Preparación ultrasónica u muestras kuxtal elegans

Kuxtal elegans ti', jump'éel xnok'ola' nematodo, jach jump'éel organismo bix u ampliamente utilizado ti' biología. Wa u le muestra yilik bey ma' le análisis k'a'abet lisis ti', extracción proteínas yéetel lípidos, bey fragmentación le ARN, u páajtal u u bix fiable yo'osal sonicación. Le disruptores celulares ultrasónicos le dispositivos fiables, sofisticados yéetel fáciles u biilankiltej utia'al rápida wa u yilik muestras kuxtal elegans.

Preparación ultrasónica u muestras kuxtal elegans

Le kuxtal elegans le x-no'lo'obo' redondos, ba'ax ku utilizan ampliamente ti' le laboratorios investigación utia'al u investigar le genómica, le biología le ma'alo'ob yéetel le k'aas k'oja'anilo'obo'. Ya'ab genes ti' le genoma kuxtal elegans yaan contrapartes funcionales ti' le humanos. Tune', le xnok'ola' nematodo jach jump'éel bix extremadamente útil utia'al le k'aas k'oja'anilo'obo' humanas. Uláak' ventajas uti'al u generalizado u kuxtal elegans le u yéetel ch'a'abil ka barato tu placas u ya'alik bacterias (je'ebix, E. coli), u transparencia, ch'a'iko'ob conveniente, bey le posibilidad congelar yéetel almacenar nook'olo'ob ichil jump'éel período asab chowak.
Le análisis proteínas yéetel lípidos le jump'éel procedimiento habitual ti' le laboratorios yéetel wa u muestras tumen ultrasonidos yilik u ti'al le método establecido lisar nematodos kuxtal elegans ti' tuláakal le u jejelas súutukil jump'éel le ma'alo'ob (es decir embriones, larvas L1-L4, paalo'ob). Dado u kuxtal elegans xan ku meyajtiko'ob bey t.u.m expresión proteínas utia'al u sobreexpresar proteínas específicas, k'a'abet jump'éel método lisis yéetel extracción proteínas fiable yéetel reproducible, u proporcione ka'anatako'ob rendimientos proteínas. Le kaambalilo'ob ultrasónicos disrupción yéetel extracción t'aan u disponibles bey homogeneizadores bin yano'ob sonda yéetel je'el bix ultrasonidos multimuestra. Hielscher Ultrasonics, ka u ocupa u tuniche' wa u yilik muestras yéetel u tuláakal bin yano'ob tamaños muestras, yaan u disruptor células ultrasónico beetike' uts utia'al u procedimiento laboratorio.

Lisis ultrasónica u kuxtal elegans utia'al u

Wa u homogeneizados u lombrices yilik
Extracción proteínas
Extracción lípidos
Cuantificación proteínas
Inmunoprecipitación
Western Blotting
Extracción de ARN
Ensayos enzimáticos

VialTweeter ti' le procesador ultrasónico UP200ST

VialTweeter Unidad wa u ya'ab k'oja'ano'ob muestras utia'al u sonicación simultánea u 10 tubos ensayo beetik.

U tsoolil bix u ultrasónicos yo'osal le disrupción yéetel lisis kuxtal elegans

Le homogeneización yéetel lisis ultrasónica u kuxtal elegans yéetel le posterior extracción proteínas yéetel lípidos páajtal u u yo'osal jejeláas procedimientos, utilizando jejeláas tampones homogeneización yéetel lisis, etcétera. Tuláakal le tsoolil bix u lisis yaan tu común u le muestras k'a'abéet mantener ku continuamente tu hielo utia'al Jech degradación le proteínas. Tu continuación ti' presentamos yaan tsoolil bix u lisis yéetel extracción ultrasónica fiables yéetel rápidos utia'al wa u muestras kuxtal yilik elegans u ka'anal calidad ku contengan proteínas wa lípidos.

Ventajas le lisis ultrasónica u kuxtal elegans

Fidedigno
reproducible
yéetel kaambalil yo'osal precisode temperatura
Kaambalil yo'osal u procesos fiable
Método O'olkij
Chéen ch'a'abil u aplicar
Yantio'

Extracción ultrasónica u proteínas muestras kuxtal elegans

Le lisis ultrasónica yéetel le extracción proteínas nook'olo'ob kuxtal elegans páajtal u u yo'osal ya'ab tsoolil bix. Tu continuación ti' presentamos yaan tsoolil bix u lisis fiables yéetel rápidos tia'al ya'ala'al máaxo'ob máano'ob reproducibles extracción proteínas.

Rápida wa u yilik le extracto citosólico u x-no'lo'obo' kuxtal elegans tumen sonicación

Yéetel le uláak' protocolo ku páajtal mentik lisados kuxtal elegans ti' bey u 30 minutos.
Colección kuxtal elegans
Mool nook'olo'ob kuxtal elegans deseados ti' jump'éel tubo 1,5 ml solución salina tamponada yéetel fosfato (PBS) wa ja'atskab le ti' jump'éel lako' yéetel 1,5 ml PBS. Centrífuga ichil 1 minuto ti' 2000 rpm utia'al u pelletizar. Mantenga le muestras ti' tuláakal súutuko' ti' hielo.
Ts'o'okole', p'o'obol nook'olo'ob ka'atéen yéetel PBS.
Ts'o'okole', ku p'o'ik le lombrices ka'atéen yéetel ddH₂O.
Sut suspender nook'olo'ob ti' bey 500ul u tampón homogeneización (HB). Le muestras nook'olo'ob ts'o'ok u listas utia'al u lisis ultrasónica.
Tia'al asab ma'alobil le extracto proteínas, jach páajtal u desee xu'ulsiko'ob contaminación bacteriana p'o'ik le lombrices ichil 5 minutos Amal jump'éel ti' PBS yéetel ja' estéril ultrapura (ddH₂Wa) wa u le flotación yéetel sacarosa. Mantenga le muestras lombrices continuamente ti' hielo.

Protocolo lisis ultrasónica u kuxtal elegans

Asegúrese mentik le ultrasonido Ba'axten adelantado utia'al u homogeneizador ultrasónico ka'ansaje' táan ts'o'oksik uti'al u (sonda montada, cha'ana' u sonicación preestablecido).

Wa u ultrasonido táan montado ti' bix, coloque táankab hielo yéetel le tubos muestra yáanal le sonda ultrasónica yéetel inserte le sonda ultrasónica ti' le tubo 1,5 ml.

Utia'al u lisis kuxtal elegans yéetel le UP200St wa le UP200Ht, le ultrasonicación k'a'ana'an u ku utilizando jump'éel micropunta (je'ebix, sonda S26d2 2 mm; wilik u wíimbala' le izquierda) ti' le 40 ti chúumuk amplitud ichil 1 segundo yéetel pausas 30 segundos ichil,. 5 ciclos sonicación tumen Amal 1 segundo yéetel pausas 30 segundos le ideales utia'al u lisis kuxtal elegans. Wa beeta'al le lisis tumen yáax ka'atéen, je'el wilik le progresión lisis ti' mejen alícuotas le muestra ka' Amal pulso utilizando jump'éel microscopio.
Le lisis ku kuuch belal le ken interrumpen nook'olo'ob. Le exceso sonicación ku beetik u rotura le núcleos yéetel ku visible ka u muestra u ku viscosa wa espuma. Utia'al u Jech degradación le muestra, meyaj asab pulsos wa k'a'abéet. Ma' aumente le k'iin Amal ciclo pulso ultrasónico tia'al extractos proteínas ka'anal calidad.
Lisado u células claras centrifugando nook'olo'ob lisados tumen ultrasonidos u 14.000rpm ti' 10min u 4 ° C.
Ts'o'okole', transfiera sobrenadante ti' jump'éel tubo túumben ka beetik u utia'al u inmunoprecipitación jump'éel uláak' ensayos.

Páaybe'en ti' le tampón homogeneización: Prepare le tampón homogeneización utia'al u protocolo lisis ultrasónica u anterior le uláak' kin tuukul:

15 mM Hepes pH 7.6 – 15 ml 0,5 M

10 mM KCl – 2,5 ml 2 M

1,5 mM MgCl2 – 0. 75 ml 1 M

0. 1 mM EDTA – 100 ul 0,5 M

0. 5 mM EGTA – 2,5 ml 0,1 M

44 mM sacarosa – 14,7 ml 50 ti chúumuk

Añadir justo bey ma' biilankiltej: 1mM TDT – 1000x 1M

Beyxan ti' kaambalilo'ob jump'éel inhibidor le proteasa

Le tutorial ku tsoolik ba'ax jejelas sonicador asab le utsil utia'al u tareas wa u muestras, bey le lisis, le disrupción t'aan, le aislamiento proteínas, le fragmentación ADN yéetel ARN ti' laboratorios, análisis investigación yilik. Elija le bin yano'ob sonicador beetike' uts utia'al u ka'anatako'ob, volumen muestra, meyaj ku muestra yéetel rendimiento. Hielscher Ultrasonics ti' le homogeneizador ultrasónico beetike' uts ti' tech.

Bix kaxtik le sonicador perfecto ti' le disrupción t'aan yéetel le extracción proteínas ti' ciencia yéetel análisis

Lisis ka'anal rendimiento kuxtal elegans ti' placas 96 pocillos utilizando sonicador placa UIP400MTP

Lisis u kuxtal elegans (nematodos paalo'ob).
UIP400MTP 80 ti chúumuk amplitud ti', 20 ciclos (Amal ciclo sonicación: 30 segundos ON, 30 seg OFF).
Tampón lisis:

Opción 1) SDS ti' le 4 ti chúumuk, 0,1 m Tris leti' HCl pH 8,0, 1 mM EDTA
Opción 2) utia'al coinmunoprecipitación (co-IP): 10 mM u Tris HCl (pH 7,5), 150 mM NaCl ti', 0,5 mM EDTA, 0,5 ti chúumuk NP-40 (cóctel k'iini' u inhibidores le proteinasa).

Fragmentación ADN ka'anal rendimiento
Kuxtal elegans (nematodos paalo'ob) ADN 200-300bp: sonicador placa UIP400MTP – Ajuste 80 ti chúumuk amplitud ti', 30 pulsos – Amal 30 segundos encendido, 30 segundos apagado

UIP400MTP Sonicador u placas utia'al wa u muestras ka'anal rendimiento yilik: El UIP400MTP sonica uniformemente muestras ti' placas microtitulación ya'ab pocillos yéetel placas 96 pocillos u alteran le células, extraen proteínas, fragmentan le ADN, le ARN yéetel le fibrillas alfa-sinucleína.

