Producción ultrasónica betaglucanos esquizofilanos altamente purificados
Schizophyallan ge 'nar hongo β — glucano ko propiedades inmunomoduladoras. Pa efectos medicinales altamente activos, ar esquizofilano gi 'ñehe 'nar hñets'i'i be̲xu molecular pa mostrar xi hño 'nar biodisponibilidad. Ar xi demostrado ne ar ultrasonicación reduce ar be̲xu molecular ar esquizofilano. Ngu nt'ot'e confiable ne xi hño, ar sonicación ar to da t'uni hingi hembi da pa ar producción esquizofilán hñets'i'i be̲xu molecular.
Hongos Schizophyllum ne extracción ultrasónica betaglucano
Ya especies hongo Schizophyllum crecen ja ya 'mui ja ya zaa jar descomposición 'mefa xta ya mpa̲di lluviosas. Ya cuerpos frutales ar recogen ja ar estación seca. Ya especies Schizophyllum ya ricas jar compuestos bioquímicos komongu ya glucanos ne, ir bí consumen hontho ja ya ximha̲i tropicales komongu nts'i ne medicinas. Nu'bya yá propiedades inmunomoduladoras, antifúngicas, antineoplásicas ne antivirales, Schizophyllum commune, 'nehe conocida komongu hongo Splitgill, xi atraído jar compañías biotecnológicas ne farmacéuticas.
Polisacárido esquizofilano, 'nehe conocido komongu ar sizofiran, sonifilan wa sizofilan, ge ar principal β — glucano da o 'mu̲i ya hongos Schizophyllum, da ofrecen ar altamente efectivo bioactivo β — glucano esquizofilán.
Ya hongos Schizophyllum commune crecen ja ya 'mui ja ya zaa, ar micelio 'nehe ar tsa̲ da cultivar jar nhñuni fermentación. Pa aplicaciones farmacéuticas ne cosméticas, esquizofilán hñets'i'i be̲xu molecular ge xingu mäs xi hño da esquizofilán mar hñets'i be̲xu molecular. 'Me̲hna ar da jar hecho ne ar esquizofilán hñets'i'i be̲xu molecular gi 'ñudi 'nar biodisponibilidad ne tasas ar absorción significativamente mpädi mäs xi. 'Nehe, esquizofilán mar hñets'i be̲xu molecular ge tso̲kwa menudo problemático ja ya aplicaciones, ya da xta komongu ar nt'uni 'nar mextha viscosidad yá soluciones ya acuosas.
Reducción ultrasónica ar tamaño ge 'nar técnica altamente efectiva ne confiable pa reducir ar be̲xu molecular ar esquizofilán, aumentando nja'bu̲ ya molécula β — glucano.

Ar ultrasonicador UIP2000hdT ar utilizó ko éxito pa reducir ar be̲xu molecular ar esquizofilano, 'nar hongo β — glucano
Nthuts'i nkohi pa ar producción esquizofilán hñets'i'i be̲xu molecular
Dado ke ár esquizofilán ar be̲xu molecular demuestra 'nar biodisponibilidad ne propiedades ya nt'ot'e drásticamente mpädi mäs xi, equipo nthoni Smirnou investigó ultrasonicación pa ar escisión ne ar reducción ar tamaño ar molécula β — glucano esquizofilán.
Ultrasonicación de Schizophyllan
β — 1.3 (1.6) — Glucan schizophyllan (SPG) bí produjo ir nge ar cultivo sumergido hongo S. commune jar biorreactor utilizando sacarosa komongu ar sustrato.
