Hielscher faka'ata tekinolosia

Sonication Lysis: fakahoha'asi & To'o e 'uli

To'oto'o movetevete pe e lysis ko ha konga angamaheni 'o e teuteu ki he sipinga faka'aho 'i biotech laboratories. Ko e taumu'a 'o e lysis 'oku ke maumau'i 'a e ngaahi konga 'o e holisi to'oto'o pe e to'oto'o kakato ke tukuange 'a e molecules 'o e ongomatu'a totonu. E fanga lysate 'e lava ke kau ai 'i he e.g. plasmid, receptor assays, polotini, DNA, RNA mo e ha fua. Ko e ngaahi sitepu ko 'eni 'o e lysis ko e fractionation, organelle li'ekina pe / mo e polotiini to'o e 'uli mo e fakama'a. Kuo ke mavahe e naunau extracted (= lysate) mo e ko e mo'ulaloa ki he lahi ange 'a e fakatotolo pe e ngaahi polokalama, e.g. ki he fakatotolo ki he proteomic. Ultrasonic homogenizers 'oku ha me'angaue angamaheni ki lysis to'oto'o ola lelei. Hange ko ia 'e lava ke holoki 'a e 'a hono malohi ultrasonic 'e fakaangaanga 'a e ngaahi fakangatangata 'o e founga ngaue, 'a hono malohi sonication tokolahi lelei mei molu 'aupito ke faingata'a 'aupito 'e lava ke ke fokotu'u fakafo'ituitui ki he koloa mo e fetu'utaki'anga takitaha ke feau 'a e fie ma'u pau 'a e tohi kole.

To'oto'o fa'unga

'Oku malu'i 'e he ngaahi selo 'i ha Semi-permeable plasma manifi 'a ia 'oku kau ki ai ha bilayer phospho-lipid (foki polotiini-lipid bilayer; fa'u 'e hydrophobic lipids mo e molecules 'o e hydrophilic phosphorus mo molecules polotiini 'i loto) pea mo fakatupu ha 'a vahevahe 'i he vaha'a 'o e to'oto'o 'a e ngaahi feitu'u 'i loto (cytoplasm) pea mo e 'atakai 'o e extracellular. 'Oku 'atakai'i 'e ha holisi to'oto'o 'a e fanga ki'i selo 'o e fu'u 'akau mo e fanga ki'i selo prokaryotic. Koe'uhi ko e kehekehe lo ua hono matolu to'oto'o holisi 'o cellulose, ko e fanga ki'i selo 'o e fu'u 'akau 'oku faingata'a ange ke lyse 'i he ngaahi selo 'o e fanga monumanu. 'Oku fakatolonga 'a e to'oto'o 'i loto, hange ko e organelles, lotomalie, mo mitochondrion, 'i he cytoskeleton.
'I he lysing e ngaahi selo, 'oku fakataumu'a ia 'i hono tatau mo hono fakamavahe'i e organelles, polotini, DNA, mRNA pe biomolecules kehe.

'Oku fa'a faka'aonga'i e Sonication ki he sipinga 'o e teuteu 'o e me'a to'oto'o.

Fakatata 1: Ultrasonic to'o 'aki e 'uli mei he ngaahi selo: 'Oku fakahaa'i 'e he microscopic transverse konga (TS) 'o e apical 'o e tefito 'o e mini (Mentha piperita) 'a e faka'enisinia 'o e ngaahi ngaue lolotonga ultrasonic 'o e to'o hingoa mei he ngaahi selo (fakalahi atu e x 2000) [ma'u'anga tokoni: Vilkhu et 'Alama 2011]

Ngaahi founga

'Oku 'i ai ha ni'ihi 'o e ngaahi founga ki he ngaahi selo lysate, 'a ia 'e lava ke ke vahevahe ki he ngaahi me'a fakamisini mo kemikale ai e ngaahi founga, 'a ia 'oku kau ai hono faka'aonga'i 'o e me'afo 'oku vaivai pe ngaahi, hono faka'aonga'i 'o e malohi, pe ko hono faka'aonga'i 'o ha fale ngaohi'anga 'i he fakahoko pe 'o ha nusipepa Falanise. Ko e faingata'a 'o e mapule'i mo e fakatonutonu 'o e ngaahi fakangatangata 'o e founga 'a e e kavenga faingata'a taha 'o e ngaahi founga ko 'eni pea uesia ai.
E tefito'i palopalema 'o e ngaahi founga angamaheni 'o e lysis:

Ngaahi founga kehekehe 'o e lysis

Tepile: 'Oku ma'u 'e he ngaahi founga anga-maheni 'o to'oto'o lysis 'a e ngaahi palopalema lalahi

'I he tafa'aki 'e taha, ko e sonication ko ha me'angaue matu'aki lelei mo falala'anga ki he movetevete to'oto'o 'oku ne faka'ata ki ha mapule'i kakato 'a e ngaahi fakangatangata 'o e sonication. 'Eni 'e fakapapau'i 'e ha selectivity ma'olunga 'i he ngaahi naunau ma'a hono tukuange pea mo e koloa. [Ko e Balasundaram et e 'Alama 2009] 'Oku fe'unga mo e ngaahi fa'ahinga kotoa pe 'o e to'oto'o pea faingofua ke kaunga ki ai 'i he me'afua iiki mo lalahi. 'Oku faingofua pe ke fakama'a 'a e ultrasonicators. 'Oku 'oatu ma'u pe 'i ha homogenizer ultrasonic ma'a-'i he-feitu'u (CIP) mo e ngaue 'a e sterilize-'i he-feitu'u ('ai ha MA'ANGA). 'Oku kau 'a e sonotrode ha Me'aifi Hoane titanium lahi 'a ia 'e lava ke holoholo'i pe na'e 'i he vai pe totongi hono mo'ua ('o fakatatau mo e founga 'o e ngaue). Hono tokanga'i 'o e 'o e ultrasonicators 'oku koe'uhi ko honau robustness meimei neglectable.

lysis

Ko ha founga ongo'ingofua ai lysis. Lolotonga 'a e lysis 'oku faka'auha 'a e malu'i 'o e to'oto'o manifi, neongo e inactivation, denaturation mo e ma'ulalo 'o e polotini extracted 'aki ha 'atakai unphysiological (afe mei he tu'unga 'ulungaanga mahu'inga 'a e pH) kuo pau ke ke ta'ofi. Ko ia, 'i hono fakalukufua lysis 'oku fakahoko 'i ha founga fakapotopoto. Na'e tu'u hake 'a e lahi taha 'o e ngaahi faingata'a mei he ta'emapule'i to'oto'o 'a e faingata'a ko e tupu 'i hano tuku atu untargeted 'o e intracellular kotoa pe 'a e ngaahi naunau pe / mo e denaturation 'o e koloa ki he taketi.

'E lava ke faka'aonga'i 'a e lysis ultrasonic to'oto'o ki he sipinga 'o e teuteu 'i he fale fakatotolo fakakemi pea mo hono ngaohi 'o ha ngaahi tohi lahi. Lomi'i ke fakalahi!

Fakatata 1:200 watts malohi ultrasonic homogenizer UP200Ht mo mapule'i faka'ilekitulonika mo e ngaahi fakamatala fakahangatonu hono lekooti ki to'oto'o falala'anga mo e ngaahi lysis.

Ultrasonic Lysis

Ko e angamaheni, 'e 'ave 'a e lysis 'o e ngaahi founga 'i he loki saienisi 'i he vaha'a 'o e sekoni 'e 15 pea miniti 'e 2. Hange ko ia 'oku faingofua 'aupito ke liliu 'aki hano fokotu'u ha taimi sonication 'a e amplitude pea pehe foki ki hono fili 'a e ngaahi me'angaue totonu 'a hono malohi 'o e sonication, 'oku malava pe ke veteki e membranes to'oto'o fakalelei 'aupito pe fu'u fakavave, 'o makatu'unga pe 'i he fa'unga to'oto'o pea mo e taumu'a 'o e lysis ( e.g. DNA To'ohingoa 'oku fie ma'u 'e sonication hiva le'osi'i, 'a e to'o hingoa polotiini kakato 'a e pekitilia 'oku fie ma'u ha faito'o ha lahi ange). 'E lava ke tokanga'i 'e ha sensor fakafekau'aki 'o e 'ea 'a e mafana 'o e 'ea lolotonga e ngaue pea 'e lava ke faingofua hono mapule'i 'e fakamokomoko'i ('aisi kaukau pe 'oku tafe mai ha ngaahi selo mo fakamokomoko'i saketi fakahaofi) pe 'e sonication 'i he pulsed mode. Lolotonga e sepo-founga sonication, sonication nounou ha siakale ki he ngingila 'o e loloa 'o e taimi 'a e sekoni 'e 1-15 faka'ata 'a dissipation 'o e 'ea vela mo e fakamokomoko'i lolotonga e vaha'ataimi ke toe fakafe'atungia'i.
Kotoa pe tuli kinautolu e ha ngaahi founga 'oku ngaahi kakato mo linearly scalable.

Ultrasonic homogenizer VialTweeter hono teuteu'i 'o e sipinga 'o download 'o 10 hake ke sivi tiupi. (Lomi'i ke fakalahi!)

E device ultrasonic VialTweeter faka'ata 'a e sipinga 'o download teuteu 'o a'u mai ki he vials 10 'i he ngaahi tu'unga tatau pe 'a e founga.

ultrasonic homogenizers

Ko e fa'ahinga kehekehe 'o e Ngaahi me'angaue ultrasonic tuku ki he fakatauhoa 'a e sipinga 'o teuteu e taumu'a pea ke fakapapau'i 'a e fakafiemalie 'o e user-friendliness mo e tafa. Vakili-fa'ahinga ultrasonicators 'oku e ngaahi device angamaheni lahi taha 'i he fale fakatotolo fakakemi. 'Oku nau fe'unga taha mo e teuteu 'o e ngaahi founga iiki mo Mid-lalahi mo e ngaahi tohi 'o e 0.1 'o e mL ki he 1000 mL. Lalahi kehekehe 'a e malohi mo e sonotrodes lava ke fulihi 'a e ultrasonicator ki he sipinga 'o e tohi pea mo e ipu ki he ngaahi ola 'o e sonicating 'o e lelei mo e lelei taha. Ko e fili lelei taha 'a e device vakili ultrasonic taimi 'oku ma'u ai ha sipinga pe 'e taha ke nau mateuteu.

Kapau 'oku ma'u ha ngaahi sipinga lahi ange ke ke mateuteu, e.g. vials 8 'o to'oto'o Fakalelei, ko e ngaahi me'angaue hange ko e VialTweeter pe ha cuphorn ultrasonic 'oku e homogenizer fe'unga taha ki he lysis. 'Oku sonicated 'a e vials ha ngaahi 'i he taimi tatau pe, 'i he malohi tatau pe. Ko 'eni 'oku fakahaofi 'e 'ikai pe ha taimi, ka fakapapau'i foki 'e he faito'o tatau 'o e ngaahi founga kotoa pe, 'a ia 'oku ne 'ai 'a e ngaahi ola 'o e 'i he lotolotonga 'o e sipinga falala'anga mo tatau mo ia. 'Ikai ngata ai, kolosi-faka'uli'i 'e matu'aki mo'oni e ultrasonic sonotrode (vakili ultrasonic 'iloa foki ko, Me'aifi Hoane, tokoni, pe ko e fo'i tuhu) ko e faka'ehi'ehi mei ai. Talu mei he taimi 'oku faka'aonga'i ai 'a e vials, fakamole taimi fakama'a 'a mo e sipinga 'o mole koe'uhi ko e decanting 'a e ngaahi ipu 'oku li'aki leva.
Voliume ma'olunga ange, e.g. ki he faiva fakakomesiale 'o to'oto'o mekehe, hokohoko 'o e ma'u 'o e ngaahi System ultrasonic mo e pa 'a e to'oto'o 'atomi ha tafe 'oku fe'unga mo e taha. 'Oku fakapapau'i mai 'e he e tafe hokohoko pea a'u pe 'o e ngaahi naunau ngaue 'oku fai ki ha sonication 'io. 'E lava ke optimized 'o e kotoa 'o e ngaahi fakangatangata 'o e founga ultrasonic movetevete pea liliu 'a e ngaahi fie ma'u 'o e tohi kole pea mo e naunau to'oto'o pau.

Fa'ifa'itaki'anga lelei 'a e founga ki he ultrasonic lysing 'o e fanga ki'i selo hangatamaki:

  • Teuteu 'o e to'oto'o fakamavahe'i e 'uli: to'oto'o pellets kuo pau ke kakato hono tautau ia 'i ha founga fakapotopoto 'i he homogenizing (fili ho'o founga fakapotopoto fenapasi mo 'analaiso ko 'eni 'o e founga pau e.g. chromatography). Tanaki atu 'a e lysozymes mo e / pe additives kehe, kapau 'e fie ma'u (kuo pau ke toe fenapasi mo mavahevahe / 'oku 'uhinga 'a e fakama'a). Tuifio / faka'uhinga ke tatau e founga fakalelei 'i lalo 'i he sonication vaivai kae 'oua kuo 'oku a'usia kakato fakamavahe'i e 'uli.
  • Ultrasonic lysis: fokotu'u 'a e sipinga 'o e 'i ha kaukau 'aisi. Ki he to'oto'o faingata'a, sonicate 'a e fakamavahe'i 'o e 'uli 'i he Ha'ele 'Anga Ua e 60-90 mafana ('o faka'aonga'i e founga sepo 'a ho'o ultrasonicator).
  • Mavahevahe: Centrifuge e lysate 'a (e.g. 10 min. 'i he toko 10,000 x l; 'i he 4degC). Fakamavahevahe'i e supernatant mei he pellet to'oto'o Fakalelei. Ko e to'oto'o fakakatoa 'o lysate 'a e supernatant. Hili 'ene 'o e supernatant, 'oku ke ma'u ai ha lolo mahino mai 'o e polotiini vaia pe to'oto'o.

'Oku 'a e ngaahi polokalama angamaheni lahi taha ki he ultrasonicators 'i he saienisi 'o e mo'ui mo e biotechnology:

  • Teuteu 'o e fakamatala na'e to'o to'oto'o
  • Faingata'a 'isite, pekitilia, to 'a e ngaahi selo, soft & to'oto'o faingata'a moluu, naunau nucleic
  • Polotiini to'o e 'uli
  • Teuteu mo e li'ekina 'o 'enisaimi (enzyme)
  • Hono ngaohi 'o e antigens
  • DNA To'ohingoa mo / pe ha fragmentation
  • teuteu 'a e liposome
'Oku faka'aonga'i 'e he malohi ma'olunga ha homogenizers hange ko e UIP1000hd ki he to'oto'o 'a e faingata'a mo e to'o hingoa 'i he kulupu (batch) pe e tafe hokohoko 'o e ma'u-neongo e founga. (Lomi'i ke fakalahi!)

Polokalama ultrasonic benchtop hange ko e UIP1000hd 'e lava ke fakahoko 'e he (1kW) 'a e lahi ange 'o e ngaahi tohi 'o e fakamatala totonu.

E ngaahi polokalama manifold 'o ha ngaahi va'a atu 'i he feitu'u he sosaieti 'o e biotechnology, bioengineering, microbiology, molecular paiolosii, Gottingen, immunology, bacteriology, virology, proteomics, fakatupu, koe'uhi, paiolosii to'oto'o, hematology, mo e botany.

Foaki ha mateuteu kakato ki he fakafuofua'i mo e optimization 'o e ngaahi polokalama 'a e kau fakatau, Hielscher Ultrasonics He fale fakatotolo fakakemi founga ultrasonic. Kataki 'o fetu'utaki mai ki ha fakamatala lahi ange!

Ngaahi fakamo'oni fakafolofola/ngaahi tohi

  • Balasundaram, B.; Halisoni, S.; Bracewell, D. G. (2009): Fakalakalaka 'a e koloa tukuange 'a e ngaahi founga pea mo e malohi lahi 'i he palani 'o e bioprocess. Ko e ngaahi feto'aki 'i he Biotechnology 27/8, 2009. p. 477-485.
  • Vilkhu, K.; Ko Manase mo r.; Mawson, r.; Ashokkumar, M. (2011): me'a Ultrasonic fakaakeake mo e liliu 'o e me'akai. 'I: He / Barbosa-Cánovas / Weiss (2011): ha tekinolosia ki he me'akai mo e Bioprocessing. Niu 'Ioke: Springer, 2011 p. 345-368.

Fetu'utaki mai / kole ke ma'u ha fakamatala lahi ange

Talanoa mai kiate kimautolu fekau'aki mo ho'o ngaahi fie ma'u 'o e ngaue'anga. Te mau fokotu'u 'a e ngaahi fakangatangata fe'unga taha hono fokotu'u mo e ngaue ki ho'o ngaue.





Kataki 'o fakatokanga'i ange 'etau Tu'utu'uni totonu fakatautaha.