UIP400MTP Plate Sonicator utia'al wa u muestras ka'anal rendimiento yilik sonica uniformemente muestras ti' multipocillos, placas microtitulación yéetel placas 96 pocillos

Lisis ultrasónica u kuxtal elegans utia'al u ensayos purificación afinidad cuantitativa

Le embriones kuxtal elegans (∼2 millones tumen réplica) ku recolectaron recién recolectados ti' triplicado biológico blanqueando hermafroditas grávidos jóvenes yéetel sonicados ti' hielo (ciclo: 0,5 Guatemala mina'an u yotocho'ob, amplitud: 40-45 ti chúumuk, 5 looxo'ob leti' xoknáalo'obo', 5 sesiones, intervalo ichil sesiones: 30; Procesador ultrasónico UP200S yéetel micropunta S26d2 (Hielscher Ultrasonics GmbH)) tu tampón lisis (volumen total: ∼600 μl; 50 mm Tris-HCl, pH 7,4, 100 mm KCl, 1 mm MgCl2, 1 mm EGTA, 1 mm DTT, 10 ti chúumuk glicerol, mezcla u inhibidores le proteasa, 0,1 ti chúumuk Nonidet p'el-40 Substitute). Paach le sonicación, ku añadió Nonidet p'el-40 Substitute tak jump'éel 1 ti chúumuk yéetel le lisados ku incubaron yéetel rotación pool yóok'ol nej 4 ° C ti' 30 min, seguida u centrifugación u 20.000 × g ti' 20 min u 4 ° kuxtal Tu continuación u aspiró le lisado aclarado ma' alterar le capa lipídica superior yéetel u tu jatsaj tumen Chúumuk ti' le perlas agarosa anti-GFP wa ti' le perlas u kaambalil yo'osal bloqueadas (40-50 μl). Ka' ts'o'ok u rotación u pool yóok'ol u nej u 4 ° C ti' 60-90 min, le perlas ku p'o'ob juntéene' yéetel tampón lisis ku contenía 0,1 ti chúumuk sustituto Nonidet p'el-40, seguido ka'atúul lavados tu tampón I (25 mm ti' Tris-HCl, pH 7,4, 300 mm ti' NaCl, 1 mm MgCl2) wa tampón II (1 mm tris-HCl, pH 7,4, 150 mm NaCl, 1 mm MgCl2) wa xan. Utia'al le pull-downs GFP:MBK-2, ku tu mentajo'ob ka'ap'éel experimentos separados utilizando jejeláas condiciones p'o'. Le proteínas ku eluyeron tumen agitación orbital te' 50 μl 6 m urea leti' 2 M u tiourea u temperatura ambiente. Utia'al le experimentos reducción MBK-1:GFP, le proteínas ku eluyeron ka'atéen agitando 50 μl cloruro guanidinio 8 m u 90 ° C, seguido ti' precipitación yéetel etanol. Tu continuación le muestras proteínas eluidas ku digierieron tu solución.
(cf. Chen et ti' le., 2016).

Le sonotrodo MTP-24-8-96 dispone u waxak sondas ultrasónicas utia'al u sonicación le pocillos le placas microtitulación.

Homogeneización ka lisis ultrasónica u nook'olo'ob

Utia'al u procedimiento lisis yéetel extracción proteínas kuxtal elegans, u recolectaron 30.000 nemotodos le p'isibij correspondiente tumen muestra yéetel u lavaron ti' Guatemala mina'an u yotocho'ob-basal síis, ku concentraron tumen centrifugación u 1500 rpm ichil 2 min., p'o'ob 6 Óoxten yéetel Guatemala mina'an u yotocho'ob-basal síis utia'al tselik le bacterias residuales yéetel ts'o'okole' ku almacenaron ti' hielo tak ka estuvieran listos uti'al u. Utia'al u extracción proteínas, u permitió u nook'olo'ob grávidos paalo'ob formaran jump'éel pellet compacto ka' le ts'ook p'o'o' basal S. Tu continuación le gránulos xnok'ola' ku resuspendieron tu 1 ml tampón extracción síis [20 mM fosfato potasio, pH 7,4, 2 mM EDTA, 1 ti chúumuk Triton-X-100, inhibidores le proteasa (Sigma P2714)] yéetel u Procesaron inmediatamente.
∼30.000 x-no'lo'obo' grávidos-adultos (tu yo'osal u ∼100 mg peso húmedo), ku sonicaron ti' hielo utilizando jump'éel ultrasonido bin yano'ob sonda (je'ebix, UP50H yéetel microtip MS2) ti' le 40 ti chúumuk amplitud ichil 10 ciclos 3 segundos t'aba'an, 30 segundos apagado, tu 1 ml tampón extracción síis. (cf. Baskharan et ti' 2012.).

