Aplicaciones ultrasónicas ti' le virus u k'áak' ti' le maaxo'
Le ultrasonicación jach jump'éel método procesamiento k'a'abéet utia'al u aislamiento u virus u k'áak' ti' le maaxo' (MPXV) ichil muestras analíticas, utia'al u fragmentación u ADN le virus, bey je'el bix ti' le fabricación vacunas xu'ullsa'al le viruela le maaxo'. Utia'al u wa u muestras yilik bey ma' le diagnóstico yéetel análisis (PCR, ELISA, etcétera), ku meyajtiko'ob le ultrasonicación utia'al u lisar le células con el fin de liberar u virus u k'áak' ti' le maaxo' yaan tu ts'u' le célula yo'osal u chíikpajal ba'ax fragmentar le ADN. Ti' le producción vacunas, le aplicaciones ku bino'ob tak wa u partículas virus yilik leti' ADN, le encapsulación ti' portadores fármacos yéetel u formulación le inóculos.
Tu continuación u kaxtik a'alajil t'aan detallada yo'osal wa u muestras ultrasónicas u virus u k'áak' le maaxo' yilik, bey je'el bix yóok'ol le producción vacunas MPXV asistidas tumen ultrasonidos.
Ku encontrarás ti' le linki abas kaambal:
- Lisis ultrasónica utia'al u extracción u virus u k'áak' ti' le maaxo'
- Fragmentación ultrasónica u ADN u virus u k'áak' ti' le maaxo'
- Aplicaciones ultrasónicas ti' le producción vacunas MPXV
Le t.u.m 2 ultrasonidos 1 kW utia'al u funcionamiento flujo continuo u instalado ti' jump'éel instalación producción vacunas.
Lisis ultrasónica yéetel fragmentación le ADN bey ma' u reacción ti' tsolokbal ti' le polimerasa (PCR).
Jump'éel infección tumen le virus u k'áak' ti' le maaxo' ku detecta yo'osal pruebas amplificación ácidos nucleicos (NAAT), yo'osal u reacción ti' tsolokbal ti' le polimerasa (PCR) convencional wa tu k'iinil xíimbal tumen, utia'al u detección secuencias únicas u ADN viral. Le muestra (je'ebix, u intercambio nasofaríngeo wa biopsias yoot'el) ku taasik le virus ti' células.
Utia'al le análisis, le virus k'a'ana'an u liberado ti' le células yéetel le ADN viral k'a'ana'an u fragmentado utia'al u PCR.
Lisis ultrasónica:
Le disrupción leti' lisis t'aan ultrasónica u ti'al jump'éel método fiable yéetel xoknáalo'obo' aislar virus muestras celulares yéetel, Ba'axten seen jump'éel láaka preferible ti' le agentes químicos, bey le lisozima, le proteinasa k'uj yéetel uláak' detergentes ku utilizan alternativamente utia'al u kaxta'al u yúuchul le lisis t'aan yéetel le liberación ADN.
Ba'ale' u búukinta'al le reactivos químicos k'a'abet jump'éel wa u le muestra k'a'abet ya'ab k'iin ti' ya'ab wook bey ma' análisis PCR utia'al Jech inhibición le reacción PCR wa u meyaj. Dado u inhibidores le PCR afectan u eficacia le amplificación, mejen variaciones ti' le cantidad inhibidores ma' u eliminan páajtal ts'áaj kúuchil nukuch variaciones ti' le amplificación u producto le PCR (Diaco, 1995).
Ventaja le ultrasonicación utia'al u lisis jach u jach deseable le disrupción completa ti' le ka'ansaj celulares yéetel le liberación ku ADN ma' necesidad reactivos lisis ti' jump'éel wa u yilik muestras k'a'abet ya'ab k'iin. (cf. Fykse et ti' le., 2003).
Fragmentación ultrasónica ti' le ADN:
Le fragmentación ultrasónica ti' le ADN jach sencilla yéetel fiable, ts'o'ok u yaantal fragmentos u ADN ajustables ti' longitud (pares bases, bp). Yo'osal u búukinta'al ultrasonidos, le ADN ku páajtal fragmentar u kin tuukul efectiva ti' le longitud ADN objetivo. U kaambalil yo'osal preciso ti' le parámetros ultrasónicos yéetel le sofisticadas opciones refrigeración evitan u degradación le ADN.
A wojeltik yóok'ol le fragmentación ultrasónica ti' le ADN.
Aplicaciones ultrasónicas ti' le vacuna xu'ullsa'al le virus u k'áak' ti' le maaxo'
Le vacunas utilizadas xu'ullsa'al le virus u k'áak' le maaxo' le bejla'e' vacunas virus vivos. Le vacunas recién desarrolladas k'a'ana'antal u utilizar uláak' plataformas bey le basadas ti' le ADN. Bejla'e' ku taasik jump'éel Vaccinia Ankara viurs juubulo'ob, jump'éel atenuado ortopoxvirus u ma' u replica. Xan ku taasik Tris (tris-aminometano) yéetel cloruro sodio. Le vacuna xan u xu'ulsa'al mejen yaan xan ya'abach ADN yéetel proteínas le células fibroblastos ti' le embrión káax, ka u utilizan utia'al u cultivar u virus le vacuna, le benzonasa yéetel compuestos antibióticos bey le gentamicina yéetel le ciprofloxacina.
Le homogeneización ultrasónica ku meyajtiko'ob ti' le producción vacunas virus vivos atenuados, vacunas ADN ti', cócteles u ADN multivalentes, vacunas ARNm, vacunas proteínas recombinantes, vacunas partículas similares ti' virus, etcétera.
- Dispersión partículas yéetel agentes virales
- Emulsificación
- Inactivación virus
- formulación portadores fármacos (NLC, SLN).
- encapsulación
- Disolución agentes
- Wa u coadyuvantes yilik
- Desgasificación leti' Desaireación
Protocolo utia'al u aislamiento ultrasónico u virus u k'áak' ti' le maaxo'
Le nu'ukulil investigación Stittelaar (2005) utilizó le lisis ultrasónica ti' liberar u virus u k'áak' ti' le maaxo' u pak'al células huésped ti' tuméen, bey je'el bix u células obtenidas yo'osal intercambios kaal primates infectados.
Wa u vacuna xu'ullsa'al le k'áak' ti' le maaxo' yilik:
Le virus u k'áak' ti' le maaxo' ku cultivaron células fibroblastos embrión libres patógenos específicos káax. Ka' ts'o'ok u incubación ti' 1 u 2 k'iino'ob, le suspensión células virales ku cosechó yo'osal jump'éel ronda congelación-descongelación ka ts'o'okole' ku concentró tumen centrifugación. Le pellet ku resuspendió yéetel u sometió u ya'abkach rondas homogeneización ultrasónica.
Aislamiento u virus u k'áak' le maaxo' ti' macacos vacunados:
Le muestras ku congelaron yéetel descongelaron Óoxten yéetel ku sonicaron ti' jump'éel CupHorn ultrasónico. Tu utilizaron ka'atúul diluciones (1:10 yéetel 1:100) chúumuk transporte suplementado yéetel suero fetal bovino ti' le 1 ti chúumuk utia'al inocular monocapas células Vero ti' placas 6 pocillos. Ka' 1 h incubación 37 ° C, u retiraron le inóculos yéetel u reemplazaron yéetel ka'a yéetel suplementado yéetel suero fetal bovino ti' le 1 ti chúumuk. Le monocapas ku cultivaron ichil 5 k'iino'ob u 37 ° C yéetel u tiñeron yéetel juntúul solución violeta cristalino.
(cf. Stittelaar et ti' le., 2005).
Ultrasonidos yo'osal le análisis virus yéetel le producción vacunas
Le amplia cartera yik'áalil Hielscher Ultrasonics k'u'ubul le beetike' uts utia'al laboratorios investigación yéetel análisis ultrasonido, bey je'el bix ti' le fabricación industrial u vacunas.
Hielscher Ultrasonics u especializada ti' le diseño, le fabricación yéetel le distribución ultrasonidos yéetel sonobiorreactores ka'anal rendimiento uti'al u ti' laboratorios investigación yéetel análisis, bey je'el bix utia'al u implementación ti' le producción industrial u vacunas (p'el. ej. Vacunas, Apis).
Le sonicación ku páajtal aplicar u recipientes abiertos, reactores cerrados agitación continua yéetel reactores flujo continuo. Tuláakal le tu'ux le kaambalilo'ob ultrasónicos, ku yokol ti' máax ku le chúumuk líquido, u hechas u acero inoxidable, titanio wa vidrio. Le páajtal a esterilizables ti' autoclave yéetel le accesorios sanitarios garantizan producción t'okik condiciones u grado farmacéutico.
Registro automático u datos: Le software na'at registra automáticamente le parámetros le tuukula' sonicación ti' le tarjeta memoria SD integrada. U kaambalil yo'osal preciso ti' tuláakal le parámetros le tuukula' garantiza le reproducibilidad, Estandarización le producciónka facilita u cumplimiento le normas ti' seguridad le yik'áalil farmacéuticos.
Hielscher Ultrasonics’ ultrasonic processors are highly reliable and can be precisely controlled. All industrial ultrasonicators can adjusted to deliver the full range from lower to very high amplitudes. The robustness of Hielscher’s ultrasonic systems allows for 24/7 operation under heavy duty and in demanding environments.
