Producción ultrasónica betaglucanos ar esquizofilano altamente purificados
Ar esquizofialano ge 'nar hongo β — glucano ko propiedades inmunomoduladoras. Pa da efectos medicinales altamente activos, ar esquizofilano gi 'ñehe 'nar be̲xu molecular hñets'i'i pa mostrar 'nar biodisponibilidad mejorada. Ar xi demostrado ne ar ultrasonicación reduce ar be̲xu molecular ar esquizofilano. Ngu nt'ot'e fiable ne xi hño, ar sonicación to da t'uni ar hingi hembi da pa ar producción esquizofilano hñets'i'i be̲xu molecular.
Hongos Schizophyllum ne extracción ultrasónica betaglucano
Ya especies hongo Schizophyllum crecen ja ya 'mui ja ya zaa jar descomposición 'mefa xta ya mpa̲di lluviosas. Ya cuerpos fructíferos ar recolectan ja ar estación seca. Ya especies Schizophyllum ya ricas jar compuestos bioquímicos komongu ya glucanos ne, ir bí consumen hontho ja ya ximha̲i tropicales komongu alimento ne 'ñithi. Nu'bya yá propiedades inmunomoduladoras, antifúngicas, antineoplásicas ne antivirales, ar Schizophyllum commune, 'nehe conocido komongu hongo branquia, xi atraído jar empresas biotecnológicas ne farmacéuticas.
Polisacárido esquizofilano, 'nehe conocido komongu ar sizofiran, sonifilan wa sizofilan, ge ar principal β — glucano da o 'mu̲i ya hongos Schizophyllum, da ofrecen ar esquizofilano bioactivo β — glucano altamente efectivo.
Ya hongos Schizophyllum commune crecen ja ya 'mui ja ya zaa, ar micelio 'nehe ar tsa̲ da cultivar jar nhñuni fermentación. Pa aplicaciones farmacéuticas ne cosméticas, esquizofilano hñets'i'i be̲xu molecular ge xingu mäs xi hño da esquizofilano mar hñets'i be̲xu molecular. 'Me̲hna ar gi ma hecho da esquizofilano hñets'i'i be̲xu molecular gi 'ñudi tasas biodisponibilidad ne absorción significativamente mpädi mäs xi. 'Nehe, esquizofilano mar hñets'i be̲xu molecular suele da problemático ja ya aplicaciones, ya da xta lugar ma 'nar mextha viscosidad yá soluciones ya acuosas.
Reducción tamaño ya ultrasonidos ge 'nar técnica xi na hño ne fiable pa reducir ar be̲xu molecular ar esquizofilano, aumentando nja'bu̲ ya molécula β — glucano.

Ar ultrasonido UIP2000hdT ar utilizó ko éxito pa reducir ar be̲xu molecular ar esquizofilano, 'nar hongo β — glucano
Nthuts'i nkohi pa ar producción esquizofilano hñets'i'i be̲xu molecular
Dado ke ár esquizofilano ar be̲xu molecular demuestra 'nar biodisponibilidad ne 'ra ya propiedades ya nt'ot'e drásticamente mpädi mäs xi, equipo nthoni Smirnou investigó ultrasonicación pa ar escisión ne ar reducción ar tamaño ar molécula β — glucano esquizofilano.
Ultrasonidos esquizofilano
β — 1.3 (1.6) — Glucan schizophyllan (SPG) bí produjo ir nge ar cultivo sumergido hongo S. commune jar biorreactor utilizando sacarosa komongu ar sustrato.
