Tecnología ultrasonido Hielscher

Nt'ot'e muestras ultrasónicas pa ensayos ELISA

Ya ensayos komongu ar ELISA ar utilizan ampliamente pa ar diagnóstico in vitro, ar detección proteínas relacionadas ko ar enfermedades ne ar control ar hño (nt'udi, ar monitoreo ar alérgenos alimentarios). Ar nt'ot'e muestras ultrasónicas ge 'nar técnica ngut'a, fiable ne reproducible pa análisis celulares ne aislar proteínas intracelulares, ADN, ARN ne ar orgánulos. Hielscher Ultrasonidos ofrece ndunthe soluciones ultrasónicas pa jar nt'ot'e mahyoni muestras Nthuts'i, múltiples viales, nja'bu komongu pa placas microtíter ne placas 96 ar me̲he̲.

Elisa – Ensayo inmunoabsorbente ligado enzimas

ELISA ir bo̲ni ensayo inmunoabsorbente ligado enzimas ne ge 'nar técnica ar análisis bioquímico ampliamente utilizada ar categoría ensayos mfats'i jar ligandos. Jar ELISA, bí añade 'nar muestra líquida ja 'nar fase sólida estacionaria ko propiedades ar mfats'i hontho. Normalmente, ar fase sólida estacionaria da t'uni komongu recubrimiento ja 'nar placa pozo wa placa ELISA. Tso̲kwa continuación, varios ya reactivos líquidos ar añaden, incuban ne lavan secuencialmente, ja modo da ngäts'i da produce 'nar cambio óptico (nt'udi, ár nte njät'i ya producto 'nar reacción enzimática) jar líquido final ja ar pozo. Ar cambio óptico permite medir yá 'bede ya ar analito ja 'nar llamado “leyendo". Pa ar da cuantitativa, ar gi japu̲'be̲fi 'nar espectrofotómetro, fluorómetro wa luminómetro pa detectar ne medir ar intensidad da transmitida. Ar sensibilidad ar detección xí influenciada ir nge ar amplificación ar señal Nxoge ya reacciones analíticas. Dado da reacciones ya enzimáticas gi 'bu̲hu̲ xi hño investigadas ne ar utilizan procesos ar amplificación fiables, ya enzimas ar utilizan pa da t'ot'e jar señal. Ya enzimas gi 'bu̲hu̲ vinculadas ja ya reactivos detección jar proporciones fijas pa hegi nuna ar Hmunts'i 'nar cuantificación precisa, nä'ä gi mä 'nehe thuuhu ensayo inmunoabsorbente "ligado enzimas jar hmä".
Komo ya ensayos ELISA ar realizan jar placas microtíter yá placas ya 96 me̲he̲, pädi komongu técnica ensayo basado jar placas ne bí gi japu̲'be̲fi, ngu, jar diagnóstico clínico in vitro, nthoni, nte fármacos, etc. pa detectar ne cuantificar anticuerpos, péptidos, proteínas ne ar hormonas.
Ar técnica ELISA ar gi japu̲'be̲fi xi frecuencia komongu herramienta diagnóstico jar 'ñithi, biotecnología, patología vegetal ne 'nehe ge 'nar mahyoni t'e̲ni ya control hño jar múltiples ar industrias.

Completar ar instalación VialTweeter: he̲'mi VialTweeter ja ar procesador ultrasónico UP200St

Ar xe̲ni nt'ot'e muestras ultrasónicas VialTweeter ar gi japu̲'be̲fi pa ar lelisis ar celular ne ar extracción proteínas nu'bu ya ensayos ELISA

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Nt'ot'e muestras ultrasónicas hontho ELISA

Ante nda pa ga OT'UJE ar ensayo ELISA, ya muestras requieren pasos mfädi tales como ar lysis ar celular ne ar extracción ar proteínas intracelulares, ADN, ARN, etc. Ar ventaja ar lysis celular ultrasónica ne ar aislamiento proteico ge ár mextha dätä nt'ot'e, ar fiabilidad ne ar reproducibilidad. Nuya factores mahyoni pa da diagnósticos mextha ar hño ne resultados nthoni

Ventajas lísis ultrasónica hontho ELISA

  • Ár nt'ot'e muestras homogéneos
  • Lelisis nxo̲ge
  • Extracción nxo̲ge ar proteínas (nt'udi, anticuerpos, ADN)
  • Adaptación óptima ya klase celda
  • Pa 'na tamaño muestra
  • reproducibles
  • Tsoxpa controlada
  • Nthuts'i nkohi automático ar datos jar ar tarheta SD

Nthuts'i nkohi pa ar lísis celular ultrasónica pre-ELISA

Sonda ar klase insonifier UP200St pa lisis

  • Pa cultivos celulares: 'Bu̲ 'be̲tho ar lysis celular ultrasónica, células centrífugas Nxoge 5 ya t'olo ora da 270 x g jar 'na microcentrífuga. Retire sobrenadante ir nge ya células ya aspiración ne ya resuspendida jar 30 — 100 l tampón RIPA. Ne gem'bu̲ bí incubar ar pellet celular dige ar hielo Nxoge 30 ar min.
  • Nu'bya, ar muestra celda xi hñoki pa ar lílisis ultrasónica:
    Utilice 'nar ultrasonicador ar klase sonda (nt'udi. UP200Ht ko sonda S26d2) wa 'nar dispositivo ultrasónico multimuestra (nt'udi, VialTweeter pa sonicación simultánea asta 10 viales wa ar UIP400MPT pa placas microtíter yá placas ya 96 me̲he̲) dependiendo de yá 'bede ya muestras da necesite hoki.
    Pa ar sonicación ar klase sonda sola 'nar muestra, coloque ya células tubos ar microcentrífuga 1,5 ar ml.
  • Ajuste mpakuthuu ár duración ultrasónica, entrada energía Nxoge, modo ciclo ne / wa ntsoni mpat'i jar menú 'bede ar ultrasonicador. 'Me̲hna garantiza 'nar sonicación ne repetibilidad altamente fiables.
  • Inset ar sonotrodo ne ar encienda ar dispositivo ultrasónico. Mueva suavemente ar micro-punta ar sonda ultrasónica a través de muestra pa sonicar dá gi 'ñudi uniformemente.
    Mäs xingu ya células, pa ar lysis ultrasónica ar completará 'mefa xta 2 — 4 ciclos sonicación 10 ar seg.
  • 'Mefa xta sonicación, retire ar sonotrodo ar muestra. Ya muestras tsa da incubadas jar hielo Nxoge 5 ar min. Ne gem'bu̲ bí centrifugar bí 10.000 x g Nxoge 20 ya t'olo ora pa ar peletizar ya escombros. Transfiera ya sobrenadantes ja 'nar 'ra'yo tubo ar microcentrífuga. Etiquetar ya analitos ne conservar jar — 20oC.
  • Ar sonotrodo ar ultrasónico ar tsa̲ da limpiar limpiando bí correctamente ko alkol wa sonicado ja 'nar Baso ar precipitados lleno alkol, ngu, 70% etanol. Ga̲tho ya sondas ultrasónicas nu'u̲ xi hokya ar titanio ya autoclavables.

Pa Homogeneizar tejidos:

  • Enjuague ar tejido PBS helado (0, 01M, pH — 7, 4) pa da hñäki ya exceso ya ji hemólisis ts'o̲e.
  • Pesar tejido (riñón, mu̲i, pulmón, bazo, etc.) ne macerar nä'ä jar trozos t'olo, da homogeneizan jar PBS. Volumen PBS requerido xi relacionado ko ar be̲xu ar tejido. Ngu t'uni jar nt'ot'e Nxoge, 1g tejido requiere aprox. 9mL PBS. Ar recomienda añadir 'nar inhibidor ar proteasa ja ar PBS. (RIPA wa tampón lelisis hipotónica da contiene ya proteasa ne cóctel inhibidor ar fosfatasa ar tsa̲ da utilizar alternativamente.)
  • Dependiendo de ar tamaño ar tejido, 'nar nt'ot'e hingi maa ar vórtice (aprox. 1 — 2 min. jar 15 seg. pulsos) to da útil pa japi mpakuthuu ar tejido.
  • Monte 'nar micro-punta, ngu S26d2, ko ár ultrasonicador. Coloque tubo muestra ko ar tejido 'nar nsaha hielo.
  • Sonicar dá gi 'ñudi ko ár ultrasonicador, ngu, UP200St (80% amplitud) Nxoge 1 min. jar modo pulso (15 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i encendido, 15 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i ar pausa). Mantenga ar muestra jar nsaha hielo.
  • Ya homogeneizatos ar centrifugan pa da piscinas específicas (citosólicas, nucleares, mitocondriales wa lisosomales) jar 'mui enriquecer proteína pa ár análisis. Ya ar centrifugar ar muestra Nxoge 5 ya t'olo ora da 5000×g, bí recupera ar sobrenadante.
Sonotrodo MTP — 24 — 8 — 96 pe̲ts'i hñäto sondas ultrasónicas da sonicación ya me̲he̲ placas microtíter.