'Me̲fa ar ngäts'i ar cultivo, ar nhñuni cultivo ar diluyó ko ar dehe desmineralizada concentración esquizofilán 2 g yá L ne da ultrasonicó ko ar Procesador ultrasónico UIP2000hdT (Hielscher Ultrasonics GmbH, nu Alemäña) jar modo reciclaje nuya ya parámetros ne ya nkohi: caudal medio 50 mL yá s, frecuencia 20 kHz, salida 2000 W, sonotrodo klase BS2d22, booster klase B2 — 1.4 ne amplitud 100%. Ar mpat'i ar nhñuni cultivo ar comienzo ar sonicación bí 25 °c.ndunthe Ar nhñuni cultivo ultrasónico (entrada ar energía específica 100 Ws yá mL) bí filtró a través de filtro profundidad Seitz HS800 ja 'nar presión 1,5 bar ma 40 °c.ndunthe Ar esquizofilán ultrasónico (uSPG) pa ar caracterización química ar precipitó a partir de ar filtrado ko ya triple ya yá 'bede ya alkol isopropílico mpat'i laboratorio, y se secó a 60°C durante 12h las soluciones uSPG para estudios inmunológicos se prepararon de la siguiente manera: (1) el filtrado de caldo de cultivo ultrasónico se diafiltraba a través de cassette PES de 0,1 m2 Pall Centramate serie T (corte de 100 kDa) a 0,8 bar ne la diafiltración continuó hasta la conductividad del retentado fue de 20 μS/cm; (2) ár njäts'i concentró ya diafiltración ar concentración uSPG 1 ar g/L ne ar esterilizó jar autoclave 120 °C/20 min. Ar uSPG desnaturalizado da hyoki ar bí similar, menu nä'ä bí agregó NaOH ma filtrado ar nhñuni cultivo jar concentración 0,2 M ne ár njäts'i alcalinizada ar incubó Nxoge 30 min jar mpat'i laboratorio 'bu̲ 'be̲tho ar diafiltración.
Nt'ot'e analíticos
Rendimiento micelio ar estimó gravimétricamente: ar nhñuni cultivo diluyó ko ar dehe 1:4, ar centrifugaron 10000 × g a 25 °C durante 20 min, el precipitado 'Beni ko triple yá 'bede ya dehe, bí secó bí 60 °C ne da ponderó. El esquizofilán ar precipitó a partir de sobrenadante con triple cantidad de alcohol isopropílico, se secó a 60°C durante 24h y su rendimiento se determinó gravimétricamente. Ar pO2 ar nhñuni cultivo ar midió ir nge ar sonda óptica Hamilton — Visiferm DO 120 (Hamilton, Suiza).
Viscosidad dinámica ar nhñuni cultivo ar midió jar HAAKE Visco Tester 6L ko husillos 1L ne 2L ma 4°C ne velocidad de rotación de 30 rpm. Velocidad filtración ar calculó a partir de ar pa filtración ar nhñuni cultivo 500 ml a través de 200 × filtro profundidad Seitz HS800 (Pall, EE. UU.) ar 200 mm ja 'nar presión 1,5 ar bar ne ar 40 °c.ndunthe
Ar be̲xu molecular uSPG bí medido ya SEC — MALLS jar ko ya HPLC Alliance (Waters) ko columnas PL aquagel OH60 ne PL aquagel OH40 conectadas jar serie, ne ar detector miniDAWN TREOS (Wyatt) bí concentró ya diafiltración ar concentración uSPG 1 g yá L ne da esterilizó jar autoclave 120 ° C / 20 ar min. Ar uSPG desnaturalizado da hyoki ar bí similar, menu nä'ä bí agregó NaOH ma filtrado ar nhñuni cultivo jar concentración 0,2 M ne ár njäts'i alcalinizada ar incubó Nxoge 30 min jar mpat'i laboratorio 'bu̲ 'be̲tho ar diafiltración.

UIP2000hdT pa ár reducción ar be̲xu molecular esquizofilano

ultrasonicador UP400St (400W, 24kHz) pa ar procesamiento esquizofilanos
Ar nt'ot'e ya ultrasonido ar aplicó Hmunts'i ja ar nhñuni cultivo S. commune 144 — h ko micelio pa ár hño ja ar procesamiento 'mefa ár njäts'i Tange'u SPG.