Extracción ultrasónica u lípidos u kuxtal elegans

Ti' lipidómica, jump'éel k'ab le metabolómica, ku caracteriza yéetel analiza le complemento lipídico ti' le kaambalilo'ob biológicos. Kuxtal elegans ku meyaj ampliamente ti' lipidómica utia'al u investigar u interacción le lípidos metabólicos yéetel u táanil yo'osal ts'aak ka alab óolal kuxtal.
Le lisis yéetel extracción ultrasónica ku meyajtiko'ob utia'al liberar lípidos bey esfingolípidos embriones, larvas yéetel x-no'lo'obo' adultos u kuxtal elegans. Le ultrasonicación ku meyajtiko'ob utia'al u mentik homogeneizados lombrices yéetel, posteriormente, utia'al extraer lípidos le muestra.
Protocolo utia'al u extracción ultrasónica u lípidos u kuxtal elegans
Descongele le pellet kuxtal elegans ti' hielo yéetel sut suspender yéetel 0,5 ml ultrawater.  Sonicar le muestras kuxtal elegans ti' tubos ensayo 1,5 ml, manteniendo le muestras continuamente ti' hielo.
Le sonicación je'el u páajtal u u utilizando jump'éel ultrasonido sonda, bey le UP200Ht, le unidad wa u muestras tumen ultrasonidos wa u meyaj VialTweeter (sonicación simultánea u 10 muestras) wa le UIP400MTP (utia'al u sonicación placas ya'ab pocillos, bey le placas 96 pocillos). Utia'al u lisis ultrasónica yéetel le UP200Ht, meyaj le micropunta S26d2. Preajuste modo ciclo ultrasónico ti' le menú digital. Ajuste u amplitud le 10 ti chúumuk yéetel le modo ciclo sonicación 2 segundos, pulsos 20 ciclos yéetel juntúul pausa 30 segundos ichil Amal ráfaga pulsaciones ultrasónicas.
Transfiera le sobrenadantes tubos vidrio yéetel tapón rosca.  Betaj le extracción Folch añadiendo 1 ml ultrawater u Amal tubo ti' vidrio, seguido 6 ml mezcla cloroformo leti' metanol (proporción = 2:1) u Amal tubo vidrio.
Vórtice Amal tubo vidrio ti' 30 segundos ichil 4 Óoxten.  Centrifugar le tubos 1.258 x g ichil 15 min (Eppendorf, 5810 R) yo'osal u ma'alo'obkíinsiko'ob láayli' asab separación fases.  Transfiera le fracción hidrofóbica inferior ti' jump'éel tubo vidrio limpio yo'osal jump'éel pipeta Pasteur u vidrio.  Seque le fracción hidrofóbica inferior yáanal flujo nitrógeno ti' jump'éel evaporador nitrógeno.  Guarde le pellet tikin ti' jump'éel congelador u - 80 ° C tak u búukinta'al.

Preparación ultrasónica u lisados lombrices

Lisado lombrices: le lombrices ti' p'isibij L4 ku cosecharon yéetel lavaron Óoxten yéetel tampón M9 (42.26 mM Na₂HPO₄, 22.04 mM KH₂PO₄, 85,56 mM NaCl yéetel 0,87 mM MgSO₄) con el fin de tselik tuláakal le bacterias. Ka' tselik le asab cantidad páajtal u tampón M9, nook'olo'ob u resuspendieron ti' le tampón lisis: 50 mM HEPES, 50 mM KCl, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA ti', 5 mM fosfato β-glicerol, 0,1 ti chúumuk (v leti' v) Triton X-100, 50 mM fluoruro sodio, 1 mM ortovanadato sodio, 5 mM pirofosfato sodio, 0,2 mM fenilmetanosulfonilo fluoruro yéetel inhibidor le proteasa. Le lombrices ku congelaron tu nitrógeno líquido yéetel u descongelaron u 37 ° C Óoxten, ts'o'okole' le lombrices ku sometieron u sonicación ti' hielo tikin yéetel juntúul unidad ultrasónica VialTweeter utia'al u simultánea wa u yilik 10 tubos muestra. Le sonicación ku tu bisaj ka'ansaj le 50 ti chúumuk amplitud ichil 10 ciclos 2 seg. yéetel juntúul pausa 30 seg. ichil le ráfagas sonicación. Posteriormente, le muestras ku centrifugaron u 12000 rpm ti' 4 ° C ichil 15 min. Le sobrenadante ku tu Jáay yéetel almacenó - 70 ° kuxtal Ku utilizó jump'éel alícuota utia'al u cuantificación proteínas yo'osal le ensayo Bradford.
Determinación glutatión total, GSH yéetel GSSG: utia'al u cuantificación le glutatión, le lisados yéetel le determinación ku tu mentajo'ob u yéet k'iin. Le larvas L4 alimentadas yéetel glucosa yéetel kaambalil yo'osal u cosecharon yéetel u p'o'ob yéetel tampón M9 Óoxten. Ka' tselik le asab cantidad páajtal u tampón M9, Nook'olo'ob u resuspendieron ácido metafosfórico síis (5 ti chúumuk p'el leti' v), ts'o'okole' nook'olo'ob u sonicaron ti' hielo yéetel juntúul VialTweeter ultrasónico ti' le 50 ti chúumuk amplitud ti' lajuntúul ciclos sonicación 2 segundos yéetel juntúul pausa 30 segundos ichil Amal ciclo. Posteriormente, centrifugado u 12000 rpm ti' 4 ̊ C ichil 15 min.
(cf. Alcántar-Fernández et ti' le., 2018).

Wa u muestra kuxtal yilik elegans bey ma' le inmunoprecipitación yéetel le Western Blotting

Ti' resumen, utia'al le extractos embrionarios, le larvas L1 kuxtal elegans ku cultivaron ti' cultivos ts'a'abal chúumuk Guatemala mina'an u yotocho'ob tu gran escala tak le nojoch ts'o'oka'an. Le embriones ku recogieron utilizando método blanqueo estándar yéetel u suspendieron ti' tampón lisis (50 mM ti' Tris, pH 7,5, 100 mM KCl, 1 mM EDTA, 1 mM MgCl2, 8,7 ti chúumuk glicerol, 0,05 ti chúumuk NP-40, 1 cóctel inhibidores proteasa yéetel 1 cóctel inhibidores fosfatasa I yéetel II), ku congelaron jáan ti' nitrógeno líquido yéetel u lisaron tumen disrupción t'aan ultrasónica utilizando jump'éel ultrasonido yéetel micropunta bey le UP200Ht yéetel S26d2 utia'al 10 pulsos ichil 10 Guatemala mina'an u yotocho'ob ti' le 30 ti chúumuk amplitud. Wa ku k'a'ana'an mentik jump'éel meyaj ku asab muestras, le ultrasonido VialTweeter wa le UIP400MTP MultiSample-Ultrasonicator utia'al u placas pocillos. Ka' sonicación, le extractos ku autorizaron ku tumen centrifugación u 30.000 g ti' 20 minutos u 4 ° kuxtal Le extracto ku aclarado (300 μg u proteína total) ku incubó yéetel 40 μ μ anticuerpo purificado tumen afinidad anti-CDC-25.1 (le xooko') reticulado u proteína U-agarosa, wa bey kanik, Ku utilizó jump'éel cantidad similar ti' inmunoglobulina (Ig) G t'u'ul reticulada u proteína U-agarosa ti' jump'éel volumen total ti' 200 μl tampón lisis ku contenía jump'éel 1 ti chúumuk NP-40, cuya inclusión redujo unión inespecífica proteínas ti' le matriz. Le muestras ku rotaron ichil 1 h ti' 4 ° C, le perlas ku p'o'ob Óoxten yéetel tampón lisis yéetel u eluyeron yéetel 30 μl glicina leti' HCl yéetel 200 mM NaCl ti', pH 2,2. Ka' ts'o'ok u inmunoprecipitación, le eluidos ku diluyeron ti' 30 μ tampón muestra SDS, u calentaron u 95 ° C ti' 4 minutos yéetel, Ba'axten lo general, u aplicó le 3 ti chúumuk le total utia'al u jool le sajkabo' yéetel le 30 ti chúumuk utia'al le eluidos ti' SDS-PAGE, seguido u Western blot yéetel anticuerpos anti-CDC-25.1 (1:400), anti-LIN-23 (1:750), anti-ubiquitina (1:1000), anti-GSK3 (1:500) wa anti-β-actina (1:2000). Ka le extractos ma' u sometieron u inmunoprecipitación, le ti' jump'éelili' kuchil-cantidad proteína total derivada ti' le extractos ku resuspendió ti' le tampón muestra SDS, u chokotaj u 95 ° C ka ts'o'okole' ku aplicó Jun in SDS-PAGE, u analizó yo'osal Western blot. (cf. Segref et le. 2020).

Electronizador sonda UP200St utia'al u lisis

Disruptor t'aan ultrasónico UP200St yéetel micro-tip S26d2 yo'osal lisis yéetel extracción proteínas

Lisis ultrasónica yáanal kanik temperatura presión

U kaambalil yo'osal preciso yéetel fiable ti' le temperatura jach crucial ka manipulan muestras biológicas. Le altas temperaturas inician degradación proteínas inducida térmicamente ti' le muestras.
Bey tuláakal le kaambalilo'ob mecánicas u wa u muestras yilik, le sonicación genera ooxoj. Ba'ale' le temperatura le muestras ku páajtal controlar uts ken u meyajtiko'ob le VialTweeter. Ti' presentamos ya'abkach opciones yo'osal monitorizar yéetel controlar u temperatura u muestras ka' jo'op' le beetik yéetel le VialTweeter yéetel le VialPress utia'al u análisis.

Maak le temperatura le muestra: le procesador ultrasónico UP200St, u acciona le VialTweeter, táan equipado yéetel juntúul software na'at yéetel juntúul sensor temperatura enchufable. Conecte le sensor temperatura ti' le UP200St yéetel inserte xnuk le sensor temperatura ti' le tubos muestra. Ti' jump'éel pantalla táctil digital u boonil, u establecer ti' le menú le UP200St jump'éel rango temperatura específico utia'al u sonicación u muestra. Le ultrasonido ku detendrá automáticamente ka u alcance le wóolis temperatura ka u detendrá tak ka temperatura le muestra baje ti' le je'o' asab t'okik ti' le temperatura establecida ∆. Tu continuación le sonicación ku ka'a káajsik automáticamente. Le función na'at evita le degradación inducida tumen le ooxoj.
Le bloque VialTweeter je'el u páajtal u preenfriar. Coloque le bloque VialTweeter (chéen le sonotrodo ma' transductor!) ti' le refrigerador wa congelador utia'al u preenfriar le bloque titanio ku yáantik posponer le aumento temperatura ti' le muestra. Wa páajtal, le muestra xan ku páajtal preenfriar.
Meyaj hielo tikin utia'al u síistal ichil le sonicación. Use jump'éel bandeja Jach taam Chuup yéetel hielo tikin ka coloque le VialTweeter yóok'ol le hielo tikin utia'al u le ooxoj u disipe jáan.

