Lisis ultrasónica u E. coli
- Le bacterias E. coli le le bacterias asab utilizadas ti' microbiología yéetel biotecnología.
- Le disruptores celulares ultrasónicos ku ts'abal ya'ala'al máaxo'ob máano'ob fiables ka reproducibles utia'al u lisis E. coli.
- Le muuk' ti' cavitación yéetel cizallamiento intensas Ba'ale' controlables yéetel precisión ts'aik bey resultado jump'éel interrupción completa yéetel ka'anatako'ob rendimientos extracción (je'ebix, proteínas, ADN).
Ba'ax ten le disrupción t'aan ultrasónica u E. coli le método preferido.
Le homogeneizadores ultrasónicos wa ultrasonidos u bin yano'ob sonda ts'abal ya'abkach ventajas utia'al u lisis E. coli, ts'o'ok u intensos le ultrasonidos alteran eficazmente le pak' celulares yéetel le membranas. Le ultrasonidos bin yano'ob sonda ku utilizan ampliamente utia'al u lisis E. coli tumen le je'ela' razones:
Le extracción proteínas ti' le células E. coli Meyajta'ab kin tuukul eficiente yéetel le sonda ultrasónica UP200St
Le ultrasonido bin yano'ob sonda k'u'ubul ya'ab ventajas utia'al u lisis E. coli. U kaambalil yo'osal fiable yéetel preciso ti' le parámetros le tuukula' ultrasónico cha'antik optimizar le parámetros funcionamiento, bey le potencia, le ku bisik yéetel u manipulación le muestras utia'al u kaxta'al u yúuchul ya'ala'al máaxo'ob máano'ob deseados.
Análisis electroforético ti' le ADN genómico u E. coli EDL933 sometido ultrasonidos 0 u 15 min. L indica le ba'ala' yaan ADN.
(xook yéetel wíimbala': ©Basselet et ti' le. 2008).
Disrupción t'aan yo'osal cavitación ultrasónica
Le homogeneizadores ultrasónicos u bin yano'ob sonda funcionan yéetel jump'éel 20.000 ciclos tumen segundo (ti' 20 kHz) yéetel provocan cavitación te' ts'a'abal wa suspensiones. Cavitación acústica: ti' microscópicas u presiones similares le vacío yéetel altas temperaturas u desgarran le células. Kex le temperaturas táan u béeytal u chukpachtik ya'ab miles grados centígrados, volúmenes cavitación Chichantako'ob uts ma' calientan le tuukula' u bix ken significativa. Le cavitación acústica generada tumen ultrasonidos yéetel le muuk' cizallamiento perforan wa rompen le membrana t'aan u células bacterianas bey E. coli. Le ultrasonidos Hielscher permiten jump'éel kaambalil yo'osal preciso u parámetros le tuukula' bey le intensidad ultrasónica, le amplitud, yaan tu energía jool yéetel le temperatura. Ti' le modo, le tuukula' lisis ultrasónica u ajustar u bix óptima yaan u bin yano'ob célula, le yéetel t'aan yéetel u le tuukula'.
- Kaambalil yo'osal preciso ti' le lisis (intensidad, amplitud, temperatura).
- Ya'ala'al máaxo'ob máano'ob fiables yéetel reproducibles
- Adaptación óptima u muestras específicas
- Kaambalil yo'osal u temperatura
- utia'al muestras jach mejen u jach nukuch (μL ti' litros).
- Ts'a'akal puramente mecánico
- Operación segura yéetel ch'a'abil u biilankiltej
- Escalado lineal tak laboratorio tak le producción
VialTweeter utia'al u lisis ultrasónica
Homogeneizador ultrasónico kíinsa'ab tu táan uláak' yo'osal u lisis
Ka' jo'op' u le lisis química yéetel enzimática u páajtal u problemática – Dado ti' le lisis química u alterar le ka'ansaj le proteínas yéetel introducir toop purificación, le lisis enzimática k'a'abet chowaktako'ob k'iino'oba' incubación yéetel ma' jach reproducible – Le disrupción ultrasónica jach jump'éel método sofisticado yéetel séeba'an u disrupción t'aan.
Le lisis ultrasónica ku basa únicamente ti' mecánicas muuk'. Ma' u añaden yik'áalil químicos, le sonicación pa' le pak'o' t'aan tuméen muuk' cizallamiento. Le lisis química u alterar le ba'ax le proteínas yéetel introducir toop purificación. Le disrupción enzimática k'a'abet chowaktako'ob k'iino'oba' incubación ka ma' jach reproducible. Le disrupción t'aan ultrasónica ti' le células le bacteria E. coli jach rápida, sencilla, fiable yéetel reproducible. Tuméen beyo', le ultrasonidos Hielscher ku utilizan tu laboratorios biológicos yéetel bioquímicos ti' le yóok'ol kaaba' utia'al wa u muestras, preananalíticos, diagnósticos in vitro yéetel ensayos ya'ab k'oja'ano'ob yilik.
Recomendaciones generales utia'al u lisis ultrasónica
Le sonicación jach tu láaka asab Seguro utia'al lisar yaan xan ya'abach jach mejen, k'as poloktak yéetel nukuch suspensiones celulares – Tak pico-litros tak 100L leti' h (utilizando jump'éel celda flujo ultrasónico). Le células ku lisan tumen cizallamiento líquido yéetel cavitación. Le ADN xan ku ch'a'akal ichil le sonicación, yo'olal ma' k'a'abéet añadir DNasa ti' le suspensión t'aan.
Kaambalil yo'osal le temperatura ichil le lisis ultrasónica u E. coli
Le preenfriar le muestra yéetel mantener le ichil le sonicación ti' hielo, ku páajtal Jech uchik u degradación térmica ti' le muestra.
Idealmente, le muestras k'a'abéet mantener ku heladas ichil le lisis, ba'ale' utia'al óol tuláakal le máasewáalo'obo' ti' le muestras suficiente wa le temperatura ma' supera u temperatura u u yéetel wa u fuente wa'ak'al. Tune', ku recomienda mantener le suspensión ti' hielo yéetel sonicar yéetel ya'ab pulsos ultrasónicos Kóomtak u 5-10 segundos yéetel pausas 10-30 segundos. Ichil le pausas, le u yooxol u disipar u utia'al restablecer jump'éel temperatura baja. Utia'al u muestras u celdas asab nukuch, yaan disponibles ya'ab reactores celda flujo yéetel julajo'ob enfriamiento.
Lea way consejos detallados yéetel recomendaciones ti' jump'éel lisis ultrasónica exitosa.
U tsoolil bix utia'al u preparación ultrasónica u lisados u E. coli
Le investigadores utilizan homogeneizadores ultrasónicos u Hielscher utia'al u disrupción t'aan u E. coli. Tu continuación u kaxtik ya'ab tsoolil bix probados ka comprobados utia'al u lisis E. coli utilizando homogeneizadores ultrasónicos u Hielscher utia'al u kúuchilo'ob aplicaciones ku relacionadas yéetel E. coli.
Tuméen t'aan, reticulación yéetel wa u extractos celulares yilik E. coli yo'osal ultrasonidos
Yo'osal le SeqA yéetel le ARN polimerasa, ChIP-Chip, E. coli MG1655 wa MG1655 ΔseqA u cultivó u 37 ° C tak juntúul OD600 u yan 0,15 ti' 50 ml LB (+ 0,2 ti chúumuk glucosa) Ma'ili' ti' u añadieran 27 μl formaldehído (37 ti chúumuk) Tuméen ml ka'a (concentración final 1 ti chúumuk). Le reticulación beetajo' agitación chaanbelil (100 rpm) tu temperatura ambiente ti' 20 min, seguida enfriamiento yéetel 10 ml glicina 2,5 M (concentración final 0,5 M). Utia'al le experimentos choque térmico E. coli MG1655 ku cultivó ti' jump'éel chúumuk LB 65 ml ti' 30 ° C tak juntúul OD600 u paach u 0,3. Posteriormente, u transfirieron 30 ml yéetel u jump'éel matraz precalentado 43 ° C yéetel u yala'ab mantuvo ti' 30 ° kuxtal Le reticulación yéetel le enfriamiento ku tu mentajo'ob bix u describió ka'achij, excepto ti' le células ku mantuvieron u 30 wa 43 ° C ichil 5 minutos bey ma' jump'éel túumben agitación chaanbelil u temperatura ambiente. Le células ku recogieron tumen centrifugación yéetel u p'o'ob ka'atéen yéetel TBS frío (pH 7,5). Paach le resuspensión ti' 1 ml tampón lisis (10 mM u Tris (pH 8,0), 20 ti chúumuk sacarosa, 50 mM NaCl ti', 10 mM EDTA, 10 mg leti' ml u lisozima) yéetel le incubación 37 ° C ti' 30 min seguida ti' le adición 4 ml tampón IP, le células ku sometieron u sonicación ti' hielo yéetel pausas 12 Óoxten 30 segundos yéetel 30 segundos utilizando le procesador ultrasónico UP400St u Hielscher ti' le 100 ti chúumuk potencia. Ka' ts'o'ok u centrifugación ichil 10 min u 9000 g, u almacenaron 800 μl alícuotas u sobrenadante u - 20 ° kuxtal (Waldminghaus 2010).
Sobreproducción ka purificación enzimas yéetel juntúul sonda ultrasónica
Utia'al u sobreproducción proteínas marcadas yéetel decahistidina (His10), E. coli BL21 (DE3) ku transformó yéetel construcciones pET19b. Ku cosechó jump'éel precultivo ichil áak'abe' tumen centrifugación, ka u utilizó jump'éel 1 ti chúumuk utia'al inocular jump'éel pak'al expresión. Le células portadoras ti' pET19mgtB cultivaron 22 ° C tak chukpachtik jump'éel densidad óptica ti' 600 nm (OD600) tu 0,7. Le yéetel u transfirió u 17 ° C yéetel u indujo yéetel 100 μM IPTG. Ka' 16 h, le yéetel u cosechó tumen centrifugación u 7.500 × g 4 ° kuxtal Le células ku resuspendieron tu solución salina tamponada yéetel fosfato (PBS) tu 50 mM yéetel NaCl 0,3 M u pH 7,4 yéetel u interrumpieron tumen ultraSonidos yéetel juntúul sonotrodo micropunta S2 ti' le ultrasonido UP200St ti' Hielscher ti' jump'éel ciclo 0,5 yéetel juntúul amplitud le 75 ti chúumuk.
Le sobreproducción GtfC marcada yéetel decahistidina indujo ti' 37 ° C yéetel juntúul DO600 u 0,6 yéetel 100 μM IPTG. Tu continuación le células ku incubaron ichil 4 h, ku cosecharon yéetel ku lisaron bix u ts'o'ok indicado ka'achij utia'al MgtB.
Le extractos celulares crudos centrifugaron 15.000 × g yéetel 4 ° C utia'al u sedimentar le jaantik yáalab celulares. Le extractos clarificados u ka tu ku'ucho'ob tu columnas HisTrap FF Crude u 1 ml utilizando juntúul t.u.m ÄKTAprime Plus. Le enzimas ku purificaron de acuerdo con u protocolo le fabricante utia'al u elución ti' gradiente proteínas marcadas yéetel His. Le soluciones proteicas eluidas ku dializaron ka'atéen kíinsa'ab tu táan 1.000 volúmenes 50 mM PBS ti', pH 7,4, yéetel 0,3 M NaCl ti' 4 ° kuxtal Le purificación ku analizó yéetel SDS-PAGE ti' le 12 ti chúumuk. Le concentración proteína u determinó tumen le método Bradford utilizando Roti-Quant. (Rabausch et le. 2013).
Extracción ultrasónica u proteínas le bacteria E. coli
Juntúul proteína cebo k'ana'an ju'uno'ob (tu este caso, MTV1 Arabidopsis thaliana) ku fusiona yéetel juntúul etiqueta GST yéetel u expresa ti' células BL21 u Escherichia coli (E. coli).
- Yuk'ej jump'éel pellet GST-MTV1 yéetel GST (correspondiente u 50 ml yéetel bacteriano) yéetel sut suspender jujuntúulal ti' jump'éel tampón u extracción síis u 2,5 ml.
- Meyaj juntúul ultrasonido UP100H (equipado yéetel juntúul microsonotrodo MS3 utia'al u mejen volúmenes aprox. 2-5 ml) utia'al u interrumpir le células bacterianas tak ka u lisen, ku indica tumen le reducción le opacidad yéetel le aumento le viscosidad. Le ba'ala' k'a'ana'an bisik u ka'ansaj ti' hielo, yéetel u recomienda sonicar ti' intervalos (je'ebix, 10 segundos u sonicación seguidos u 10 segundos pausa ti' hielo, etc.). Yaan u kanantikikbaj ma' sonicar yéetel juntúul intensidad ka'anal. Wa u detecta espuma wa u formación jump'éel precipitado sak, k'a'abéet xu'ulsiko'ob le intensidad.
