Ultrasónico lisis e. Coli
- Bacteria e. coli leti' le bacteria asab comúnmente utilizada ti' Microbiología yéetel biotecnología.
- Disruptores u endocrinos le célula ultrasonidos proporcionan ya'ala'al máaxo'ob máano'ob fiables ka reproducibles utia'al u lisis e. coli.
- Intensa láayli' precisamente controlables cavitación esquileo le muuk' ka ocasionar le completa interrupción yéetel extracción ka'anal rendimiento (je'ebix proteínas, ADN).
Ba'ax ten le interrupción t'aan ultrasónica u E. coli le método preferido.
Le homogeneizadores ultrasónicos wa le ultrasonidos bin yano'ob sonda ts'abal ya'abkach ventajas utia'al u lisis E. coli, ts'o'ok u le ultrasonido ku ts'tantik interrumpe eficientemente le pak' yéetel membranas celulares. Le ultrasonidos bin yano'ob sonda le ampliamente utilizados ti' le lisis U. coli debido a le je'ela' razones:
Le extracción proteínas ti' le células E. coli Meyajta'ab kin tuukul eficiente yéetel le sonda ultrasónica UP200St
Le ultrasonido bin yano'ob sonda k'u'ubul ya'ab ventajas utia'al u lisis E. coli. U kaambalil yo'osal confiable yéetel preciso yóok'ol le parámetros le tuukula' ultrasónico cha'antik optimizar le parámetros operativos, bey le potencia, le ku bisik yéetel u ch'a'iko'ob muestras, utia'al u kaxta'al u yúuchul ya'ala'al máaxo'ob máano'ob deseados.
Análisis electroforéticos ti' le ADN genómico u E. coli EDL933 sometido ultrasonidos 0 – 15 min. L indica le ba'ala' yaan ADN.
(xook yéetel wíimbala': ©Basselet et ti' le. 2008).
Disrupción t'aan yo'osal cavitación ultrasónica
Le homogeneizadores ultrasónicos u bin yano'ob sonda funcionan yéetel aprox. 20.000 ciclos tumen segundo (ti' 20 kHz) yéetel causan cavitación te' ts'a'abal wa suspensiones. Ti' microscópicas u cavitación acústica u presiones similares le vacío yéetel altas temperaturas u desgarran le células. Kex le temperaturas táan u béeytal u chukpachtik ya'ab miles grados centígrados, volúmenes cavitación Chichantako'ob uts u ma' calientan le tuukula' significativamente. Le cavitación acústica generada tumen ultrasonido yéetel le muuk' cizallamiento perforan wa rompen le membrana t'aan u células bacterianas bey E. coli. Le ultrasonidos Hielscher permiten le kaambalil yo'osal preciso u parámetros le tuukula' bey le intensidad ultrasónica, le amplitud, yaan tu energía jool yéetel le temperatura. Ti' le modo, le tuukula' lisis ultrasónica ku páajtal ajustar u kin tuukul óptima yaan u bin yano'ob célula, le yéetel t'aan yéetel u le tuukula'.
- Kaambalil yo'osal preciso u lisis (intensidad, amplitud, temperatura).
- Ya'ala'al máaxo'ob máano'ob fiables yéetel reproducibles
- óptima adaptación u muestras específicas
- Kaambalil yo'osal u temperatura
- utia'al muestras jach mejen u jach Nuuktak (μL ti' litros).
- Ts'a'akal puramente mecánico
- Operación segura yéetel ch'a'abil u biilankiltej
- escalado lineal tak laboratorio ti' le producción
VialTweeter utia'al u lisis ultrasónico
Homogeneizador ultrasónico vs uláak' yo'osal u lisis
Ka' jo'op' u le lisis química yéetel enzimática u páajtal u problemática – lisis químico táan u béeytal u alterar ka'ansaj proteínas ka ye'esa'al talamilo'ob purificación ka lisis enzimática k'a'abet k'iin incubación Óoxten yéetel ma' jach reproducible – disrupción ultrasónica jach jump'éel método interrupción ti' sofisticada, rápida ti' le célula.
