تحضير العينات بالموجات فوق الصوتية لتحليل THC
- الاستخلاص بالموجات فوق الصوتية طريقة مثبتة لإنتاج THC، ويمكن استخدامه أيضًا لأغراض تحليلية.
- المعالجة بالموجات فوق الصوتية طريقة شائعة لتحضير العينات تُستخدم لتحليل المحتوى الكلي من THC في منتجات القنب.
- يُطبَّق الاستخلاص بالموجات فوق الصوتية على العينات قبل تحليلها باستخدام TLC وGC وHPLC.
استخلاص THC بالموجات فوق الصوتية
THC، أو رباعي هيدروكانابينول (دلتا-9-رباعي هيدروكانابينول)، هو المادة الكيميائية التي تسبب معظم التأثيرات النفسية للماريجوانا. يُعرف أكثر من 400 سلالة مختلفة من القنب. وبحسب سلالة القنب المحددة، قد ينخفض محتوى القنب من THC إلى 0.3 wt%. وفي سلالات أخرى، قد يصل محتوى THC إلى 20 wt%.
تختلف منتجات القنب المختلفة أيضًا اختلافًا كبيرًا: إذ يتراوح متوسط تركيز THC في الماريجوانا بين 1 و5%؛ وفي الحشيش، يتراوح محتوى THC بين 5 و15%، بينما يبلغ متوسطه في زيت الحشيش 20%. وتتفاوت كمية THC في جرعات الماريجوانا المستخدمة لأغراض ترفيهية تفاوتًا كبيرًا، وكلما انخفض محتوى THC في الماريجوانا، اضطر المستخدم إلى استهلاك كمية أكبر للشعور بالتأثيرات المطلوبة.
يُستخدم تحضير العينات بالموجات فوق الصوتية لتحليل محتوى THC
- لمراقبة جودة منتجات THC المستخدمة لأغراض ترفيهية،
- لتحديد جودة منتجات THC الصيدلانية،
- للتمييز بين القنب المستخدم كمخدر والقنب المستخدم لإنتاج الألياف.
تُستخدم عادةً الطرق الكروماتوغرافية التالية لتحليل THC: كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة (TLC)، وكروماتوغرافيا الغاز (GC)، والكروماتوغرافيا السائلة عالية الأداء (HPLC)
بروتوكول تحضير العينات بالموجات فوق الصوتية لتحليل TLC
تحضير العينات: لتحضير العينات، يجب نقع المادة النباتية المجففة وطحنها للحصول على مسحوق متجانس. وللاستخلاص بالموجات فوق الصوتية، يُمزج 500mg من مسحوق نبات القنب مع 5mL من خليط الميثانول والكلوروفورم (بنسبة 9 : 1) في قارورة. ويمكن تطبيق المعالجة بالموجات فوق الصوتية باستخدام جهاز معالجة بالموجات فوق الصوتية ذي طرف دقيق، أو VialTweeter ، أو جهاز الموجات فوق الصوتية CupHorn. تستغرق المعالجة بالموجات فوق الصوتية نحو 5 min. بعد ذلك، اترك العينة تستقر مدة لا تقل عن 5 min. خفِّف السائل الفوقاني الصافي بخليط الاستخلاص (v/v: 1 : 10). THC الحر: 1μL على صفيحة TLC
نزع الكربوكسيل: يُبخَّر 100μL من المستخلص حتى الجفاف. وتُسخَّن البقايا عند 180℃ لمدة 4 min. أضف 500μL من الميثانول والكلوروفورم (v/v 9 : 1). عالِج بالموجات فوق الصوتية لمدة 5 min. خفِّف السائل الفوقاني الصافي بخليط الاستخلاص (v/v: 1 : 10).