- Transfiera le solución bacterias lisadas tubos microcentrífuga 1,5 ml yéetel centrifugue 4 ° C, 16.000 x g ti' 20 min.
Ultrasonidos u bin yano'ob sonda bey le UP400St utilizar le principio funcionamiento le cavitación acústica utia'al u lisis eficiente u E. coli.
Análisis expresión yéetel purificación proteínas recombinantes yo'osal sonicación
Le pellet E. coli ku sonicó yéetel le ultrasonido UP100H ti' Hielscher. Utia'al u beyo', le pellet t'aan ku resuspendió ti' jump'éel tampón lisis refrigerado (50 mM Tris-HCl pH = 7,5, 100 mM NaCl, 5 mM DTT ti', 1 mM PMSF) yéetel u síistal tu hielo ichil 10 min. Tu continuación le suspensión t'aan ku sonicó yéetel 10 ráfagas cortas 10 Guatemala mina'an u yotocho'ob seguidas ti' jump'éel intervalo 30 Guatemala mina'an u yotocho'ob utia'al u enfriamiento. Finalmente, le jaantik yáalab le célula ku eliminaron tumen ultracentrifugación u 4 ° C ichil 15 min u 14000 rpm. Utia'al u confirmar le expresión rPR, le sobrenadante ku ejecutó tu gel poliacrilamida le 12 ti chúumuk yéetel u analizó yo'osal SDS-PAGE yéetel Western blot. Le purificación rPR u beetajo' utilizando yiits Ni2 + - NTA (Invitrogen, EE. UU.) de acuerdo con le náakake' u yaak'il ti' le fabricante. Ti' le p'isibij ku utilizó le método purificación kajnáalo'ob. Pureza le proteína purificada ku evaluó yo'osal electroforesis ti' le gel poliacrilamida le 12 ti chúumuk yéetel posterior tinción yéetel azul Coomassie. Le concentración proteína purificada u p'íis yo'osal le kit ensayo proteínas Micro BCA (PIERCE, EE. UU.). (Azarnezhad et ti' le. 2016).
Homogeneizadores ultrasónicos utia'al u lisis E. coli
Hielscher Ultrasonics diseña, fabrica yéetel suministra homogeneizadores ultrasónicos u ka'anal rendimiento utia'al u lisis fiable yéetel eficiente bacterias E. coli yéetel uláak' tipos células, jach yéetel cultivos celulares.
Le amplia gama sondas ultrasónicas, bey je'el bix u sistemas sonicación indirecta, ku cha'antik k ofrecer ti' le homogeneizador jach ultrasónico beetike' uts utia'al u ka'anatako'ob disrupción yéetel extracción t'aan.
Diseño, Fabricación yéetel Consultoría – Calidad Made in Germany
Le ultrasonidos Hielscher le u k'ajóolta'ano'ob tuméen u asab ka'anatako'ob estándares calidad yéetel diseño. Le software na'at, le menú intuitivo, le ajustes programables yéetel le protocolización yo'osal u datos le chéen algunas le yáantajo'ob ti' le ultrasonidos Hielscher. U robustez ka facilidad ch'a'iko'ob permiten jump'éel integración fluida u k ultrasonidos ti' kúuchilo'ob investigación yéetel biotecnología. Páajtal le condiciones adversas yéetel le entornos exigentes le uchik manejables tumen le ultrasonidos Hielscher.
Hielscher Ultrasonics le jump'éel empresa yéetel certificación ISO yéetel ts'áabal yaabilajech énfasis ti' le ultrasonidos ka'anal rendimiento kisbuts' ma'alo'obtal máax k'oja'an yéetel facilidad búukinta'al. Ba'axten supuesto le ultrasonidos Hielscher cumplen yéetel le normativa CE yéetel cumplen le requisitos UL, CSA yéetel RoHs.
