Ma'alo'obtal u ultrasonido Hielscher

Extracción u proteínas ultrasónica jach yéetel cultivos celulares

  • Extracción proteínas jach jump'éel paso wa u le tuukulo'obo' ti' proteómica muestra yilik.
  • Proteínas páajtal extraer u paak'alo'ob yéetel jach animales, levaduras yéetel microorganismos.
  • Sonicación jach jump'éel método extracción proteína confiable, eficiente ts'áaik rendimientos proteínas ichil jump'éel k'iin u extracción corto.

 

Extracción proteínas u jach yéetel células

Extracción proteínas le jach yéetel células cultivadas le jump'éel paso preparación tuukulo'obo' ti' le muestra ku beeta'al ichil ya'ab yo'osal bioquímicas yéetel analíticas bey ELISA ti', PAGE, Le borrar occidental, espectrometría masas, wa u purificación proteínas. Ultrasónico interrupción, lisis yéetel extracción le célula u ti'al jump'éel láaka precisamente controlable asegurar ka'anatako'ob rendimientos proteínas.

Extracción proteínas u wa'ak'al ba'alche'o'

Utia'al wa u tuláakal Buka'aj yilik jach (yis, puksi'ik'al, pulmón, músculo, etc.), u wa'ak'al k'a'ana'an u disecado ti' trozos jach mejen yéetel nu'ukulo'ob limpias, yóok'ol hielo preferiblemente yéetel lo ka'ache' posible utia'al Jech le degradación tumen proteasas (p'el. ej. tampón lisis bey). RIPA wa lisis hipotónica buffer ba'ax ku taasik proteasa ka fosfatasa u inhibidor cóctel). Ka' le disección, le muestra ku sumerge tu nitrógeno líquido utia'al congelar séeba'an. Le muestra u conservar u u-80 ° C uti'al u posterior wa u cuidadas ti' le hielo homogeneización inmediata. Inmediatamente bey ma' u extracción ultrasónica, tampón u lisis frío ti' hielo (yéetel inhibidores le proteasa TDT, leupeptin yéetel aprotinina) jáan u agrega ti' le tubo muestra (tumen ~ 10 mg wa'ak'al u recomiendan yan ~ 600 μL tampón). Aprox. 20 ti'-60mg wa'ak'al le recomendado tumen le tubo muestra.
Homogeneización ultrasonidos, lisis yéetel extracción ku beeta'al yéetel juntúul homogenizador ultrasónico bey le UP200Ht o UP200St, equipado yéetel juntúul sonda xnuk. Sonicación ku bisik le 60-90 segundos ti' jump'éel modo ciclo ultrasónico ti' sonicación kex teen jo'olajun segundos ka k'iin descanso 10 segundos. Le muestra k'a'ana'an conservar u tu hielo le k'iin.
Ka' ts'o'ok u homogeneización ultrasónica leti' extracción, lisada u centrifuga u 27.000 g ti' aprox 20 minutos ts'o'okole' ku Mool le supernatent utia'al u concentración proteína je'el u páajtal u determinada tumen juntúul análisis proteína tales como ensayo Pierce proteína BCA.

Le sonicación proteínas le jump'éel método k'a'abéet u wa u muestras yilik

Extracción proteínas u ultrasónicas células yéetel UP200St

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Extracción proteínas suero k'i'ik'el

Utia'al u jump'éel mezcla homogénea ti' le suero yéetel le tampón fosfato, le muestra jach bok'ik u bey ma' lisis t'aan ultrasónico. Utia'al u lisis ultrasónica, u ye'esik u sonicó yéetel juntúul homogeneizador laboratorio ultrasonidos bey le UP100H 8 ciclos tu amplitud le 20 ti chúumuk, utia'al le ciclos Amal 5 segundos t'aba'an yéetel 15 segundos apagado. Sonocation ku bisik ka'ansaj tumen sonicationg ti' ciclos yéetel je'ela' le muestra ti' hielo tumen le ba'ax ku evita jump'éel degradación térmica yéetel sobrecalentamiento le muestra. Puesto ti' le suero ku taasik nuxi' cantidad proteínas ka'anal peso molecular (tales como albúmina, α1-antitripsina, transferrina, haptoglobulin, inmunoglobulina G yéetel inmunoglobulina U), ku interfieren yéetel le separación proteínas t'okik peso molecular ichil le IEF, le recomienda utia'al u agotar ti' le suero utilizando jump'éel columna agotamiento.

Extracción proteínas u wa'ak'al le chan páak'alo'

Wa'ak'al vegetal ts'o'onota', O'olkij, je'ebix, musgo, etc., u interrumpir u uchik je'ela' le xooko'obo' le muestra picada ti' tampón lisis tumen sonicación. Duro ti', ligenous le jach u vegetales bey neek'o'obo', agujas abeto etc.,, k'a'ana'an u beel tikin lu'um. Yaan duros, materiales paak'alo'ob leñosas k'a'abéet u congelados yéetel nitrógeno líquido antes u obtuvieron tumen sonicación. Chan t'aan miatsil suspensiones, jump'éel Ts'a'akal ultrasonido ichil 30 yéetel lelo' ku segundos ti' jump'éel tampón lisis sobre todo suficiente. Xooko'obo' asab resistente bey le neek'o'ob k'úum requieren jump'éel asab intensa sonicación bix u describe in continuación.

Protocolo extracción ultrasónica u albúmina le neek'o'ob k'úum

Homogeneizador ultrasónico tejido UP400St yéetel S24d40 - utia'al u extracción proteínas ti' u wa'ak'al ba'alche'o' yéetel vegetal (Click utia'al agrandar!).Utia'al u extracción ultrasónica proteína albúmina juuch'bil neek' k'úum u fina le lu'umo', ti' jump'éel vaso u precipitados vidrio 250mL ku añaden 10 g neek'o'ob k'úum desgrasada ti' juuch'bil yéetel 100 mL ja' desionizada bey solvente. Extracción le proteína consiste ti' ka'ap'éel wook: ti' yáax kúuchil, le muestra ku sonicó yéetel juntúul ultrasonicador bin yano'ob sonda UP400St (400W, 24kHz). yéetel sonda montada S24d7. Le vaso vidrio ku coloca jump'éel wichkíil síis ja' ichil le homogeneización ultrasónica. Le ajuste le ultrasonicador UP400St yéetel le sensor temperatura extraible asegura u temperatura le muestra ku mantiene Mantats' ti' a yáanal 30 ° kuxtal U kaambalil yo'osal preciso ti' le temperatura ichil le sonicación, evita u desnaturalización le albúmina. Tu ka' kúuchil, le extracción ku beetajo' yéetel juntúul batidora velocidad 200 rpm yéetel 30° kuxtal Ts'o'okole' ku transfiere le vaso ti' jump'éel agitador termostático. Globulina u elimina yo'osal diálisis yéetel destilada ja'. Ka' ts'o'ok u retiro globulina, le extracto proteína je'el u páajtal u muestreado utia'al u determinación u perfil le albúmina yéetel u ajusta posteriormente utia'al u pI = 3.0 utilizando 0.1 M HCl utia'al u coagulación albúmina. Le fase sólida separa tumen centrifugación 5000g, 20° C yéetel u redisuelve ti' desionizada ja'. Coagulación albúmina Meyajta'ab ka'atéen utia'al u ya'abtal le proporción proteína ti' le concentrado ku albúmina.

Extracción proteínas alcalinas ultrasónico utia'al wa u proteína yilik concentrado arroz salvado ku ye'esik u ya'ala'al máaxo'ob máano'ob u Ts'a'akal ultrasónico ti' proteínas asab ka'anal rendimiento ti' jump'éel k'iin significativamente asab corto ti' le extracción – Comparado yéetel métodos u extracción convencionales.

Dispositivo ultrasónico VialTweeter utia'al u extracción proteínas muestras wa'ak'al (Click utia'al agrandar!).

VialTweeter utia'al u sonicación indirecta.

