Lysis Ultrasónica u Drosophila melanogaster Muestras

Drosophila melanogaster le ampliamente utilizado ti' laboratorios bey organismo bix. Tune', ku k'a'abéet bisik ka'ansaj con frecuencia medidas u preparación preanálisis bey lisis, alteración t'aan, extracción proteínas yéetel cizallamiento ADN muestras Drosophila melanogaster. Le desmembradores ultrasónicos ku fiables yéetel eficientes yéetel u páajtal utilizar utia'al u kúuchilo'ob tareas bey lisis, extracción proteínas wa fragmentación ADN je'el bix t'aane' ajustando únicamente le parámetros tuukula' ultrasónico. Tune', le homogeneizadores ultrasónicos le nu'ukulo'ob flexibles yéetel amplia gama aplicaciones.

Lysis Ultrasónica yéetel Extracción u Proteínas

Drosophila melanogaster is widely used as model organism in biological labs. Find here protocols for lysis, protein extracion and DNA shearing of D. melanogaster samples.Le lísis, le solubilización t'aan, le homogeneización jach yéetel le extracción proteínas le tareas típicas ti' le desmembradores ultrasónicos ti' laboratorios biológicos. Le dismembradores ultrasónicos yéetel le disruptores celulares le adecuados utia'al u homogeneizar jach animales, yik'elo'obo' (je'ebix, Drosophila melanogaster, kuxtal elegans) wa especímenes paak'alo'ob. Le aplicaciones yéetel u ultrasonidos le lysis suspensiones celulares yéetel pellets, bey le extracción proteínas intracelulares.
Le lysis ultrasónica yéetel le extracción proteínas le procesos ma'alob fiables yéetel reproducibles, u páajtal u u yóok'ol le k'oja'ano'obo' tsoolil bix establecidos. Dado u intensidad le tuukula' ultrasónico ku páajtal ajustar exactamente yéetel parámetros sonicación bey amplitud, ciclo leti' modo pulso, temperatura yéetel volumen le muestra, una pakteche' kin le tsoolil bix probados ku páajtal repetir yéetel u yéet resultado jump'éel y otra ka'.

Ventajas wa u muestras ultrasónicas wa u meyaj

  • ma'alob eficiente
  • Ajustable u xooko'obo' muestra específico
  • Adecuado utia'al u je'el volumen
  • Ts'a'akal ma' térmico
  • ya'ala'al máaxo'ob máano'ob reproducibles
  • Simple yéetel seguro

Fragmentación u ADN ultrasónico yéetel ARN

Ka' ts'o'ok u lisis t'aan yéetel le extracción proteínas, jump'éel paso común requerido ti' wa u muestras yilik leti' le cizallamiento yéetel fragmentación le ADN, arnes yéetel cromatina, je'ebix, bey ma' inmunoprecipitación cromatina (ChIP). Fragmentación le ADN yéetel le ARN ku páajtal kaxta'al u yúuchul fiable bix u t'aakik le covalentes lazos ku mantienen unido le ADN tumen le muuk' meyajtbilo'. Usando cizallamiento ka'ap'éel bey le sonicación, yaan u principio le hebras ADN u rompen, ts'o'okole' le ADN ku fragmenta ti' trozos asab mejen.
Fragmentación le ADN ultrasónico le fiable yéetel eficiente ti' le cizallamiento ku ADN ti' jump'éel longitud específica, je'ebix, 500bp (pares k'oja'ano'obo'). Le k'ajle' ventajas u fragmentación le ADN ultrasónico incluyen le kaambalil yo'osal preciso ti' le parámetros le tuukula' ultrasónico yéetel le intensidad. Le parámetros le tuukula' ultrasónico ku páajtal ajustar ajustando u intensidad le sonicación, le ciclos yéetel le k'iin yéetel precisión. Le je'ela' ku cha'antik crear le tamaños u ADN deseados yéetel le longitud ADN dirigida ku páajtal producir yéetel reproducir bix fiable. Le cizallamiento ultrasónico ti' le ADN xan le beetike' uts ch'a'iko'ob fragmentos ADN ka'anal peso molecular.

Ultrasonicator UP200Ht with microtip S26d2 for ultrasonic lysis of Drosophila samples

ultrasonicador UP200Ht yéetel microtip S26d2 u 2 mm utia'al u sonicación muestras Drosophila

Solicitud a'alajil t'aan




Yanak ti' tu yilaje' k Política yojeta'al mixba'al.


U tsoolil bix utia'al u lísis ultrasónica u Drosophila melanogaster

Tu continuación u kaxtik ya'ab tsoolil bix utia'al u lysis asistida tumen ultrasonidos, extracción proteínas, yéetel le fragmentación ti' ADN wa cromatina le muestras Drosophila.

Lysis Ultrasónica utia'al El Ensayo u Inmunoprecipitación u Reticulación (CLIP).

CLIP assay was performed as previously reported with some modifications. Approximately 20 mg ovaries from 0- to 1-day-old wild-type females were UV crosslinked (3 × 2000 μJ/cm2), homogenized on ice in 1 mL RCB buffer (50 mM HEPES pH 7.4, 200 mM NaCl, 2.5 mM MgCl2, 0.1% Triton X-100, 250 mM sucrose, 1 mM DTT, 1× EDTA-free Complete Protease Inhibitors, 1 mM PMSF) supplemented with 300 U RNAseOUT and placed on ice for 30 min. The homogenate was sonicated on ice, at 80% power, five times in 20 s bursts with a 60 s rest in between using the Hielscher Ultrasonic Processor UP100H (100 W, 30 kHz). ka centrifugado (16000 × g ichil 5 min 4oC). Le extracto soluble ku preclearizó yéetel 20 l dinar-G proteína-G ti' 20 min u 4oC. Ka' eliminación muestras yo'osal inmunoblotting yéetel le cuantificación yaan tu ARN jool (1 ti chúumuk), HP1 bin inmunoprecipitado yéetel anticuerpos anti-HP1 9A9 ichil 450 l extracto precleared tumen incubación ichil 4 h yéetel 50 l proteína-G dinesas. Le inmunoprecipitados ku p'o'ob 4 Óoxten yéetel RCB. Utia'al u eluir le ARN inmunoprecipitados, le perlas peletadas ku hervieron ti' 100 l ja' tratada yéetel DEPC UltraPure ichil 5 min. 900 l reactivo Qiazol ku añadió ti' le sobrenadante yutstal yo'osal utia'al wa u ARN yilik. Le ARN purificado ku utilizó bey plantilla utia'al u sintetizar cDNA utilizando oligo dT, hexámeros aleatorios yéetel SuperScript rever ku transcriptase III bin u protocolo le fabricante.
(Cassale et ti' le. 2019).

Lysis Ultrasónica utia'al u Ensayo u Inmunoprecipitación u Cromatina

Chromatin immunoprecipitation was performed according to the method described by Menet with minor modifications. Approximately 20 mg ovaries from 0- to 1-day-old wild-type females were homogenized in 1 mL of NEB buffer (10 mM HEPES-Na at pH 8.0, 10 mM NaCl, 0.1 mM EGTA-Na at pH 8, 0.5 mM EDTA-Na at pH 8, 1 mM DTT, 0.5% NP-40, 0.5 mM Spermidine, 0.15 mM Spermine, 1× EDTA- free Complete Protease Inhibitors) with a homogenizer / immersion disperser 1 min (at 3000 rpm). The homogenate was transferred to a pre-chilled glass dounce and 15 full strokes were applied with a tight pestle. Free nuclei were then centrifuged at 6000xg for 10 min at 4°C. The nuclei-containing pellets were resuspended in 1 mL of NEB and centrifuged at 20000 × g for 20 min on sucrose gradient (0.65 mL of 1.6 M sucrose in NEB, 0.35 mL of 0.8 M sucrose in NEB). The pellet was resuspended in 1 mL of NEB and formaldehyde to a final concentration of 1%. Nuclei were cross-linked for 10 min at room temperature and quenched by adding 1/10 vol of 1.375 M glycine. The nuclei were collected by centrifugation at 6000 × g for 5 min. Nuclei were washed twice in 1 mL of NEB and resuspended in 1 mL of Lysis Buffer (15 mM HEPES-Na at pH 7.6, 140 mM NaCl, 0.5 mM EGTA, 1 mM EDTA at pH 8, 1% Triton X-100, 0.5 mM DTT, 0.1% Na Deoxycholate, 0.1% SDS, 0.5% N-lauroylsarcosine and 1× EDTA-free Complete Protease Inhibitors). Nuclei were sonicated using a Hielscher Ultrasonic Processor UP100H (100 W, 30 kHz). 6 Óoxten ti' 20 sajbe'eno'ob yéetel 1 min ti' hielo. Le núcleos sonicados centrifugaron 13000 × g ti' 4 min u 4oC. Óol tuláakal le máasewáalo'obo' ti' le cromatina sonicada bin u 500 u 1000 pares bases (bp) tu longitud. Utia'al u Amal inmunoprecipitación, u incubaron 15 g cromatina te' meyajo'ob 10 g anticuerpo monoclonal HP1 9A9 (3 h ti' 4oC ti' jump'éel Balk'es giratoria). Ts'o'okole', ku añadieron 50 l proteína dinabeads G yéetel u continuó le incubación ichil áak'abe' u 4oC. Le sobrenadantes ku desecharon yéetel le muestras ku p'o'ob ka'atéen ti' Lysis Buffer (Amal p'o' 15 min 4oC) yéetel ka'atéen ti' TEECH Buffer (EDTA 1 mM, 10 mM TrisHCl ti' pH 8). Le cromatina eluía ti' ba'ax menta'abij ichil ka'ap'éel wook; táanil ti' 100 l tampón elución 1 (10 mM EDTA, 1 ti chúumuk SDS, 50 mM TrisHCl ti' pH 8) u 65oC ichil 15 min, seguido centrifugación yéetel recuperación le sobrenadante. Le xooko'obo' le perlas ku u suut u extraer ti' 100 l u IN + 0,67 ti chúumuk SDS. Le eluido combinado (200 l) ku incuba ichil áak'abe' u 65oC utia'al u invertir le K'aanan cruzados yéetel u trató yéetel RNaseA ti' 15oG leti' ml ichil 15 min 65oC yéetel tumen 500 g leti' ml u Proteinasa k'uj ichil 3 h u 65oC. Le muestras ku extrajeron fenol-cloroformo yéetel u precipitó etanol. Le ADN ku resuspendió 25 l ja'. Utia'al u maximizar le análisis moleculares yéetel ADN inmunoprecipitado, le genes candidatos ku amplificaron ti' pares ti' jump'éel protocolo dúplex-PCR optimizado yo'osal u búukinta'al ka'atúul conjuntos jejeláas imprimaciones yéetel temperaturas u fusión similares ti' jump'éel tin juunal reacción.
(Casale et ti' le. 2019).

UP200St TD_CupHorn utia'al u sonicación indirecta u muestras

UP200St TD_CupHorn utia'al u sonicación indirecta ti' muestras bey ADN yéetel cizallamiento cromatina

Disruptores celulares ultrasónicos u ka'anal rendimiento utia'al u muestras biológicas

Hielscher Ultrasonidos jach u socio yéetel yaan ti' ya'ab k'iin ka lela' ultrasonicadores ka'anal rendimiento utia'al u interrupción t'aan, lelisis, extracción proteínas, ADN, ARN yéetel fragmentación cromatina, bey uláak' wook wa u muestras previas yilik. Hielscher k'u'ubul jump'éel cartera completa u homogeneizadores u laboratorio ultrasónicos yéetel unidades ti' wa u muestras yilik, ka ti' le dispositivo ultrasónico beetike' uts utia'al u ka'anatako'ob biológica ka requisitos.
Sonda bin yano'ob insonifier UP200St utia'al u lisisUltrasonicador clásico u bin yano'ob sonda yéetel micro-xnuk bey le UP200St (200W; wil wíimbala' le izquierda) wa jump'éel le kúuchilo'ob wa u muestras ultrasónicas yilik VialTweeter o UP200ST_TD_CupHorn yéetel VialHolder ku modelos favoritos ti' laboratorios investigación yéetel análisis. Le sonda ultrasónica clásica le beetike' uts, ken u meenta'al menos muestras k'a'abéet u asanadas, extraídas wa fragmentadas. Le kúuchilo'ob wa u muestras VialTweeter yilik yéetel UP200St_TD_CupHorn permiten le sonicación simultánea ti' tak 10 wa 5 viales, respectivamente.
Wa ku k'a'abéet procesar números muestras elevados (je'ebix, placas u 96 pozos, placas ti' microtíter, etc.), le UIP400MTP Leti' le configuración sonicación beetike' uts. Le UIP400MTP u meyaj bey jump'éel cuerno luuch sak vino nojochil, ku Chuup ja' yéetel u suficiente kúuchil utia'al u xu'ulsa'al placas micro-pozo. Alimentado tumen juntúul potente procesador ultrasónico u 400 vatios, le UIP400MTP ku jump'éel sonicación jach xan yéetel intensa u placas multi-pozo con el fin de interrumpir le células, muestras lese, solubilizar pellets, extraer proteínas wa ADN a'alaj t'aan.

Kaambalil yo'osal preciso yéetel Smart Software

Procesadores industriales u Hielscher le serie hdT páajtal u yanen yéetel ch'a'abil u biilankiltej u meyaj yo'osal kanik remoto ti' le navegador.Tuláakal le soluciones sonicación Hielscher ti' 200 vatios ti' táanil u equipadas yéetel juntúul pantalla táctil digital te' boonil yéetel juntúul software na'at. Ti' le datos inteligentes protocolling tuláakal le parámetros le tuukula' ultrasónico ku guardan automáticamente bey archivo CSV ti' jump'éel tarjeta SD incorporada uts séeb bix u Revolución le ultrasonicador. Le je'ela' ku beetik le investigación yéetel le protocolo k'áati' jach asab convenientes. Ka' le ensayos sonicación wa wa u le muestra yilik, yéetel u xíixtik, le parámetros sonicación Amal sonicación ka comparar le.
Ti' le menú intuitivo, numerosos parámetros ku páajtal preajustar bey ma' le sonicación: je'ebix, utia'al u controlar le temperatura ti' le muestra yéetel Jech u degradación térmica, ku páajtal establecer jump'éel límite superior u temperatura le muestra. Juntúul sensor temperatura enchufable, ku tal yéetel le unidad ultrasónica, ku ts'aik u procesador ultrasónico retroalimentación yóok'ol le temperatura xíimbal tumen ti' le sonicación. Le kéen u chukik le límite temperatura superior, dispositivo ultrasónico u je'elsik tak ka u chukik le límite inferior ti' le nu'ukulo'ob ∆T ka Káaj u sonicar automáticamente ka'a.
Wa k'a'abet sonicación yéetel jump'éel yaan tu energía específica, u preestablecer le energía ultrasónica final ti' le meyajta'ale' sonicación. Ba'axten supuesto le pulsación ultrasónica yéetel le modo ciclo xan ku páajtal configurar individualmente.
Utia'al u k'a' utilizar le parámetros u sonicación asab exitosos, je'el ooks ya'ab modos sonicación (je'ebix, k'iinil sonicación, intensidad, modo ciclo, etc.) bey modos predefinidos, utia'al u páajtal u fáciles ka jáan iniciados ka'a.
Utia'al u jump'éel asab comodidad operativa, tuláakal le kúuchilo'ob ultrasónicas digitales ku páajtal operar ti' le kaambalil yo'osal remoto ti' le navegador ti' je'el navegador común (je'ebix, InternetExplorer, Safari, Chrome, etc.). Le conexión LAN le jump'éel configuración simple plug-n-play ka ma' k'a'abet instalación software adicional.
Tu Hielscher k ojel u le sonicación exitosa ti' muestras biológicas k'a'abet precisión ka repetibilidad. Tune', diseñamos k ultrasonicadores bey dispositivos inteligentes yéetel tuláakal le ba'alo'ob ku permiten jump'éel wa u yilik muestras eficiente, confiable, reproducible yéetel conveniente.

Búukint u ti' máax ku To'one' bejla'e' yéetel xook k yóok'ol u muestras biológicas yéetel le wook u preparación k'a'abeto'ob. Tu propondremos le dispositivo wa u muestras ultrasónicas u asab yáax yilik yéetel ti' yaan k wáantik yéetel a'alajil t'aan adicional bey tsoolil bix ka recomendaciones.

Le uláak' tabla ku ts'aik ti' jump'éel indicación le Buka'aj u ba'al u procesamiento aproximada u k sistemas ultrasónicos, tak micro-puntas ultrasónicas yéetel homogeneizadores ultrasónicos clásicos tak ultrasonicadores MultiSample utia'al u preparación conveniente yéetel confiable u numerosas muestras:

Volumen lote Tasa flujo Dispositivos recomendados
Placas 96 pozos leti' microtíteres N.a. UIP400MTP
10 viales u 0,5 u 1,5 ml N.a. VialTweeter tu UP200St
CupHorn utia'al u sonicación indirecta, je'ebix, tak 5 viales N.a. UP200ST_TD_CupHorn
0. 01 u 250mL 5 u 100 ml leti' min UP50H
0. 01 u 500mL 10 200 mL leti' min UP100H
0. 02 u 1L 20 400 mL leti' min. UP200Ht / UP200St
10 u 2000mL 20 400 mL leti' min. UP200Ht, UP400St
0.25 u 5L 0. 05 u 1L leti' min UIP500hdT

Ti' máax ku yéetel to'on! Leti' k'áatiko'ob k!

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Meyaj le uláak' formulario utia'al solicitar a'alajil t'aan adicional yo'osal procesadores ultrasónicos, aplicaciones yéetel tojol. K encantados u discutir u tuukula' yéetel tech ka ofrecer ti' jump'éel ultrasónico yaan u cumpla yéetel u requisitos!









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The VialTweeter is a MultiSample Ultraonicator that allows for reliable sample preparation under precisely controlled temperature conditions.

Le unidad preparación ultrasónica u multimuestra VialTweeter Cha' le sonicación simultánea u tak 10 viales. Yéetel le dispositivo sujeción VialPress, ku páajtal presionar tak 4 tubos adicionales tu delantera ti' jump'éel sonicación intensa.

Literatura leti' Referencias



Hielscher Ultrasonics supplies high-performance ultrasonic homogenizers from lab to industrial size.

Ultrasonidos u ka'anal rendimiento! Le gama yik'áalil Hielscher baal tuláakal le espectro, tak le ultrasonicador laboratorio compacto yóok'ol kúuchilo'ob sobremesa tak sistemas ultrasónicos jaatsatako'ob industriales.


Hechos u tojol le su'utalil K'ajóolt

Metabolómica

Metabolómica jach le xooko' moléculas mejen, conocidas bey metabolitos, presentes ichil células, biofluidos, jach jump'éel áantajilo'ob. Táan a moléculas mejen yéetel u interacciones ichil jump'éel t.u.m biológico resumen yáanal le término paraguas "metabolome" yéetel le jach yáax investigación u k'aaba' metabolómica. Le investigación metabolómes u estrechamente relacionada yéetel le jach yáax emergente le ts'aako' precisión. Comprensión le metaboloma yéetel u relación yéetel kúuchilo'ob k'aas k'oja'anilo'obo' ku yáantik j yo'osal prevención k'aas k'oja'anilo'obo' yéetel tu clínica, ka' jo'op' u le variabilidad lak tu ka'a jeets', estilo kuxtal, genética yéetel fenotipo molecular. Con el Fin de liberar moléculas metabolito le células, le ultrasonidos ku meyajtiko'ob con frecuencia ti' laboratorios biológicos utia'al wa u muestras pre-analíticas bey le interrupción t'aan, lisis yéetel le extracción proteínas, lípidos yéetel uláak' moléculas yilik.