Kaxáant le disruptor t'aan ultrasónico óptimo utia'al u ka'anatako'ob lisis

Hielscher Ultrasonics jach jump'éel fabricante yéetel ya'ab yaan ti' kaambalo'ob ti' le fabricación disruptores yéetel homogeneizadores celulares u ultrasónicos u ka'anal rendimiento utia'al laboratorios ti', sistemas sobremesa u escala industrial. Le Buka'aj u pak'al células bacterianas, u ba'ax ku kaxtik ti' investigación wa producción yéetel le volumen células ti' procesar tumen p'isib wa k'iin le ba'ax tu láakal utia'al u kaxtik le disruptor t'aan ultrasónico adecuado utia'al u ka'anatako'ob.
Hielscher Ultrasonics k'u'ubul ya'abkach soluciones utia'al u sonicación simultánea ti' muestras ya'ab k'oja'ano'ob (tak 10 viales), bey je'el bix u muestras masivas (es decir placas microtitulación leti' placas 96 pocillos), tak le clásico ultrason u laboratorio u bin yano'ob sonda yéetel jejeláas niveles ti' potencia 50 u 400 vatios tak procesadores ultrasónicos jaatsatako'ob industriales yéetel tak 16.000 vatios tumen unidad yo'osal le disrupción t'aan comercial yéetel le extracción proteínas ti' nukuch producciones. Tuláakal le ultrasonidos Hielscher beta'aniko'ob utia'al meyaj le 24 horas k'iin, 7 k'iin ti' le k'iino'ob, 365 k'iin ti' le ja'aba' u molayil kuuch. Le robustez yéetel le fiabilidad ku yáantajo'ob fundamentales ti' k dispositivos ultrasónicos.
Tuláakal le homogeneizadores ultrasónicos digitales u equipados yéetel juntúul software na'at, jump'éel pantalla táctil u boonil yéetel juntúul protocolizado automático u datos, ku p'áatal ti' le dispositivo ultrasónico ti' tuniche' nu'ukula' meyaj ti' le laboratorio yéetel le kúuchilo'ob producción.
Beet k wojéeltik ba'ax jejelas células ti', ba'ax volumen, yéetel ba'ax frecuencia, yéetel ba'ax ba'ax ku kaxtik yaan utia'al procesar u muestras biológicas. Recomendaremos ti' le disruptor células ultrasónico asab yáax utia'al le requisitos u tuukula'.

Le uláak' tabla k'u'ubul ti' jump'éel indicación le Buka'aj u ba'al u procesamiento aproximada u k sistemas ultrasonidos, tak homogeneizadores portátiles compactos yéetel ultrasonidos MultiSample tak procesadores ultrasónicos industriales utia'al u aplicaciones comerciales:

Volumen lote	Gasto	Dispositivos recomendados
Placas 96 pocillos leti' microtitulación	n.d.	UIP400MTP
10 viales u 0,5 u 1,5 ml	n.d.	VialTweeter tu UP200St
0. 01 tu 250 ml	U 5 u 100 ml leti' min	UP50H
0. 01 tu 500 ml	U 10 ti' 200 ml leti' min	UP100H
U 10 ti' 2000 ml	Ti' 20 u 400 ml leti' min	UP200Ht, UP400St
0. 1 u 20L	0. 2 u 4L leti' min	UIP2000hdT
U 10 u 100L	U 2 u 10 l leti' min	UIP4000hdT
n.d.	U 10 ti' 100 L leti' min	UIP16000
n.d.	Mayor	Racimo u UIP16000

Xook k! Leti' k'áatiko'ob k!

Le homogeneizadores ultrasónicos u ka'anal cizallamiento u utilizan le procesamiento laboratorio, u sobremesa, piloto yéetel industrial.

Hielscher Ultrasonics fabrica homogeneizadores ultrasónicos u ka'anal rendimiento utia'al u aplicaciones mezcla, dispersión, emulsificación yéetel extracción escala ti' laboratorio, piloto yéetel industrial.

Bibliografía leti' Referencias

Chen J.-X; Cipriani P.G.; Mecenas D.; Polanowska J.; Piano F.; Gunsalus K.C.; Selbach M. (2016): In Vivo Interaction Proteomics in Caenorhabditis elegans Embryos Provides New Insights into P Granule Dynamics. Molecular & Cellular Proteomics 15.5; 2016. 1642-1657.
Jonathan Alcántar-Fernández, Rosa E. Navarro, Ana María Salazar-Martínez, Martha Elva Pérez-Andrade, Juan Miranda-Ríos (2018): Caenorhabditis elegans respond to high-glucose diets through a network of stress-responsive transcription factors. PLoS One 13(7); 2018.
Segref, A.; Cabello, J.; Clucas, C.; Schnabel, R.; Johnstone I.L. (2010): Fate Specification and Tissue-specific Cell Cycle Control of the Caenorhabditis elegans Intestine. Molecular Biology of the Cell Vol. 21, 2010. 725–738.
Henderson S.T., Bonafe M., Johnson T.E. (2006): daf-16 protects the nematode Caenorhabditis elegans during food deprivation. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 2006; 61:444–60.