Ventajas

  • rápida
  • Ka'anatako'ob rendimientos
  • ma'alob eficiente
  • Kaambalil yo'osal preciso ti' le parámetros
  • ya'ala'al máaxo'ob máano'ob reproducibles
  • escalabilidad lineal

Protocolo wa u muestra utia'al u enzima iNOS funcional yilik

Tia'al le enzima iNOS completamente funcional (je'ebix utia'al u detección u drogas), ku recomienda le uláak' protocolo: le suspensión células k'a'ana'an colocar ti' hielo yéetel someter ultrasonidos yéetel jump'éel UP100H yéetel amplitud 10 ti' le modo ciclo 5 segundos sonicación yéetel 25 segundos ku je'esikuba'ob ti' le hielo. Le procedimiento k'a'ana'an repetir u yan 3 Óoxten. Le k'iin descanso ichil ciclos sonicación reduce u aumento le temperatura yéetel tune' reduce le ku desnaturalización.

Solubilización proteína ultrasónico

Sonicación je'el u páajtal u acelerar le tuukula' solubilización proteína, ba'ax ku k'a'abet u ya'abkach horas. Utia'al ma' sobrecalentar le muestra yéetel Jech le degradación proteínas yéetel modificaciones ti' soluciones u contengan urea, le explosiones ultrasónicas ma' k'a'abéet durar asab u yaan segundos.

T'aano'ob generales

Kaambalil yo'osal u temperatura: Utia'al asegurar jump'éel rendimiento ka'anal ku proteico ma' desnaturalización térmica, k'a'ana'an controlar u le temperatura ichil le extracción. Homogeneizadores ultrasónicos u noj u yila'ob Hielscher – xan llamado desintegrador ultrasónico wa sonificator – le precisamente controlable. Ku talo'ob yéetel juntúul sensor temperatura extraible. Ti' le opciones configuración homogenizador ultrasónico, ku páajtal establecer jump'éel wóolis temperatura. Le kéen u chukik le k'aas temperatura ti', le ultrasonicador utia'al automáticamente tak ka u muestra u yaantal enfriado.
Almacenador intermediario: Le elección jump'éel buffer yáax ka le volumen correcto ti' búfer varían u wa'ak'al u wa'ak'al ka k'a'abéet u calculado-out tumen pruebas ensayo yéetel ba'alo'.
Aislamiento leti' purificación: Lisados u proteína páajtal xu'ulsa'al jump'éel exceso ti' biomoléculas bey le ADN wa carbohidratos, le ju'unil táan u béeytalo'ob u removidos tumen precipitación proteínas (ácido tricloroacético desoxicolato) wa k'eexpajal buffer.

Chittapalo ka Noomhorm (2009) informaron ti' le rendimiento proteína aumentó utilizando sonicación yéetel u le tuukula' le homogeneización ultrasónica ti' u wa'ak'al yéetel lisis u ma'alo'obkíinsiko'ob significativamente le procesos u extracción existentes – habilitación u túumben kúuchil meyajo'ob yaan extracción comercial.

Protección ma'alo'ob yéetel blindaje SPB-L yéetel dispositivo ultrasónico UP200St u Hielscher. (Click utia'al agrandar!).

Homogeneizador u ultrasónico u wa'ak'al UP200St utia'al u extracción eficiente ti' le proteína

Kaambalil yo'osal preciso ti' u Ts'a'akal ultrasónico (Click utia'al agrandar!).

Kaambalil yo'osal u explorador yo'osal jump'éel operación precisa yéetel seguimiento le tuukula' sonicación

Nu'ukulil ultrasónico utia'al u extracción proteínas

Hielscher Ultrasonics ku ts'abal jump'éel amplia gama Homogenizadores ultrasónicos utia'al u desintegración le células, tejidos, bacterias, microorganismos, levaduras yéetel esporas.
Ultrasonicators laboratorio u Hielscher le potentes yéetel fáciles u operar. Construido ti' jump'éel funcionamiento 24 leti' 7, u diseñados bey dispositivos u sobremesa robusto yéetel eficiente laboratorio. Utia'al tuláakal le dispositivos, tíip'ik le energía yéetel le amplitud táan u béeytal u precisamente controladas. Le amplia gama ti' Accesorios Jaap u asab opciones configuración. Le dispositivos digitales tales bey VialTweeter, UP200Ht, UP200St, ka UP400St Yaan jump'éel kanik u temperatura integrado yéetel juntúul tarjeta SD incorporada utia'al u grabación datos automáticas.
Utia'al u sonicación indirecta, libre u contaminación cruzada yéetel simultáneo ya'ab k'oja'ano'ob muestras, ofrecemos le VialTweeter wa le Cuphorn ultrasónico.
A recomendamos le configuración asab úuchuk utia'al wa u le muestra yilik dependiendo de u ka'anatako'ob, le yéetel le volumen muestra, Contactar k bejla'e' wéet!

