Hielscher Ultrasonics
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Nt'ot'e ultrasónica muestras pa ensayos ELISA

Ya ensayos komongu ar ELISA ar utilizan ampliamente pa ar diagnóstico in vitro, ar detección proteínas relacionadas ko ar enfermedades ne ar control ar hño (nt'udi, ar seguimiento ar alérgenos alimentarios). Ar nt'ot'e ultrasónica muestras ge 'nar técnica ngut'a, fiable ne reproducible pa lisar células ne aislar proteínas intracelulares, ADN, ARN ne ar orgánulos. Hielscher Ultrasonics ofrece ndunthe soluciones ultrasónicas pa jar nt'ot'e cómoda muestras Nthuts'i, viales múltiples, nja'bu komongu pa placas microtitulación ne placas 96 ar pocillos.

ELISA – Ensayo inmunoabsorción enzimática

ELISA ir bo̲ni ensayo inmunoabsorción ligado enzimas ne ge 'nar técnica ar análisis bioquímico ampliamente utilizada ar categoría ensayos mfats'i jar ligandos. Jar ELISA, bí añade 'nar muestra líquida ja 'nar fase sólida estacionaria ko propiedades ar mfats'i hontho. Normalmente, ar fase sólida estacionaria da t'uni komongu recubrimiento ja 'nar placa pocillo wa placa ELISA. Ne gem'bu̲ bí ar agregan, incuban ne lavan secuencialmente varios reactivos líquidos, ja modo da ngäts'i da produce 'nar cambio óptico (nt'udi, ár nte ar njät'i ir nge ar producto 'nar reacción enzimática) jar líquido final ja ar pozo. Ar cambio óptico permite medir yá 'bede ya analito ir nge nä'ä bí denomina cuantitativo “da hmä". Pa ar da cuantitativa, ar gi japu̲'be̲fi 'nar espectrofotómetro, fluorómetro wa luminómetro pa detectar ne medir ar intensidad da transmitida. Ar sensibilidad ar detección xí influenciada ir nge ar amplificación ar señal Nxoge ya reacciones analíticas. Dado da reacciones ya enzimáticas ya procesos ar amplificación xi hño investigados ne fiables, ar utilizan enzimas pa da t'ot'e jar señal. Ya enzimas ar unen ja ya reactivos detección jar proporciones fijas pa hegi nuna ar Hmunts'i 'nar cuantificación precisa, nä'ä gi mä 'nehe thuuhu ensayo inmunoabsorbente "ligado enzimas jar hmä".
Dado ke ya ensayos ELISA ar realizan jar placas microtitulación yá placas ya 96 pocillos, pädi komongu ar técnica ar ensayo basada jar placas ne bí gi japu̲'be̲fi, ngu, ja ar diagnóstico clínico in vitro, ár nthoni, ár nte fármacos, etcétera, pa detectar ne cuantificar anticuerpos, péptidos, proteínas ne ar hormonas.
Ar técnica ELISA ar gi japu̲'be̲fi xi frecuencia komongu herramienta diagnóstico jar 'ñithi, biotecnología, fitopatología ne 'nehe ge 'nar mahyoni t'e̲ni ya control hño jar múltiples ar industrias.

Configuración nxo̲ge ar VialTweeter: Sonotrodo VialTweeter jar procesador ultrasónico UP200St

Ar xe̲ni nt'ot'e muestras ya ultrasonidos VialTweeter ar gi japu̲'be̲fi pa ar lisis ar celular ne ar extracción proteínas nu'bu ya ensayos ELISA

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Nt'ot'e muestras ultrasónicas 'bu̲ 'be̲tho ELISA

Ante nda pa ga OT'UJE ar ensayo ELISA, ya muestras requieren pasos mfädi komongu lisis celular ne extracción ar proteínas intracelulares, ADN, ARN, etcétera Ar ventaja ar lisis celular ultrasónica ne ar aislamiento proteínas ge ár mextha dätä nt'ot'e, ar fiabilidad ne ar reproducibilidad. Nuya factores mahyoni pa da diagnósticos ne resultados nthoni mextha ar hño

Ventajas lisis ultrasónica 'bu̲ 'be̲tho ELISA

  • Nt'ot'e homogéneo ya muestras
  • Lisis nxo̲ge
  • Extracción nxo̲ge ar proteínas (nt'udi, anticuerpos, ADN)
  • Adaptación óptima ya klase célula
  • Pa 'na tamaño muestra
  • reproducible
  • ar mpat'i controlada
  • Protocolización automática datos jar ar tarheta SD

 

Nuna tutorial gi mä Temu̲ ar klase ar sonicador ge ar mäs xi hño pa yá tareas ya nt'ot'e muestras, komongu ar lisis, ar disrupción celular, aislamiento proteínas, ar fragmentación ya ADN ne ya ARN jar laboratorios, análisis ne nthoni. Elija ar klase ar sonicador ideal pa ár nt'ot'e, volumen muestra, ya 'bede ya muestra ne ya rendimiento. Hielscher Ultrasonics pe̲ts'i ar homogeneizador ultrasónico ideal pa gí.

Tema tingigi mbo jar sonicador perfecto pa ar disrupción ar celular ne ar extracción proteínas jar ciencia ne análisis

Miniatura ar vídeo

 

Nthuts'i nkohi pa ar lisis celular ultrasónica pre-ELISA

  • Pa cultivos celulares: 'Bu̲ 'be̲tho ar lisis celular ultrasónica, centrifugar ya células Nxoge 5 ya t'olo ora da 270 x g jar 'na microcentrífuga. Eliminar el sobrenadante por aspiración y resuspender las células en 30 – 100 μL de tampón RIPA. Tso̲kwa continuación, incuba ar pellet ar célula hielo Nxoge 30 ar min.
  • Nu'bya, ar muestra celular xi hñoki pa ar lisis ultrasónica:
    Utilice 'nar ultrasonido ar klase sonda (hne. ej. UP200Ht ko sonda S26d2) wa 'nar dispositivo ultrasónico multimuestra (nt'udi, VialTweeter pa ar sonicación simultánea asta 10 viales wa ar UIP400MPT pa placas microtitulación yá placas ya 96 pocillos) ir nge yá 'bede ya muestras da necesite hoki.
    Pa ar sonicación jar sonda sola 'nar muestra, bí coloquen ya células tubos ar microcentrífuga 1,5 ar mL.
  • Preajuste ar duración ya ultrasonidos, ar entrada energía Nxoge, modo ciclo y/o yá ngäts'i mpat'i jar menú 'bede ar ultrasonido. 'Me̲hna garantiza 'nar sonicación ne repetibilidad altamente fiables.
  • Inserte ar sonotrodo ne encienda ar dispositivo ultrasónico. Mueva suavemente ar micropunta ar sonda ultrasónica a través de muestra pa sonicar ar muestra ar bí uniforme.
    Mäs xingu ya células, pa ar lisis ultrasónica ar completará 'mefa xta 2 — 4 ciclos 10 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i ar sonicación.
  • 'Mefa xta sonicación, retire ar sonotrodo ar muestra. Ya muestras tsa incubar ar jar hielo Nxoge 5 ar min. Tso̲kwa continuación, centrifugar jar 10.000 x g Nxoge 20 min da granular ya residuos. Transfiera ya sobrenadantes ja 'nar 'ra'yo tubo ar microcentrífuga. Etiquete los analitos y guardar los a -20 °C.
  • Sonotrodo ar ultrasónico ar tsa̲ da limpiar ar limpiando bí adecuadamente ko alkol wa sonicate ja 'nar Baso ar precipitados lleno alkol, ngu, etanol jar 70%. Ga̲tho ya sondas ultrasónicas ar titanio ar xi esterilizar jar autoclave.
Ya ultrasonidos ar klase sonda, komongu ar UP200St ya homogeneizadores tejidos fiables ne ar utilizan ampliamente pa jar nt'ot'e muestras jar genética, ngu, pa ar lisis ar E. coli

Extracción proteínas células ar E. coli ko ar sonda ultrasónica UP200St

Pa homogeneizados ar tejidos:

  • Enjuague ar tejido PBS helado (0,01 M, pH = 7,4) para eliminar completamente el exceso de sangre de hemólisis.
  • Pesar tejido (riñón, mu̲i, pulmón, bazo, etcétera) ne macerar nä'ä jar t'olo trozos, da homogeneizan jar PBS. Volumen PBS requerido xi relacionado ko ar be̲xu ar tejido. Ngu t'uni jar nt'ot'e Nxoge, 1 g tejido requiere aprox. 9 ml PBS. Ar recomienda añadir 'nar inhibidor ar proteasa ja ar PBS. (Alternativamente, ar tsa̲ da utilizar RIPA wa tampón ar lisis hipotónica da contiene 'nar cóctel inhibidores proteasa ne fosfatasa).
  • Dependiendo de ar tamaño ar tejido, breve 'nar nt'ot'e ya vórtice (aprox. 1 — 2 min. jar pulsos 15 seg.) to da útil pa pretratar ar tejido.
  • Monta 'nar micropunta, ngu, S26d2, ja ir ultrasonido. Coloque tubo muestra ko ar tejido 'nar nsaha hielo.
  • Sonicar dá gi 'ñudi ko ár ultrasonido, ngu, UP200St (80% ar amplitud) Nxoge 1 ar min. jar modo pulso (15 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i encendido, 15 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i ar pausa). Mantenga ar muestra jar nsaha hielo.
  • Tso̲kwa continuación, ya homogeneizados ar centrifugan pa da pools específicos (citosólicos, nucleares, mitocondriales wa lisosomales) jar 'mui enriquecer proteína pa ár análisis. Ya ar centrifugar ar muestra Nxoge 5 ya t'olo ora jar 5000 × g, bí recupera ar sobrenadante.
Sonotrodo MTP — 24 — 8 — 96 mä ar hñäto sondas ultrasónicas da sonicación yá pocillos ya placas microtitulación.

Sonotrodo MTP — 24 — 8 — 96 mä ar hñäto sondas ultrasónicas da sonicación yá pocillos ya placas microtitulación.

Control fiable ar mpat'i Nxoge ar sonicación

Ar mpat'i ge 'nar factor crucial da influye jar jar proceso ne honja hontho mahyoni pa ar nt'ot'e ya muestras biológicas, ngu, pa nu'bu ar degradación térmica ya proteínas. Ga̲tho ya técnicas mecánicas nt'ot'e muestras, komongu ar sonicación genera pa. Wat'i, ar mpat'i ya muestras to controlar ar za̲ nu'bu̲ da utilizan ya dispositivos ultrasónicos Hielscher. Bí presentamos ndunthe ya opciones pa monitorizar ne controlar ar mpat'i yá muestras Mente ya gi hoki ko ar ultrasonido ar klase sonda wa ar VialTweeter ar nt'ot'e preanalítica.

  1. Monitorización ar mpat'i ar muestra: ga̲tho ya procesadores ultrasónicos digitales ar Hielscher gi 'bu̲hu̲ equipados 'nar software inteligente ne 'nar sensor mpat'i enchufable. Conecte sensor mpat'i ja ar dispositivo ultrasónico (hne. ej.,) UP200Ht, UP200St, VialTweeter, Sonicator de placa multipocillo UIP400MTP) ne inserte ár nts'ä sensor mpat'i jar 'na ya tubos muestra. A través de 'nar pantalla táctil 'bede jar njät'i, to da t'ot'e jar menú ar procesador ultrasónico 'nar rango ar mpat'i específico da sonicación ár muestra. Ar ultrasonido ar detendrá automáticamente nu'bu̲ ar alcance ar mpat'i máxima ne detendrá asta ar mpat'i ar muestra baje ár hmädi mäs hñets'i'i ar mpat'i establecida ∆. Tso̲kwa continuación, ar sonicación pengi da du'mi bí automáticamente. Nuna ar función inteligente evita degradación inducida ir nge ar pa.
  2. Dige ar ar xe̲ni ultrasónica multimuestra VialTweeter, bloque titanio, da contiene ya tubos muestra, ar tsa̲ da preenfriar. Coloque bloque VialTweeter (ho̲ntho ar sonotrodo hinda transductor!) jar ar refrigerador wa congelador pa preenfriar bloque titanio ayuda bí posponer ar aumento mpat'i ja ar muestra. Nu'bu̲ xähmä, ar muestra 'nehe ar tsa̲ da preenfriar.
  3. Utilice 'nar nsaha hielo wa hielo seco pa enfriar Nxoge ar sonicación. Coloque ár (s) tubo (s) ar muestra Nxoge ar sonicación 'nar nsaha hielo. Pa ar VialTweeter, use 'nar bandeja tx'u̲tho profunda ár ñut'i ko xingu ya hielo seco ne coloque VialTweeter dige ar hielo seco pa ndi ar pa tsa disipar ar rápidamente.

Clientes nga̲tho utilizan ya ultrasonidos ar klase sonda Hielscher, nja'bu ngu ya unidades sonicación multimuestra VialTweeter ne UIP400MTP, pa ár 'be̲fi diario nt'ot'e muestras jar laboratorios biológicos, bioquímicos, médicos ne clínicos. Jamädi ar software inteligente ne da control mpat'i ya procesadores Hielscher, ar mpat'i controla dets'e fiable ne bí evita ar degradación ar muestra inducida ir nge ar pa. Ar nt'ot'e muestras ya ultrasonidos ko ya soluciones ultrasónicas Hielscher ofrece resultados altamente fiables ne reproducibles.
Mäs ungumfädi dige ar sonicación mar hñets'i rendimiento utilizando sonicador placas multipocillo UIP400MTP pa ya ensayos.

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Ya homogeneizadores ultrasónicos mar hñets'i ar cizallamiento bí utilizan jar procesamiento laboratorio, sobremesa, piloto ne industrial.

Hielscher Ultrasonics fabrica homogeneizadores ultrasónicos mar hñets'i rendimiento pa aplicaciones ar mezcla, dispersión, emulsificación ne extracción bí escala ar laboratorio, piloto ne industrial.



Bibliografía yá Referencias

Datos da Bale ar penä ga pädi

¿Temu̲ xingu ya ELISA 'bu̲i?

'Bu̲i varios xingu ya ELISA, da distinguen ir nge ár ndui funcionamiento. Pädi komongu ELISA directo, ELISA indirecto, ELISA sándwich, ELISA competitivo ne ELISA inverso. Tso̲kwa continuación, bí presentamos 'nar visión Nxoge ja ya 'na'ño xingu ya ELISA ne ja yá características ne ya.
ELISA to ejecutar ar ja 'nar formato cualitativo wa ya cuantitativo. Ya resultados cualitativos proporcionan 'nar nt'uni positivo wa negativo simple, mente da ja ar ELISA cuantitativo ar densidad óptica (DO) ja ar muestra ar gi hye̲ki ko 'nar curva estándar, da suele to 'nar dilución serie 'nar njäts'i ya concentración conocida ar molécula ar objetivo.

ELISA directo

Ar ELISA directo ge ar dets'e ensayo mäs simple Elisa, ho gi Honto ar japu̲'be̲fi 'nar anticuerpo primario marcado ko ya enzimas ne hingi ar requieren anticuerpos secundarios. Ar anticuerpo primario marcado ko ar enzima bí une Hmunts'i ja ar diana, es decir, 'na jar antígeno. Ár njäts'i ya antígeno tamponada ar agrega ja ya pocillo 'nar placa microtitulación (nu'bu̲ da nthe̲hu̲ 'ra placas ar 96 pocillos, placas ELISA), ho bí adhiere bí superficie plástica a través de interacciones carga. Nu'bu̲ enzima unida ar anticuerpo primario reacciona ko ár sustrato, produce 'nar señal visible ke ar tsa̲ da medir ir nge ya espectrofotómetro, fluorómetro wa luminómetro.

ELISA indirecto

Pa ar ntsa̲ ELISA indirecta, ar requiere tanto 'nar anticuerpo primario ngu 'nar anticuerpo secundario. Wat'i, bí diferencia ar ELISA directo, hingi anticuerpo primario, ge ar anticuerpo secundario ar marca ko 'nar enzima. Ar antígeno bí inmoviliza ar placa ar pocillo ne ar une ar anticuerpo primario. 'Mefa, ar anticuerpo secundario marcado ko ar enzima bí une bí anticuerpo ar primario. Ar ngäts'i, ar enzima unida ar anticuerpo secundario reacciona ko ár sustrato pa producir 'nar señal visible nä'ä to da detectada.

Sándwich ELISA

Mente ne ya pruebas ELISA directas ne indirectas, ar antígeno ar inmoviliza ne ar recubre ko ar superficie ar placa ar pocillo, ar ELISA jar sándwich ar anticuerpo bí inmoviliza jar superficie plástica ar placa ELISA. Ya anticuerpos inmovilizados ar ELISA sándwich ar pädi komongu anticuerpos captura. 'Nehe ya anticuerpos captura, ja ar ELISA sándwich 'nehe ar requieren ya llamados anticuerpos detección. Ya anticuerpos detección incluyen 'nar anticuerpo ar detección primaria hingi mbeni ne 'nar anticuerpo ar detección secundaria marcado ko ya enzimas.
Ar nt'ot'e escalonada, ar antígeno ya 'befi da une ya ar anticuerpo ar captura inmovilizado ar placa. Ne gem'bu̲ bí anticuerpo ar detección primaria ar une ja ar antígeno. 'Mefa, anticuerpo detección secundaria ar une da anticuerpo detección primaria. Ja ar bi thogi final ar ar reacción, ar enzima reacciona ko ár sustrato pa producir 'nar señal visible ke ar tsa̲ da detectar ópticamente.

ELISA competitivo

Ar ELISA competitivo, 'nehe conocido komongu ELISA inhibición, ge ar klase ar ELISA xí complejo ngetho implica njapu'befi ya antígeno 'nar inhibidor. Kadu 'na ya hñu formatos, ELISA, directo, indirecto ne sándwich, ar tsa̲ da adaptar ya ar formato ELISA competitivo. Jar ELISA competitivo, antígeno ar inhibidor ne ar antígeno ya 'befi compiten ya unir bí ma anticuerpo ar primario.
Pa 'nar ELISA competitivo, ar anticuerpo hingi mbeni ar incuba jar 'bu̲i Kwä ár antígeno, es decir, ar 'nar muestra. Nuya complejos anticuerpo yá antígeno unidos ar añaden da pocillo recubierto ar antígeno.
Ar placa ar lava pa da hñäki ya anticuerpos hingi unidos. Ar ELISA competitivo recibe ár thuhuu nu'bya hecho da cuanto mäs antígeno 'bu̲i jar muestra, mäs complejos antígeno — anticuerpo mi o̲t'e. 'Me̲hna ir bo̲ni ke ja menos anticuerpos hingi unidos da 'mui da unir ar ja ar antígeno nu jar pocillo ne ya antígenos tsa competir ja 'nar anticuerpo disponible. Bí añade 'nar anticuerpo secundario, da coincide ko ar anticuerpo primario. Nuna segundo anticuerpo xi unido jar ar enzima. Nu'bu̲ bí agrega ar sustrato, ya enzimas restantes producen 'nar señal cromogénica wa fluorescente.
Jar nuna punto, ar reacción bí detiene pa nu'bu ar eventual saturación ar señal.
'Ra ya kits ELISA ar 'bets'i incluyen 'nar antígeno ligado ja 'nar enzima en lugar de anticuerpo ligado 'nar enzima. Antígeno marcado compite ir nge ya sitios primarios mfats'i ar anticuerpo ko ar antígeno muestra (hinda marcar). Cuanto nja'bu̲ antígeno xi muestra, mäs antígeno ar marcado bí retendrá ja ar pocillo ne mäs xí nze̲di ge ar señal.

ELISA inverso

Ar ELISA inverso hingi gi japu̲'be̲fi placas pocillos, ho̲ntho mi he̲gi ya antígenos suspendidos jar líquido ntsa̲. Ar ntsa̲ ELISA inversa mide yá 'bede ya anticuerpo unido a través de ar antígeno. Bí desarrollado específicamente pa detectar ne hyoni ar proteína ar envoltura ar virus ar Nilo Occidental ne honja ar capaz ar tingigi mbo anticuerpos específicos ar virus.

¿Temu̲ marcadores enzimáticos ar utilizan da ELISA?

Xtí ar Nthuts'i proporciona ya marcadores enzimáticos pa mäs ngatho utilizados ya ensayos ELISA, da permiten medir ya resultados ar ensayo ja ar finalizar.

  • OPD (diclorhidrato ar o — fenilendiamina) bí japi ámbar pa detectar HRP (peroxidasa ar rábano picante), nä'ä da menudo usa komongu proteína conjugada.
  • TMB (3,3′,5,5′(— tetrametilbencidina) bí japi azul nu'bu̲ ar detecta HRP ne bí japi nk'axt'i 'mefa xta adición ácido sulfúrico wa ya fosfórico.
  • ABTS (2,2′—Azinobis [ácido 3 — etilbenzotiazolina — 6 — sulfónico] — sal diamónica) bí pengi xí ar detectar HRP.
  • PNPP (p-fosfato nitrofenilo, sal disódica) bí pengi nk'axt'i ar detectar fosfatasa alcalina.

Estaremos encantados ar da mä ár proceso.

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