Sonicación utia'al u lisis: disrupción yéetel extracción t'aan

Le desintegración t'aan wa lisis jach jump'éel nu'ukulil común u diaria wa u yilik muestras ti' le laboratorios biotecnología. U le lisis jach u alterar pak'chaje' ti' le pak'o' t'aan wa u célula completa utia'al u liberar moléculas biológicas. Le homogeneizadores ultrasónicos le ampliamente utilizados ti' le lisis t'aan exitosa. Le noj bejo' ventaja le ultrasonidos sofisticados jach u kaambalil yo'osal preciso yóok'ol le parámetros le tuukula' bey le intensidad yéetel le temperatura, ba'ax ku cha'antik jump'éel interrupción yéetel extracción t'aan O'olkij Ba'ale' ma'alob eficiente.

Lisis t'aan yo'osal ultrasonido

Le ultrasonidos bin yano'ob sonda bey le UP200St ku homogeneizadores jach confiables yéetel ampliamente utilizados utia'al wa u muestras yilik ti' genética, je'ebix, utia'al u transformación mediada tumen agrobacterias asistida tumen sonicación (SAAT).Le lisis yéetel extracción ultrasónica u células u ti'al jump'éel método utilizado jaatik le células abiertas yéetel extraer le contenido utilizando ondas sonoras u ka'anal frecuencia, es decir ultrasonido. Le sonicación jach jump'éel láaka lisis, ba'ax ku meyajtiko'ob ampliamente bey juntúul método establecido yéetel confiable interrupción t'aan yéetel extracción xooko'obo' intracelular. Le lisis ultrasónica u ti'al jump'éel láaka confiable mentik lisados ku ya'alik, je'ebix, plásmidos, ensayos ti' receptores, proteínas, ADN, ARN, etc. Bix u intensidad ultrasónica ku páajtal nivelar ajustando le parámetros le tuukula', le intensidad sonicación óptima u O'olkij u intensa u páajtal ajustar individualmente utia'al Amal sustancia junsáap' utia'al u beetik yéetel le requisitos específicos ti' le ka'anatako'ob. Le je'ela' wook le lisis ku le ku, le aislamiento orgánulos yéetel leti' wa le extracción yéetel purificación proteínas. Le xooko'obo' extraído (= lisado) k'a'ana'an separar u ka táan sujeto u investigaciones wa aplicaciones adicionales, je'ebix, ti' le investigación proteómica.

Desmembradores u laboratorio ultrasónicos UP100H yéetel UP400St utia'al wa u muestras (homogeneización, lisis, extracción) wa u meyaj.

Homogeneizadores ultrasónicos UP100H (100 vatios). ka UP400St (400 vatios). utia'al wa u muestras, bey lisis yilik ka extracción.

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Ti' comparación yéetel uláak' métodos lisis yéetel extracción t'aan, le lisis t'aan ultrasónica yaan ya'abkach ventajas:

  1. Velocidad: Le lisis yéetel extracción ultrasónica ti' células jach jump'éel séeba'an método u páajtal u jaatik le células abiertas wa segundos. Le ba'ala' es jach asab séeba'an u uláak' métodos bey le homogeneización, le congelación-descongelación wa molienda ba'ax menta'abij.
  2. Eficiencia: Le lisis yéetel extracción ultrasónica u células u páajtal utilizar utia'al u k'aax muestras mejen, nukuch wa ya'ab k'oja'ano'ob in la ka', ba'ax ku betik asab eficiente u uláak' métodos u requieren le procesamiento lak u mejen muestras.
  3. Libre u químicos: Le lisis yéetel extracción t'aan ultrasónica le jump'éel ma' invasivo método u ma' k'a'abet u búukinta'al yik'áalil químicos wa enzimas agresivos. Le je'ela' ku betik beetik beetike' uts utia'al aplicaciones tu'ux ku k'a'ana'an mantener u integridad u contenido le celda. Je'el u páajtal u Jech le contaminación ma' deseada ti' le muestras.
  4. Ka'anal rendimiento: Le lisis yéetel extracción t'aan ultrasónica je'el u páajtal u extraer jump'éel ka'anal rendimiento contenido t'aan, incluyendo ADN, ARN yéetel proteínas. Le ba'ala' k'a'ana'an u ti' le ondas sonoras u ka'anal frecuencia rompen le pak' celulares ka liberan u contenido ti' le solución circundante.
  5. Kaambalil yo'osal u temperatura: Le sofisticados ultrasonidos permiten jump'éel kaambalil yo'osal preciso u temperatura le muestra. Le sonicadores digitales ti' Hielscher u equipados yéetel juntúul sensor temperatura conectable yéetel juntúul software monitoreo temperatura.
  6. Reproducible: Le tsoolil bix utia'al u lisis t'aan ultrasónica ku páajtal reproducir uchik yéetel páajtal combinar yéetel jejeláas volúmenes muestra asab nukuch wa asab mejen yo'osal jump'éel simple escalado lineal.
  7. Versátil: Le lisis yéetel extracción ultrasónica u células u páajtal utilizar utia'al u extraer amplia gama tipos células, incluidas bacterias, levaduras, hongos, células paak'alo'ob yéetel mamíferos. Bey xan u páajtal utilizar utia'al extraer jejeláas tipos moléculas, incluyendo proteínas, ADN, ARN yéetel lípidos.
  8. Simultánea preparación u numerosas muestras: Hielscher Ultrasonics k'u'ubul ya'abkach soluciones utia'al u procesar cómodamente numerosas muestras ti' le meyajo'ob condiciones tuukula'. Le je'ela' ku beetik u le paso wa u muestra lisis yéetel extracción wa u bixake' ma'alob eficiente yéetel ahorre k'iin.
  9. Chéen ch'a'abil u biilankiltej: Le nu'ukulil le lisis yéetel extracción células ultrasónicas ch'a'abil u biilankiltej ka k'a'abet jump'éel xook chen. Le nu'ukulil xan jach económico, ts'o'ok u jach jump'éel inversión chen xma' necesidad u recompra u eliminaciones. Le je'ela' ku betik atractivo ti' jump'éel amplia gama investigadores yéetel laboratorios.

Tu general le lisis yéetel extracción t'aan ultrasónica jach jump'éel método séeba'an, eficiente, controlable yéetel precisión yéetel versátil utia'al u extraer contenidos celulares. U ventajas yóok'ol le métodos alternativos ku suutikuba'ob jump'éel opción atractiva utia'al u amplia gama aplicaciones industriales yéetel u investigación.

Principio funcionamiento le lisis t'aan ultrasónica

Le lisis yéetel extracción ultrasónica ti' células meyajtiko'ob ondas sonoras u ka'anal frecuencia utia'al u interrumpir le células yéetel extraer u contenido. Le ondas sonoras crean cambios presión ti' le líquido circundante, causando formen mejen burbujas ka colapsen ti' jump'éel tuukula' k'ajóolta'an je'el bix cavitación. Táan a burbujas generan muuk' mecánicas localizadas ma'alob intensas u páajtal jaatik le células abiertas yéetel liberar u contenido ti' le solución circundante.

Le lisis t'aan yéetel juntúul ultrasonido comúnmente implica le je'ela' wook:

  • Le muestra ku coloca ti' jump'éel tubo wa un'ts'íibil yéetel juntúul tampón líquido.
  • Ku inserta jump'éel sonda ultrasónica ti' le muestra yéetel u aplican ondas sonoras u ka'anal frecuencia yéetel aprox. 20-30 kHz.
  • Le ondas ultrasonido causan oscilación yéetel cavitación ti' le líquido circundante, generando muuk' localizadas u rompen le células abiertas yéetel liberan u contenido.
  • Le muestra ku centrifuga wa filtra utia'al tselik je'el residuo t'aan, yéetel le contenido extraído Mool utia'al u análisis posterior.
Le extracción ultrasónica u meyaj interrumpiendo le ka'ansaj celulares ka promoviendo le transferencia juuch'

Le poderosas ondas ultrasonido interrumpen le matriz t'aan u le ka'ansaj biológicas ka liberan le compuestos bioactivos. Le transferencia juuch' ichil le xooko'obo' vegetal yéetel le disolvente (je'ebix, tampón) ku intensifica. (gráfico: ©Vilkhu et ti' le., 2006).