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Literatura leti' referencias

  • Chittapalo t'aano', U Noomhorm (2009): Álcali asistida ultrasónica extracción u proteína u salvado arroz desengrasado yéetel propiedades ti' le proteína ku concentra. Int J Food Sci Technol 44:1843-1849.
  • Simões ti', André le:; Pereira ti', Diane M.; Amaral ti', Joana D.; Nunes, Anae' F.; Gomes, Sofiae' yéetel.; Rodrigues ti', JPedroe' M.; Tu, kuxtal Adrian; Mulix ' Hooge, Rudi; Buey ti', Clifford J.; Thibodeau ti', Stephen N.; Borralho ti', JPedroe' M.; Rodrigues, Cecília M.P. (2013): Eficientes u recuperación proteínas muestras ya'ab k'oja'ano'ob ti' le fuente ka' trizol wa trizol LS ARN extracción yéetel almacenamiento chowak plazo. BMC Genomics 2013, 14:181.


Hechos u tojol le su'utalil K'ajóolt

Proteómica

Proteómica jach le jach yáax investigación u investiga proteínas yéetel le proteoma. Proteínas báats'tik amplia gama noj vitales ichil le áantajilo'ob. Le proteoma jach le nu'ukulo'ob proteínas expresadas tumen juntúul genoma, célula, wa'ak'al jump'éel organismo ti' jump'éel súutuko' determinado. Le proteoma varía yéetel le ka distintos requisitos wa tensiones, ku somete ti' jump'éel célula jump'éel organismo. Asab específicamente jach le nu'ukulo'ob proteínas expresadas ti' jump'éel determinado bin yano'ob célula jump'éel organismo, ti' jump'éel súutuko' dado, yáanal condiciones definidas. Le término jach jump'éel mezcla proteínas yéetel u le genoma. Proteómica jach le xooko' le proteoma.

Proteína

Le proteínas ku biomoléculas nukuch, u macromoléculas llamadas – Ba'ax ku componen ti' jump'éel wa asab cadenas chowak u aminoácidos. Le proteínas táan presentes ti' tuláakal le áantajilo'ob k'aaba' vegetal yéetel ba'alche'o' yéetel le cruciales utia'al u óol tuláakal le máasewáalo'obo' ti' le noj biológicas. Puesto ti' le proteínas ya'alik nuxi' cantidad a'alajil t'aan biológica, u extrajeron fines analíticos, je'ebix, utia'al investigaciones proteómicas. Le función ke realizada tumen le proteínas incluyen catálisis reacciones metabólicas, u replicación le ADN, núukik estímulos yéetel le transporte moléculas jump'éel kúuchil ti' uláak'. Le proteínas ku diferencian chuunil laat'a'an ti' u secuencia aminoácidos, u jach dictado tumen le secuencia nucleótidos le genes, ka ba'ax ku u tsolik ichil ti' proteína plegable ti' jump'éel ba'ax tridimensional específica u determina u actividad. Le proteínas ku – Beyxan ti' kaambalilo'ob péptidos – juntúul ti' le componentes clave ti' le janalbe'eno'ob. Tune', le proteómica jach jump'éel potente nu'ukula' ti' ciencia le janalbe'eno'ob utia'al optimizar procesos, ti' seguridad alimentaria yéetel valoración nutricional.

Electroforesis tu gel u

Electroforesis te' gel leti' le método noj bejo' utia'al separación yéetel análisis macromoléculas tales como DNA, RNA yéetel proteínas, bey u fragmentos, basados ti' u Buka'aj ka kuuch. Ku meyajtiko'ob ti' química clínica utia'al u separar le proteínas tumen kuuch wa Buka'aj (agarosa IEF, esencialmente independiente le Buka'aj) yéetel tu Bioquímica, biología molecular yéetel proteómica utia'al u separar jump'éel jo'olkaajo' mixta u fragmentos u ADN yéetel u ARN tumen le longitud, utia'al estimar le Buka'aj u Fragmentos ADN yéetel ARN wa utia'al separar le proteínas tumen kuuch.

