Nt'ot'e ultrasónica muestras c.ndunthe elegans

C.ndunthe elegans, 'nar zu'we nematodo, ge 'nar organismo modelo ampliamente utilizado jar biología. Ar nt'ot'e muestra 'bu̲ 'be̲tho ar análisis requiere lisis, extracción ya proteínas ne lípidos, nja'bu ngu fragmentación ar ARN, nä'ä to ga OT'UJE ar ar nt'ot'e fiable ir nge ya sonicación. Ya disruptores celulares ultrasónicos ya dispositivos fiables, sofisticados ne fáciles ar zu̲di pa jar nt'ot'e ngut'a muestras c.ndunthe elegans.

Nt'ot'e ultrasónica muestras c.ndunthe elegans

Ya c.ndunthe elegans ya zu'we 'wadá redondos, nä'ä da utilizan ampliamente ja ya laboratorios nthoni da hyoni ar genómica, ar biología ár nte ne ya enfermedades. Xingu genes jar genoma c.ndunthe elegans pe̲ts'i contrapartes funcionales ja ya jä'i. Ir zu'we nematodo ge 'nar modelo extremadamente útil pa ya enfermedades humanas. Ma 'ra ya ventajas da njapu'befi generalizado ya c.ndunthe elegans ge ár cultivo hei ne barato jar placas da contienen bacterias (nt'udi, E. coli), ár transparencia, manejo mahyoni, nja'bu̲ komongu ar posibilidad ya congelar ne ya almacenar ya zu'we 'wadá Nxoge 'nar período mäs ya'bu̲.
Ar análisis ar proteínas ne ar lípidos ge 'nar nt'ot'e habitual ja ya laboratorios ne ár nt'ot'e muestras ya ultrasonidos ge ár nt'ot'e establecido pa lisar nematodos c.ndunthe elegans jar ga̲tho ya etapas ár nte (es decir, embriones, larvas L1 — L4, dätä jä'i). Mä ya xki da c.ndunthe elegans 'nehe ar gi japu̲'be̲fi komongu ko ya hmä proteínas pa sobreexpresar proteínas específicas, bí requiere 'nar nt'ot'e ár lisis ne extracción ar proteínas fiable ne reproducible, da proporcione altos rendimientos proteínas. Ya sistemas ultrasónicos disrupción ne extracción celular gi 'bu̲hu̲ da 'mui komongu ar homogeneizadores ar klase sonda ne komongu ultrasonidos multimuestra. Hielscher Ultrasonics, da ocupa ar cómoda mfädi muestras ne nga̲tho ar klase ar tamaños muestras, pe̲ts'i ar disruptor ar células ultrasónico ideal pa ár nt'ot'e laboratorio.

Lisis ultrasónica c.ndunthe elegans pa

Nt'ot'e homogeneizados lombrices
Extracción proteínas
Extracción lípidos
Cuantificación proteínas
Inmunoprecipitación
Western Blotting
Extracción de ARN
Ensayos enzimáticos

Ar VialTweeter jar procesador ultrasónico UP200ST

VialTweeter Ar xe̲ni nt'ot'e múltiples muestras pa sonicación simultánea 10 tubos ensayo.

Protocolos ultrasónicos pa ar disrupción ne ar lisis c.ndunthe elegans

Ar homogeneización ne ar lisis ultrasónica c.ndunthe elegans ne 'mefa ár njäts'i Tange'u ar extracción proteínas ne lípidos xi ga OT'UJE ar ir nge yá nt'ot'e, utilizando ya 'na'ño tampones homogeneización ne lisis, etcétera. Ga̲tho ya protocolos lisis pe̲ts'i da común ke ya muestras tsa zeti ñäñho jar hielo pa nu'bu ar degradación ya proteínas. Tso̲kwa continuación, bí presentamos 'ra ya protocolos lisis ne extracción ultrasónica fiables ne rápidos pa jar nt'ot'e muestras c.ndunthe elegans ar mextha ar hño da contengan proteínas wa ya lípidos.