Le videoclip ye'esik le homogeneizador ultrasónico Hielscher UP100H, jump'éel ultrasonido ampliamente utilizado utia'al wa u muestras yilik ti' laboratorios.

Homogeneizador ultrasónico UP100H

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Desventajas le métodos náats'al u lisis

Ichil u meyaj ti' laboratorios, jach páajtal u ts'o'ok yanak experimentado u molestia le lisis t'aan utilizando tsoolil bix tu'ux u lisis kanáanil wa química.

  • Lisis kanáanil: Le métodos lisis kanáanil, bey le molienda yéetel mortero jump'éel homogeneización yéetel juntúul prensa francesa, jump'éel molino perlas wa juntúul t.u.m rotor-estator tu menudo carecen u opciones u kanik yéetel ajuste precice. Lela' u k'áat u ya'al ti' u búukinta'al molienda yéetel molienda je'el generar jáan ooxoj yéetel muuk' cizallamiento ku páajtal dañar le muestra yéetel desnaturalizar le proteínas. Xan páajtal bisik ya'ab k'iin ka requerir yaan xan ya'abach xooko'obo' partida.
  • Lisis química: Le métodos lisis química, bey le lisis yéetel detergente, páajtal dañar u muestra u alterar le bicapa lipídica yéetel desnaturalizar le proteínas. Xan páajtal requerir ya'ab k'oja'ano'ob wook ka páajtal p'atik contaminantes residuales ku interfieren yéetel le aplicaciones yéetel. Kaxtik le dosis óptima ti' detergente jach jump'éel desafío adicional.
  • Ciclos congelación-descongelación: Le ciclos congelación-descongelación táan u béeytal u causar u ruptura le membranas celulares, ba'ale' le ciclos repetidos xan páajtal causar desnaturalización yéetel degradación proteínas. Le método xan u requerir ya'ab k'oja'ano'ob ciclos, ba'ax u bisik ya'ab k'iin ka, tu menudo resulta ti' rendimientos asab bajos.
  • Lisis enzimática: Le métodos lisis enzimática táan u béeytal u específicos utia'al u ciertos tipos células yéetel requieren ya'ab k'oja'ano'ob wook, ba'ax ku beetik lentos. Xan generan residuos yéetel requieren jump'éel optimización cuidadosa utia'al Jech degradación le muestra. Le kits lisis enzimática suelen u beel caros. Wa u procedimiento ma'alo'ob u lisis enzimática ma' u ts'aik ya'ala'al máaxo'ob máano'ob kuxlaken, ku u aplicar le sonicación bey método sinérgico utia'al u intensificar le interrupción t'aan.

U jela'anil in ti' le métodos convencionales ti' lisis t'aan kanáanil yéetel química, le sonicación jach jump'éel nu'ukula' jach eficiente ka confiable utia'al u t'aan desintegración ba'ax ku cha'antik jump'éel kanik k'iini' yóok'ol le parámetros sonicación. Le ba'ala' garantiza jump'éel ka'anal selectividad ti' le liberación materiales yéetel u pureza le producto. [cf. Balasundaram et ti' le., 2009]
Le adecuado utia'al tuláakal le tipos células yéetel uchik aplicable chan yéetel nuxi' escala – Mantats' yáanal condiciones controladas. Le ultrasonidos ku fáciles u cho'oik. Juntúul homogeneizador ultrasónico Mantats' yile' yéetel le función limpieza in situ (CIP) yéetel esterilización in situ (SIP). Le sonotrodo consiste ti' jump'éel cuerno titanio masivo tu u páajtal cho'oik wa enjuagar ichil ja' wa solvente (dependiendo de le ka'a meyaj). Le mantenimiento le ultrasonidos k'a'ana'an u robustez óol descuidable.

 

Le tutorial ku tsoolik ba'ax jejelas sonicador asab ma'alo'ob utia'al u tareas wa u muestras, bey lisis, interrupción t'aan, aislamiento proteínas, fragmentación ADN yéetel ARN ti' laboratorios, análisis investigación yilik. Elija le bin yano'ob sonicador beetike' uts utia'al u ka'anatako'ob, volumen muestra, meyaj ku muestra yéetel rendimiento. Hielscher Ultrasonics ti' le homogeneizador ultrasónico beetike' uts ti' tech!

Bix kaxtik le sonicador perfecto ti' le disrupción t'aan yéetel le extracción proteínas ti' le ciencia yéetel le análisis

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Lisis ultrasónica yéetel interrupción t'aan

Ba'axten lo general, u yaan u lisis le muestras ti' le laboratorio ichil kex teen jo'olajun segundos yéetel 2 minutos. Bix u intensidad táankab ultrasonidos ch'a'abil jach u ajustar tumen juntúul k'iin sonicación amplitud, bey ti' le elegir le nu'ukulil le yáax, le páajtal alterar le membranas celulares táaj O'olkij wa jach abruptamente dependiendo de le ba'ax t'aan yéetel le propósito lisis () je'ebix, le extracción ADN k'a'abet asab O'olkij sonicación, extracción proteína completa ti' bacterias k'a'abet jump'éel Ts'a'akal asab ku ts'tantik u ultrasonido). Le temperatura ichil le tuukula' je'el u páajtal u monitoreada tumen juntúul sensor u temperatura integrado yéetel je'el u páajtal u uchik controlada tumen refrigeración (hielo wichkíil flujo ti' le células wa yéetel chaquetas enfriamiento) wa tumen sonicación ti' modo pulsado. Ichil u sonicación le modalidad impulso, sonicación kóom explosión ciclos ku bisik 1 u 15 segundos permiten utia'al u disipación ooxoj ka kaambal ti' le chowaktako'ob periodos intermitentes.
Tuláakal le procesos basados ti' le ecografía ku linealmente escalable yéetel jaatsatako'ob reproducible.

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Le VialTweeter jach jump'éel ultraonicador MultiSample ba'ax ku cha'antik jump'éel homogeneización fiable ti' le muestra ti' condiciones estériles.

Le VialTweeter Leti' jump'éel homogeneizador ultrasónico utia'al u preparación estéril simultánea, xan yéetel rápida numerosas muestras.

Homogeneizadores ultrasónicos utia'al lisis t'aan yéetel extracción

Ya'ab tipos dispositivos ultrasónicos permiten igualar u wa u muestras yilik ka garantizar le facilidad búukinta'al yéetel le comodidad operación. Le ultrasonidos bin yano'ob sonda le le dispositivos asab náats'al ti' le laboratorio. Ku asab adecuados utia'al wa u muestras mejen yéetel k'as poloktak yéetel volúmenes 0,1 ml tak 1000 ml yilik. Jejeláas tamaños potencia yéetel sonotrodos permiten u adaptar u ultrasonido le volumen muestra yéetel le un'ukul tia'al ya'ala'al máaxo'ob máano'ob sonicación asab efectivos ka eficientes. Le dispositivo sonda ultrasónica jach le utsil opción ken u k'a'abéet mentik muestras individuales.

