Protocolo ku meyajtiko'ob sonicadores multimuestra ti' Hielscher ti' análisis biopelículas yéetel proteómicas
U búukinta'al sonicadores multimuestra, bey le sonicador multitubo VialTweeter yéetel le sonicador microplacas UIP400MTP, agiliza flujos meyaj laboratorio utia'al aplicaciones ka'anal rendimiento. Je'el dispositivos permiten jump'éel procesamiento ultrasónico preciso yéetel xan ti' ya'ab k'oja'ano'ob muestras, minimizando le variabilidad yéetel ku ma'alobkiinsik le reproducibilidad. Lela' particularmente ventajoso ti' experimentos u requieren lisis constante ti' le muestra, desprendimiento ti' biopelícula, extracción ti' proteínas wa digestión proteolítica, tu'ux le métodos manuales wa ti' jump'éel tin juunal muestra le bey eficientes yéetel propensos ti' le inconsistencia.
Optimice le flujos meyaj yéetel sonicadores multimuestra
Le UIP400MTP je'ebix, ku cha'ik u Ts'a'akal ultrasónico simultáneo u pocillos microplacas, ku garantiza jump'éel desprendimiento xan ti' le biopelículas wa u le xooko'obo' t'aan. Mientras seen le VialTweeter ku jump'éel lisis yéetel u homogeneización precisas u ya'ab k'oja'ano'ob muestras tubos ma' contaminación cruzada. Le sonicadores reducen significativamente le k'iino'oba' procesamiento, mejoran le reproducibilidad experimental yéetel mantienen ka'anal integridad le muestra, ba'ax ku p'áatal ti' nu'ukul k'a'ana'antak ti' le investigación ti' microbiología, proteómica yéetel biología molecular.
Tu continuación u ye'esik jump'éel detallado protocolo u ejemplifica u búukinta'al le modelos sonicador multimuestra Hielscher, le sonicador multitubo VialTweeter yéetel le UIP400MTP sonicador ti' microplacas, ti' jump'éel xooko' ku involucró le formación biopelículas E. coli yéetel le posterior análisis proteómico.
Sonicator placa multipocillo u UIP400MTP – Fiable wa u yilik muestras yéetel jump'éel ka'anal rendimiento
Protocolo: Formación, desprendimiento yéetel análisis proteómico u biopelículas yo'osal sonicadores multimuestra u Hielscher
1 wa u yáanta'al le yéetel bacteriano
- Pak'al bacterias E. coli (cepa W3110) tu 30 ° C, jump'éel temperatura favorable utia'al u formación biopelículas u E. coli, tu k'as k'aab triptona (TB) ku contenga:
– 10 g leti' L u triptona
– 5 g leti' L u NaCl - Suplementar yéetel antibióticos bin bixake' k'a'abéet utia'al asegurar le ken plásmidos.
- Utia'al u xook microscopía yéetel actividad le promotor, meyaj le cepa E. coli W3110 yéetel juntúul indicador GFP mejorado genómicamente (eGFP) yáanal le kaambalil yo'osal le promotor rplL.
- Meyaj plásmidos reporteros gFP utia'al ya'ab promotores (p'el. ej., csgA, csgD, fliA, fliC, flhD ) utia'al P'iis ku le promotores.
2 yéetel ka desprendimiento biofilm
- Siembre 1,5 mL yéetel bacteriano diluido tumen pocillo ti' jump'éel placa 12 pocillos (placas CellStar u 12 pocillos, Greiner Bio-One).
- Incubar utia'al u permitir le formación biopelícula.
- Retire le yéetel planctónico (ma' adherente) con cuidado.
– P'o'obol Amal pocillo yéetel 500 μL PBS.
– Separe le células conectadas sonicando placa 12 pocillos ti' le sonicador microplaca UIP400MTP. Le UIP400MTP garantiza jump'éel desprendimiento xan yo'osal u k'u'ubul energía ultrasónica u constante ti' le pozos.
– Ajustes sonicación: 60 ti chúumuk amplitud ti', modo ciclo: 60 segundos ENCENDIDO leti' 30 segundos APAGADO.
3 recolección yéetel lisis t'aan
- Centrifugar le células u biofilm desprendidas 4.500 g ichil 5 minutos.
- P'o'iko'ob le celdas peletizadas yéetel PBS.
- Resuspender le células ti' 100 μL laurelil sarcosinato u sodio u le 2 ti chúumuk (SLS) yéetel incubar u 95 ° C ichil 15 minutos.
- Sonicado utilizando sonicador multitubo VialTweeter utia'al u garantizar jump'éel lisis t'aan completa.
– Ajustes sonicación: 100 ti chúumuk amplitud, 50 Guatemala mina'an u yotocho'ob ON leti' 10 Guatemala mina'an u yotocho'ob OFF ichil 10 minutos k'iinil total funcionamiento; Mantenga le muestras hielo.
4 reducción yéetel alquilación
- Añadir 5 mM Tris (2-carboxietil) fosfina (TCEP) utia'al xu'ulsiko'ob le K'aanan disulfuro yéetel incubar ti' 95 ° C ichil 15 minutos.
- Proteínas alquiladas yéetel 10 mM yodoacetamida ti' 30 minutos u 25 ° kuxtal
5 Cuantificación yéetel digestión proteínas
- Centrifugar lisados utia'al u cho'oik le residuos.
- Cuantifique le contenido total ti' proteínas utilizando kit ensayo proteínas BCA u Pierce.
- Digiera 50 μg proteína total yéetel 1 μg tripsina ti' jump'éel solución ku contenga 2 ti chúumuk SLS yéetel 100 mM bicarbonato amonio.
- Incubar le reacción digestión ti' le áak'aba' yaan 30 ° kuxtal
6 purificación péptidos
- Precipite SLS agregando ácido trifluoroacético (TFA) ti' le 1,5 ti chúumuk yéetel ku centrifuga.
- Purifique le péptidos utilizando columnas microcentrifugado C18.
- Tikintaj péptidos purificados yéetel resuspender ti' 0,1 ti chúumuk TFA.
7 cromatografía líquida-espectrometría masas (LC-MS leti' MS).
- Analice péptidos ti' jump'éel espectrómetro masas Q-Exactive Plus yéetel juntúul nanosistema Ultimate 3000 RSLC.
- Separe le péptidos utilizando jump'éel columna HPLC fase reversa (75 μm × 42 cm) rellena yéetel u rellena yéetel u resina C18 (2,4 μm).
- Aplicar jump'éel gradiente 2 ti chúumuk u 35 ti chúumuk disolvente B (acetonitrilo yéetel 0,15 ti chúumuk ácido fórmico) ichil 140 minutos.
- Adquiera datos utilizando escaneos MS u ka'anal resolución seguidos u escaneos MS leti' MS tu tándem le 10 iones asab intensos.
8 análisis datos
- Procese datos brutos u LC-MS utilizando software Progenesis.
- Exporte archivos.mgf yéetel analícelos yéetel MASCOT.
- Betaj le cuantificación péptidos yéetel SafeQuant yo'osal u kaambalil yo'osal calidad yéetel le ajuste falsos descubrimientos.
- Betaj tuláakal le experimentos tumen duplicado wa triplicado utia'al u garantizar le reproducibilidad.
Sonicadores multimuestra utia'al wa u muestras ka'anal rendimiento yilik
Le modelos sonicador multimuestra VialTweeter yéetel UIP400MTP ma'alo'obkíinsiko'ob significativamente le precisión yéetel u eficiencia le flujos meyaj experimentales, especialmente ti' le investigación biopelículas yéetel le proteómica. U Buka'aj u ba'al utia'al procesar ya'ab k'oja'ano'ob muestras u kin tuukul xan garantiza jump'éel ka'anal Buka'aj u ba'al u rendimiento xma' tu'ux le ma'alobil le datos. Táan a ventajas, combinadas yéetel le flujos meyaj optimizados descritos ka'achij, ku betiko'ob le sonicadores multimuestra ti' Hielscher k'áati' nu'ukul yo'osal le investigación biológica moderna tu láakal.
- Ka'anal eficiencia
- Ma'alo'obtal u ts'ook generación
- fiabilidad & robustez
- Kaambalil yo'osal u tuukula' ajustable yéetel preciso
- lote & Inline
- utia'al u je'el volumen
- Software na'at
- Noj inteligentes (p'el. ej., programables, protocolización datos ti', kaambalil yo'osal remoto).
- Chéen ch'a'abil yéetel yantio'ob u operar
- Yáanal mantenimiento
- CIP (limpieza in situ).
Diseño, Fabricación yéetel Consultoría – Calidad Made in Germany
Le ultrasonidos Hielscher le u k'ajóolta'ano'ob tuméen u asab ka'anatako'ob estándares calidad yéetel diseño. Le robustez yéetel le facilidad ch'a'iko'ob permiten jump'éel integración fluida u k ultrasonidos ti' kúuchilo'ob industriales. Le condiciones adversas yéetel le entornos exigentes le uchik manejables tumen le ultrasonidos Hielscher.
Hielscher Ultrasonics le jump'éel empresa yéetel certificación ISO yéetel ts'áabal yaabilajech énfasis ti' le ultrasonidos ka'anal rendimiento kisbuts' ma'alo'obtal máax k'oja'an yéetel facilidad búukinta'al. Ba'axten supuesto le ultrasonidos Hielscher cumplen yéetel le normativa CE yéetel cumplen le requisitos UL, CSA yéetel RoHs.
Bibliografía leti' Referencias leti' le' informativas
- Download PDF “Protocol using Hielscher Multi-Sample Sonicators in Biofilm and Proteomic Analysis” – Hielscher Ultrasonics
- FactSheet UIP400MTP – High-throughput Sonicator for Multiwell-Plates
- FactSheet VialTweeter – Simultaneous sonication of closed vials
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K'áat chi'oba' frecuentes
Ba'ax le jump'éel Biofilm.
Jump'éel biofilm jach jump'éel kaajil estructurada microorganismos incrustados ti' jump'éel matriz extracelular (MEC) autoproducida, adherida le meyajo'ob. Proporciona protección xu'ullsa'al le estrés ambiental, le antibióticos yéetel le yaan inmunitario, ku contribuye le infecciones persistentes yéetel le bioincrustación.
Ba'ax le le desprendimiento biopelícula.
Le desprendimiento biopelícula le le tuukula' tuméen le le células wa ku microbianos u p'atikuba'ob ti' le ba'ax u biopelícula, ts'o'ok bixake' activamente (yéetel le degradación enzimática wa detección quórum) wa pasivamente (debido a muuk' ti' cizallamiento, agotamiento ti' nutrientes wa interrupción kanáanil). Le ba'ala' facilita u dispersión le biopelícula yéetel le colonización túumben meyajo'ob.
Ba'ax ku le proteínas asociadas le biofilm.
Le proteínas asociadas le biopelícula (BAC) ku proteínas superficie microbiana wa secretadas ku desempeñan jump'éel ju'un clave ti' le formación, estabilidad yéetel adhesión le biopelícula. Lelo'oba' incluyen adhesinas, enzimas extracelulares yéetel proteínas estructurales bey le fibras rizadas ti' E. coli wa BapA ti' Staphylococcus aureus.
Ba'ax le u ECM ti' le biofilms.
Le matriz extracelular (MEC) ti' le biopelículas jach jump'éel páawo'ob ma'alob polisacáridos, proteínas, ADN extracelular (ADNe) yéetel lípidos ku to'obo' le células microbianas. Proporciona integridad estructural., chúumuk le adhesión, retiene le humedad yéetel mejora u resistencia u biopelícula le antimicrobianos yéetel le defensas le huésped.
Máakalmáak le función le fibras rizadas
Le fibras rizadas le fibrillas amiloides extracelulares producidas tumen Escherichia coli yéetel bacterias relacionadas, ku desempeñan jump'éel ju'un crucial ti' le formación biopelículas, u adhesión le superficie yéetel u colonización le huésped. Contribuyen u integridad le biopelícula, mejoran resistencia ti' le tensiones ambientales yéetel facilitan le interacciones yéetel le jach huésped ichil le infección. Ku ts'o'okole', le fibras rizadas táan involucradas ti' le taak'in le activación le yaan inmunológico yéetel u séen implicado ti' le persistencia yéetel patogenicidad bacteriana.
Hielscher Ultrasonics fabrica homogeneizadores ultrasónicos u ka'anal rendimiento ichil laboratorio Utia'al Buka'aj industrial.