Características ar Sonicated Schizophyllan: Ar esquizofilán ultrasónico (uSPG) bí precipitó a partir de 'nar filtrado ar nhñuni cultivo ya alkol ne da caracterizó. SEC — MALLS estimó da Mw uSPG ge ar alrededor ar 1 ar MDa. Ar be̲xu molecular promedio ar esquizofilán ar fermentación líquida ge ar aproximadamente 5 MDa, mente da ja ar cultivo estado sólido to alcanzar ga 10 ar MDa. Comparando ar be̲xu molecular ar esquizofilán ultrasónico ko ya pesos moleculares ar esquizofilán nativo hingi tratado, ar tsa̲ da observar 'nar be̲xu molecular reducido ar 5 da 10 ya 'nandi nu'bya ar ultrasonicación.
Polisacárido sonicado uSPG contenía 0,7% p/p proteína ne 1,0% p/p residuos 'mefa xta ar ignición. Ar hidrolizado ar uSPG consistió jar glucosa ko mäs de ar 99%. Ya resultados analíticos indican ne ar sonicación escinde columna vertebral β — glucano 'na jar azar ne ya ramas laterales permanecen intactas, reduciendo nja'bu̲ ar tamaño ne ar be̲xu molecular ar esquizofilano. Ya nsadi inmunológicos dige ar uSPG esencialmente xi hño proteínas ne endotoxinas mostraron da esquizofilán ultrasónico hñets'i'i Mw pe̲ts'i 'nar nt'ot'e inmunomoduladora pronunciada.

Imágenes AFM (ja ar xeni mäs xi ngu) ne perfil topográfico (ja ar xeni inferior) ar esquizofilán ultrasónico nativo. T'e̲ni jar modo semicontacto ko resolución 512 × 512 ar pxs2. Nkohi: recubrimiento k'axt'i, nzäm'bu̲ resorte 15.3 N yá m, ángulo cono nts'ä <22°.
Viscosidad reducida: Ar ultrasonicación resultó ja 'nar disminución significativa ar viscosidad ar nhñuni cultivo. Nxoge ar ultrasonicación, ar viscosidad ar nhñuni cultivo cambió ar 'mui hingi lineal: ar disminución ar viscosidad bí ngut'a ma ar comienzo ar ultrasónica, pe gem'bu̲ bí ralentizó. Entrada energía específica 100 Ws yá ml bí xingu pa reducir ar viscosidad ar nhñuni cultivo kasu̲ 7 bes.

Ultrasonicación ar nhñuni cultivo S.commune, nä'ä da obtuvo ir nge ya cultivo hongos jar biorreactor Nxoge 144 h. Ntsoni período ultrasonido (expresado komongu entrada energía específica jar Ws yá mL) dige ar velocidad filtración ar profundidad ar nhñuni cultivo (columna negra) ne ar concentración esquizofilán (SPG) jar filtrado (columna nxo̲ge ar 'bospi). Ar nkohi ultrasonicación: Procesador ultrasónico UIP2000hd (20 ar kHz, 2000W), sonotrodo BS2d22, amplificador B2 — 1.4, amplitud 100%, caudal 50 mL yá s.
(tsita ne estudio: ©Smirnou et jar el., 2017)
Filtración mejorada: Ar nhñuni cultivo tratado ko ultrasonido fluyó a través de ar filtro xí rápido nä'ä ar nhñuni cultivo hingi tratado (entrada energía específica 0 Ws yá ml) ko SPG mar hñets'i be̲xu molecular. 'Nehe, ar ultrasonicación redujo significativamente ar pérdida producto Nxoge ar filtración. Ar filtrado ar nhñuni cultivo hingi tratado ko SPG mar hñets'i be̲xu molecular (entrada energía específica 0 Ws yá mL) contenía 0,3 ± 0,07 g/L SPG, mente ke ar concentración SPG 'bu̲ 'be̲tho ar filtración profundidad mar 2 ar g/L. Jar contraste, filtrado cultivo ultrasónico 100 Ws yá mL contenía SPG jar concentración 2.2 ± 0.2 g/L, nä'ä bi nthe 'nar pérdida ar producto kasu̲ nula.