Wa yaan mentik asab muestras je'ebix, 8-10 viales u solución t'aan, jump'éel sonicación indirecta intensa yéetel sistemas ultrasónicos bey le VialTweeter wa jump'éel cuphorn ultrasónico le le método homogeneización asab yáax ti' jump'éel lisis eficiente. Ya'ab viales sonican le k'iino' je'el xano' k'iin, ti' le ti' jump'éelili' kuchil-intensidad. Le ba'ala' ma' chéen ahorra k'iin, sino u xan garantiza le k'iino' je'el xano' Ts'a'akal tuláakal le muestras, ba'ax ku beetik ya'ala'al máaxo'ob máano'ob ichil le muestras k'áati' confiables ka comparables. Ku ts'o'okole', ichil le sonicación indirecta u evita le contaminación cruzada tumen inmersión sonotrodo ultrasónico (xan k'ajóolta'an bix sonda ultrasónica, bocina, xnuk wa yaal). Dado u individualmente u utilizan viales Buka'aj muestra compatibles, u omiten le limpieza yéetel le asab muestras requieren ya'ab k'iin debido a u decantación le recipientes. Utia'al u sonicación xan ti' placas multipocillos wa microtitulación, Hielscher k'u'ubul le UIP400MTP.
Utia'al u mayores volúmenes, je'ebix, utia'al u producción comercial u extractos celulares, sistemas ultrasónicos continuo yéetel juntúul reactor celda flujo ku asab convenientes. Le flujo continuo yéetel xan u le xooko'obo' procesado asegura jump'éel sonicación páajtal. Tuláakal le parámetros le tuukula' desintegración ultrasónica táan u béeytal u optimizados ka ajustados le requerimientos le ka'anatako'ob yéetel le xooko'obo' específico ti' le célula.
 
 
Procedimiento ejemplar utia'al u ultrasonidos lisis le células bacterianas:

  • Wa u suspensión t'aan yilik: gránulos le célula k'a'abéet u jaatsatako'ob suspendidas ti' jump'éel solución tampón tumen homogeneización (elija u solución compatible yéetel le uláak' análisis, método u cromatografía je'ebix específico buffer). Añadir lisozimas yéetel leti' jump'éel uláak' aditivos, wa k'a'abéet (k'a'ana'an u xan compatibles yéetel separación leti' medios purificación). Mezcla leti' homogeneizar le solución suavemente yáanal O'olkij sonicación tak logra jump'éel suspensión completa.
  • Lisis ultrasonidos: colocar le muestra ti' jump'éel wichkíil hielo. Utia'al u interrupción le célula, someter u ultrasonidos le suspensión ti' 60-90 segundos estalla (usando modo pulso u ultrasonicador).
  • Separación: Centrifugar le lisado (je'ebix 10 min in 10.000 x g; ti' 4degC). Separar u sobrenadante u precipitado u células cuidadosamente. Le sobrenadante jach le lisado nu'ukul-t'aan total. Ka' ts'o'ok u filtración le sobrenadante, tech kéen p'áatak jump'éel líquido clarificado ti' le proteína soluble ti' le célula.

 

Le video ye'esik le yaan wa u muestras ultrasónicas UIP400MTP, ku Cha' le confiable wa u yilik muestras je'el placa estándar ya'ab k'oja'ano'ob pocillos utilizando ultrasonido ka'anal intensidad. Le aplicaciones típicas ti' le UIP400MTP incluyen lisis t'aan, ADN, ARN yéetel cizallamiento cromatina, bey extracción proteínas.

Ultrasonicador UIP400MTP utia'al u sonicación placas ya'ab k'oja'ano'ob pozos

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Le aplicaciones jach náats'al ti' ultrasonicators ti' biología yéetel biotecnología ku:

  • Wa u extracto t'aan yilik
  • Alteración u levaduras, bacterias, células vegetales, tejido t'aan blando wa Chich, xooko'obo' nucleico
  • Extracción proteínas
  • Preparación ka aislamiento enzimas
  • Producción u antígenos
  • Extracción ADN yéetel / wa fragmentación dirigida
  • wa u liposomas yilik
Le disrupción t'aan, le lisis yéetel le extracción yéetel ultrasonido jach jump'éel método eficiente u wa u muestras ti' le laboratorios wa u muestras ti' le laboratorios.

Le interrupción t'aan yéetel ultrasonido bin yano'ob sonda jach jump'éel método eficiente ti' wa u muestras wa u muestras.

Le uláak' tabla k'u'ubul ti' jump'éel visión tuláakal u k ultrasonidos yo'osal le interrupción yéetel extracción t'aan. Beetik clic ti' le bin yano'ob dispositivo tia'al a wojeltik yóok'ol Amal homogeneizador ultrasónico. K máaxo'ob técnico ma'alob entrenado yéetel yaan tak úuch yéetel encantado u wáantik u elegir le ultrasonido asab yáax utia'al u muestras!
 

Volumen loteTasa flujoDispositivos recomendados
tak 10 viales wa tubosN.a.VialTweeter
placas multipocillos leti' microtituladoresN.a.UIP400MTP
Ya'ab k'oja'ano'ob tubos leti' recipientesN.a.Cuphorn
1 u 500mL10 200 mL leti' minUP100H
10 u 1000 ml20 ti' 200 ml leti' minUP200Ht, UP200St
10 u 2000mL20 400 mL leti' min.UP400St

Máax ku leti' solicitar a wojeltik

T'aan yéetel to'on yóok'ol u tuukula' lisis yéetel extracción t'aan. Recomendaremos ti' le ultrasonido yéetel le parámetros ku procesamiento asab adecuados utia'al u disrupción t'aan.





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Le video ye'esik le homogeneizador ultrasónico UP100H 100 vatios utia'al u extracción yik'áalil botánicos.

Extracción ultrasónica u compuestos bioactivos

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Le ya'ab k'oja'ano'ob aplicaciones le ultrasonido ramifica tak náachil ti' meatsil u biotecnología, bioingeniería, microbiología, biología molecular, bioquímica, Inmunología, bacteriología, virología, proteómica, genética, fisiología, biología t'aan, hematología, yéetel le botánica.

Lisis: Ruptura ka'ansaj celulares

Le células táan protegidas tumen juntúul membrana plasmática semipermeable ku consiste ti' jump'éel bicapa Fosfo-lípidos (xan bicapa u proteínas-lípidos; formada tumen lípidos hidrofóbicos ka joop hidrofílico moléculas yéetel le moléculas proteínas integrado) yéetel crea jump'éel barrera ichil le interior ti' le célula (citoplasma) yéetel le jeets' extracelular. Células procariotas yéetel le células vegetales u rodeadas tumen juntúul pak'o' t'aan. Debido a ya'ab k'oja'ano'ob capas xtóop' pak'o' t'aan u celulosa ti', le células vegetales ku asab talam u lisar le células animales. Yaan tu ts'u' le célula bey orgánulos, núcleo, mitocondria, jach u estabilizado tumen le citoesqueleto.
Tuméen lisis ti' le células, ku ts'aabal extraer yéetel separar le organelos, proteínas, ADN, ARNm jump'éel uláak' biomoléculas.

Métodos convencionales u lisis t'aan yéetel u inconvenientes

Yaan ya'ab métodos utia'al u lisado células, ba'ax u páajtal ja'atsal ti' métodos mecánicos yéetel químicos, u incluyen u búukinta'al detergentes wa solventes, le ka'anatako'ob ka'anal presión, wa u búukinta'al jump'éel molino u grano wa ti' jump'éel prensa francesa. Le desventaja asab problemática ti' le métodos jach talam kanik ka ajuste le parámetros u tal modo impacto.
Le uláak' tabla ye'esik le k'ajle' desventajas le métodos náats'al ti' lisis:

Le tabla enumera le métodos convencionales ti' disrupción t'aan yéetel lisis ka ye'esik le k'ajle' desventajas Amal método.

Tabla: Le métodos convencionales ti' lisis t'aan yaan nukuch desventajas

 

Procedimiento lisis

Lisis jach jump'éel tuukula' sensible. Ichil le lisis u protección u membrana u célula le destruida, ba'ale' le inactivación, desnaturalización yéetel degradación le proteínas extraídas tumen juntúul jeets' unphysiological (desviación le je'o' pH) k'a'abéet Jech u. Tune', tu general lisis ku bisik ka'ansaj ti' jump'éel solución tampón. Asab toopo'ob interrupción t'aan u incontrolada u ts'áaik kúuchil ti' jump'éel liberación ma' focalizada u xooko'obo' intracelular tuláakal o leti' ka u desnaturalización le producto objetivo.

Literatura leti' referencias

K encantados u discutir u tuukula'.

Búukint k ti' máax ku.