Le lisis ultrasónica ku basa únicamente ti' mecánicas muuk'. Ma' u agregan yik'áalil químicos, le sonicación pa' le pak'o' t'aan tuméen muuk' cizallamiento. Le lisis química u alterar le ba'ax le proteínas yéetel introducir toop purificación. Le disrupción enzimática k'a'abet chowaktako'ob k'iino'oba' incubación ka ma' jach reproducible. Le disrupción t'aan ultrasónica ti' le células le bacteria E. coli jach rápida, simple, confiable yéetel reproducible. Le beetike' ti' le ultrasonidos Hielscher ku utilizan tu laboratorios biológicos yéetel bioquímicos ti' le yóok'ol kaaba' utia'al wa u muestras, preanlíticos yilik, diagonísticos in vitro yéetel ensayos ya'ab k'oja'ano'ob.
Recomendaciones generales utia'al u lisis ultrasónica
Sonicación le tu láaka asab Seguro utia'al lisis yaan xan ya'abach jach mejen, k'as poloktak yéetel nukuch suspensiones celulares – u pico-litros tak 100 litros leti' p'isib (utilizando jump'éel celda flujo ultrasónico). Le células ku sometidas in lisis tumen cavitación yéetel esquileo líquido. ADN xan le k'oosik ichil le sonicación, bey u ma' k'a'abéet ts'áabal ADNasa ti' le suspensión células.
Kaambalil yo'osal u temperatura ti' le lisis ultrasónica ti' E. coli
U ye'esik u prerefrigeración ka manteniendo le muestra ichil le sonicación ti' hielo, degradación térmica u muestra le muestra je'el Je'e bix u páajtale' u uchik.
Idealmente, le muestras k'a'abéet mantener ku heladas ichil le lisis, ba'ale' utia'al óol tuláakal le máasewáalo'obo' ti' le muestras suficiente wa le temperatura ma' u eleva por encima de u temperatura le yéetel wa u fuente wa'ak'al. Tune', ku recomienda mantener le suspensión ti' hielo yéetel sonicar yéetel ya'ab pulsos Kóomtak ti' ultrasonidos 5-10 segundos yéetel pausas 10-30 segundos. Ichil le pausas, le u yooxol u disipar u utia'al restablecer jump'éel temperatura baja. Utia'al u muestras u celdas asab nukuch, yaan disponibles ya'ab reactores celda flujo yéetel julajo'ob enfriamiento.
U tsoolil bix utia'al u preparación ultrasónica u lisados u E. coli
Le investigadores utilizan homogeneizadores ultrasónicos u Hielscher utia'al u interrupción t'aan u E. coli. Tu continuación u kaxtik ya'ab tsoolil bix probados ka probados utia'al u lisis E. coli utilizando homogeneizadores ultrasónicos u Hielscher utia'al u kúuchilo'ob aplicaciones ku relacionadas yéetel E. coli.
Tuméen t'aan, reticulación yéetel wa u extractos celulares u E. coli yilik usando ultrasonidos
Utia'al u coli SeqA yéetel E. u viruta RNA polimerasa MG1655 wa MG1655 ΔseqA bin asab ya'abtal, u 37° C ti' jump'éel OD600 u tu yo'olal 0.15 ti' 50 ml LB (+ 0.2 ti chúumuk glucosa) bey ma' 27 μl formaldehído (37 ti chúumuk) por medio de ml ku agregaron (concentración final 1 ti chúumuk). Entrecruzamiento u beetajo' ti' agitación chaanbelil (100 rpm) u temperatura ambiente ti' 20 min, seguido u Temple yéetel 10 ml glicina 2,5 M (concentración final u 0,5 M). Utia'al u experimentos choque térmico, e. coli MG1655 bin crecida tu k'as 65 ml LB 30° C ti' jump'éel OD600 u yan 0,3. Posteriormente, u transfirieron 30 ml yéetel juntúul matraz precalentado 43 ° C yéetel u yala'ab ti' 30 ° kuxtal Le reticulación yéetel le enfriamiento bino'ob bix u describió ka'achij, excepto ti' le células ku mantuvieron u 30 wa 43 ° C ichil 5 minutos bey ma' bok'ik Chaambel u temperatura ambiente. Le células recogieron tumen centrifugación yéetel u p'o'ob ka'atéen yéetel TBS frío (pH 7.5). Ka' ts'o'ok u resuspensión ti' tampón lisis 1 ml (10 mM Tris (pH 8,0), sacarosa ti' le 20 ti chúumuk, NaCl 50 mM, EDTA 10 mM, lisozima u 10 mg leti' ml) yéetel incubación 37 ° C ti' 30 minutos seguida ti' le adición tampón IP u 4 ml, le células ku sonicaron tu hi yéetel roturas 12 Óoxten 30 segundos yéetel 30 segundos utilizando le procesador ultrasónico UP400St ti' Hielscher yéetel juntúul ajuste potencia le 100 Ti chúumuk. Ka' ts'o'ok u centrifugación ichil 10 min u 9000 g, u almacenaron 800 μl alícuotas u sobrenadante u - 20 ° kuxtal (Waldminghaus 2010).
Sobreproducción ka purificación enzimas yéetel juntúul sonda ultrasónica
Utia'al u sobreproducción proteínas marcadas yéetel decahistidina (His10), E. coli BL21 (DE3) ku transformó yéetel construcciones pET19b. Ku cosechó jump'éel precultivo nocturno tumen centrifugación yéetel u utilizó jump'éel 1 ti chúumuk utia'al inocular jump'éel pak'al expresión. Le células portadoras pET19mgtB cultivaron 22 ° C tak jump'éel densidad óptica ti' 600 nm (OD600) tu 0,7. Le yéetel bin transferido 17 ° C yéetel inducido tumen 100 μM IPTG. Ka' 16 h, le yéetel u jooch tumen centrifugación u 7.500 × g 4 ° kuxtal Le células ku resuspendieron tu solución salina tamponada yéetel fosfato (PBS) tu 50 mM yéetel NaCl 0,3 M u pH 7,4 yéetel u interrumpieron yo'osal ulTrasonidos yéetel juntúul sonotrodo micropunta S2 ti' le ultrasonido UP200St ti' Hielscher ti' jump'éel ciclo 0,5 yéetel juntúul amplitud le 75 ti chúumuk.
Le sobreproducción decahistidine tagged GtfC bin u inducida u 37° C ti' jump'éel OD600 u 0,6 yéetel 100 μM IPTG. Le células bino'ob túun incubadas ichil 4 h jooch yéetel lisis bix u indicó ka'achij utia'al MgtB.
Le extractos células crudas centrifugaron 15.000 × g yéetel 4 ° C utia'al u sedimentar le jaantik yáalab celulares. Le extractos clarificados u ka tu ku'ucho'ob tu columnas HisTrap FF Crude u 1 ml utilizando juntúul t.u.m ÄKTAprime Plus. Le enzimas ku purificaron de acuerdo con u protocolo le fabricante utia'al u elución tumen gradiente proteínas marcadas yéetel His. Le soluciones proteínas eluidas ku dializaron ka'atéen xu'ullsa'al 1.000 volúmenes 50 mM PBS, pH 7,4, yéetel 0,3 M NaCl ti' 4 ° kuxtal Le purificación bin u analizada tuméen 12 ti chúumuk SDS-PAGE. Le concentración proteína u determinó tumen le método Bradford utilizando Roti-Quant. (Rabausch et ti' le. 2013).
Extracción ultrasónica u proteínas bacterias E. coli
Juntúul proteína cebo le k'ana'an ju'uno'ob (tu este caso, MTV1 u Arabidopsis thaliana) fundida jump'éel etiqueta GST yéetel expresada ti' células BL21 Escherichia coli (e. coli).
- Yuk'ej jump'éel pellet GST-MTV1 yéetel GST (correspondiente ti' jump'éel yéetel bacteriano u 50 ml) yéetel resuspenda jujuntúulal ti' jump'éel tampón extracción te' ke'el síis u 2,5 ml.
- Use jump'éel ultrasonido UP100H (equipado yéetel sonotrodo micropunta MS3 utia'al volúmenes mejen u aprox. 2-5 ml) utia'al u interrumpir le células bacterianas tak ka u lisen, ku indica tumen le reducción le opacidad yéetel le aumento le viscosidad. Le ba'ala' k'a'ana'an bisik u ka'ansaj ti' hielo, yéetel u recomienda sonicar ti' intervalos (je'ebix, sonicación u 10 segundos seguida ti' jump'éel pausa 10 segundos ti' hielo, etc.). K'a'ana'an u yaantal Bik u ma' sonicar yéetel juntúul intensidad ka'anal. Wa u detecta espuma wa u formación jump'éel precipitado sak, le intensidad k'a'ana'an xu'ulsiko'ob u.