Ultrasonicación ar nhñuni cultivo S.commune, nä'ä da obtuvo ir nge ya cultivo hongos jar biorreactor Nxoge 144 h. Ntsoni período ultrasonido (expresado komongu entrada energía específica jar Ws yá mL) dige ar velocidad filtración ar profundidad ar nhñuni cultivo (columna negra) ne ar concentración esquizofilán (SPG) jar filtrado (columna nxo̲ge ar 'bospi). Ar nkohi ultrasonicación: Procesador ultrasónico UIP2000hd (20 ar kHz, 2000W), sonotrodo BS2d22, amplificador B2 — 1.4, amplitud 100%, caudal 50 mL yá s.
(tsita ne estudio: ©Smirnou et jar el., 2017)

Imágenes AFM (ja ar xeni mäs xi ngu) ne perfil topográfico (ja ar xeni inferior) ar esquizofilán ultrasónico desnaturalizado. T'e̲ni jar modo semicontacto ko resolución 512 × 512 ar pxs2. Nkohi: recubrimiento k'axt'i, nzäm'bu̲ resorte 15.3 N yá m, ángulo cono nts'ä < 22°.
(tsita ne estudio: ©Smirnou et jar el., 2017)
'Nehe, ya investigadores bí dini da procesamiento ultrasónico schizophyllan ar hingi hembi da escalable. Ar 'nar xe̲ni ar desintegrador ultrasónico ar planta piloto UIP2000hdT procesó 1 litro ar nhñuni cultivo jar 110 s jar modo flujo. Productividad ko ar tsa̲ da aumentar hingi hembi da ir nge ar conexión secuencial unidades ar ultrasonido Nthuts'i.
Lea mäs dige ar sencilla ampliación ar extracción hongos!
Equipo ultrasónico mar hñets'i rendimiento pa ar procesamiento glucano fúngico
Fragmentación polisacáridos komongu ya glucanos, nja'bu komongu ar compuestos ya bioactivos komongu ar quitina ne ar quitosano, pe procesar ar ar nt'ot'e fiable ko ya equipos ultrasonidos mar hñets'i rendimiento Hielscher. HMUNTS'UJE ultrasonidos xi ofrecer dätä amplitudes, ofrecen 'nar control preciso ya parámetros jar proceso ne xi funcionar 24 ya ora ar pa, 7 ya pa ar su̲mänä, jár cargas pesadas ne entornos exigentes. Gama equipos Hielscher Ultrasonics tso̲ni nuya requisitos ya nt'ot'e fiable. 'Nar excelente rendimiento ya ultrasonidos, 'nehe ya ultrasonidos Hielscher pede yá 'bede ko 'nar mextha dätä nt'ot'e energética, nä'ä supone 'nar mahyoni ventaja bojä – Ho̲ntho nu'u̲ nu'bu̲ bí emplea ar producción yá 'ma jar gran tso̲kwa escala.
Ya ultrasonidos Hielscher ya sistemas mar hñets'i rendimiento ne xi equipar ar ko accesorios komongu ar sonotrodos, amplificadores, reactores wa celdas flujo da satisfacer yá ndu proceso ar bí óptima. Ko ar pantalla 'bede ya njät'i, bí garantiza ar opción ar preestablecer ya ejecuciones sonicación, grabación automática datos 'na jar tarheta SD 'mui, ar control remoto jar navegador ne xingu mäs ya 'befi, ar mäs control ar proceso ne ar facilidad njapu'befi. Junto con ar robustez ne ar Nar dätä hño mfeni ya carga, ya sistemas ultrasónicos Hielscher ya ár fani hñäki confiable ja ar producción. Ár reducción ar be̲xu molecular β — glucanos Komo ar esquizofilán requiere 'nar ultrasonido potente da uni ar escisión dirigida ne 'nar producto esquizofilano final mextha hño, nä'ä ar tsa̲ da utilizar pa aplicaciones farmacéuticas.