'Nar pa finalizado ar cultivo, ar nhñuni cultivo diluyó ko ar dehe desmineralizada asta 'nar concentración esquizofilano 2 ar g/L ne ar ultrasonicó ko ar procesador ultrasónico UIP2000hdT (Hielscher Ultrasonics GmbH, nu Alemäña) jar modo reciclaje ko nuya ya parámetros ne ya nkohi: caudal made 50 mL yá s, frecuencia 20 ar kHz, ir nge 2000 W, sonotrodo klase BS2d22, booster klase B2 — 1.4 ne amplitud 100%. La temperatura del caldo de cultivo al inicio de la sonicación fue de 25°C. Ar nhñuni cultivo ultrasónico (entrada ar energía específica 100 Ws yá mL) bí filtró a través de filtro profundidad Seitz HS800 ja 'nar presión 1,5 bar ma 40°c.ndunthe Ar esquizofilano ultrasónico (uSPG) pa ar caracterización química bí precipitó ar filtrado ko ya triple ya yá 'bede ya alkol isopropílico mpat'i laboratorio, y se secó a 60 °C durante 12 h Las soluciones de uSPG para estudios inmunológicos se prepararon de la siguiente manera: (1) el filtrado de caldo de cultivo ultrasónico se diafiltró a través de un casete PES de la serie T de Pall Centramate de 0,1 m2 (corte de 100 kDa) a 0,8 bar ne la diafiltración continuó hasta la conductividad del retenido fue de 20 μS/cm; (2) ár njäts'i concentró ya diafiltración 'nar concentración uSPG 1 ar g/L ne ar esterilizó jar autoclave 120 °C/20 min. Ar uSPG desnaturalizado da hyoki ar bí similar, menu nä'ä bí agregó NaOH ma filtrado ar nhñuni cultivo ja 'nar concentración 0,2 M ne ár njäts'i alcalinizada ar incubó Nxoge 30 min jar mpat'i laboratorio 'bu̲ 'be̲tho ar diafiltración.
Nt'ot'e analíticos
Rendimiento micelio ar estimó gravimétricamente: ar nhñuni cultivo diluyó ko ar dehe 1:4, ar centrifugó 10000 × g 25 °C durante 20 min, el precipitado 'Beni ko triple ya yá 'bede ya dehe, bí secó bí 60 °C ne da pesó. El esquizofilano ar precipitó a partir de 'nar sobrenadante triple ya yá 'bede ya alkol isopropílico, secó jar 60°C durante 24 h ne su rendimiento se determinó gravimétricamente. Ar pO2 ar nhñuni cultivo ar midió ko ar sonda óptica Hamilton — Visiferm DO 120 (Hamilton, Suiza).
Viscosidad dinámica ar nhñuni cultivo ar midió jar HAAKE Visco Tester 6L ko husillos 1L ne 2L ma 4°C ne velocidad de rotación de 30 rpm. Velocidad filtración ar calculó a partir de ar pa filtración 500 mL ar nhñuni cultivo a través de 'nar filtro profundidad Seitz HS800 (Pall, EE. UU.) ar 200 × 200 mm ja 'nar presión 1,5 ar bar ne ar 40 °c.ndunthe
Ar be̲xu molecular uSPG ar midió ir nge ya SEC — MALLS jar ko ya HPLC Alliance (Waters) ko columnas PL aquagel OH60 ne PL aquagel OH40 conectadas jar serie, ne ar detector miniDAWN TREOS (Wyatt) concentró ya diafiltración 'nar concentración uSPG 1 ar g/L ne ar esterilizó jar autoclave ma 120 °C yá 20 min. Ar uSPG desnaturalizado da hyoki ar bí similar, menu nä'ä bí agregó NaOH ma filtrado ar nhñuni cultivo ja 'nar concentración 0,2 M ne ár njäts'i alcalinizada ar incubó Nxoge 30 min jar mpat'i laboratorio 'bu̲ 'be̲tho ar diafiltración.

UIP2000hdT pa ár reducción ar be̲xu molecular ar esquizofilano

ultrasonicador UP400St (400 W, 24 ar kHz) pa ar procesamiento esquizofila
Ar nt'ot'e ya ultrasonidos ar aplicó Hmunts'i ja ar nhñuni cultivo S. commune 144 h ko micelio pa ár hño ja ar procesamiento 'mefa ár njäts'i Tange'u ar SPG.
Características esquizofilano sonicado: Ar esquizofilano ultrasónico (uSPG) precipitó a partir de 'nar nhñuni cultivo filtrado ya alkol ne da caracterizó. SEC — MALLS estimó da Mw uSPG mi alrededor ya 1 ar MDa. Ar be̲xu molecular made ar esquizofilano procedente ar fermentación líquida ge ar aproximadamente 5 MDa, mente da ja ar cultivo estado sólido to alcanzar ga 10 ar MDa. Comparando ar be̲xu molecular ar esquizofilano ultrasonicado ko ar be̲xu molecular ar esquizofilano nativo hingi tratado, ar tsa̲ da observar 'nar reducción ar be̲xu molecular 5 da 10 ya 'nandi jamädi ar ultrasonicación.
Polisacárido sonicado uSPG contenía 'nar 0,7% ar proteína p/p ne 'nar 1,0% p/p residuo 'mefa xta ar ignición. Ar hidrolizado ar uSPG consistió jar glucosa ko mäs de ar 99%. Ya resultados analíticos indican ne ar sonicación escinde aleatoriamente columna vertebral ar β — glucano ne ya ramas laterales permanecen intactas, reduciendo nja'bu̲ ar tamaño ne ar be̲xu molecular ar esquizofilano. Ya nsadi inmunológicos dige ar uSPG esencialmente mpe̲fi proteínas ne endotoxinas mostraron da esquizofilano hñets'i'i Mw ultrasonicado pe̲ts'i 'nar nt'ot'e inmunomoduladora pronunciada.

Imágenes AFM (ja ar xeni mäs xi ngu) ne perfil topográfico (ja ar xeni inferior) ar esquizofilano nativo ultrasónico. Ar t'e̲ni jar modo semi-contacto ko resolución 512 × 512 ar pxs2. Nkohi: recubrimiento k'axt'i, nzäm'bu̲ resorte 15,3 N yá m, ángulo cono mañä <22°.r />(picture and study: ©Smirnou et al., 2017)
Viscosidad reducida: Ar ultrasonicación umbi lugar ma 'nar disminución significativa ar viscosidad ar nhñuni cultivo. Nxoge ar ultrasonicación, ar viscosidad ar nhñuni cultivo cambió ar 'mui hingi lineal: ar disminución ar viscosidad bí ngut'a ar ndui jar ultrasonicación, pe gem'bu̲ bí ralentizó. Aporte energía específica 100 Ws yá mL bí xingu pa reducir ar viscosidad ar nhñuni cultivo kasu̲ 7 bes.

Ultrasonidos ar nhñuni cultivo S.commune, nä'ä da obtuvo ir nge ar cultivo hongos jar biorreactor Nxoge 144 h. Ntsoni ar período ar ultrasonidos (expresado komongu entrada energía específica jar Ws yá mL) dige ar velocidad filtración ar profundidad ar nhñuni cultivo (columna negra) ne ar concentración esquizofilano (SPG) jar filtrado (columna nxo̲ge ar 'bospi). Ar nkohi ultrasonidos: Procesador ultrasónico UIP2000hd (20 ar kHz, 2000W), sonotrodo BS2d22, booster B2 — 1.4, amplitud 100%, caudal 50 mL yá s.
(tsita ne estudio: ©Smirnou et jar el., 2017)
Filtración mejorada: Ar nhñuni cultivo tratado ko ultrasonidos fluyó a través de ar filtro xí rápido nä'ä ar nhñuni cultivo hingi tratado (entrada energía específica 0 Ws yá mL) ko SPG mar hñets'i be̲xu molecular. 'Nehe, ar ultrasonicación redujo significativamente ar pérdida producto Nxoge ar filtración. Ar filtrado ar nhñuni cultivo hingi tratado ko SPG mar hñets'i be̲xu molecular (aporte energía específica 0 Ws yá mL) contenía 0,3 ± 0,07 g/L SPG, mente ke ar concentración SPG 'bu̲ 'be̲tho ar filtración profundidad bí 2 ar g/L. Ya ar contrario, ar filtrado ar cultivo ultrasónico 100 Ws yá mL contenía SPG ja 'nar concentración 2,2 ± 0,2 g/L, nä'ä bi nthe 'nar pérdida ar producto kasu̲ nula.