المعايرة: 20ng، 60ng، 100ng، 140ng
HPTLC:
هلام السيليكا لكروماتوغرافيا TLC، F-254، Merck 5729
ماسح TLC II، برنامج CATS3، Camag Muttenz؛ الطور المتحرك:
أسيتات الإيثيل : التولوين : الكلوروفورم = 3 : 17 : 0.25 (v/v/v)
الاشتقاق بعد الفصل الكروماتوغرافي: ملح Fast Blue بتركيز 0.1% في NaOH بتركيز 0.1 M
قياس الكثافة الضوئية عند 550 nm
رباعي هيدروكانابينول (Δ9-THC) للتحليل والاستخلاص
بروتوكول تحضير العينات بالموجات فوق الصوتية لتحليل GC
تحضير العينات: تُنقع المادة النباتية المجففة وتُطحن للحصول على مسحوق متجانس. وللاستخلاص، يُمزج 500mg من مسحوق نبات القنب مع 10mL من خليط الميثانول والهكسان (بنسبة 9 : 1) في قارورة. ويمكن تطبيق المعالجة بالموجات فوق الصوتية باستخدام جهاز موجات فوق صوتية من نوع المسبار ذي طرف دقيق، أو VialTweeter ، أو جهاز الموجات فوق الصوتية CupHorn. عالِج العينة بالموجات فوق الصوتية لمدة 15–20 min. رُجّ العينة واتركها تستقر مدة لا تقل عن 5 min. خفِّف السائل الفوقاني الصافي بخليط الاستخلاص (v/v 1: 20).
نزع الكربوكسيل: في القطعة المُدخلة
درجة حرارة الحاقن 250℃
المعايرة: من 5 ng/μL إلى 250 ng/μL
GC: HP 6890 مع 5973 MSD وجهاز أخذ العينات الآلي 7683؛ حجم الحقن: 1μL، زمن الحقن دون تقسيم: 2 min.
العمود: HP-5 MS، 30m، القطر 250 μm، سُمك الغشاء 0.25 μm
الغاز الحامل: He، 35 psi، التدفق الثابت: 4 mL/min.
الفرن: 100℃ لمدة 1min.؛ زيادة درجة الحرارة بمعدل 15℃ /min. حتى 280℃؛ 280℃ لمدة 5 min. MSD: المسح SCAN: m/e 35 – 550
بروتوكول تحضير العينات بالموجات فوق الصوتية لتحليل HPLC
تحضير العينات (مماثل لتحضير العينات لتحليل GC): تُنقع المادة النباتية المجففة وتُطحن للحصول على مسحوق متجانس. وللاستخلاص، يُمزج 500mg من مسحوق نبات القنب مع 10mL من خليط الميثانول والهكسان (بنسبة 9 : 1) في قارورة. ويمكن تطبيق المعالجة بالموجات فوق الصوتية باستخدام جهاز معالجة بالموجات فوق الصوتية من نوع المسبار ذي طرف دقيق، أو VialTweeter ، أو جهاز الموجات فوق الصوتية CupHorn. عالِج العينة بالموجات فوق الصوتية لمدة 15–20 min. رُجّ العينة واتركها تستقر مدة لا تقل عن 5 min. خفِّف السائل الفوقاني الصافي بخليط الاستخلاص (v/v 1: 20).
VialTweeter لتحضير العينات بالموجات فوق الصوتية
العمود التمهيدي: LiChrospher 60، RP-Select B، 5μm (Merck 50963)
العمود: LiChroCart 125-4، Lichrospher 60، RP-Select B، 5 μm (Merck 50829)
الطور المتحرك: ثابت التركيب، 36% من TEAP بتركيز 25 mmol/L، و64% أسيتونتريل؛ التقدير الكمي عند 210nm
المعايرة: 0.001 – 0.10 μg/μL
المعايرة: 0.01 – 0.50 μg/μL
زمن الاحتجاز: لـ CBD: 6.2 min.؛ لـ CBN: 8.0 min.؛ لـ THC: 9.4 min.؛ لـ THC-A: 11.0 min
حد الكشف LOD: CBD 0.5%، CBN 0.5%، THC 0.15%، THC-A 1%
UP200St ذو طرف دقيق لمعالجة العينات بالموجات فوق الصوتية
المؤلفات/المراجع
- Werner Bernhard, Franziska Penitschka, Alain Broillet, Prisma Regenscheit (2006): التحاليل الكيميائية الجنائية لعشبة القنب المحتوية على THC. من DC عبر GC إلى طريقة HPLC. Applica 2006.
حقائق جديرة بالمعرفة
الماريجوانا تتكون من الأزهار المجففة والأوراق والسيقان الواقعة أسفلها في نبات القنب الأنثوي. وهي الشكل الأكثر استهلاكًا، وتحتوي على نحو 3% إلى 20% من THC. وتصل أشكال معينة من الماريجوانا، خضعت لاستنباط مكثف، إلى محتوى THC يتجاوز 30%. والماريجوانا هي المادة الأولية لجميع الأنواع الأخرى من منتجات القنب المحتوية على THC. ولتحويل الكانابينويد الأكثر وفرة، وهو حمض رباعي هيدروكانابينول (THCA)، إلى THC ذي التأثير النفسي، يجب بدء عملية نزع الكربوكسيل. ولذلك، يجب تسخين القنب ومستخلصاته أو تجفيفها لإحداث نزع الكربوكسيل.
الكيف يشير إلى مسحوق غني بالشعيرات الغدية يُفصل بالنخل من أوراق القنب وأزهاره. ويُستهلك إما في صورة مسحوق أو يُضغط ويُستخدم في أقراص الحشيش.
الحشيش ، أو الهاش، هو قرص أو كرة من الراتنج المركز، يُنتج إما من الكيف المضغوط أو من الراتنج الذي يُكشط من سطح النبات ويُشكَّل على هيئة كرات. ويأتي بألوان مختلفة تتراوح من الأسود إلى البني الذهبي بحسب النقاوة والمصدر. ويمكن تناوله عن طريق الفم أو تدخينه، مثلًا في غليون أو نرجيلة أو غليون مائي «بونغ» أو غليون مائي صغير «بابلر» أو جهاز تبخير، أو باستخدام سكين ساخن، أو تدخينه في سجائر ملفوفة، أو مزجه ببراعم القنب أو التبغ، أو تدخينه بسحب الدخان من زجاجة، أو استخدامه مكونًا في الطعام.
صبغة القنب تشير إلى مستخلص الكانابينويدات في الكحول. وتُستخلص الكانابينويدات من نبات القنب باستخدام مشروبات كحولية مقطَّرة عالية التركيز (غالبًا كحول الحبوب) لإنتاج الصبغة.
زيت الحشيش هو مصفوفة راتنجية من الكانابينويدات تُنتج بالاستخلاص بالمذيبات، وتُشكَّل في كتلة متصلبة أو لزجة. ويُعد زيت الحشيش من أشد منتجات القنب فاعلية بسبب ارتفاع محتواه من المركب ذي التأثير النفسي. وقد ازداد مؤخرًا الإقبال على استخدام زيت الحشيش المستخلص بالبيوتان وثاني أكسيد الكربون فوق الحرج.
المنقوعات تشير إلى أنواع مختلفة من منقوعات القنب، تختلف فيما بينها بحسب المجموعة الواسعة من المذيبات غير المتطايرة التي يمكن استخدامها لإنتاج منقوع القنب. ولتحضير مثل هذا المنقوع، تُخلط المادة النباتية للقنب بمذيب، ثم تُعصر وتُرشَّح لنقل الزيوت من النبات إلى المذيب. وتُستخدم عادةً زبدة الكاكاو والزبدة اللبنية وزيت الطهي والغليسرين ومرطبات الجلد كمذيبات.
الماريجوانا الطبية تشير إلى استخدام نبات القنب علاجًا عشبيًا يوصي به الطبيب، وكذلك استخدام THC والكانابينويدات المُصنَّعة. ويتطلب هذا الاستخدام عمومًا وصفة طبية، ويجري التوزيع عادةً ضمن إطار تحدده القوانين المحلية. وقد أظهرت عدة دراسات بحثية أن استخدام القنب أو مشتقاته يعمل على مواجهة حالات مثل الغثيان والقيء الناجمين عن العلاج الكيميائي، والألم الاعتلالي العصبي، والتصلب المتعدد.