Le uláak' tabla ku ts'aik ti' jump'éel indicación le Buka'aj u ba'al u procesamiento aproximada u k ultrasonidos:
| Volumen lote | Gasto | Dispositivos recomendados |
|---|---|---|
| Placas multipocillo leti' u microtitulación | n.d. | UIP400MTP |
| CupHorn utia'al u viales wa vaso u precipitados | n.d. | cupHorn ultrasónico |
| reactor ultrasónico u microflujo | n.d. | GDmini2 |
| tak 10 viales yéetel 0,5 u 1,5 ml | n.d. | VialTweeter |
| 0. 5 u 1.5mL | n.d. | VialTweeter |
| U 1 u 500 ml | U 10 ti' 200 ml leti' min | UP100H |
| U 10 ti' 2000 ml | Ti' 20 u 400 ml leti' min | UP200Ht, UP400St |
| 0. 1 u 20L | 0. 2 u 4L leti' min | UIP2000hdT |
| U 10 u 100L | U 2 u 10 l leti' min | UIP4000 |
| n.d. | U 10 ti' 100 L leti' min | UIP16000 |
| n.d. | Mayor | Racimo u UIP16000 |
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Tsoolil bix adicionales utia'al u lisis ultrasónica u E. coli
Proteínas modificadas yéetel alicina ti' E. coli yo'osal jump'éel vial ultrasónicoTweeter
Determinación le contenido sulfhidrilo yo'osal le ensayo 5,5′-dithiobis (ácido 2-nitrobenzoico) (DTNB).
Ku utilizó jump'éel pak'al nocturno E. coli MG1655 utia'al u inocular MOPS te' chúumuk mínimo (1:100). Le yéetel u cultivó aeróbicamente tak chukpachtik jump'éel A600 0,4. Le yéetel u tu jatsaj ti' óoxp'éel cultivos 15 ml utia'al u Ts'a'akal le estrés. Jump'éel yéetel ma' tratado beelal bey kaambalil yo'osal negativo. U añadió 0,79 mM alicina (128 μg ml-1) wa 1 mM diamida juntúul le ka'ap'éel cultivos restantes u jujuntúulal. Le cultivos ku incubaron ichil 15 min. 5 ml Amal yéetel u cosecharon tumen centrifugación (8.525 × g, 4 ° C, 10 min). Le células ku p'o'ob ka'atéen yéetel 1 ml PBS (137 mM ti' NaCl, 2,7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4 ti', pH 7,4, almacenadas anaeróbicamente bey ma' u búukinta'al) yéetel ku centrifugaron (13.000 × g, 4 ° C, 10 min). Le células ku resuspendieron tu tampón lisis (PBS yéetel 6 mM guanidinio HCl, pH 7,4) bey ma' u interrupción u 4 ° C tumen ultrasonidos ().VialTweeter ultrasonido, Hielscher GmbH, Alemania) (3 × 1 min). Le jaantik yáalab celulares peletizaron tumen centrifugación (13.000 × g, 4 ° C, 15 min). Le sobrenadante ku transfirió ti' jump'éel cubeta QS-macro u 3,5 ml (10 mm) yéetel juntúul barra agitación magnética yéetel j-xa'ak'pajij yéetel 1 ml tampón lisis. Extinción le muestras monitorizó 412 nm yéetel juntúul espectrofotómetro Jasco V-650 equipado yéetel le bix célula PSC-718 yéetel kanik temperatura temperatura ambiente. U añadieron 100 μl ti' jump'éel solución 3 mM ditiobis (ácido 2-nitrobenzoico). Le extinción bin monitoreada tak ka ts'o'ok u chukik le saturación. Le cálculo concentración tiol beetajo' u utilizando le coeficiente extinción ε412 = 13.700 m-1 cm-1 utia'al u ácido tio-2-nitrobenzoico (TNB). Le concentraciones celulares tiol calcularon ichil jump'éel volumen células E. coli 6,7 × 10-15 litro yéetel juntúul densidad celdas A600 = 0,5 (equivalente ti' 1 × 108 Células ML-1 miatsil). (Müller et ti' le. 2016).