Ventajas lisis ultrasónica c.ndunthe elegans

Fidedigno
reproducible
ko control precisode mpat'i
Control ar procesos fiable
Nt'ot'e za̲tho
Hei ar da t'uni
Pädi xi hño

Extracción ultrasónica proteínas muestras c.ndunthe elegans

Ar lisis ar ultrasónica ne ar extracción proteínas ya zu'we 'wadá c.ndunthe elegans xi ga OT'UJE ar ir nge ya varios ar protocolos. Tso̲kwa continuación, bí presentamos 'ra ya protocolos lisis fiables ne rápidos pa da resultados reproducibles extracción proteínas.

Nt'ot'e ngut'a extracto citosólico zu'we 'wadá c.ndunthe elegans ya sonicación

Ko ar Xtí nthuts'i nkohi ar xi hoki lisados ar c.ndunthe elegans jar menu ar 30 t'olo ora.
Colección c.ndunthe elegans
Recoge ya zu'we 'wadá c.ndunthe elegans deseados 'nar tubo 1,5 ml njäts'i salina tamponada ko fosfato (PBS) wa xu̲t'i ya ar 'nar mohi 1,5 ml PBS. Centrífuga Nxoge 1 ya t'olo ora bí 2000 ar rpm da pelletizar. Mantenga ya muestras nzäm'bu jar hielo.
Ne gem'bu̲ bí lave ya zu'we 'wadá yoho ya 'nandi ko PBS.
'Me̲fa, lava ya lombrices yoho ya 'nandi ko ddH₂O.
Vuelva da suspender ya zu'we 'wadá jar tso̲kwa menu 500ul ar tampón homogeneización (HB). Ya muestras zu'we 'wadá ya gi 'bu̲hu̲ listas pa ar lisis ultrasónica.
Da uni 'nar dätä hño extracto proteínas, ar tsa̲ da desee reducir ar contaminación bacteriana lavando ya lombrices Nxoge 5 t'olo ora kadu 'na jar PBS ne ar dehe estéril ultrapura (ddH₂(O) wa ga OT'UJE ar flotación sacarosa. Mantenga ya muestras lombrices ñäñho jar hielo.

Nthuts'i nkohi lisis ultrasónica c.ndunthe elegans

Xi hño da ar hoki ar ultrasonido ir adelantado pa da homogeneizador ar ultrasónico ntsuni hñoki pa ár njapu'befi (sonda montada, programa ar sonicación preestablecido).

Nu'bu̲ ár ultrasonido xi montado jar soporte, coloque nsaha hielo ko ya tubos muestra debajo de ar sonda ultrasónica ne inserte ar sonda ultrasónica jar tubo 1,5 ar ml.

Pa ar lisis c.ndunthe elegans ko ar UP200St wa ar UP200Ht, ar ultrasonicación da ga OT'UJE ar utilizando 'nar micropunta (nt'udi, sonda S26d2 ar 2 mm; nú ar tsita ar izquierda) ar 40% ar amplitud Nxoge 1 mfe̲tsi ko pausas 30 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i entre Nuyu̲. 5 ciclos sonicación ir nge ya 1 mfe̲tsi pausas 30 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i ko ya ideales pa ar lisis c.ndunthe elegans. Nu'bu̲ realiza ar lisis ya bes, pe comprobar ar progresión ar lisis pequeñas alícuotas ar muestra 'mefa xta kadu̲ 'nar pulso utilizando 'nar microscopio.
Ar lisis ar completa ko éxito nu'bu̲ da interrumpen ya zu'we 'wadá. Exceso sonicación provoca ar rotura ya núcleos ne bí thogi visible nu'bu̲ ar muestra bí japi viscosa wa espuma. Pa nu'bu ar degradación ar muestra, utilice mäs pulsos nu'bu mahyoni. Hingi aumente ar pa kadu̲ 'nar ciclo pulso ultrasónico pa da extractos proteínas mextha ar hño.
Lisado de células claras centrifugando los gusanos lisados por ultrasonidos a 14.000rpm durante 10min a 4ºC.
Ne gem'bu̲ bí transfiera ar sobrenadante ja 'nar tubo 'ra'yo ne hoki ar pa ar inmunoprecipitación wa ma'ra ya ensayos.