'Bui mäs ungumfädi dige ar extracción ultrasónica betaglucanos setas, incluidas ya instrucciones paso a paso, nuwa.
Xtí tabla bí xta ar 'nar indicación ya mfeni ya procesamiento aproximado HMUNTS'UJE ultrasonicators:
Volumen lote | Tasa flujo | Dispositivos recomendados |
---|---|---|
1 jar 500mL | 10 200 mL yá min | UP100H |
10 da 2000mL | 20 400 mL yá min. | UP200Ht, UP400St |
0.1 da 20L | 0.2 4 L yá min | UIP2000hdT |
10 da 100L | 2 10 L yá min | UIP4000hdT |
n.a. | 10 100 L yá min | UIP16000 |
n.a. | mäs dätä | Cluster ar UIP16000 |
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Ot'a yá Referencias
- Smirnou, Dzianis; Knotek, Petr; Nesporova, Kristina; Smejkalova, Daniela; Pavlik, Vojtech; Franke, Lukas; Velebny, Vladimir (2017): Ultrasound-assisted production of highly-purified β-glucan schizophyllan and characterization of its immune properties. Process Biochemistry 2017.
- Zhong, Kui; Tong, Litao; Liu, Liya; Zhou, Xianrong; Liu, Xingxun; Zhang, Qi; Zhou, Sumei (2015): Immunoregulatory and antitumor activity of schizophyllan under ultrasonic treatment. International Journal of Biological Macromolecules, 80, 2015. 302–308.
- Kengo Tabata, Wataru Ito, Takemasa Kojima, Shozo Kawabata, Akira Misaki (1981): Ultrasonic degradation of schizophyllan, an antitumor polysaccharide produced by Schizophyllum commune fries. Carbohydrate Research, Volume 89, Issue 1, 1981. 121-135.
Hechos Bale ar penä ga pädi
Esquizofilán – 'Nar hongo β — glucano
Schizophyllan, 'nehe conocido komongu ar sizofiran, SPG, sonifilan, sizofilan, ge 'nar polisacárido extracelular neutro producido ya hongo Schizophyllum commune Fries, 'nar zu'we Dar hongo Basidiomycetes. Ar esquizofilano ge 'nar beta-D — glucano soluble, yá nt'ot'e mbo ya nt'ot'e exacto aún mi hingi 'bu̲i completamente dilucidado, pe nuna β — glucano específico gi 'ñudi efectos inmunomoduladores ne antitumorales. Anke ar nt'ot'e mbo ya nt'ot'e exacto ar sizofiran aún mi hingi ar xi dilucidado ya completo, agente nuna mä da 'BATS'I ko ya inmunológico ar aumentar ar producción citoquinas, activar ya macrófagos ne ya células Langerhans ne mejorar ar nt'ot'e ya leucocitos polimorfonucleares (PML) ne ya células asesinas naturales (NK). Sizofiran ar bí nthe̲hu̲ bastante ineficaz kontra ar cáncer gástrico, pe extendió ar pa supervivencia jar pacientes ko cáncer yá ñä ne ya cuello. Ar cáncer cuello uterino, Sizofiran prolongó ar supervivencia ne ar pa asta ar recurrencia pa ya casos jar estadio II, pe hingi jar estadio III, ne mostró 'nar eficacia adicional nu'bu̲ ar inyectó Hmunts'i ja ar masa tumoral. Sonifilan ar gi japu̲'be̲fi komongu 'nar modificador ar respuesta biológica (BRM) ko radioterapia pa ar nt'ot'e ya cáncer jar Japón. Bí lanzado pa ar cáncer cuello uterino jar Corea jar Sur jar 1998.

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