Determinación glutatión in kuxtal yo'osal jump'éel trituradora células ultrasónica
E.coli MG1655 ku cultivó tu k'as chen MOPS ti' jump'éel volumen total u 200 ml tak chukpachtik jump'éel A600 0,5. Le yéetel u tu jatsaj cultivos 50 ml utia'al u Ts'a'akal le estrés. Ka' 15 min incubación yéetel 0,79 mM alicina, 1 mM ti' diamida wa dimetilsulfóxido (kanik), le células ku cosecharon u 4.000 g ti' 4 ° C ichil 10 min. Le células p'o'ob ka'atéen yéetel tampón KPE bey ma' u resuspensión le gránulos ti' 700 μl tampón KPE. Utia'al u desproteinación, ku añadieron 300 l ácido sulfosalicílico ti' le 10 ti chúumuk (p'el leti' v) bey ma' u rotura le células tumen ultrasonidos (3 x 1 min; VialTweeter ultrasonidos). Le sobrenadantes ku recogieron ka' u centrifugación (30 min, 13.000 g, 4 ° C). Le concentraciones ácido sulfosalicílico redujeron le 1 ti chúumuk yo'osal le adición 3 volúmenes tampón KPE. Le mediciones u glutatión total yéetel GSSG ku tu mentajo'ob bix u describió ka'achij. Le concentraciones celulares ti' glutatión calcularon ichil jump'éel volumen células E. coli 6,7×10-15 litro yéetel juntúul densidad celda A600 0,5 (equivalente u 1×108 Células ML-1 miatsil). Le concentraciones GSH calcularon u restando 2 [GSSG] ti' le glutatión total. (Müller et ti' le. 2016).
Expresión mAspAT ch'íijsajil ti' E. coli utilizando jump'éel homogeneizador ultrasónico
Le colonia chen u E. coli BL21 (DE3) ku p'áatal le vector expresión ti' 30 mL u chúumuk Luria-Bertani (LB) ku ku taasik 100μg leti' mL ti' ampicilina, ka ts'o'okole' ku cultiva u 37 ° C tak chukpachtik le densidad óptica (OD600) ts'o'ok u chukik le 0,6. Le células ku recolectaron tumen centrifugación u 4.000 × g ichil 10 min, ka u resuspendieron ti' jump'éel chúumuk LB ts'o'onota' u 3 litros ku contenía 100 μg leti' ml u ampicilina.
Posteriormente, u indujo le expresión proteínas yéetel 1 mM isopropilo β-ᴅ-1-tiogalactopiranósido (IPTG) ti' 20 h u 16 ° C. Le células ku recolectaron tumen centrifugación u 8.000 × g ichil 15 min yéetel u lavaron yéetel tampón ti' (20 mM NaH2PO4, 0,5 M NaCl, pH 7,4). Ku obtuvieron yan 45 g (peso húmedo) ku células ichil jump'éel pak'al 3 L. Ka' ts'o'ok u centrifugación, le gránulos le célula ku resuspendieron tu 40 mL (utia'al 1 L yéetel) tampón extracción te' ke'el U yéetel u lisaron tumen ultrasonidos u temperatura helada utilizando trituradora células ultrasónica UP400St. Le lisis t'aan ku centrifugó u 12.000 rpm ichil 15 min utia'al u separar le fracciones solubles (sobrenadantes) yéetel precipitadas (pellets). (Jiang et le. 2015).
Datos u tojol le su'utalil K'ajóolt
E.coli
Escherichia coli (E. coli) leti' jump'éel bacteria coliforme gramnegativa, facultativamente anaeróbica, ti' bix u xóolte', ti' le género Escherichia Kula'an comúnmente ti' le intestino inferior ti' áantajilo'ob k'i'ik'el chokoj (endotermos). Yaan jump'éel nojoch meyaj ku ti' cepas (wa subtipos) u E. coli yéetel kúuchilo'ob ba'alo'ob. Óol tuláakal le máasewáalo'obo' ti' le cepas E. coli ku inofensivas ti' le humanos je'ebix, le cepas B yéetel k'uj-12, ba'ax ku utilizan comúnmente utia'al u aplicaciones investigación ti' laboratorios. Ba'ale' Jayp'éel cepas ku dañinas ka páajtal u causar k'aas k'oja'anilo'obo' graves.
Le E. coli desempeña jump'éel ju'un Páaybe'en ti' le ingeniería biológica moderna yéetel le microbiología industrial, ts'o'ok u le bacteria ch'a'abil u manipular. Aplicaciones náats'al u laboratorio ba'ax u menudo implican u búukinta'al E. coli, je'ebix, ch'a'iko'ob ácido desoxirribonucleico (ADN) recombinante wa utia'al kan bey organismo bix.
E coli le jump'éel huésped jach versátil utia'al u producción proteínas heterólogas, ka u dispone u ya'ab k'oja'ano'ob sistemas expresión proteínas utia'al u producir proteínas recombinantes ti' E. coli. Utilizando plásmidos u permiten jump'éel ka'anal nivel expresión proteínas, ku páajtal introducir genes ti' le bacterias, ba'ax ku cha'antik producir dichas proteínas te' yaan xan ya'abach ti' procesos fermentación industrial.
Le E. coli ku utilizan bey fábricas células utia'al u producir insulina. Uláak' aplicaciones incluyen u búukinta'al células u E. coli modificadas yo'osal j yéetel producir vacunas yéetel enzimas inmovilizadas, utia'al producir biocombustibles, bey je'el bix ti' le biorremediación.
Le cepa k'uj-12 jach jump'éel bix mutante u E. coli u sobreexpresa le enzima fosfatasa alcalina (ALP). Le mutación ku yaantal debido a jump'éel defecto ti' le gen ku codifica constantemente le enzima. Wa jump'éel gen u yaantal jump'éel producto mina'an mix jump'éel inhibición, le je'ela' ku leti'e', k'ajolo'on bey actividad constitutiva. Beyo' mutante específica ku meyajtiko'ob yo'osal le aislamiento yéetel u purificación le enzima ALP.
Le bacterias E. coli xan u utilizan ampliamente bey fábricas células. Le microbios modificados genéticamente (je'ebix, le bacterias) yéetel le células vegetales páajtal utilizar u bey le llamadas fábricas células. Táan a células modificadas genéticamente ku ts'áiko'ob moléculas, yik'áalil químicos, polímeros, proteínas yéetel uláak' sustancias, ka u utilizan, je'ebix, ti' le industria farmacéutica, alimentaria yéetel química. Con el Fin de liberar le moléculas producidas ti' yaan tu ts'u' a células bioingeniería, le lisis ultrasónica u ti'al jump'éel método común jaatik le pak' celulares ka transferir le sustancias objetivo ti' le líquido circundante. Lea asab yóok'ol le lisis células bioingeniería!
Cizallamiento ultrasónico ti' le ADN
Le muuk' u cizallamiento ultrasónicas le jump'éel método comúnmente utilizado utia'al u liberar moléculas, orgánulos yéetel proteínas yaan tu ts'u' le célula, bey je'el bix ti' jaatik le hebras u ADN ti' ts'iit. Le cavitación acústica pa' le pak' celulares yéetel le membranas utia'al u extraer u ADN le células yéetel generar fragmentos jump'éel 600 – 800 pb longitud, le ku beetike' uts utia'al u análisis.
Beetik clic waye' tia'al a wojeltik yóok'ol le homogeneizadores ultrasónicos utia'al u fragmentación le ADN.
Bibliografía leti' Referencias
- Azarnezhad A., Sharifi Z., Seyedabadi R., Hosseini A., Johari B., Sobhani Fard M. (2016): Cloning and Expression of Soluble Recombinant HIV-1 CRF35 Protease-HP Thioredoxin Fusion Protein. Avicenna J Med Biotechnol. 8(4), 2016. 175–181.
- Jiang X., Wang J., Chang H.; Zhou Y. (2016): Recombinant expression, purification and crystallographic studies of the mature form of human mitochondrial aspartate aminotransferase. BioScience Trends 2016.
- Müller A., Eller J., Albrecht F., Prochnow P., Kuhlmann K., Bandow J.E., Slusarenko A.J., Leichert L.I.O. (2016): Allicin Induces Thiol Stress in Bacteria through S-Allylmercapto Modification of Protein Cysteines. Journal of Biological Chemistry Vol. 291, No. 22, 2016. 11477–11490.
- Rabausch U., Juergensen J., Ilmberger N., Böhnke S., Fischer S., Schubach B., Schulte M., Streit W. R. (2013): Functional Screening of Metagenome and Genome Libraries for Detection of Novel Flavonoid-Modifying Enzymes. Applied and Environmental Microbiology 79(15), 2013. 4551–4563.
- Sauer M. (2014): MTV1 Pull-down Assay in Arabidopsis. bio-protocol Vol 4, Iss 12, Jun 20, 2014.
- Waldminghaus T., Skarstad K. (2010): ChIP on Chip: surprising results are often artifacts. BMC Genomics 11, 2010. 414.
Hielscher Ultrasonics fabrica homogeneizadores ultrasónicos u ka'anal rendimiento ichil laboratorio Utia'al Buka'aj industrial.