Transformación genética ti' células vegetales yo'osal ultrasonidos

Le Transformación Mediada tumen Agrobacterias Asistida tumen Sonicación (SAAT) ti'al jump'éel método eficiente infectar células vegetales yéetel genes extraños utilizando Agrobacterium bey transportador. Le cavitación ultrasónica ku beetik sonoporación, ka u describir u bey jump'éel microherida selectiva ti' u wa'ak'al vegetal. Ti' le microheridas, le ADN yéetel le vectores ADN páajtal najil ts'aak u eficazmente ti' le matriz t'aan.

sonoporación – Transformación t'aan mejorada tumen ultrasonidos

Le ken u aplican ultrasonidos baja frecuencia (aprox. 20 kHz) ti' le suspensiones celulares, le táanil le cavitación acústica provocan jump'éel permeabilización transitoria ti' le membrana ti' le jach celulares. Le efecto ultrasónico u leti'e', k'ajolo'on bey sonoporación yéetel ku meyajtiko'ob utia'al u transferencia genes ti' células wa jach.
Le ventajas u ultrasonicación u basan u principio funcionamiento mecánico ma' térmico, ku beetik u le sonicación je'el in menudo asab versátil yéetel bey dependiente ti' le tipos células. Le ka'anatako'ob versátil ti' le sonoporación Jaap le posibilidad ti' le utilización paak'alo'ob transgénicas, yaan jump'éel potencial significativo ti' le bioproducción proteínas terapéuticas u humanas complejas. Le biorreactores u k'aaba' vegetal páajtal manipular ku genéticamente uchik, evitan u páajtal contaminación yéetel patógenos yóolo'ob, ma' dañan le bacterias mediadoras ti' le transformación (je'ebix, Agrobacterium) yéetel le jump'éel método económico yéetel xoknáalo'obo' u biosíntesis.

Transformación t'aan asistida tumen ultrasonidos

Le sonicación jach jump'éel láaka u aplica ondas ultrasónicas u baja frecuencia utia'al bok'ik partículas ti' solución, utia'al xa'ak'tik soluciones, aumentando bey le tasa transferencia u juuch' yéetel disolución. Ti' le k'iino' je'el xano' k'iin, le sonicación je'el tselik le gases disueltos ti' le ts'a'abal. Ti' le transformación le páak'alo'obo', le sonicación provocará le formación microheridas ti' u wa'ak'al vegetal ka mejorará u ADN u k'u'ubul desnudo ti' le protoplasto le páak'alo'.

Utia'al u transformación genética, le transformación mediada tumen agrobacterias asistidas tumen sonicación (SAAT) leti' le método preferido yéetel yaan jump'éel eficacia significativamente asab u le sonicación utilizada utia'al u transferir ADN desnudo yéetel vectores ti' ADN Jun ti' le protoplasto. Numerosos xook séen demostrado ti' le transformación mediada tumen agrobacterias (SAAT) asistida tumen sonicación u utilizar u utia'al u inducir le disrupción kanáanil yéetel le formación heridas ti' le células vegetales yo'osal ondas ultrasónicas yéetel le cavitación acústica resultante. Jump'éel breve Ts'a'akal ultrasónico crea microheridas way le explantes. Ts'o'ok u heridas le células taal u penetración u Agrobacterium tu asab taam le jach vegetales, aumentando bey le probabilidad u vegetales le células ku infecten. Ku ts'o'okole', le compuestos fenólicos secretados mejoran le transformación. Le microheridas generadas tumen ultrasonidos ku betiko'ob u penetración le bacterias ti' le explante xan bixake' asab factible. Le SAAT ku utilizó belal utia'al u transformación genética te' ba'alche'ob vegetales particularmente consideradas bey resistentes u Agrobacterium.
Le u bin jump'éel método jach sencillo yéetel económico, bey le mejora significativa ti' le transferencia ku genes mediada tumen Agrobacterium le le k'ajle' ventajas SAAT. Beyxan ti' kaambalilo'ob le ka'anatako'ob exitosa u SAAT ti' le transformación Chenopodium rubrum L. yéetel Beta vulgaris L., le enfoque xan u ts'o'ok aplicado ti' le producción holotoxinas termolábiles u bin yano'ob salvaje recombinantes Escherichia coli yéetel adyuvantes vacunas LT mutantes u Escherichia coli ti' Nicotiana tabacum, ti' le u detectaron le títulos IgG sistémicos específicos LT-B asab ka'anatako'ob en aves.
(cf. Laere et ti' le., 2016; M. Klimek-Chodacka yéetel R. Baranski, 2014).