- Transfiera le solución bacterias lisadas tubos microcentrífuga 1,5 ml yéetel centrifuga 4 ° C, 16.000 x g ti' 20 min.
Ultrasonidos bin yano'ob sonda bey le UP400St utilizar le principio funcionamiento le cavitación acústica utia'al u lisis eficiente u E. coli.
Análisis expresión yéetel purificación proteínas recombinantes yo'osal sonicación
Le pellet E. coli bin u sonicado yéetel le ultrasonido Hielscher UP100H. Utia'al le propósito, le pellet t'aan ku resuspendió ti' tampón lisis refrigerado (50 mM Tris-HCl pH = 7.5, 100 mM NaCl, 5 mM DTT, 1 mM PMSF) yéetel u síistal tu hielo ichil 10 min. Ts'o'okole', le suspensión t'aan ku sonilizó yéetel 10 ráfagas cortas 10 Guatemala mina'an u yotocho'ob seguidas ti' jump'éel intervalo 30 Guatemala mina'an u yotocho'ob utia'al enfriamiento. Finalmente, le jaantik yáalab celulares ku eliminaron yo'osal ultracentrifugación 4 ° C ichil 15 minutos u 14000 rpm. Utia'al u confirmar le expresión rPR, le sobrenadante ku ejecutó tu gel poliacrilamida le 12 ti chúumuk yéetel u analizó yo'osal SDS-PAGE yéetel Western blotting. Le purificación rPR u beetajo' utilizando yiits Ni2 + - NTA (Invitrogen, EE.UU.) de acuerdo con le náakake' u yaak'il ti' le fabricante. Ti' le p'isibij, ku utilizó le método purificación nativo. Pureza le proteína purificada ku evaluó yo'osal electroforesis ti' le gel poliacrilamida le 12 ti chúumuk yéetel le posterior tinción azul Coomassie. Le concentración ku proteína purificada u p'íis yo'osal le kit ensayo proteínas Micro BCA (PIERCE, EE. (Azarnezhad et ti' le. 2016).
Homogeneizadores ultrasónicos utia'al u lisis E. coli
Hielscher Ultrasonics diseña, fabrica yéetel suministra homogeneizadores ultrasónicos u ka'anal rendimiento utia'al u lisis confiable yéetel eficiente ti' le bacteria E. coli yéetel uláak' tipos células, jach yéetel cultivos celulares.
Le amplia cartera sondas ultrasónicas, bey le kaambalilo'ob sonicación indirecta, ku cha'antik k ofrecer ti' le homogeneizador wa'ak'al ultrasónico beetike' uts utia'al u ka'anatako'ob interrupción yéetel extracción t'aan.
Diseño, Fabricación yéetel Consultoría – Calidad Made in Germany
Le ultrasonidos Hielscher le u k'ajóolta'ano'ob tuméen u asab ka'anatako'ob estándares calidad yéetel diseño. Software na'at, menú intuitivo, configuraciones programables yéetel protocolo automático u datos le chéen algunas le yáantajo'ob ti' le ultrasonidos Hielscher. Le robustez yéetel ch'a'abil operación permiten le integración ma' talamil k ultrasonidos ti' kúuchilo'ob investigación yéetel biotecnología. Páajtal le condiciones talam yéetel le entornos exigentes le uchik manejados tumen le ultrasonidos Hielscher.
Hielscher Ultrasonics le jump'éel empresa certificada ISO yéetel ts'áabal yaabilajech énfasis ti' ultrasonidos ka'anal rendimiento yéetel ma'alo'obtal u yéetel facilidad búukinta'al. Ba'axten supuesto le ultrasonidos Hielscher cumplen yéetel le CE yéetel cumplen yéetel le requisitos UL, CSA yéetel RoHs.
