Protocolo utia'al u inactivación le coronavirus SARS-CoV-2 yéetel sonicación

Hielscher VialTweeter jach jump'éel unidad chen u preparación ultrasónica u ya'ab k'oja'ano'ob muestras, ba'ax ku meyajtiko'ob utia'al u inactivar le coronavirus SARS-COV-2. Le VialTweeter ku cha'antik mentik tak 10 viales muestra simultáneamente, tune', leti', le unidad beetike' uts utia'al u procesamiento masivo u muestras.

Inactivación le coronavirus SARS-CoV-2 yéetel le VialTweeter

Ka' ka tselik yóok'ol le fijador, le monocapas ku lavaron Óoxten yéetel solución salina tamponada yéetel fosfato (PBS) bey ma' ts'o'ok le células ti' 1 ml MEM leti' 5 ti chúumuk FBS yéetel sonicar (3 × 10 segundos u t'aba'an, 10 segundos u apagado le 100 ti chúumuk potencia yéetel amplitud) utilizando le procesador ultrasónico u Hielscher UP200St yéetel VialTweeter archivo adjunto. Le sobrenadantes ku clarificaron centrifugando 3000 × g ichil 10 minutos. 

Lea waye' le protocolo k'iini' utia'al u inactivación le coronavirus SARS-CoV-2 u Welch et ti' le. (2020) tu continuación:

Células ka virus

Celdas Vero E6 (Vero C1008; ATCC CRL-1586) ku cultivaron chúumuk chen tuukulo'obo' (MEM) tu Eagle juubulo'ob suplementado yéetel suero fetal ti' ternero (FCS) tu le 10 ti chúumuk (v leti' v). Le virus utilizado bin le cepa hCOV-19 ti' le SARS-CoV-2 leti' England leti' 2 leti' 2020, aislada tumen PHE le yáax múuch' k'oja'ano'ob ti' reino Unido le 29 leti' 01 leti' 2020. Le virus ku obtuvo ti' le pasaje 1 yéetel u utilizó utia'al u xook inactivación ti' le pasaje 2 wa 3.
Utia'al u K'ajóolt le reactivos yéetel u yik'áalil químicos utilizados utia'al u inactivación le SARS-CoV-2, bey je'el bix ti' le eliminación u citotoxicidad le reactivos, consulte le informe científico ti' Welch et ti' le. (2020).

Inactivación virus tumen detergentes – Protocolo inactivación le coronavirus SARS-CoV-2 tumen Welch et ti' le. 2020

Inactivación le SARS-CoV-2

En el caso de le yik'áalil comerciales, preparaciones virus (fluido pak'al jach ti', títulos oscilan ichil 1 × 10⁶ u 1 ja× 10⁸ PFU leti' ml) ku trataron tumen triplicado yéetel reactivos le concentraciones yéetel utia'al le k'iino'oba' ti' máax ku recomendados ti' le t'aano'ob búukinta'al le fabricante, ka táan disponibles, wa yo'osal le concentraciones yéetel le k'iino'oba' específicamente solicitados tumen le laboratorios ensayo. Le ken u fabricante tu ts'áaj jump'éel rango concentraciones, u ensayó le proporción asab baja u producto u muestra (es decir le concentración asab baja recomendada ti' producto prueba). Reactivos le tubo transporte muestras ku probaron utilizando jump'éel proporción jump'éel volumen fluido pak'al jach tumen lajuntúul volúmenes reactivo, a menos ti' le fabricante especificara jump'éel relación volumen líquido muestra reactivo. Le detergentes, fijadores yéetel solventes probaron le concentraciones indicadas ti' le k'iino'oba' indicados. Tuláakal le wook inactivación u tu mentajo'ob u temperatura ambiente (18 – 25 ° C). Utia'al le pruebas tipos muestras alternativas, le virus ku introdujo ti' le matriz muestra indicada ti' jump'éel proporción 1:9 ka ts'o'okole' ku trató yéetel reactivos prueba bix u indicó ka'achij. Tuláakal le experimentos incluyeron muestras simuladas u kanik tumen triplicado yéetel juntúul volumen equivalente ti' PBS kúuchil reactivo prueba. Inmediatamente ka' le k'iin Máax ku requerido, ku procesó 1 ml muestra tratada utilizando matriz filtración seleccionada adecuadamente. Le eliminación reactivos ti' le pruebas inactivación u tu bisaj ka'ansaj ti' jump'éel formato columna centrifugación nojochil utilizando columnas centrifugación eliminación detergente Pierce u 4 ml (Thermo Fisher), wa llenando columnas centr Vacías 10 ml Buka'aj u ba'al u Pierce (Thermo Fisher) yéetel SM2 Bio-Beads, Sephacryl S-400 HR wa Sephadex LH-20 utia'al u ts'aik perlas leti' u resina empaquetadas u 4 mL. Utia'al le purificación yéetel filtros Amicon, u purificaron muestras 2 × 500 μl utilizando ka'atúul filtros centrífugos yo'osal le método descrito ka'achij, ka ts'o'okole' ku agruparon. Utia'al le formaldehído yéetel le formaldehído yéetel eliminación glutaraldehído, ku utilizó jump'éel filtro yéetel juntúul volumen muestra 1× 500 μl, u resuspendió ka' procesamiento ti' 500 μl PBS yéetel u agregó u 400 ul MEM leti' 5 ti chúumuk FBS. Utia'al u inactivación u infectados monocapas, 12,5 cm² Frascos pilas Vero E6 (2,5 × 10⁶ células leti' matraz ti' 2,5 mL MEM leti' 5 ti chúumuk FBS) ku infectaron u MOI 0,001 yéetel u incubaron u 37 ° C leti' 5 ti chúumuk CO₂ ichil 24 horas. Ku retiró le sobrenadante yéetel u fijaron le células yéetel 5 mL formaldehído, wa formaldehído ka glutaraldehído u temperatura ambiente ichil 15 wa 60 minutos. Ku retiró le fijador yéetel le monocapas p'o'ob Óoxten yéetel PBS bey ma' la'achik le células ti' 1 ml MEM leti' 5 ti chúumuk FBS yéetel u sometieron sonicación (3 × 10 segundos u t'aba'an, 10 segundos u apagado le 100 ti chúumuk potencia yéetel amplitud) utilizando jump'éel UP200St yéetel accesorio VialTweeter (ma'alo'obtal u ultrasonido Hielscher). Le sobrenadantes ku clarificaron centrifugando 3000 × g ichil 10 minutos.

Detalles le reactivo utilizado utia'al u inactivación le coronavirus SARS-CoV-2 yéetel le ultrasónico VialTweeter bin u protocolo u Welch et ti' le. 2020

Le protocolo k'iini', incluido u búukinta'al le Hielscher VialTweeter, ku páajtal kaxtik waye':
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

Sofisticados desmembradores ultrasónicos yéetel disruptores celulares

Le ultrasonido multimuestra VialTweeter jach chéen jump'éel le ya'ab soluciones ultrasónicas utia'al wa u muestras yilik ti' laboratorios biológicos, bioquímicos yéetel clínicos. Hielscher Ultrasonics k'u'ubul le desmembrador ultrasónico beetike' uts utia'al u ka'anatako'ob, je'ebix, lisis t'aan, extracción t'aan, homogeneización jach, solubilización u lisados, disolución, desgasificación muestras, etcétera.
Beetik k wojéeltik Jayp'éel muestras yaan u procesar tuméen p'isib ka k'iine', wa prefiere le sonicación directa wa indirecta yéetel u ts'áak u u Ts'a'akal ultrasónico ti' le muestra. Recomendaremos ti' le unidad ku ultrasonidos asab úuchuk utia'al u rutina diaria meyaj!
Le procesadores ultrasónicos digitales u Hielscher Ultrasonics u equipados yéetel software na'at, registro automático ti' datos, Jayáach opciones preajuste utia'al u kaambalil yo'osal le temperatura, le ku bisik le sonicación, le modo ciclo leti' pulso, bey le iluminación muestras yéetel le kaambalil yo'osal remoto ti' le navegador. K esforzamos tumen meentik k dispositivos ultrasónicos k'áati' u asab inteligentes páajtal utia'al u u rutina investigación yéetel meyaj je'el u asab tuniche' yéetel exitosa páajtal.
Beetik clic waye' utia'al u kaxtik asab aplicaciones, incluidos le tsoolil bix u wa u muestras yilik tumen ultrasonidos yéetel le VialTweeter.