Ultrasonidos ar nhñuni cultivo S.commune, nä'ä da obtuvo ir nge ar cultivo hongos jar biorreactor Nxoge 144 h. Ntsoni ar período ar ultrasonidos (expresado komongu entrada energía específica jar Ws yá mL) dige ar velocidad filtración ar profundidad ar nhñuni cultivo (columna negra) ne ar concentración esquizofilano (SPG) jar filtrado (columna nxo̲ge ar 'bospi). Ar nkohi ultrasonidos: Procesador ultrasónico UIP2000hd (20 ar kHz, 2000W), sonotrodo BS2d22, booster B2 — 1.4, amplitud 100%, caudal 50 mL yá s.
(tsita ne estudio: ©Smirnou et jar el., 2017)

Imágenes AFM (ja ar xeni mäs xi ngu) ne perfil topográfico (ja ar xeni inferior) ar esquizofilano ultrasónico desnaturalizado. Ar t'e̲ni jar modo semi-contacto ko resolución 512 × 512 ar pxs2. Nkohi: recubrimiento k'axt'i, nzäm'bu̲ resorte 15,3 N yá m, ángulo cono mañä < 22°.
(tsita ne estudio: ©Smirnou et jar el., 2017)
'Nehe, ya investigadores descubrieron da procesamiento ultrasónico ar esquizofilano ar hingi hembi da escalable. Ar 'nar xe̲ni ar desintegrador ultrasónico planta piloto UIP2000hdT procesó 1 litro ar nhñuni cultivo jar 110 s jar modo flujo. Productividad ko ar tsa̲ da aumentar hingi hembi da ir nge ar conexión secuencial unidades ar ultrasonido Nthuts'i.
Mäs ungumfädi dige ar sencilla ampliación ar extracción hongos!
Equipos ultrasónicos mar hñets'i rendimiento pa ar procesamiento glucanos fúngicos
Fragmentación polisacáridos, komongu ya glucanos, nja'bu komongu ar ma'ra compuestos bioactivos, komongu ar quitina ne ar quitosano, pe procesar ar ar nt'ot'e fiable ko ya equipos ultrasónicos mar hñets'i rendimiento Hielscher. HMUNTS'UJE ultrasonidos xi suministrar dätä amplitudes, ofrecen 'nar control preciso ya parámetros jar proceso ne xi funcionar 24 ya ora ar pa, 7 ya pa ar su̲mänä jár cargas pesadas ne entornos exigentes. Gama equipos Hielscher Ultrasonics tso̲ni nuya requisitos ya nt'ot'e fiable. 'Nar excelente rendimiento ya ultrasonidos, 'nehe ya ultrasonidos Hielscher pede yá 'bede ko 'nar mextha dätä nt'ot'e energética, nä'ä supone 'nar mahyoni ventaja bojä – Ho̲ntho nu'u̲ nu'bu̲ bí emplea ar producción yá 'ma jar gran tso̲kwa escala.
Ya ultrasonidos Hielscher ya sistemas mar hñets'i rendimiento ne xi equipar ar ko accesorios komongu ar sonotrodos, boosters, reactores wa celdas flujo pa adaptar ar ar nt'ot'e óptima ja ya ndu ár proceso. Ko ar pantalla 'bede ya njät'i, ar opción ar preestablecer ya ejecuciones sonicación, registro automático datos 'na jar tarheta SD 'mui, ar control remoto jar navegador ne xingu mäs 'befi, bí garantiza ar máximo control ar proceso ne ar facilidad njapu'befi. Junto con ar robustez ne nar dätä hño mfeni ya carga, ya sistemas ultrasónicos Hielscher ya ár fani hñäki fiable ja ar producción. Ár reducción ar be̲xu molecular ya β — glucanos, komongu ar esquizofilano, requiere 'nar potente ultrasonido da uni ar escisión deseada ne 'nar producto final esquizofilano mextha hño, da tsa utilizar ar pa aplicaciones farmacéuticas.
'Bui mäs ungumfädi dige ar extracción ultrasónica betaglucano ya hongos, incluidas ya instrucciones paso a paso, nuwa.
Xtí tabla bí xta ar 'nar indicación ya mfeni ya procesamiento aproximada ar HMUNTS'UJE ultrasonidos:
Volumen lote | Gasto | Dispositivos recomendados |
---|---|---|
Ar 1 jar 500 ml | Ar 10 200 ml yá min | UP100H |
Ar 10 da 2000 ml | Ar 20 400 ml yá min | UP200Ht, UP400St |
0.1 da 20L | 0.2 4 L yá min | UIP2000hdT |
Ar 10 da 100L | Ar 2 10 l yá min | UIP4000hdT |
n.d. | Ar 10 100 L yá min | UIP16000 |
n.d. | Mar dätä | Racimo ar UIP16000 |
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Bibliografía yá Referencias
- Smirnou, Dzianis; Knotek, Petr; Nesporova, Kristina; Smejkalova, Daniela; Pavlik, Vojtech; Franke, Lukas; Velebny, Vladimir (2017): Ultrasound-assisted production of highly-purified β-glucan schizophyllan and characterization of its immune properties. Process Biochemistry 2017.
- Zhong, Kui; Tong, Litao; Liu, Liya; Zhou, Xianrong; Liu, Xingxun; Zhang, Qi; Zhou, Sumei (2015): Immunoregulatory and antitumor activity of schizophyllan under ultrasonic treatment. International Journal of Biological Macromolecules, 80, 2015. 302–308.
- Kengo Tabata, Wataru Ito, Takemasa Kojima, Shozo Kawabata, Akira Misaki (1981): Ultrasonic degradation of schizophyllan, an antitumor polysaccharide produced by Schizophyllum commune fries. Carbohydrate Research, Volume 89, Issue 1, 1981. 121-135.
Datos da Bale ar penä ga pädi
esquizofilano – 'Nar hongo β — glucano
Ar esquizofilano, 'nehe conocido komongu ar sizofiran, SPG, sonifilan, sizofilan, ge 'nar polisacárido extracelular neutro producido ya hongo Schizophyllum commune Fries, 'nar zu'we Dar hongo Basidiomycetes. Ar esquizofilano ge 'nar beta-D — glucano soluble, yá nt'ot'e mbo ya nt'ot'e exacto aún mi hingi 'bu̲i completamente dilucidado, pe nuna β — glucano específico gi 'ñudi efectos inmunomoduladores ne antitumorales. Anke ar nt'ot'e mbo ya nt'ot'e exacto ar sizofiran ar aún mi hingi ar xi dilucidado ya completo, agente nuna mä da 'BATS'I ko ya inmunológico ar aumentar ar producción citoquinas, activar ya macrófagos ne ya células Langerhans ne mejorar ar nt'ot'e ya leucocitos polimorfonucleares (PML) ne ya células asesinas naturales (NK). Ar bí nthe̲hu̲ da Sizofiran mar bastante ineficaz kontra ar cáncer gástrico, pe extendió ar pa supervivencia jar pacientes ko cáncer yá ñä ne ya cuello. Ar cáncer cuello uterino, Sizofiran prolongó ar supervivencia ne ar pa asta ar recurrencia ya casos jar estadio II, pe hingi jar estadio III, ne mostró 'nar eficacia adicional nu'bu̲ ar inyectó Hmunts'i ja ar masa tumoral. Sonifilan ar gi japu̲'be̲fi komongu ar modificador ar respuesta biológica (BRM) ko ar radioterapia pa ar nt'ot'e ya cáncer jar Japón. Ar lanzó pa ar cáncer cuello uterino jar Corea jar Sur jar 1998.

Hielscher Ultrasonics fabrica homogeneizadores ultrasónicos mar hñets'i rendimiento ma partir ar laboratorio Pa tamaño industrial.