Le uláak' tabla ku ts'aik ti' jump'éel indicación le Buka'aj u ba'al u procesamiento aproximada u k ultrasonidos:
| Volumen lote | Gasto | Dispositivos recomendados |
|---|---|---|
| Placas multipocillo leti' u microtitulación | N/A | UIP400MTP |
| U 1 u 500 ml | U 10 ti' 200 ml leti' min | UP100H |
| U 10 ti' 2000 ml | Ti' 20 u 400 ml leti' min | UP200Ht, UP400St |
| 0. 1 u 20L | 0. 2 u 4L leti' min | UIP2000hdT |
| U 10 u 100L | U 2 u 10 l leti' min | UIP4000hdT |
| N/A | U 10 ti' 100 L leti' min | UIP16000 |
| N/A | Mayor | Racimo u UIP16000 |
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Cizallamiento ultrasónico ti' le ADN
Bibliografía leti' Referencias
- Stittelaar, Koert; Amerongen, Geert; Kondova, Ivanela; Kuiken, Thijs; Lavieren, Rob; Pistoor, Frank; Niesters, Hubert; Doornum, Gerard; Van der Zeijst, Bernard; Mateo, Luis; Chaplin, Paul; Osterhaus, Albert (2005): Modified Vaccinia Virus Ankara Protects Macaques against Respiratory Challenge with Monkeypox Virus. Journal of Virology 79, 2005. 7845-51.
- Shah Purvin, Parameswara Rao Vuddanda, Sanjay Kumar Singh, Achint Jain, and Sanjay Singh (2014): Pharmacokinetic and Tissue Distribution Study of Solid Lipid Nanoparticles of Zidov in Rats. Journal of Nanotechnology, Volume 2014.
- J. Robin Harris, Andrei Soliakova, Richard J. Lewis, Frank Depoix, Allan Watkinson, Jeremy H. Lakeya (2012): Alhydrogel® adjuvant, ultrasonic dispersion and protein binding: a TEM and analytical study. Micron Volume 43, Issues 2–3, February 2012, 192-200.
- Doron Melamed, Gabriel Leitner, E. Dan Heller (1991): A Vaccine against Avian Colibacillosis Based on Ultrasonic Inactivation of Escherichia coli. Avian Diseases Vol. 35, No. 1 (Jan. – Mar., 1991), 17-22.
- Huang C-F, Wu T-C, Wu C-C, Lee C-C, Lo W-T, Hwang K-S, Hsu M-L, Peng H-J. (2011): Sublingual vaccination with sonicated Salmonella proteins and mucosal adjuvant induces mucosal and systemic immunity and protects mice from lethal enteritis. APMIS 119, 2011. 468–78.
Datos u tojol le su'utalil K'ajóolt
Virus u k'áak' ti' le maaxo'
K'áak' ti' le maaxo' (MPV, MPXV wa hMPXV) leti' jump'éel especie virus ADN bicatenario ku causa jump'éel k'oja'anil zoonótica viral. Le k'oja'anil u leti'e', k'ajolo'on bey infección tumen viruela le maaxo' yéetel u ocurrir ti' humanos yéetel ba'alche'ob. Pertenece ti' le género Orthopoxvirus u láak'o'ob Poxviridae. Le virus u k'áak' ti' le maaxo' jach juntúul le ortopoxvirus yóolo'ob yéetel le virus le k'áak' ti'ob (VARV), le k'áak' ti'ob bovina (CPX) yéetel le vaccinia (VACV). Le orthopoxvirus ku caracterizan tumen nukuch partículas virus ti' bix u ladrillo, ku ya'alik juntúul genoma ADN bicatenario u yan 200.000 pb.
Ensayo ELISA
ELISA le le siglas Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay (ensayo u inmunoabsorción ligado enzimas) yéetel le jump'éel marcado inmunoensayo u considera le estándar táak'iin le inmunoensayos. ELISA jach jump'éel prueba inmunológica, valorada tumen u ka'anal sensibilidad diagnóstica, ba'ax ku meyajtiko'ob yo'osal detectar yéetel cuantificar moléculas, incluidos anticuerpos, antígenos, proteínas, glicoproteínas yéetel hormonas. Le principio u ELISA u basa le interacción antígeno-anticuerpo. Yo'osal le interacción antígeno-anticuerpo, le anticuerpos específicos ku unen ti' u antígeno diana. Chéen ka yaantal le interacción, le sustrato u unir u ti' le enzima yéetel u páajtal uts' posterior tzeltalo'obo' le sustrato, ba'ax u k'áat u ya'al ku obtiene jump'éel resultado positivo.
Hielscher Ultrasonics fabrica homogeneizadores ultrasónicos u ka'anal rendimiento ichil laboratorio Utia'al Buka'aj industrial.