Kaambalo'ob Relacionados

Datos u tojol le su'utalil K'ajóolt

Caenorhabditis elegans

Kuxtal elegans jach jump'éel nematodo transparente kuxtal libre (xnok'ola' wóolis) u yan 1 mm ti' longitud, ba'ax ku tuláakal u bacterias (je'ebix, E. coli) yéetel yaan jump'éel ciclo kuxtal relativamente corto. Ti' 20 ° C, cepa laboratorio kuxtal elegans (N2) ti' jump'éel kuxtal chúumuk u Jayp'éel 2-3 semanas yéetel jump'éel k'iin generación 3-4 k'iin. Ka kuxtal elegans ku cultiva ti' yaan xan ya'abach, ba'ax ku je'el u meentik uchik ti' condiciones u laboratorio controladas yéetel precisión, ku páajtal examinar uchik utia'al u determinar le principio funcionamiento le túumben medicamentos, bey u táanil yéetel interacción ichil procesos moleculares complejos te' k'aas k'oja'anilo'obo' humanas. Le genoma corto, le ciclo kuxtal corto yéetel u ch'a'iko'ob sencillo ti' entornos laboratorio ku betiko'ob kuxtal elegans jump'éel organismo bix beetike' uts utia'al investigaciones bey genómica, proteómica, biología ti' le ma'alo'ob, investigación k'aas k'oja'anilo'obo', ma'alo'ob fármacos, etcétera.
Nook'olo'ob Caenorhabditis elegans táan u béeytal u machos wa hermafroditas. Le hermafroditas yaan ti' órganos reproductores masculinos yéetel femeninos. Ba'ale' nook'olo'ob hembra ma' yaano'ob. Le hermafroditas táan u béeytal u autofecundar wa xan páajtal reproducir u yéetel x-no'lo'obo' ts'ook. Kuxtal elegans je'el producir asab u 1.000 je' k'iin.
Dado u kuxtal elegans jach juntúul le áantajilo'ob asab simples yéetel juntúul t.u.m nervioso, le xnok'ola' nematodo ku meyajtiko'ob tak 1963 bey organismo bix ti' le investigación. Le neuronas ma' ku ts'o'onol Potenciales asab ka ma' expresan mix beel sodio dependiente voltaje. Ti' le hermafrodita, le t.u.m comprende 302 neuronas cuyo patrón u sido mapeado exhaustivamente, ti' ba'ax ku leti'e', k'ajolo'on bey conectoma.
Ya'ab le genes le genoma kuxtal elegans yaan contrapartes funcionales ti' seres humanos, ba'ax ku p'áatal ti' jump'éel bix extremadamente útil utia'al le k'aas k'oja'anilo'obo' humanas yéetel, je'ebix, ku meyajtiko'ob utia'al u xook le biología le ma'alo'ob, le envejecimiento yéetel le ba'ax influyen ti' le longevidad. Ku ts'o'okole', le mutantes kuxtal elegans proporcionan modelos utia'al k'oja'anilo'ob humanas, incluidos le trastornos neurológicos (je'ebix, le Alzheimer), le cardiopatías congénitas yéetel le k'aas k'oja'anilo'obo' renales.
Le ba'ax tu beetajo'ob u kuxtal elegans jump'éel bix jach valioso utia'al ya'ab sikte investigación. Tu consecuencia kuxtal elegans bin le yáax organismo multicelular in u genoma k'iini' secuenciado. Ku estima ti' le genoma ku taasik 20.470 genes codificadores u proteínas. Mentik kex le 35 ti chúumuk le genes kuxtal elegans yaan homólogos yóolo'ob. Sorprendentemente, u ts'o'ok demostrado repetidamente u yóolo'ob genes reemplazan ti' u homólogos kuxtal elegans ka u introducen ti' kuxtal elegans. Tuméen le contrario, ya'ab genes kuxtal elegans páajtal meyaj u kin tuukul similar u genes le mamíferos.

Alab óolal kuxtal kuxtal elegans jach yan 3 semanas ka consta u 6 u jejelas súutukil jump'éel kuxtal: embriogénesis (p'isibij je'), kantúul jejelas súutukil jump'éel larvales (L1 ti' L4) yéetel le nojoch p'isibij. Le nematodos eclosionan ti' le je'obo' bey larvas L1 compuestas tumen 560 células. Tuméen ichil Amal p'isibij larvaria tuukul a tumen división t'aan yéetel tumen hipertrofia t'aan. Le chan muda ts'aak marca Amal p'isibij larvaria. Wa le condiciones ambientales adversas ti' indican xnok'ola' ti' ma'alo'ob Junp'íit probable ti' le condiciones apoyen le nojoch fertilidad, kuxtal elegans u alterar u ma'alo'ob yéetel formar jump'éel p'isibij larvaria L3 alternativa, tu'ux le larvas ku yokol ichil jump'éel p'isibij dauer. Ti' le noj, le ba'alche'obo' ku extraordinariamente tolerantes le estrés yéetel longevos, ka páajtal páajal in kuxtal u óoxp'éel u nueve wi'inal. Le larvas dauer ku aíslan ti' le adversidad cháaltik u cavidades bucal yéetel anal, encogiendo u intestino ka activando jump'éel cha'ana' genético dependiente daf-16 leti' FOXO u, ichil uláak' ba'alo'ob, conduce u expresión jump'éel cutícula específica u dauer. (cf. Henderson et ti' le., 2006).