Procedimiento tuláakal utia'al u transferencia genes yo'osal sonoporación ti' células vegetales

1. Wa u le xooko'obo' genético meyaj: Ken káaje' tumen mentik le genético xooko'obo' ku k'áato' introducir ti' le células vegetales. U páajtal u ADN plasmídico, ARN jump'éel la ácidos nucleicos.
2. Aislamiento células vegetales: Aísla le células vegetales ti' le ku Táak a dirigir a. Dependiendo de u experimento a células páajtal aislar u ti' jach wa cultivos vegetales.
3. Suspensión celdas: Suspenda le células vegetales ti' jump'éel ka'a wa yáax tampón. Lela' tuukulo'obo' utia'al garantizar ti' le células kuxkinko'obi' sanas yéetel jump'éel noj propicio utia'al u absorción genes.
4. Configura a Sonicator: Prepare u sonicador u bin yano'ob sonda preconfigurando sonicación yéetel parámetros bey le amplitud, le, le energía yéetel le temperatura. Sumerja le sonda ultrasónica ti' le suspensión t'aan.
5. Sonicación: Inicie le procedimiento sonicación. Le rápida oscilación xnuk le sonda genera burbujas cavitación ti' le líquido. Táan a burbujas ku expanden yéetel colapsan debido a le ondas ultrasónicas, creando muuk' mecánicas yéetel microflujos ti' le suspensión.
6. Sonoporación: Le muuk' mecánicas yéetel le microflujo jach tuméen le cavitación crean temporalmente poros yéetel agujeros ti' le membranas le células vegetales. Le xooko'obo' genético presente ti' le suspensión je'el u páajtal u wokol ichil le células vegetales ti' le poros.
7. Incubación: Ka' ts'o'ok u Ts'a'akal sonoporación, incubar le células vegetales utia'al ka u recuperen ka estabilicen u membranas. Lela' jump'éel paso crucial utia'al u garantizar le supervivencia t'aan yéetel le transferencia exitosa ti' genes.

Transferencia genes yéetel agrobacterias wa liposomas

Yaan ka'ap'éel formas náats'al u transfectar le célula vegetal. Utilizan agrobacterias, jump'éel género ti' bacterias Gram-negativas, wa liposomas bey portadores le xooko'obo' genético.

• Sonoporación mediada tumen agrobacterias: Agrobacterium tumefaciens jach jump'éel bacteria comúnmente utilizada ti' ingeniería genética u paak'alo'ob. Ti' le método, le plasmídico ADN ba'ax ku taasik le gen deseado ku ts'otik ti' Agrobacterium, ku ts'o'okole' ku xa'ak'ta'al tuláakal yéetel células vegetales. Le suspensión t'aan somete sonoporación utilizando jump'éel sonicador bin yano'ob sonda. Le energía ultrasónica mejora transferencia le xooko'obo' genético u Agrobacterium ti' le células vegetales. Le método jach jach utilizado utia'al u uchik u péeksa'al genética u paak'alo'ob.
• Sonoporación mediada tumen liposomas: Le liposomas ku vesículas yéetel lípidos u páajtal u najil ts'aak xooko'obo' genético. Ti' le método, le liposomas cargados yéetel ADN plasmídico jump'éel la ácidos nucleicos ku xa'ak'pajal yéetel células vegetales. Le sonoporación je'ela' jump'éel sonicador bin yano'ob sonda u emplea utia'al u facilitar absorción liposomas por parte de células vegetales. Le ultrasonido pa' le bicapas lipídicas ti' le liposomas, liberando le xooko'obo' genético ti' le células vegetales. Le enfoque jach útil utia'al u xook expresión génica transitoria ti' células vegetales.

Beneficios científicamente probados ti' le transformación mediada tumen agrobacterias asistida tumen sonicación (SAAT).

Le Transformación Mediada tumen Agrobacterias Asistida tumen Sonicación (SAAT) ku u aplicado u numerosas ba'alche'ob paak'alo'ob. Jump'éel Ts'a'akal ultrasónico corto yéetel relativamente O'olkij ti' le cultivos células vegetales ku beetik le sonoporación, ku posteriormente ku cha'antik jump'éel penetración taam u Agrobacterium bey transportador genes. In continuación je'el u páajtal a xook ejemplares u demuestran le táanil beneficiosos ti' le SAAT.