Sonotrodo MTP — 24 — 8 — 96 pe̲ts'i hñäto sondas ultrasónicas da sonicación ya me̲he̲ placas microtíter.

Control mpat'i fiable Nxoge ar sonicación

Ar mpat'i ge 'nar factor crucial da influye jar proceso ar hontho mahyoni pa ar nt'ot'e ya muestras biológicas, ngu, pa da mä 'met'o degradación térmica proteínas. Ga̲tho ya técnicas mecánicas nt'ot'e muestras, komongu ar sonicación crea pa. Wat'i, ar mpat'i ya muestras to da xi hño controlada nu'bu̲ da utilizan ya dispositivos Hielscher Ultrasonics. Bí presentamos ndunthe ya opciones pa monitorear ne controlar ar mpat'i yá muestras Mente ya preparamos ko ar ultrasonicador ar klase sonda wa ar VialTweeter pre — analíticamente.

  1. Monitorización ar mpat'i ar muestra: ga̲tho ya procesadores ultrasónicos digitales Hielscher gi 'bu̲hu̲ equipados 'nar software inteligente ne 'nar sensor mpat'i conectable. Conecte sensor mpat'i ja ar dispositivo ultrasónico (hne. ej.,) UP200Ht, UP200St, VialTweeterUIP400MTP) ne inserte ár nts'ä sensor mpat'i jar 'na ya tubos muestra. A través de ar pantalla táctil ar njät'i 'bede, pe configurar jar menú ar procesador ultrasónico 'nar rango ar mpat'i específico pa ár sonicación ar muestra. Ar ultrasonicador ar detendrá automáticamente nu'bu̲ ar alcance ar mpat'i máxima ne detenga asta ar mpat'i ar muestra baje ár hmädi mäs hñets'i'i ar mpat'i establecida ∆. Tso̲kwa continuación, ar sonicación ar gi du̲i automáticamente ar nuevo. Nuna ar función inteligente evita degradación inducida ir nge ar pa.
  2. Dige ar ar xe̲ni multimuestra ultrasónica VialTweeter, bloque titanio, da sostiene ya tubos muestra, ar tsa̲ da preenfriar. Coloque bloque VialTweeter (ho̲ntho ar sonotrodo hinda transductor!) jar ar refrigerador wa congelador pa preenfriar bloque titanio ayuda bí posponer ar aumento ar mpat'i ja ar muestra. Nu'bu̲ xähmä, muestra jar hä 'nehe ar tsa̲ da preenfriar.
  3. Use 'nar nsaha hielo wa hielo seco pa enfriar Nxoge ar sonicación. Coloque ar (ya) tubo (s) ar muestra Nxoge ar sonicación 'nar nsaha hielo. Pa ar VialTweeter, utilice 'nar bandeja tx'u̲tho profunda ár ñut'i ko xingu ya hielo seco ne coloque VialTweeter dige ar hielo seco pa ndi ar pa tsa disipar ar rápidamente.

Ya clientes nga̲tho utilizan ar sonda-ultrasonidos Hielscher, nja'bu̲ komongu ya unidades sonicación multimuestra VialTweeter ne UIP400MTP pa ár 'be̲fi diario nt'ot'e muestras jar laboratorios biológicos, ar bioquímicos, ya médicos ne ya clínicos. Ar software ar inteligente ne ar control mpat'i ya procesadores Hielscher, ar mpat'i controla dets'e fiable ne bí evita ar degradación muestra inducida ya pa. Ar nt'ot'e muestras ultrasónicas ko soluciones ultrasónicas Hielscher ofrece resultados altamente fiables ne reproducibles!

Ja ar contacto ko ngekihe! Yá preguntar ga!

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Utilice da ku̲hu̲ formulario pa da 'yadi ungumfädi adicional dige ar procesadores ultrasónicos, ar aplicaciones ne ar precio. Estaremos encantados da mä ár proceso ko nu'i ne bí ofrecer 'nar ko ya ultrasónico da cumpla ko yá requisitos!









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Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

Hielscher Ultrasonidos fabrica homogeneizadores ultrasónicos mar hñets'i rendimiento pa aplicaciones ar mezcla, dispersión, emulsión ne extracción jar laboratorio, ar piloto ne ar escala industrial.

Ot'a yá Referencias



Hechos Bale ar penä ga pädi

Xingu ya ELISA

'Bu̲i varios xingu ya ELISA, da distinguen ir nge ár ndui funcionamiento. Ar pädi komongu ar ELISA directa, ELISA indirecto, sándwich ELISA, ELISA competitivo ne ELISA inversa. Tso̲kwa continuación, bí presentamos 'nar visión Nxoge ya 'na'ño xingu ELISA ne ja yá características ne ya.
ELISA to ejecutar ar ja 'nar formato cualitativo wa ya cuantitativo. Ya resultados cualitativos proporcionan 'nar nt'uni positivo wa negativo simple, mente da ja ar ELISA cuantitativo ar densidad óptica (OD) ja ar muestra ar gi hye̲ki ko 'nar curva estándar, da suele to 'nar dilución serie 'nar njäts'i ya concentración conocida ar ar molécula diana.

ELISA directo

Ar ELISA directo ge ar dets'e ensayo mäs simple Elisa, ho ho̲ntho ar gi japu̲'be̲fi 'nar anticuerpo primario etiquetado jar enzimas ne hingi ar requieren anticuerpos secundarios. Anticuerpo primario ko etiqueta enzimática ar une Hmunts'i jar objetivo, es decir, antígeno. Ár njäts'i ya antígeno tamponado ar añade ja ya pozo 'nar placa microtíter (nu'bu̲ da nthe̲hu̲ 'ra placas ar 96 me̲he̲, placas ELISA), ho bí adhiere bí superficie ar plástico a través de interacciones carga. Nu'bu̲ enzima vinculada ar anticuerpo primario reacciona ko ár sustrato, produce 'nar señal visible ke ar tsa̲ da medir a través de ar espectrofotómetro, ar fluorómetro wa ar luminómetro.

ELISA indirecto

Pa ar ntsa̲ ELISA indirecta, ar requieren tanto 'nar anticuerpo primario ngu 'nar anticuerpo secundario. Wat'i, contrariamente jar ELISA directo, hingi anticuerpo primario, pe ar anticuerpo secundario xi etiquetado ko 'nar enzima. Ar antígeno bí inmoviliza ar placa ar pozo ne ar une ir nge ar anticuerpo primario. 'Mefa, ar anticuerpo secundario etiquetado enzimas ar une bí anticuerpo ar primario. Ar ngäts'i, ar enzima vinculada ar anticuerpo secundario reacciona ko ár sustrato pa producir 'nar señal visible ke ar tsa̲ da detectar.

Sandwich ELISA

Mente da ja ya pruebas ELISA directas ne indirectas, ar antígeno ar inmoviliza ne ar recubre ar superficie ar placa ar pozo, ja ya sándwich ELISA ar anticuerpo bí inmoviliza bí superficie plástica ar placa ELISA. Ya anticuerpos inmovilizados sándwich ELISA ar pädi komongu anticuerpos captura. 'Nehe ar anticuerpos captura, ja ya sándwich 'nehe ar requieren ya llamados anticuerpos detección. Ya anticuerpos detección incluyen 'nar anticuerpo detección primaria hinda etiquetar ne 'nar anticuerpo ar detección secundaria etiquetado jar enzimas.
Paso tso̲kwa paso, ar antígeno ya 'befi da une ya ar anticuerpo ar captura inmovilizado ar placa. Ne gem'bu̲ bí anticuerpo ar detección primaria ar une ja ar antígeno. 'Me̲fa, ar anticuerpo ar detección secundario ar une da anticuerpo detección primaria. Ja ar bi thogi ar reacción final, ar enzima reacciona ko ár sustrato pa producir 'nar señal visible ke ar tsa̲ da detectar ópticamente.

ELISA competitivo

Ar ELISA competitivo, 'nehe conocido komongu inhibición ELISA, ge ar klase ELISA mäs complejo ngetho implica njapu'befi ya antígeno 'nar inhibidor. Kadu 'na ya hñu formatos, directo, indirecto ne sándwich ELISA, ar tsa̲ da adaptar ya ar competitivo formato ELISA. Jar ELISA competitivo, antígeno ar inhibidor ne ar antígeno ya 'befi compiten ir nge ar mfats'i ar anticuerpo primario.
Pa ELISA competitivo, ya anticuerpos hingi etiquetados ar incuban jar 'bu̲i Kwä ár antígeno, es decir, gi 'ñudi. Nuya complejos anticuerpos yá antígenos enlazados ar añaden da pozo recubierto ar antígeno.
Ar placa ar lava, ja modo ne da eliminan ya anticuerpos hingi unidos. ElISA competitivo pe̲ts'i ár thuhuu nu'bya hecho da cuanto mäs antígeno 'bu̲i ja ar muestra, mäs complejos antigen — anticuerpos mi o̲t'e. 'Me̲hna ir bo̲ni ke ja menos anticuerpos hingi unidos da 'mui da unir ar ja ar antígeno nu jar pozo ne ya antígenos tsa competir ja 'nar anticuerpo disponible. Bí añade 'nar anticuerpo secundario, da coincide ko ar anticuerpo primario. Nuna segundo anticuerpo xi relacionado ko ar enzima. Nu'bu̲ bí añade ar sustrato, ya enzimas restantes producen 'nar señal cromogénica wa fluorescente.
Jar nuna punto, ar reacción bí detiene pa nu'bu ar saturación final ar señal.
'Ra ya kits ELISA competitivos incluyen 'nar antígeno ligado enzimas en lugar de anticuerpo ligado enzimas. Antígeno etiquetado compite ir nge ya sitios mfats'i primaria anticuerpos ko ar antígeno muestra (hinda etiquetar). Cuanto nja'bu̲ antígeno xi ja ar muestra xí antígeno ar etiquetado ar conservará nu jar pozo ne mäs fuerte ge ar señal.

Rever ar ELISA

Rever ar ELISA hingi gi japu̲'be̲fi placas pozo, pe he̲gi ya antígenos suspendidos jar líquido ntsa̲. Ar ntsa̲ ELISA inversa mide yá 'bede ya anticuerpos enlazados a través de ar antígeno. Bí desarrollado específicamente pa detectar ne hyoni ar proteína envoltura ar virus ar Nilo Occidental ne honja ar capaz ar tingigi mbo anticuerpos específicos ar virus.

Marcador enzimático utilizado pa ELISA

Xtí ar Nthuts'i gi 'ñudi ya marcadores enzimáticos pa mäs ngatho utilizados ya ensayos ELISA, da permiten medir ya resultados ar ensayo ja ar finalizar.

  • OPD (dihidrocloruro ar o — fenilenimina) bí japi ámbar pa detectar HRP (Peroxidasa ar Rábano picante), nä'ä da menudo ar gi japu̲'be̲fi komongu 'nar proteína conjugada.
  • TMB (3,3′,5,5′(— tetrametilbenzidina) bí pengi azul ar detectar HRP ne bí japi nk'axt'i 'mefa xta adición ácido sulfúrico wa ya fosfórico.
  • ABTS (2,2′(— Azinobis [3 — etilbenzotiazolina — 6 — ácido sulfónico] — sal ar diamonio) bí pengi xí ar detectar HRP.
  • PNPP (Fosfato ar Nitrofenilo, Sal Disódica) bí pengi nk'axt'i ar detectar fosfatasa alcalina.