Cultivos celulares

Yéetel t'aan leti' le tuukula' tuméen controlado tumen le ba'ax le células ku cultivan yáanal condiciones controladas. Condiciones yéetel t'aan varían utia'al Amal bin yano'ob célula. Tu general le jeets' jump'éel t'aan yéetel consiste ti' jump'éel un'ukul yáax (je'ebix, placa u Petri) yéetel sustrato wa ka'a u suministra le nutrientes tu láakal (aminoácidos, carbohidratos, vitaminas, minerales), ba'ax tuméen, hormonas yéetel gases (CO2, Wa2) yéetel regula le jeets' physio-chemical (tampón ti' pH, presión osmótica, temperatura). Mayoría le células K'abéet jump'éel superficie wa sustrato artificial, ka' jo'op' u uláak' culturas célula táan u béeytal u cultivado libre flotando chúumuk yéetel (pak'al suspensión, suspensión le célula).
Totales cultivos líneas celulares u animales u utilizan le producción industrial u vacunas virales yéetel uláak' yik'áalil derivados u biotecnología. U cultivan células na' humanas utia'al waaj a kóochkinsike'ex le meyaj ku células yéetel le células diferencian ti' ya'ab tipos células somáticas utia'al u fines trasplante.

Muestras u wa'ak'al

U wa'ak'al le término describe jump'éel nu'ukul-t'aan intermedio, le xooko'obo' le célula tu'ux ti' jump'éel nivel organizativo ichil le células yéetel juntúul órgano k'iini'. Ti' u wa'ak'al, le células similares, tak le k'iino' je'el xano' k'aaba' u conjuntamente ku beetiko'ob jump'éel función específica, u montadas. Le agrupación funcional jach ya'ab k'oja'ano'ob, ku táakpajalo'ob le ka'ansaj complejas u órganos.
Jach muestras u wa'ak'al ti' le investigación ti' biología ti', histología leti' histopatología, Parasitología, bioquímica, inmunohistoquímica, bey bix yo'osal cultivar yéetel extraer ADN. U páajtal distinguir ichil ba'alche'ob (Subdivisión: wa'ak'al mamíferos) yéetel wa'ak'al le páak'alo'. Le animales jach agrupan ti' le kan tipos k'a'abeto'ob ti' conectivo, muscular, nervioso yéetel wa'ak'al epitelial. Wa'ak'al le páak'alo' subdivide ti' le je'ela' kaambalilo'ob óoxp'éel jach: u wa'ak'al jump'éel k'oja'anil ti', le epidermis yéetel u wa'ak'al le páak'alo'.
Táan u béeytal u mentik le muestras wa'ak'al ba'alche'ob wa pak'chaje' le páak'alo', je'ebix, baako', músculo, u le', etcetera.

Fluidos corporales

K'i'ik'el, suero, plasma, líquido cefalorraquídeo, tuubo' yéetel líquido sinovial le fluidos corporales, ku ts'abal nuxi' fuente a'alajil t'aan ti' diagnóstico relevante. Tune', Páaybe'en jump'éel sofisticada wa u yilik muestras ts'a'abal corporales utia'al u análisis. Le yáax talamil k ku asocia yéetel le amplio rango ku ts'o'okole' ku ti' le componentes presentes ti' le fluidos corporales.

Determinación u concentración le proteína

Ensayo u Bradford, Lowry análisis yéetel ensayo bicinchoninic ácido (BCA) ku náats'al ensayos utia'al u determinar le concentración proteínas. Albúmina suero bovino (BSA) leti' jump'éel le proteínas asab utilizadas estándar.

Tampón lisis

Tampón lisis k'a'ana'an u yéeyik de acuerdo con le xooko'obo' ti' le célula wa wa'ak'al (pak'al jach, paak'alo'ob, bacterias, hongos, etc.), ka wa le células yano'ob ti' jump'éel ba'ax ka le bin yano'ob ba'ax. Amplia gama almacenadores intermediarios le lisis utia'al u extracción proteínas, membranas yéetel orgánulos táan formulados yéetel detergentes uno wa asab. Le detergente ku selecciona ku yo'osal pruebas ensayo yéetel ba'alo' wa – Wa táan disponible – ti' jump'éel protocolo extracción proteína existente. Le detergente k'a'ana'an u beel compatible yéetel le fuente wa'ak'al yéetel le proteínas. Tu general ti', le asab O'olkij detergente ku meyaj yo'osal jump'éel wa'ak'al específico leti' proteína, jach yéeyik utia'al mantener le wóolis funcionalidad le extracto. Ku ts'o'okole', kano'ob jump'éel extracción ti' le membranas yéetel organelos, jump'éel detergente O'olkij mantiene le membrana intacta. Detergentes utilizados ti' tampones u lisis le ti' u mayoría ma' iónicos wa zwitteriónico, je'ebix, grietas, desoxicolato ti', Triton™ X-100, NP40 yéetel Tween 20.
Je'ebix, le jach bix ta ts'o'omej, táaman, intestino, yis, bazo etc. páajtal yéetel almacenar temporal yéetel RIPA – Ba'ale' le inhibidores proteasa yéetel TDT (je'ebix utia'al electroforesis ti' gel) k'a'abéet incluir u.
Tampón lisis u wa'ak'al muscular esquelético (tin wuk'aj síis): 2,7 mM KCl ti' 20 mM Tris (pH 7.8), 137 mM NaCl ti', 1 mM MgCl2, 1 ti chúumuk Tritón X-100, glicerol ti' le 10 ti chúumuk (w/v), 1 mM EDTA ti', 1 mM Ditiotreitol complementado yéetel inhibidor ti' le proteasa yéetel fosfatasa cóctel
Tabla buffers común yéetel u rango pH. Tu general le buffers ku utilizan normalmente ti' concentraciones 20-50 mM.

Tampón u rango pH
Ácido cítrico – Naoh 2.2 – 6.5
Citrato sodio – Ácido cítrico 3.0 – 6.2
Acetato sodio – ácido acético 3.6 – 5.6
Ta'ab sódica u ácido cacodílico – Ácido clorhídrico 5.0 – 7.4
WI'INAL – Naoh 5.6 – 6.8
Fosfato u biácido le sodio – fosfato hidrógeno disódico 5.8 – 8.0
Imidazol – Ácido clorhídrico 6.2 – 7.8
Mops – Koh 6.6 – 7.8
Hidrocloruro trietanolamina – Naoh 6.8 – 8.8
Tris – Ácido clorhídrico 7.0 – 9.0
HEPES – Naoh 7.2 – 8.2
Tricina – Naoh 7.6 – 8.6
Tetraborato sodio – ácido bórico 7.6 – 9.2
Bicina – Naoh 7.7 – 8.9
Glicina – Naoh 8.6 – 10.6

Almacenadores intermediarios óol tuláakal le máasewáalo'obo' muestran jump'éel dependencia pH yéetel le temperatura. Le ba'ala' es especialmente jaaj utia'al le búferes Tris. Cambios le pKa 8.06 u 25° C u 8.85 u 0 ° kuxtal
(pH yéetel pKa jump'éel tampón: medidas u pH le concentración iones hidrógeno ti' jump'éel solución acuosa. pKa (constante disociación ácida =) leti' jump'éel ti', ba'ale' p'iss bey asab concreta, ba'ax ku yáantik predecir bix actuará jump'éel molécula ti' ku 30 pH específico.).

TRIzol

TRIzol jach jump'éel química solución ba'ax ku meyajtiko'ob utia'al u extraer le ADN leti' ARN leti' proteína ichil le extracción le tiocianato-fenol-cloroformo u guanidinio. U búukinta'al ultrasonidos asistida TRIzol extracción resulta te' ka'anatako'ob rendimientos DNA, RNA yéetel proteínas le ti' jump'éelili' kuchil-muestra ka sobresale u tal modo uláak' métodos extracción.