Transformación asistida tumen ultrasonidos u ashwagandha

Con el Fin de ma'alo'obkíinsiko'ob u eficiencia le transformación ti' W. somnifera (k'ajo'olta'an bey ashwagandha wa cereza ke'elil), Dehdashti yéetel u colegas (2016) investigaron u búukinta'al acetossiringona (AS) yéetel le sonicación.
U añadió acetosiringona (AS) tu óoxp'éel jejelas súutukil jump'éel: pak'al líquido Agrobacterium ti', infección tumen Agrobacterium yéetel cocultivo explantes yéetel Agrobacterium. Tu yiilubaa u adición 75 μM u AS ti' u pak'al líquido Agrobacterium ka'ach óptima utia'al u inducción genes vir.
U kaambalil adicional yo'osal le sonicación (SAAT) tu kúuchil ti' le wóolis expresión génica. Ku chíikbes u expresión le gen gusA tu jaanta' pilosas ka'ach utsil le le' yéetel le puntas le brotes ku sonicaron ichil 10 yéetel 20 segundos, respectivamente. Le eficiencia transformación protocolo mejorado ku registró ti' 66.5 yéetel 59.5 ti chúumuk en el caso de le explantes u le' yéetel xnuk brote, respectivamente. Ti' comparación yéetel uláak' tsoolil bix, tu yilubáa u eficiencia transformación le protocolo mejorado-2,5 Óoxten asab utia'al le' yéetel 3,7 Óoxten asab ti' le puntas le brotes. Le análisis Southern blot confirmaron 1-2 copias ti' le transgén gusA ti' le líneas W1-W4, ka' jo'op' u detectaron 1-4 copias u transgén ti' le internet ichil W5 generadas tumen le protocolo mejorado.

Efecto le ku bisik le transformación mediada tumen Agrobacterium (SAAT) asistida tumen sonicación yóok'ol le frecuencia transformación ti' le explantes le' (u) yéetel xnuk brote (b) tu W. somnifera
(xook yéetel gráfico: © Dehdashti et ti' le., 2016).

Transformación ultrasónica le piits'

Hussain et ti' le. (2007) demuestran le táanil beneficiosos ti' le transformación piits' le asistida tumen sonicación. Le cavitación acústica causada tumen ultrasonidos u baja frecuencia crea microheridas ti' ka yáanal le superficie u wa'ak'al vegetal (sonoporación) yéetel Cha' u Agrobacterium viaje asab taam yéetel completamente ti' u wa'ak'al vegetal. Beyo' yaajil aumenta u probabilidad u infectar le vegetales células ku lu'umo'oba' asab profundas ti' u wa'ak'al. Con el Fin de Trauma eficiencia transformación SAAT, u p'íis le expresión génica ti' GUS. Le yaan indicador GUS jach juntúul t.u.m genes reporteros, particularmente útil ti' biología molecular yéetel microbiología paak'alo'ob. Ajustando ya'ab parámetros SAAT, le expresión transitoria ti' GUS ti' taman utilizando embriones tech bey explante yutstal significativamente. Le GUS ku detectó tumen yáax ka'atéen 24 horas ka' u incubación le explantes yéetel le 48 horas, le expresión GUS ka'ach jach intensa, u beelal bey juntúul indicador útil ti' le éxito transformación ti' le explante piits' paach le transformación mediada tumen Agrobacterium (SAAT) asistida tumen sonicación. Le comparación ya'abkach yo'osal u transformación (in wojéeltik biolística, Agro, BAAT, SAAT), le transformación mediada tumen Agrobacterium asistida tumen sonicación (SAAT) tu ye'esaj yéetel u jela'anil in ti' ya'ala'al máaxo'ob máano'ob transformación.

Elección le procedimiento transformación yóok'ol le k'oja'ano'obo' le expresión transitoria ti' GUS. Le transformación mediada tumen agrobacterias asistida tumen sonicación (SAAT) ye'esik jump'éel expresión transitoria significativamente asab.
(xook yéetel gráfico: © Hussain et ti' le., 2007).

Soluciones ultrasónicas u ka'anal rendimiento yo'osal sonoporación yéetel SAAT

Hielscher Ultrasonics yaan chowak tecnología le ma'alo'ob yéetel le fabricación ultrasonidos ka'anal rendimiento utia'al laboratorios, kúuchilo'ob investigación yéetel producción industrial yéetel rendimientos jach ka'anatako'ob. Utia'al le microbiología yéetel le ciencias kuxtal, Hielscher k'u'ubul ya'abkach soluciones utia'al u adaptar ti' le jejeláas requisitos k'a'abeto'ob utia'al jach específicos yéetel u tratamientos. Utia'al u ultrasonicación simultánea u numerosas muestras, Hielscher k'u'ubul le UIP400MTP utia'al u placas multipocillo, le VialTweeter utia'al u sonicación tak 10 viales (je'ebix, tubos Eppendorf) wa u CupHorn ultrasónico. Le ultrasonidos bin yano'ob sonda u disponibles u 50 u 400 vatios bey homogeneizadores laboratorio, ka' jo'op' u le kaambalilo'ob industriales ku pixiko'ob le rango potencia 500 vatios u 16 kW.
Búukint u ti' máax ku yéetel to'on yéetel meentik k wojéeltik yóok'ol le requisitos ti' u solicitud yéetel tuukula'. K experimentado máaxo'ob yéetel encantado u recomendar ti' le ultrasonido asab yáax utia'al u tuukula' biológico.
Le uláak' tabla ku ts'aik ti' jump'éel indicación le Buka'aj u ba'al u procesamiento aproximada u k ultrasonidos: