Drosophila melanogaster le ampliamente utilizado ti' laboratorios bey organismo bix. Tune', ku k'a'abéet bisik ka'ansaj con frecuencia medidas u preparación preanálisis bey lisis, alteración t'aan, extracción proteínas yéetel cizallamiento ADN muestras Drosophila melanogaster. Le desmembradores ultrasónicos ku fiables yéetel eficientes yéetel u páajtal utilizar utia'al u kúuchilo'ob tareas bey lisis, extracción proteínas wa fragmentación ADN je'el bix t'aane' ajustando únicamente le parámetros tuukula' ultrasónico. Tune', le homogeneizadores ultrasónicos le nu'ukulo'ob flexibles yéetel amplia gama aplicaciones.

Lysis Ultrasónica yéetel Extracción u Proteínas

Le lísis, le solubilización t'aan, le homogeneización jach yéetel le extracción proteínas le tareas típicas ti' le desmembradores ultrasónicos ti' laboratorios biológicos. Le dismembradores ultrasónicos yéetel le disruptores celulares le adecuados utia'al u homogeneizar jach animales, yik'elo'obo' (je'ebix, Drosophila melanogaster, kuxtal elegans) wa especímenes paak'alo'ob. Le aplicaciones yéetel u ultrasonidos le lysis suspensiones celulares yéetel pellets, bey le extracción proteínas intracelulares.
Le lysis ultrasónica yéetel le extracción proteínas le procesos ma'alob fiables yéetel reproducibles, u páajtal u u yóok'ol le k'oja'ano'obo' tsoolil bix establecidos. Dado u intensidad le tuukula' ultrasónico ku páajtal ajustar exactamente yéetel parámetros sonicación bey amplitud, ciclo leti' modo pulso, temperatura yéetel volumen le muestra, una pakteche' kin le tsoolil bix probados ku páajtal repetir yéetel u yéet resultado jump'éel y otra ka'.

Fragmentación u ADN ultrasónico yéetel ARN

Ka' ts'o'ok u lisis t'aan yéetel le extracción proteínas, jump'éel paso común requerido ti' wa u muestras yilik leti' le cizallamiento yéetel fragmentación le ADN, arnes yéetel cromatina, je'ebix, bey ma' inmunoprecipitación cromatina (ChIP). Fragmentación le ADN yéetel le ARN ku páajtal kaxta'al u yúuchul fiable bix u t'aakik le covalentes lazos ku mantienen unido le ADN tumen le muuk' meyajtbilo'. Usando cizallamiento ka'ap'éel bey le sonicación, yaan u principio le hebras ADN u rompen, ts'o'okole' le ADN ku fragmenta ti' trozos asab mejen.
Fragmentación le ADN ultrasónico le fiable yéetel eficiente ti' le cizallamiento ku ADN ti' jump'éel longitud específica, je'ebix, 500bp (pares k'oja'ano'obo'). Le k'ajle' ventajas u fragmentación le ADN ultrasónico incluyen le kaambalil yo'osal preciso ti' le parámetros le tuukula' ultrasónico yéetel le intensidad. Le parámetros le tuukula' ultrasónico ku páajtal ajustar ajustando u intensidad le sonicación, le ciclos yéetel le k'iin yéetel precisión. Le je'ela' ku cha'antik crear le tamaños u ADN deseados yéetel le longitud ADN dirigida ku páajtal producir yéetel reproducir bix fiable. Le cizallamiento ultrasónico ti' le ADN xan le beetike' uts ch'a'iko'ob fragmentos ADN ka'anal peso molecular.

U tsoolil bix utia'al u lísis ultrasónica u Drosophila melanogaster

Tu continuación u kaxtik ya'ab tsoolil bix utia'al u lysis asistida tumen ultrasonidos, extracción proteínas, yéetel le fragmentación ti' ADN wa cromatina le muestras Drosophila.

Lysis Ultrasónica utia'al El Ensayo u Inmunoprecipitación u Reticulación (CLIP).

Le ensayo CLIP u beetajo' bix u informó ka'achij yéetel Jayp'éel modificaciones. Yan 20 mg u ovarios hembras silvestres u 0 u 1 k'iin u ts'o'oka'an bino'ob erticulados tumen UV (3 × 2000 μJ leti' cm2), homogeneizados ti' hielo ti' tampón RCB 1 mL (50 mM HEPES pH 7.4, 200 mM NaCl, 2.5 mM MgCl2, 0.1 ti chúumuk Triton X-100, 250 mM sacarosa ti', 1 mM TDT, × inhibidores completos ti' le proteasa ma' EDTA ti', 1 mM PMSF) suplementados yéetel 300 jump'éel RNAseOUT yéetel colocados ti' hielo ti' 30 min. Le homogeneizado ku sonicó ti' hielo, ti' le 80 ti chúumuk potencia, jo'op'éel Óoxten ti' ráfagas 20 s yéetel juntúul descanso 60 s ti' le ka'a utilizando le procesador ultrasónico Hielscher UP100H (100 W, 30 kHz). ka centrifugado (16000 × g ichil 5 min 4oC). Le extracto soluble ku preclearizó yéetel 20 l dinar-G proteína-G ti' 20 min u 4oC. Ka' eliminación muestras yo'osal inmunoblotting yéetel le cuantificación yaan tu ARN jool (1 ti chúumuk), HP1 bin inmunoprecipitado yéetel anticuerpos anti-HP1 9A9 ichil 450 l extracto precleared tumen incubación ichil 4 h yéetel 50 l proteína-G dinesas. Le inmunoprecipitados ku p'o'ob 4 Óoxten yéetel RCB. Utia'al u eluir le ARN inmunoprecipitados, le perlas peletadas ku hervieron ti' 100 l ja' tratada yéetel DEPC UltraPure ichil 5 min. 900 l reactivo Qiazol ku añadió ti' le sobrenadante yutstal yo'osal utia'al wa u ARN yilik. Le ARN purificado ku utilizó bey plantilla utia'al u sintetizar cDNA utilizando oligo dT, hexámeros aleatorios yéetel SuperScript rever ku transcriptase III bin u protocolo le fabricante.
(Cassale et ti' le. 2019).

Lysis Ultrasónica utia'al u Ensayo u Inmunoprecipitación u Cromatina

Le inmunoprecipitación cromatina u beetajo' de acuerdo con le método descrito tumen Menet yéetel modificaciones menores. Yan 20 mg u ovarios hembras bin yano'ob salvaje 0 u 1 k'iin u ts'o'oka'an bino'ob u homogeneizados ti' 1 mL tampón NEB (10 mM HEPES-Na u pH 8.0, 10 mM NaCl, 0.1 mM EGTA-Na u pH 8, 0.5 mM EDTA-Na u pH 8, 1 mM TDT, 0.5 ti chúumuk NP-40, 0.5 mM Espermidina, 0.15 mM Espermatozoides, 1× Inhibidores Completos u Proteasa libres EDTA) yéetel juntúul homogeneizador leti' dispersor inmersión 1 min (u 3000 rpm). Le homogeneizado ku transfirió ti' jump'éel dounce vidrio pre-enfriada yéetel aplicaron 15 looxo'ob completos yéetel juntúul mortero apretado. Le núcleos libres u centrifugaron u 6000 x g ichil 10 min u 4 ° kuxtal Le gránulos ku contenían núcleos resuspendieron ti' 1 ml NEB yéetel u centrifugaron u 20000 × g ti' 20 min ti' gradiente sacarosa (0,65 ml sacarosa 1,6 M ti' NEB, 0,35 ml sacarosa 0,8 M ti' NEB). Le pellet ku resuspendió 1 ml NEB yéetel formaldehído jump'éel concentración final ti' le 1 ti chúumuk. Le núcleos ku reticularon ichil 10 min u temperatura ambiente yéetel u tu tuupajo'ob agregando 1 leti' 10 vol glicina 1.375 M. Le núcleos ku recogieron tumen centrifugación u 6000 × g ichil 5 min. Le núcleos p'o'ob ka'atéen ti' 1 mL NEB yéetel u resuspendieron ti' 1 mL Lysis Buffer (15 mM HEPES-Na u pH 7,6, 140 mM NaCl, 0,5 mM EGTA, 1 mM EDTA pH 8, 1 ti chúumuk Triton X-100, 0,5 mM TDT, 0,1 ti chúumuk Na Desoxicolato, 0,1 ti chúumuk SDS, 0,5 ti chúumuk N-lauroilsarcosina yéetel 1× Inhibidores Completos u proteasa libres EDTA). Le núcleos ku sonicaron utilizando jump'éel procesador ultrasónico Hielscher UP100H (100 W, 30 kHz). 6 Óoxten ti' 20 sajbe'eno'ob yéetel 1 min ti' hielo. Le núcleos sonicados centrifugaron 13000 × g ti' 4 min u 4oC. Óol tuláakal le máasewáalo'obo' ti' le cromatina sonicada bin u 500 u 1000 pares bases (bp) tu longitud. Utia'al u Amal inmunoprecipitación, u incubaron 15 g cromatina te' meyajo'ob 10 g anticuerpo monoclonal HP1 9A9 (3 h ti' 4oC ti' jump'éel Balk'es giratoria). Ts'o'okole', ku añadieron 50 l proteína dinabeads G yéetel u continuó le incubación ichil áak'abe' u 4oC. Le sobrenadantes ku desecharon yéetel le muestras ku p'o'ob ka'atéen ti' Lysis Buffer (Amal p'o' 15 min 4oC) yéetel ka'atéen ti' TEECH Buffer (EDTA 1 mM, 10 mM TrisHCl ti' pH 8). Le cromatina eluía ti' ba'ax menta'abij ichil ka'ap'éel wook; táanil ti' 100 l tampón elución 1 (10 mM EDTA, 1 ti chúumuk SDS, 50 mM TrisHCl ti' pH 8) u 65oC ichil 15 min, seguido centrifugación yéetel recuperación le sobrenadante. Le xooko'obo' le perlas ku u suut u extraer ti' 100 l u IN + 0,67 ti chúumuk SDS. Le eluido combinado (200 l) ku incuba ichil áak'abe' u 65oC utia'al u invertir le K'aanan cruzados yéetel u trató yéetel RNaseA ti' 15oG leti' ml ichil 15 min 65oC yéetel tumen 500 g leti' ml u Proteinasa k'uj ichil 3 h u 65oC. Le muestras ku extrajeron fenol-cloroformo yéetel u precipitó etanol. Le ADN ku resuspendió 25 l ja'. Utia'al u maximizar le análisis moleculares yéetel ADN inmunoprecipitado, le genes candidatos ku amplificaron ti' pares ti' jump'éel protocolo dúplex-PCR optimizado yo'osal u búukinta'al ka'atúul conjuntos jejeláas imprimaciones yéetel temperaturas u fusión similares ti' jump'éel tin juunal reacción.
(Casale et ti' le. 2019).

Disruptores celulares ultrasónicos u ka'anal rendimiento utia'al u muestras biológicas

Hielscher Ultrasonidos jach u socio yéetel yaan ti' ya'ab k'iin ka lela' ultrasonicadores ka'anal rendimiento utia'al u interrupción t'aan, lelisis, extracción proteínas, ADN, ARN yéetel fragmentación cromatina, bey uláak' wook wa u muestras previas yilik. Hielscher k'u'ubul jump'éel cartera completa u homogeneizadores u laboratorio ultrasónicos yéetel unidades ti' wa u muestras yilik, ka ti' le dispositivo ultrasónico beetike' uts utia'al u ka'anatako'ob biológica ka requisitos.
Ultrasonicador clásico u bin yano'ob sonda yéetel micro-xnuk bey le UP200St (200W; wil wíimbala' le izquierda) wa jump'éel le kúuchilo'ob wa u muestras ultrasónicas yilik VialTweeter o UP200ST_TD_CupHorn yéetel VialHolder ku modelos favoritos ti' laboratorios investigación yéetel análisis. Le sonda ultrasónica clásica le beetike' uts, ken u meenta'al menos muestras k'a'abéet u asanadas, extraídas wa fragmentadas. Le kúuchilo'ob wa u muestras VialTweeter yilik yéetel UP200St_TD_CupHorn permiten le sonicación simultánea ti' tak 10 wa 5 viales, respectivamente.
Wa ku k'a'abéet procesar números muestras elevados (je'ebix, placas u 96 pozos, placas ti' microtíter, etc.), le UIP400MTP Leti' le configuración sonicación beetike' uts. Le UIP400MTP u meyaj bey jump'éel cuerno luuch sak vino nojochil, ku Chuup ja' yéetel u suficiente kúuchil utia'al u xu'ulsa'al placas micro-pozo. Alimentado tumen juntúul potente procesador ultrasónico u 400 vatios, le UIP400MTP ku jump'éel sonicación jach xan yéetel intensa u placas multi-pozo con el fin de interrumpir le células, muestras lese, solubilizar pellets, extraer proteínas wa ADN a'alaj t'aan.

Kaambalil yo'osal preciso yéetel Smart Software

Tuláakal le soluciones sonicación Hielscher ti' 200 vatios ti' táanil u equipadas yéetel juntúul pantalla táctil digital te' boonil yéetel juntúul software na'at. Ti' le datos inteligentes protocolling tuláakal le parámetros le tuukula' ultrasónico ku guardan automáticamente bey archivo CSV ti' jump'éel tarjeta SD incorporada uts séeb bix u Revolución le ultrasonicador. Le je'ela' ku beetik le investigación yéetel le protocolo k'áati' jach asab convenientes. Ka' le ensayos sonicación wa wa u le muestra yilik, yéetel u xíixtik, le parámetros sonicación Amal sonicación ka comparar le.
Ti' le menú intuitivo, numerosos parámetros ku páajtal preajustar bey ma' le sonicación: je'ebix, utia'al u controlar le temperatura ti' le muestra yéetel Jech u degradación térmica, ku páajtal establecer jump'éel límite superior u temperatura le muestra. Juntúul sensor temperatura enchufable, ku tal yéetel le unidad ultrasónica, ku ts'aik u procesador ultrasónico retroalimentación yóok'ol le temperatura xíimbal tumen ti' le sonicación. Le kéen u chukik le límite temperatura superior, dispositivo ultrasónico u je'elsik tak ka u chukik le límite inferior ti' le nu'ukulo'ob ∆T ka Káaj u sonicar automáticamente ka'a.
Wa k'a'abet sonicación yéetel jump'éel yaan tu energía específica, u preestablecer le energía ultrasónica final ti' le meyajta'ale' sonicación. Ba'axten supuesto le pulsación ultrasónica yéetel le modo ciclo xan ku páajtal configurar individualmente.
Utia'al u k'a' utilizar le parámetros u sonicación asab exitosos, je'el ooks ya'ab modos sonicación (je'ebix, k'iinil sonicación, intensidad, modo ciclo, etc.) bey modos predefinidos, utia'al u páajtal u fáciles ka jáan iniciados ka'a.
Utia'al u jump'éel asab comodidad operativa, tuláakal le kúuchilo'ob ultrasónicas digitales ku páajtal operar ti' le kaambalil yo'osal remoto ti' le navegador ti' je'el navegador común (je'ebix, InternetExplorer, Safari, Chrome, etc.). Le conexión LAN le jump'éel configuración simple plug-n-play ka ma' k'a'abet instalación software adicional.
Tu Hielscher k ojel u le sonicación exitosa ti' muestras biológicas k'a'abet precisión ka repetibilidad. Tune', diseñamos k ultrasonicadores bey dispositivos inteligentes yéetel tuláakal le ba'alo'ob ku permiten jump'éel wa u yilik muestras eficiente, confiable, reproducible yéetel conveniente.

Le uláak' tabla ku ts'aik ti' jump'éel indicación le Buka'aj u ba'al u procesamiento aproximada u k sistemas ultrasónicos, tak micro-puntas ultrasónicas yéetel homogeneizadores ultrasónicos clásicos tak ultrasonicadores MultiSample utia'al u preparación conveniente yéetel confiable u numerosas muestras: