، فإن الزيلين نفسه غير قابل للذوبان في الماء ولكنه قابل للذوبان في الكحول ، مما يستلزم خطوة وسيطة حيث يتم استبدال الماء أولا بالكحول. اغمر الأنسجة في الزيلين أو بديل الزيلين لإزالة الإيثانول وإعداد الأنسجة لتسرب البارافين.
    التسلل باستخدام البارافين: قم بتضمين الأنسجة في شمع البارافين المنصهر ، مما يضمن التسلل الكامل. تتضمن هذه الخطوة عادة العديد من التغييرات في البارافين لضمان التشريب الشامل.
  • تضمين الأنسجة
    في هذه الخطوة ، يتم تشكيل الأنسجة في كتلة الأنسجة: ضع المنديل في قالب بالاتجاه المطلوب واسكب البارافين المنصهر فوقه. اترك البارافين يتجمد عن طريق التبريد في درجة حرارة الغرفة أو على طبق بارد.
  • التقسيم والتركيب
    المجهري: لتقطيع الأنسجة المضمنة ، استخدم ميكروتوم لقطع أقسام رقيقة (عادة 4-5 ميكرومتر) من كتلة البارافين. ثم يتم تركيب العينة ، ووضع الأقسام على شرائح زجاجية للتلطيخ اللاحق والتحليل المجهري.
    أخيرا ، تحقق من جودة الأنسجة: قم بتقييم الأقسام الأولى تحت المجهر لضمان التثبيت والمعالجة المناسبين. اضبط البروتوكولات حسب الحاجة بناء على نوع الأنسجة والجودة المرصودة.

 
يمكن استخدام أنسجة FFPE لاستعادة الحمض النووي الريبي والحمض النووي والبروتينات وكذلك اكتشاف علامات السرطان أو أي مرض آخر. يمكن تخزينها لسنوات ، وهي جزء أساسي من كيفية استفادة الباحثين والأطباء من عينات الأنسجة للتشخيص والبحث.

ما هي المشاكل والتحديات الشائعة مع أنسجة FFPE؟

تستخدم عينات الأنسجة الثابتة بالفورمالين والمضمنة بالبارافين (FFPE) على نطاق واسع في البحث والتشخيص ، ولكنها تمثل العديد من التحديات والمشاكل الشائعة:

  • تدهور الجزيئات الحيوية: يمكن أن يؤدي التثبيت المطول إلى تدهور الحمض النووي والحمض النووي الريبي والبروتينات ، مما يجعل من الصعب استخراج الأحماض أو البروتينات النووية عالية الجودة للتطبيقات النهائية. التثبيت الصحيح (تجنب التثبيت الناقص والزائد) ضروري للحفاظ على الأنسجة.
  • الربط المتبادل: يتسبب تثبيت الفورمالين في ربط البروتينات والأحماض النووية ، مما قد يعيق التحليل الجزيئي ويؤثر على دقة الكيمياء الهيستولوجية المناعية والمقايسات الأخرى.

  • إخفاء المستضد: يمكن لعملية التثبيت إخفاء مواقع المستضدات ، مما يقلل من فعالية ارتباط الأجسام المضادة في الكيمياء المناعية والمقايسات المناعية الأخرى. غالبا ما يتطلب هذا استرجاع المستضد ، وهو إجراء يتم من خلاله عكس إخفاء الحواتم واستعادة ارتباط الجسم المضاد للظميمة. ومع ذلك ، قد لا يتم دائما استعادة المستضدات الكاملة.
  • جودة التثبيت المتغيرة: يمكن أن تؤدي الاختلافات في أوقات التثبيت وظروفه إلى جودة عينة غير متسقة ، مما يؤثر على قابلية استنساخ النتائج وقابليتها للمقارنة. استخدم بروتوكولات تثبيت موثوقة وتجنب التثبيت الناقص والزائد.
  • تلف الحمض النووي وتجزئته: يمكن أن يتسبب تثبيت الفورمالين لعينات FFPE في أنواع مختلفة من تلف الحمض النووي ، بما في ذلك نزع أمين السيتوزين (طفرات C إلى T) ، والضرر التأكسدي (على سبيل المثال ، 8-oxo-guanine مما يؤدي إلى طفرات G إلى T) ، بالإضافة إلى الاضطرابات المادية مثل الشقوق والفجوات والمواقع غير الأساسية التي تعيق نشاط بوليميراز الحمض النووي. يمكن أن تتسبب عملية تثبيت الفورمالين في تفتيت الحمض النووي ، مما يعقد التحليلات الجينية والجينومية مثل تفاعل البوليميراز المتسلسل والتسلسل.
  • جودة الحمض النووي الريبي: غالبا ما يكون الحمض النووي الريبي المستخرج من أنسجة FFPE مجزأ ومعدلا كيميائيا ، مما يجعل من الصعب إجراء تحليلات نسخية عالية الجودة.
  • تعديلات البروتين: يمكن أن يحفز الفورمالين تعديلات كيميائية في البروتينات ، مما يؤثر على هيكلها ووظيفتها ، والتي يمكن أن تتداخل مع التحليلات البروتينية.
  • عينات معالجة القطع الأثرية: أثناء عملية التضمين والتقسيم ، يمكن أن يؤدي الإجهاد الميكانيكي والحرارة إلى إدخال القطع الأثرية والتسبب في مزيد من الضرر للأنسجة.
  • التباين من دفعة إلى دفعة: يمكن أن تؤدي الاختلافات في بروتوكولات التثبيت والتضمين بين الدفعات المختلفة إلى تباين كبير في النتائج ، مما يعقد المقارنات بين الدراسات.
  • مشاكل التخزين: يمكن أن يؤدي التخزين طويل الأجل لكتل FFPE إلى تدهور إضافي وفقدان سلامة الحمض النووي بمرور الوقت ، مما يؤثر على صلاحية العينات الأرشيفية للدراسات بأثر رجعي.

يساعد استخدام البروتوكولات المحسنة والمعالجة الدقيقة للعينات وتطبيق التقنيات المتقدمة على تحسين جودة وموثوقية البيانات التي تم الحصول عليها من أنسجة FFPE.

ما هو الفرق بين FFPE والأنسجة المجمدة؟

يتم الحفاظ على أنسجة FFPE (الفورمالين الثابتة ، المضمنة بالبارافين) باستخدام الفورمالين لإصلاح الأنسجة ثم تضمينها في شمع البارافين ، مما يسمح بالتخزين طويل الأجل في درجة حرارة الغرفة مع الحفاظ على مورفولوجيا الأنسجة. في المقابل ، يتم الحفاظ على الأنسجة المجمدة بسرعة عن طريق التجميد ، مما يحافظ بشكل أفضل على سلامة الأحماض النووية والبروتينات ولكنه يتطلب التخزين في درجات حرارة منخفضة للغاية.

ما هي المواد الكيميائية المستخدمة في تضمين FFPE؟

عادة ما تشمل المواد الكيميائية المستخدمة في تضمين FFPE الفورمالين للتثبيت وشمع البارافين للتضمين. بالنسبة لتضمين FFPE ، يتم إصلاح الأنسجة عادة باستخدام إما 10٪ (v / v) فورمالين محايد (FA) أو محلول فورمالديهايد (PFA) محضر حديثا بنسبة 4٪ (وزن / حجم) مصنوع من مسحوق بارافورمالدهايد. يتم تخزين الفورمالين ، وهو محلول من الفورمالديهايد في الماء ، إلى درجة حموضة محايدة للحفاظ على مورفولوجيا الأنسجة ومنع الارتباط المتقاطع المفرط. يوفر المحلول القائم على بارافورمالدهايد أيضا تثبيتا فعالا عن طريق ربط البروتينات المتقاطعة ، وبالتالي تثبيت بنية الأنسجة لتضمينها لاحقا في شمع البارافين. هذه المواد الكيميائية ضرورية للحفاظ على سلامة الأنسجة والتشكل أثناء عملية التثبيت والتضمين.

كيف يتم إزالة البارافين من عينات FFPE؟

لإزالة البارافين من عينات FFPE ، تخضع أقسام الأنسجة عادة لسلسلة من غسولات الزيلين تليها الإماهة من خلال سلسلة متدرجة من الكحول وأخيرا الماء. نظرا لأن الزيلين شديد السمية ، مما يشكل مخاطر صحية مثل مشاكل الجهاز التنفسي وتهيج الجلد والآثار المحتملة طويلة المدى مع التعرض المتكرر ، فإن إزالة البارافين بالموجات فوق الصوتية تظهر كبديل واعد في العديد من المختبرات. تستخدم هذه الطريقة موجات فوق صوتية مكثفة لإزالة البارافين بكفاءة وأمان دون الحاجة إلى مذيبات سامة مثل الزيلين ، وبالتالي تقليل المخاطر على موظفي المختبر وخلق بيئة عمل أكثر أمانا.

كم من الوقت يجب أن أثبت أنسجتي للحصول على جودة عينة FFPE جيدة؟

تقترح التوصيات العامة لمدة التثبيت عادة تثبيت عينات الأنسجة في الفورمالين لمدة 24 إلى 48 ساعة. هذه المدة كافية بشكل عام للحفاظ على مورفولوجيا الأنسجة والهياكل الخلوية مع تقليل التثبيت المفرط ، مما قد يؤدي إلى الإفراط في الترابط وتدهور الأحماض النووية والبروتينات. ومع ذلك ، يمكن أن يختلف وقت التثبيت الأمثل اعتمادا على حجم ونوع الأنسجة ، حيث تتطلب العينات الأصغر أو الأكثر حساسية أوقات تثبيت أقصر. من الأهمية بمكان موازنة التثبيت الكافي لمنع التحلل الذاتي للأنسجة وتدهورها مع تجنب التثبيت المطول الذي قد يعقد التحليلات الجزيئية النهائية.

سنكون سعداء لمناقشة العملية الخاصة بك.

Let's get in contact.