Larvas kuxtal elegans Dauer

Larvas u Dauer u ti'al le término le larvas nematodos, ku ooke'ex jump'éel p'isibij ma'alo'ob alternativa. Le término "larvas u Dauer" ku meyajtiko'ob particularmente utia'al nook'olo'ob u láak'o'ob le rabdítidos, incluido le Caenorhabditis elegans. Le t'aano' "Dauer" jach u k'aaba' alemán yéetel u k'áat u ya'al le "ku bisik"” Ti' le sentido ti' “jump'éel período k'iin". Le larvas Dauer ku yokol ti' jump'éel especie estasis yéetel páajtal páajal in kuxtal ti' condiciones adversas. Le súutuko' ku jump'éel larva ku yokol ichil le fase incubación yaantal yo'osal u ambientales le condiciones. Le larvas dauer u ku ampliamente ti' biología tumen muestran jump'éel Buka'aj u ba'al extraordinaria utia'al u páajal in kuxtal ti' entornos hostiles yéetel kajtal te' chowaktako'ob períodos k'iin. Je'ebix, le larvas kuxtal elegans dauer páajtal páajal in kuxtal tak Kanp'éel wi'inal, jach asab u u alab óolal kuxtal taamele' u yan óoxp'éel semanas ichil le ma'alo'ob reproductivo normal.

Visión tuláakal u le ciclo kuxtal kuxtal elegans

Ma'alo'ob u kuxtal elegans ti' ambientes favorables:
Caenorhabditis elegans (kuxtal elegans) ye'esik jump'éel progresión le ma'alo'ob jela'an ti' condiciones ambientales u favorables ka desfavorables.

Núukik u kuxtal elegans condiciones favorables:
Tu condiciones favorables, le xnok'ola' wóolis microscópico Caenorhabditis elegans (kuxtal elegans) Chúuns jump'éel bej ma'alo'ob uts definido. Le nematodo suele u máan tuméen u ciclo kuxtal yéetel ya'abkach xookilo'ob ka le condiciones ambientales le óptimas, normalmente ti' temperaturas ichil 15 ° C yéetel 20 ° kuxtal

Ma'alo'ob reproductivo: Kuxtal elegans Káaj u ciclo kuxtal bey jump'éel embrión. Tu láak' progresa yéetel kan jejelas súutukil jump'éel larvales ya'la'alo', abreviadas bey L1 L4.
P'isibij nojoch: Ka' chukbesik le kan jejelas súutukil jump'éel larvarias, kuxtal elegans u chukik le nojoch p'isibij ti' chéen 3 ti' 5 k'iin. Ti' le p'isibij, ku capaces u reproducir u yéetel continúan viviendo ti' uláak' 2 u 3 semanas, dependiendo de ba'ax ambientales.

Núukik u kuxtal elegans condiciones desfavorables:

Ba'ale' kuxtal elegans le jump'éel organismo resistente yéetel u adaptar u u condiciones desfavorables ti' jump'éel tuukula' llamado formación dauer.

Formación Dauer: Ka le condiciones ambientales ku vuelven desfavorables, bey le hacinamiento, le suministro limitado ti' janalbe'eno'ob wa le altas temperaturas, kuxtal elegans je'el wokol ichil jump'éel tercera p'isibij larvaria extraordinaria t'aano' “dauer,” abreviado je'el bix L3d.
Supervivencia u Dauer: Le larvas Dauer u especialmente adaptadas utia'al u páajal in kuxtal ti' condiciones adversas. Páajtal kajtal ichil ya'ab wi'inal ti' le p'isibij, conservando energía yéetel soportando entornos desafiantes.

Recuperación tu entornos favorables:
Le bey notable u kuxtal elegans u ti'al u Buka'aj u ba'al k'a' jump'éel ciclo kuxtal normal ka le condiciones mejoran.

K'a' condiciones favorables: Ka le larvas kuxtal elegans dauer vuelven kaxtik condiciones favorables, bey abundante alimento, menor densidad u jo'olkaajo' yéetel temperaturas ti'alo'ob, perciben le k'eexpajal ti' le entorno.
Recuperación yéetel kuxtal kajnáalo'ob: Tu núukik a condiciones mejoradas, le larvas dauer ku someten ti' jump'éel tuukula' llamado “recuperación.” Ichil le recuperación, vuelven le jejelas súutukil jump'éel larvales yéetel, finalmente, ku suutikuba'ob paalo'ob reproductivos yéetel jump'éel alab óolal kuxtal normal.

Le Buka'aj u ba'al u k'ex ichil u ma'alo'ob jejelas súutukil jump'éel ti' núukik le condiciones ambientales jach jump'éel bey yaabilajech ti' le biología kuxtal elegans. Ti' leti'ob ku cha'antik páajal in kuxtal yéetel reproducir ku eficazmente tu amplia gama condiciones, ba'ax ku p'áatal ti' jump'éel valioso organismo bix ti' le investigación científica, particularmente ti' le xooko' le ma'alo'ob, le genética yéetel le envejecimiento.

Preparación ultrasónica u muestras kuxtal elegans