Le uláak' tabla ku ts'aik ti' jump'éel indicación le Buka'aj u ba'al u procesamiento u aproximado k ultrasonicators:
| Volumen lote | Tasa flujo | Dispositivos recomendados |
|---|---|---|
| placas multipocillo leti' microtitulador | N.a. | UIP400MTP |
| CupHorn utia'al u viales wa vaso u precipitados | N.a. | Cuphorn ultrasónico |
| Reactor ultrasónico u microflujo | N.a. | GDmini2 |
| tak 10 viales yéetel 0,5 u 1,5 ml | N.a. | VialTweeter |
| 0.5 u 1.5mL | N.a. | VialTweeter |
| 1 u 500mL | 10 200 mL leti' min | UP100H |
| 10 u 2000mL | 20 400 mL leti' min. | UP200Ht, UP400St |
| 0.1 ti' 20L | 0.2 u 4 L leti' min | UIP2000hdT |
| 10 ti' 100L | 2 10 L leti' min | UIP4000 |
| N.a. | 10 100 L leti' min | UIP16000 |
| N.a. | asab nojoch | Cluster u UIP16000 |
Ti' máax ku yéetel to'on! Leti' k'áatiko'ob k!
Tsoolil bix adicionales utia'al u lisis ultrasónica u E. coli
Proteínas modificadas yéetel alicina ti' E. coli usando jump'éel VialTweeter ultrasónico
Determinación contenido sulfidrilo tumen 5 ti', 5-Dithiobis(2-nitrobenzoic acid) (DTNB) ensayo
Ku utilizó jump'éel pak'al nocturno E. coli MG1655 utia'al u inocular le chúumuk mínimo MOPS (1:100). Le yéetel u cultivó aeróbicamente tak chukpachtik jump'éel A600 0,4. Le yéetel u tu jatsaj ti' óoxp'éel cultivos 15 ml utia'al u Ts'a'akal le estrés. Jump'éel miatsil ma' tratada beelal bey juntúul kaambalil yo'osal negativo. U añadieron 0,79 mM alicina (128 μg ml-1) wa 1 mM diamida juntúul le ka'ap'éel cultivos restantes jujuntúulal. Le cultivos ku incubaron ichil 15 min. 5 ml Amal yéetel u cosecharon tumen centrifugación (8.525 × g, 4 ° C, 10 min). Le células ku p'o'ob ka'atéen yéetel 1 ml PBS (137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4, pH 7,4, almacenado anaeróbicamente bey ma' u búukinta'al) yéetel centrifugados (13.000 × g, 4 ° C, 10 min). Le células ku resuspendieron tu tampón lisis (PBS yéetel 6 mM HCl guanidinio ti', pH 7,4) bey ma' u interrupción u 4 ° C tumen ultrasonido ().VialTweeter ultrasonido, Hielscher GmbH, Alemania) (3 × 1 min). Le jaantik yáalab celulares granularon tumen centrifugación (13.000 × g, 4 ° C, 15 min). Le sobrenadante ku transfirió ti' jump'éel cubeta QS-macro u 3,5 ml (10 mm) yéetel juntúul barra agitación magnética yéetel j-xa'ak'pajij yéetel 1 ml tampón lisis. Extinción le muestras monitoreó 412 nm yéetel juntúul espectrofotómetro Jasco V-650 equipado yéetel le bix celda PSC-718 yéetel temperatura controlada temperatura ambiente. U añadieron 100 μl ti' jump'éel solución 3 mM ditiobis (ácido 2-nitrobenzoico). Le extinción bin monitoreada tak ka ts'o'ok u chukik le saturación. Le cálculo concentración tiol beetajo' u utilizando le coeficiente extinción ε412 = M 13.700-1 Cm-1 TiO-2-nitrobenzoico ácido (TNB). Le concentraciones tioles celulares calculan ju'unilo'ob jump'éel volumen células e. coli 6,7 × 10-15 litro yéetel juntúul densidad t'aan u A600 = 0,5 (equivalente ti' 1 × 108 ml células-1 miatsil). (Müller et el. 2016).
Determinación glutatión in kuxa'an utilizando jump'éel trituradora células ultrasónica
E.coli MG1655 ku cultivó chúumuk chen MOPS ti' jump'éel volumen total ti' 200ml tak chukpachtik jump'éel A600 0,5. Le yéetel u tu jatsaj cultivos 50 ml utia'al u Ts'a'akal le estrés. Ka' 15 min incubación yéetel 0,79 mM alicina, 1 mM ti' diamida wa dimetilsulfóxido (kanik), le células ku cosecharon u 4.000 g ti' 4 ° C ichil 10 min. Le células p'o'ob ka'atéen yéetel tampón KPE bey ma' resuspensión pellets ti' 700μl tampón KPE. Utia'al u desproteinización, ku agregaron 300 l ácido sulfosalicílico ti' le 10 ti chúumuk (p'el leti' v) bey ma' u interrupción le células tumen ultrasonido (3 x 1 min; VialTweeter ultrasonicador). Sobrenadantes bino'ob u recogidos ka' u centrifugación (30 min, 13, 000 g, 4 ° C). Concentraciones ácido sulfosalicílico disminuyeron 1 ti chúumuk yo'osal le adición 3 volúmenes tampón KPE. U tu mentajo'ob mediciones u glutatión total yéetel GSSG bix u describió ka'achij. Le concentraciones glutatión t'aan calculan ju'unilo'ob jump'éel volumen células e. coli 6.7×10-15 litro yéetel juntúul densidad t'aan u A600 0.5 (equivalente u 1×108 ml células-1 miatsil). Ku calcularon le concentraciones u GSH tumen le substracción 2 [GSSG] u glutatión total. (Müller et el. 2016).
Expresión mAspAT ch'íijsajil ti' E. coli utilizando jump'éel homogeneizador ultrasónico
Le chen colonia E. coli BL21 (DE3) albergando le expresión vector ti' 30 mL ampicilina 100μg leti' mL yéetel chúumuk Luria-Bertani (LB) yéetel ku cultivadas 37 ° c tak le densidad óptica (OD600) ts'o'ok u chukik 0.6. Le células bino'ob cosechadas tumen centrifugación in 4.000 x g ichil 10 minutos ka resuspendió ti' 3L ts'o'onota' LB chúumuk u ku taasik ampicilina 100μg leti' mL.
Posteriormente, u indujo le expresión proteínas yéetel 1 mM isopropil β-ᴅ-1-tiogalactopiranósido (IPTG) ti' 20 h u 16 ° C. Le células ku cosecharon tumen centrifugación u 8.000 × g ichil 15 min yéetel u lavaron yéetel tampón ti' (20 mM NaH2PO4, 0,5 M NaCl, pH 7,4). Ku obtuvieron yan 45 g (peso húmedo) u células pak'al 3 L. Ka' centrifugación, le gránulos celulares ku resuspendieron tu 40 ml (utia'al jump'éel pak'al 1 L) u tampón ti' u extracción helada, ka u lisaron tumen ultrasonidos u temperatura helada utilizando trituradora ultrasónica u células Hielscher UP400St. Le lisis t'aan ku centrifugó u 12.000 rpm ichil 15 min utia'al u separar le fracciones solubles (sobrenadante) yéetel precipitadas (pellets). (Jiang et le. 2015).
Hechos u tojol le su'utalil K'ajóolt
E coli
Escherichia coli (e. coli) leti' jump'éel bacteria gram negativa, facultativamente anaerobia, ti' bix u barra ti', coliforme le género Escherichia Kula'an comúnmente ti' le intestino asab t'okik u le áantajilo'ob k'i'ik'el chokoj (le endotherms). Yaan jump'éel nojoch meyaj ku u cepas u e coli (wa subtipos) yéetel kúuchilo'ob ba'alo'ob. Mayoría le cepas e. coli jach inofensiva ti' le seres humanos, e.g. B yéetel k'uj-12 cepas ba'ax ku utilizan comúnmente utia'al u aplicaciones ti' laboratorios investigación. Ba'ale' Jayp'éel cepas ku perjudiciales ka páajtal u causar k'aak'aas.
E coli ku báaxal jump'éel ju'un Páaybe'en ti' le moderna ingeniería biológica yéetel Microbiología industrial tak le bacterias ch'a'abil u manipular. Laboratorio aplicaciones náats'al ku implican tu menudo u búukinta'al e. coli, je'ebix, ch'a'iko'ob ácido desoxirribonucleico recombinante (ADN) wa utia'al kan bey juntúul organismo modelo.
E coli le jump'éel huésped jach versátil utia'al u producción proteínas heterólogas, ka sistemas expresión proteínas ya'ab k'oja'ano'ob táan disponibles utia'al u producción proteínas recombinantes te' e. coli. Utilizando plásmidos u permiten le expresión nivel ka'anal u proteína, genes páajtal introducir u ti' le bacterias, ku Cha' producir tales proteínas ti' yaan xan ya'abach ti' procesos fermentación industrial.
E coli ku utilizan bey fábricas células utia'al u producir insulina. Uláak' aplicaciones incluyen u búukinta'al células modificadas u E. coli yo'osal j yéetel producir vacunas yéetel enzimas inmovilizadas, utia'al producir biocombustibles, bey je'el bix ti' le biorremediación.
Le cepa k'uj-12 le jump'éel bix mutante e. coli u yóok'ol-expresa le enzima fosfatasa alcalina (ALP). Le mutación ku yaantal debido a jump'éel defecto ti' le gen codifica utia'al u enzima constantemente. Wa jump'éel gen u yaantal jump'éel producto mina'an mix jump'éel inhibición ku leti'e', k'ajolo'on bey actividad constitutiva. Beyo' mutante específica ku meyajtiko'ob yo'osal aislar yéetel purificar le enzima fosfatasa alcalina.
Le bacterias E. coli xan le ampliamente utilizadas bey fábricas celulares. Le microbios modificados (je'ebix, bacterias) yéetel le células vegetales ku páajtal utilizar bey le llamadas fábricas celulares. Táan a células modificadas genéticamente ku ts'áiko'ob moléculas, yik'áalil químicos, polímeros, proteínas yéetel uláak' sustancias, ka u utilizan, je'ebix, ti' le industria farmacéutica, alimentaria yéetel química. Con el Fin de liberar le moléculas producidas ti' yaan tu ts'u' tales células bioingeniería, lisis ultrasónica u ti'al jump'éel método común interrumpir celulares pak'ilo'ob ka transferir le sustancias diana ti' le líquido circundante. Lea asab yóok'ol le lisis le células bioingeniería!
Ultrasónico ADN corte
Le muuk' u cizallamiento ultrasónicas le jump'éel método comúnmente utilizado utia'al u liberar moléculas, orgánulos yéetel proteínas yaan tu ts'u' le célula, bey je'el bix ti' jaatik hebras u ADN ti' ts'iit. Le cavitación acústica pa' le pak' celulares yéetel le membranas utia'al u extraer ADN le células yéetel generar fragmentos jump'éel 600 – 800 bp u longitud, ba'ax le beetike' uts utia'al u análisis.
Beetik clic waye' tia'al a wojeltik yóok'ol homogeneizadores ultrasónicos u fragmentación le ADN!
Literatura leti' Referencias
- Azarnezhad A., Sharifi Z., Seyedabadi R., Hosseini A., Johari B., Sobhani Fard M. (2016): Cloning and Expression of Soluble Recombinant HIV-1 CRF35 Protease-HP Thioredoxin Fusion Protein. Avicenna J Med Biotechnol. 8(4), 2016. 175–181.
- Jiang X., Wang J., Chang H.; Zhou Y. (2016): Recombinant expression, purification and crystallographic studies of the mature form of human mitochondrial aspartate aminotransferase. BioScience Trends 2016.
- Müller A., Eller J., Albrecht F., Prochnow P., Kuhlmann K., Bandow J.E., Slusarenko A.J., Leichert L.I.O. (2016): Allicin Induces Thiol Stress in Bacteria through S-Allylmercapto Modification of Protein Cysteines. Journal of Biological Chemistry Vol. 291, No. 22, 2016. 11477–11490.
- Rabausch U., Juergensen J., Ilmberger N., Böhnke S., Fischer S., Schubach B., Schulte M., Streit W. R. (2013): Functional Screening of Metagenome and Genome Libraries for Detection of Novel Flavonoid-Modifying Enzymes. Applied and Environmental Microbiology 79(15), 2013. 4551–4563.
- Sauer M. (2014): MTV1 Pull-down Assay in Arabidopsis. bio-protocol Vol 4, Iss 12, Jun 20, 2014.
- Waldminghaus T., Skarstad K. (2010): ChIP on Chip: surprising results are often artifacts. BMC Genomics 11, 2010. 414.
Hielscher Ultrasonics fabrica homogeneizadores ultrasónicos u ka'anal rendimiento Laboratorio Utia'al Buka'aj industrial.