Hñeti pa ar tampón homogeneización: Prepare tampón homogeneización pa ar Nthuts'i nkohi lisis ultrasónica 'be̲t'o ar Xtí bí:

Ar 15 ma mM Hepes pH 7.6 – Ar 15 ma ml 0,5 M

10 mM KCl – 2,5 ml 2 M

1,5 mM MgCl2 – 0.75 ml 1 ar M

0.1 mM EDTA – 100 ul 0,5 M

0.5 mM EGTA – 2,5 ml 0,1 M

44 mM sacarosa – 14,7 ml 50%

Añadir justo 'bu̲ 'be̲tho ga: 1mM TDT – 1000 x 1 ar M

'nehe 'nar inhibidor ar proteasa

Nuna tutorial gi mä Temu̲ ar klase ar sonicador ge ar mäs xi hño pa yá tareas ya nt'ot'e muestras, komongu ar lisis, ar disrupción celular, aislamiento proteínas, ar fragmentación ya ADN ne ya ARN jar laboratorios, análisis ne nthoni. Elija ar klase ar sonicador ideal pa ár nt'ot'e, volumen muestra, ya 'bede ya muestra ne ya rendimiento. Hielscher Ultrasonics pe̲ts'i ar homogeneizador ultrasónico ideal pa gí.

Tema tingigi mbo jar sonicador perfecto pa ar disrupción ar celular ne ar extracción proteínas jar ciencia ne análisis

Lisis mar hñets'i rendimiento c.ndunthe elegans jar placas 96 pocillos utilizando sonicador placa UIP400MTP

Lisis c.ndunthe elegans (nematodos adultos)
UIP400MTP 80% ar amplitud, 20 ar ciclos (kadu̲ 'nar ciclo sonicación: 30 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i ON, 30 seg OFF)
Tampón lisis:

Opción 1) SDS ja ar 4%, 0,1 m Tris yá HCl pH 8,0, 1 mM EDTA
Opción 2) pa coinmunoprecipitación (co — IP): 10 mM Tris HCl (pH 7,5), 150 mM NaCl, 0,5 mM EDTA, 0,5% ar NP — 40 (cóctel completo ar inhibidores ar proteinasa)

Fragmentación ADN mar hñets'i rendimiento
C.ndunthe elegans (nematodos adultos) ADN 200 — 300bp: sonicador placa UIP400MTP – Ajuste 80% ar amplitud, 30 ar pulsos – Nu'bu̲ 30 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i encendido, 30 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i apagado

UIP400MTP Sonicador placas pa jar nt'ot'e muestras mar hñets'i rendimiento: ar UIP400MTP sonica uniformemente muestras jar placas microtitulación varios ar pocillos ne ar placas 96 pocillos da alteran ya células, extraen proteínas, fragmentan ar ADN, ar ARN ne ya fibrillas alfa — sinucleína.

UIP400MTP Plate Sonicator pa jar nt'ot'e muestras mar hñets'i rendimiento sonica uniformemente muestras jar multipocillos, placas ar microtitulación ne ar placas 96 pocillos

Lisis ultrasónica c.ndunthe elegans pa ensayos purificación afinidad cuantitativa

Ya embriones c.ndunthe elegans (∼2 millones ya réplica) bí recolectaron xki recolectados jar triplicado biológico blanqueando hermafroditas grávidos ya ts'u̲nt'u̲ i ya sonicados jar hielo (ciclo: 0,5 s, amplitud: 40 — 45%, 5 golpes yá sesión, 5 ar Hmunts'i, intervalo ja ya Hmunts'i: 30 s;) Procesador ultrasónico UP200S con micropunta S26d2 (Hielscher Ultrasonics GmbH)) jar tampón lisis (volumen total: ∼600 μl; 50 mm tris — HCl, pH 7,4, 100 mm KCl, 1 mm de MgCl2, 1 mm de EGTA, 1 mm de DTT, 10% de glicerol, mezcla de inhibidores de la proteasa, 0,1% de Nonidet P-40 Substitute). Ir sonicación, ar añadió Nonidet P — 40 Substitute asta 'nar 1% ne ya lisados ar incubaron ko rotación cabeza sobre cola a 4°C durante 30 ar min, seguida de centrifugación a 20.000 × g durante 20 min a 4°C. Tso̲kwa continuación, bí aspiró ar lisado aclarado sin alterar ar capa lipídica superior ne dividió ya japi ya perlas agarosa anti—GFP wa ja ya perlas ar control bloqueadas (40-50 μl). 'Me̲fa ar rotación yá ñä dige ar gät'u̲wi 4 °C durante 60-90 min, ya perlas bí lavaron 'nar pa tampón lisis da contenía 0,1% ar sustituto Nonidet hne — 40, seguido ar dos lavados tampón I (25 mm Tris — HCl, pH 7,4, 300 mm NaCl, 1 mm MgCl2) wa tampón II (1 mm tris — HCl, pH 7,4, 150 mm NaCl, 1 mm MgCl2) wa ambos. Pa ya pull — downs GFP:MBK — 2, bí realizaron yoho ya experimentos separados utilizando 'na'ño nkohi lavado. Las proteínas se eluyeron por agitación orbital en 50 μl de 6 m de urea/2 M de tiourea a temperatura ambiente. Para los experimentos de reducción de MBK-1::GFP, las proteínas se eluyeron dos veces agitando 50 μl de cloruro de guanidinio de 8 m a 90 °C, seguido de precipitación con etanol. Tso̲kwa continuación, ya muestras proteínas eluidas ar digierieron jar njäts'i.
(cf. Chen et jar el., 2016)

Sonotrodo MTP — 24 — 8 — 96 mä ar hñäto sondas ultrasónicas da sonicación yá pocillos ya placas microtitulación.

Homogeneización ne lisis ultrasónica zu'we 'wadá

Pa ar nt'ot'e lisis ne extracción proteínas c.ndunthe elegans, ar recolectaron 30.000 nemotodos etapa correspondiente ya muestra ne lavaron jar S — basal helado, bí concentraron ya centrifugación 1500 rpm Nxoge 2 ar min., ar lavaron 'rato ya 'nandi ko S — basal helado pa da hñäki ya bacterias residuales ne xu̲ki ar almacenaron jar hielo asta da estuvieran listos pa ár njapu'befi. Pa ar extracción proteínas, nä'ä da permitió ke ya zu'we 'wadá grávidos adultos formaran 'nar pellet xí nze̲di 'mefa xta ar ngäts'i lavado basal ar S. Tso̲kwa continuación, gránulos ya zu'we ar resuspendieron jar 1 ml tampón ar extracción helado [20 mM ar fosfato potasio, pH 7,4, 2 mM EDTA, 1% ar Triton — X — 100, inhibidores ar proteasa (Sigma P2714)] ne da procesaron ngut'a.
∼30.000 zu'we 'wadá grávidos — dätä jä'i ('bui a ∼100 mg be̲xu nxa), bí sonicaron jar hielo utilizando 'nar ultrasonido ar klase sonda (nt'udi, UP50H ko microtip MS2) ja ar 40% ar amplitud Nxoge 10 ciclos 3 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i ar encendido, 30 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i ya apagado, ja ya 1 ml tampón ar extracción helado. (cf. Baskharan et jar el. 2012)

Extracción ultrasónica lípidos c.ndunthe elegans

Lipidómica, 'nar rama ar metabolómica, ar caracteriza ne analiza ar complemento lipídico ya sistemas biológicos. C.ndunthe elegans ar usa ampliamente jar lipidómica da hyoni ar interacción ya lípidos metabólicos ne yá efectos dige ar nzaki ne ar esperanza ar nzaki.
Ar lisis ne ar extracción ultrasónica ar gi japu̲'be̲fi pa liberar lípidos komongu ar esfingolípidos embriones, larvas ne ya zu'we 'wadá adultos c.ndunthe elegans. Ar ultrasonicación ar gi japu̲'be̲fi pa ndi hoki homogeneizados lombrices ne, 'mefa, da extraer ya lípidos ar muestra.
Nthuts'i nkohi pa extracción ultrasónica lípidos c.ndunthe elegans
Descongele pellet c.ndunthe elegans jar hielo ne vuelva suspender ko 0,5 ml ultrawater.  Sonicar ya muestras c.ndunthe elegans jar tubos ensayo 1,5 ml, manteniendo ya muestras ñäñho jar hielo.
Ar sonicación to ga OT'UJE ar utilizando 'nar ultrasonido sonda, ngu ar UP200Ht, ar xe̲ni nt'ot'e muestras ya ultrasonidos VialTweeter (sonicación simultánea ar 10 muestras) wa ar UIP400MTP (pa ar sonicación placas varios pocillos, komongu ya placas 96 pocillos). pa ar lisis ultrasónica ko ar UP200Ht, utilice ar micropunta S26d2. Preajuste modo ciclo ultrasónico jar menú ar 'bede. Ajuste ar amplitud 10% ne ar modo ciclo sonicación 2 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i, pulsos 20 ciclos ko 'nar pausa 30 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i ja ya ráfaga pulsaciones ultrasónicas.
Transfiera ya sobrenadantes ma tubos vidrio ko tapón rosca.  Realice la extracción de Folch añadiendo 1 ml de ultrawater a cada tubo de vidrio, seguido de 6 ml de mezcla de cloroformo/metanol (proporción = 2:1) a cada tubo de vidrio.
Vórtice ya tubo vidrio Nxoge 30 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i Nxoge 4 ya 'nandi.  Centrifugar ya tubos 1.258 x g Nxoge 15 min (Eppendorf, 5810 R) pa mejorar aún mi mäs ar separación fases.  Transfiera ar fracción hidrofóbica inferior ja 'nar tubo vidrio limpio ir nge 'nar pipeta Pasteur ar vidrio.  Seque ar fracción hidrofóbica inferior jár flujo nitrógeno ja 'nar evaporador nitrógeno.  Guarde el pellet seco en un congelador a -80 °C hasta su uso.

Nt'ot'e ultrasónica lisados lombrices

Lisado ar lombrices: ya lombrices etapa L4 ar cosecharon ne lavaron hñu ya 'nandi ko tampón M9 (42.26 mM Na₂HPO₄, 22.04 mM KH₂PO₄, 85,56 mM NaCl ne 0,87 mM MgSO₄) jar 'mui da hñäki ya ga̲tho ya bacterias. 'Me̲fa da hñäki ya dätä yá 'bede tsa̲ tampón M9, ya zu'we 'wadá ar resuspendieron jar tampón lisis: 50 mM HEPES, 50 mM KCl, 1 mM EDTA, 1 mM EGTA, 5 mM fosfato β — glicerol, 0,1% (v/v) Triton X — 100, 50 mM fluoruro sodio, 1 mM ortovanadato sodio, 5 mM pirofosfato sodio, 0,2 mM fenilmetanosulfonilo fluoruro ne inhibidor ar proteasa. Ya lombrices congelaron jar nitrógeno líquido ne descongelaron ma 37 °C tres bes, xu̲ki ya lombrices ar sometieron da sonicación jar hielo seco ko 'nar ar xe̲ni ultrasónica VialTweeter pa jar nt'ot'e simultánea 10 tubos muestra. Ar sonicación bí zits'i da t'ot'e xi hño ar 50% ar amplitud jar 10 ciclos 2 ar seg. ko 'nar pausa 30 ar seg. ja ya nangu̲ndähi sonicación. Posteriormente, las muestras se centrifugaron a 12000 rpm a 4°C durante 15 min. Ar sobrenadante ar recogió ne almacenó ma -70 °C. Ar utilizó 'na alícuota pa ar cuantificación proteínas ir nge ar ensayo Bradford.
Njäts'i glutatión Nxoge, ar GSH ne ar GSSG: pa ar cuantificación ar glutatión, ya lisados ne ár njäts'i bí realizaron xkagentho ar pa. Ya larvas L4 alimentadas glucosa ne control ar cosecharon ne ar lavaron ko tampón M9 hñu ya 'nandi. 'Me̲fa da hñäki ya dätä yá 'bede tsa̲ tampón M9, ya zu'we 'wadá ar resuspendieron jar ácido metafosfórico helado (5% p/v), xu̲ki ya zu'we 'wadá ar sonicaron jar hielo ko 'nar VialTweeter ultrasónico ja ar 50% ar amplitud jar 're̲t'a ciclos sonicación 2 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i ko 'nar pausa 30 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i ja ya ciclo. Posteriormente, centrifugado a 12000 rpm a 4 ̊C durante 15 min.
(cf. Alcántar-Fernández et jar el., 2018)

Nt'ot'e muestra c.ndunthe elegans 'be̲tho ar inmunoprecipitación ne ar Western Blotting

Jar resumen, pa ya extractos embrionarios, ya larvas L1 ar c.ndunthe elegans ar cultivaron jar cultivos líquidos made S tso̲kwa gran escala asta ar bätsitho adulta. Ya embriones ar recogieron utilizando ar nt'ot'e blanqueo estándar ne suspendieron jar tampón lisis (50 mM ar Tris, pH 7,5, 100 mM KCl, 1 mM EDTA, 1 mM MgCl2, 8,7% ar glicerol, 0,05% ar NP — 40, 1 cóctel inhibidores proteasa ne 1 cóctel inhibidores fosfatasa I ne II), bí congelaron rápidamente jar nitrógeno líquido ne da lisaron ya disrupción celular ultrasónica utilizando 'nar ultrasonido ko micropunta Komo ar UP200Ht ko S26d2 pa 10 pulsos Nxoge 10 s ja ar 30% ar amplitud. Nu'bu̲ ar gi hoki 'nar 'bede dätä muestras, ar ultrasonido VialTweeter wa ar UIP400MTP MultiSample — Ultrasonicator pa placas pocillos. 'Mefa xta sonicación, ya extractos ar autorizaron mpakuthuu por centrifugación 30.000 g durante 20 minutos a 4 °C. Extracto mpakuthuu aclarado (300 μg de proteína total) bí incubó ko 40 μ μ anticuerpo purificado por afinidad anti — CDC — 25.1 (este estudio) reticulado ja ar proteína A — agarosa, wa komongu ar control, bí utilizó 'nar yá 'bede similar ya inmunoglobulina (Ig) G kwa reticulada ja ar proteína A- agarosa ja 'nar volumen total de 200 μl de tampón de lisis que contenía un 1% de NP-40, cuya inclusión redujo la unión inespecífica de proteínas a la matriz. Las muestras se rotaron durante 1 h a 4 °C, las perlas se lavaron tres veces con tampón de lisis y se eluyeron con 30 μl de glicina/HCl y 200 mM de NaCl, pH 2,2. 'Mefa xta inmunoprecipitación, ya eluidos ar diluyeron jar 30 ar μ tampón muestra SDS, ar calentaron da 95 °C durante 4 minutos y, por lo general, se aplicó el 3 % de total para la entrada y el 30 % para los eluidos a SDS-PAGE, seguido de Western blot con anticuerpos anti-CDC-25.1 (1:400), anti — LIN — 23 (1:750), anti-ubiquitina (1:1000), anti — GSK3 (1:500) wa anti-β — actina (1:2000). Nu'bu̲ ya extractos hingi ar sometieron ma inmunoprecipitación, xkagentho yá 'bede ya proteína total derivada ar esos extractos resuspendió jar tampón muestra SDS, pat'i ya 95 °C ne gem'bu̲ bí aplicó Hmunts'i da SDS — PAGE ne analizó ir nge ya Western blot. (cf. Segref et jar el. 2020)

Disruptor celular ultrasónico UP200St ko micro — tip S26d2 pa lisis ne extracción proteínas

Lisis ultrasónica jár control ar mpat'i presión

Ar control preciso ne fiable ar mpat'i ar crucial nu'bu̲ ar manipulan muestras biológicas. Altas ya temperaturas inician ar degradación ar proteínas inducida térmicamente ja ya muestras.
Ga̲tho ya técnicas mecánicas nt'ot'e muestras, komongu ar sonicación genera pa. Wat'i, ar mpat'i ya muestras ar tsa̲ da controlar xi hño nu'bu̲ ar gi japu̲'be̲fi ar VialTweeter. Bí presentamos ndunthe ya opciones pa monitorizar ne controlar ar mpat'i yá muestras Mente ya gi hoki ar VialTweeter ne ar VialPress pa ár análisis.

Monitorización ar mpat'i ar muestra: ar procesador ultrasónico UP200St, da acciona ar VialTweeter xí equipado 'nar software inteligente ne 'nar sensor mpat'i enchufable. Conecte sensor mpat'i 'na jar UP200St ne inserte ár nts'ä sensor mpat'i jar 'na ya tubos muestra. A través de 'nar pantalla táctil 'bede ya njät'i, to da t'ot'e jar menú ar UP200St 'nar rango ar mpat'i específico da sonicación ár muestra. Ar ultrasonido ar detendrá automáticamente nu'bu̲ ar alcance ar mpat'i máxima ne detendrá asta ar mpat'i ar muestra baje ár hmädi mäs hñets'i'i ar mpat'i establecida ∆. Tso̲kwa continuación, ar sonicación pengi 'bu̲i automáticamente. Nuna ar función inteligente evita degradación inducida ir nge ar pa.
Bloque VialTweeter ar tsa̲ da preenfriar. Coloque bloque VialTweeter (ho̲ntho ar sonotrodo hinda transductor!) jar ar refrigerador wa congelador pa preenfriar bloque titanio ayuda bí posponer ar aumento mpat'i ja ar muestra. Nu'bu̲ xähmä, ar muestra 'nehe ar tsa̲ da preenfriar.
Utilice hielo seco pa enfriar Nxoge ar sonicación. Use 'nar bandeja tx'u̲tho profunda ár ñut'i ko xingu ya hielo seco ne coloque VialTweeter dige ar hielo seco pa ndi ar pa ar disipe rápidamente.

'Bui ar disruptor celular ultrasónico óptimo pa ár nt'ot'e lisis

Hielscher Ultrasonics ge 'nar fabricante ko ndunthe ya mfeni jar fabricación ya disruptores ne ya homogeneizadores celulares ar ultrasónicos ar mar hñets'i rendimiento pa laboratorios, sistemas sobremesa ne da escala industrial. Tamaño ár cultivo células bacterianas, ár objetivo nthoni wa ar producción ne ar volumen células da procesar ya ora wa pa ya factores esenciales pa tingigi mbo jar disruptor celular ultrasónico mfädi pa ár nt'ot'e.
Hielscher Ultrasonics ofrece ndunthe soluciones pa sonicación simultánea muestras múltiples (asta 10 viales), nja'bu komongu ar muestras masivas (es decir, placas ar microtitulación yá placas ya 96 pocillos), ndezu̲ ar clásico ultrasonido laboratorio ar klase sonda ko 'na'ño niveles ar nts'edi ar 50 da 400 vatios asta ya procesadores ultrasónicos ar totalmente industriales asta 16.000 vatios ir nge ar xe̲ni pa ar disrupción celular yá 'ma ne ar extracción proteínas jar dätä ar producciones. Ga̲tho ya ultrasonidos Hielscher gi 'bu̲hu̲ construidos da funcionar ya 24 ora ar pa, 7 ya pa ar su̲mänä, ya 365 pa ar je̲ya plena ar carga. Ar robustez ne ar fiabilidad ya características du̲i HMUNTS'UJE dispositivos ultrasónicos.
Ga̲tho ya homogeneizadores ultrasónicos digitales gi 'bu̲hu̲ equipados ko 'nar software inteligente, 'nar pantalla táctil ya njät'i ne 'nar protocolizado automático datos, nä'ä bi pa̲ti bí dispositivo ar ultrasónico ja 'nar cómoda herramienta ar 'be̲fi jar jar laboratorio ne ya instalaciones producción.
Da ga ga pädi Temu̲ ar klase ar células, Temu̲ volumen, ko Temu̲ frecuencia ne ko Temu̲ objetivo pe̲ts'i da procesar yá muestras ya biológicas. Bí recomendaremos ar disruptor ar células ultrasónico mäs adecuado pa ya requisitos ár proceso.

Xtí tabla bí ofrece 'nar indicación ya mfeni ya procesamiento aproximada HMUNTS'UJE sistemas ultrasonidos, ndezu̲ homogeneizadores portátiles compactos ne ultrasonidos MultiSample asta ya procesadores ultrasónicos ar industriales pa aplicaciones comerciales:

Volumen lote	Gasto	Dispositivos recomendados
Placas 96 pocillos yá microtitulación	n.d.	UIP400MTP
10 viales 0,5 ma 1,5 ml	n.d.	VialTweeter jar UP200St
0.01 jar 250 ya ml	Ar 5 100 ml yá min	UP50H
0.01 jar 500 ya ml	Ar 10 200 ml yá min	UP100H
Ar 10 da 2000 ml	Ar 20 400 ml yá min	UP200Ht, UP400St
0.1 da 20L	0.2 4 L yá min	UIP2000hdT
Ar 10 da 100L	Ar 2 10 l yá min	UIP4000hdT
n.d.	Ar 10 100 L yá min	UIP16000
n.d.	Mar dätä	Racimo ar UIP16000

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Ya homogeneizadores ultrasónicos mar hñets'i ar cizallamiento bí utilizan jar procesamiento laboratorio, sobremesa, piloto ne industrial.

Hielscher Ultrasonics fabrica homogeneizadores ultrasónicos mar hñets'i rendimiento pa aplicaciones ar mezcla, dispersión, emulsificación ne extracción bí escala ar laboratorio, piloto ne industrial.

Bibliografía yá Referencias

Chen J.-X; Cipriani P.G.; Mecenas D.; Polanowska J.; Piano F.; Gunsalus K.C.; Selbach M. (2016): In Vivo Interaction Proteomics in Caenorhabditis elegans Embryos Provides New Insights into P Granule Dynamics. Molecular & Cellular Proteomics 15.5; 2016. 1642-1657.
Jonathan Alcántar-Fernández, Rosa E. Navarro, Ana María Salazar-Martínez, Martha Elva Pérez-Andrade, Juan Miranda-Ríos (2018): Caenorhabditis elegans respond to high-glucose diets through a network of stress-responsive transcription factors. PLoS One 13(7); 2018.
Segref, A.; Cabello, J.; Clucas, C.; Schnabel, R.; Johnstone I.L. (2010): Fate Specification and Tissue-specific Cell Cycle Control of the Caenorhabditis elegans Intestine. Molecular Biology of the Cell Vol. 21, 2010. 725–738.
Henderson S.T., Bonafe M., Johnson T.E. (2006): daf-16 protects the nematode Caenorhabditis elegans during food deprivation. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 2006; 61:444–60.

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Datos da Bale ar penä ga pädi

Caenorhabditis elegans

C.ndunthe elegans ge 'nar nematodo transparente ar nzaki mpe̲fi (zu'we redondo) ar aproximadamente 1 mm ar longitud, da T'ini ar bacterias (nt'udi, E. coli) ne pe̲ts'i 'nar ciclo ar nzaki relativamente hingi maa. A 20 °C, la cepa de laboratorio de C. elegans (N2) tiene una vida media de unas 2-3 semanas y un tiempo de generación de 3-4 días. Nu'bu̲ c.ndunthe elegans ar cultiva jar dätä cantidades, nä'ä ar tsa̲ da 'yo̲t'e hingi hembi da ja ya laboratorio controladas ko ar precisión, ar xi examinar hingi hembi da pa ar tsa da jäts'i ndui funcionamiento ya 'ra'yo medicamentos, nja'bu Komo yá efectos ne interacción mbo ja ya procesos moleculares ar complejos jar enfermedades humanas. Ar genoma hingi maa, ar ciclo ar nzaki hingi maa ne manejo sencillo jar entornos laboratorio o̲t'e ar c.ndunthe elegans 'nar organismo modelo ideal pa investigaciones Honja genómica, proteómica, biología ár nte, nthoni enfermedades, nte fármacos, etcétera.
Ya zu'we 'wadá Caenorhabditis elegans xi da machos wa ya hermafroditas. Ya hermafroditas pe̲ts'i yá Hmunts'i reproductores masculinos ne femeninos. Wat'i, ya zu'we 'wadá hembra hingi 'bu̲i. Ya hermafroditas xi autofecundarse wa 'nehe xi reproducir ar ko zu'we 'wadá macho. C.ndunthe elegans to producir mäs ar 1.000 ar huevos da ar pa.
Mä ya xki da c.ndunthe elegans ge 'na ja ya Hmunts'i mäs simples ko 'nar ko ya nervioso, ar zu'we nematodo ar gi japu̲'be̲fi ndezu̲ 1963 komongu organismo modelo pa ár nthoni. Ya neuronas hingi disparan potenciales ya nt'ot'e ne hingi expresan ningún 'ñuu sodio dependiente ar voltaje. Ja ár hermafrodita, nuna ko ya comprende 302 neuronas da t'ot'e hmu ge mapeado exhaustivamente, jar nä'ä mi pädi komongu ar conectoma.
Xingu ya genes genoma c.ndunthe elegans pe̲ts'i contrapartes funcionales ja ya jä'i, nä'ä nä'ä bi pa̲ti ja 'nar modelo extremadamente útil pa ya enfermedades humanas ne, ngu, bí gi japu̲'be̲fi studya biología ár nte, ar envejecimiento ne ya factores da influyen ar longevidad. 'Nehe, ya mutantes ar c.ndunthe elegans proporcionan modelos pa dí enfermedades humanas, incluidos ya trastornos neurológicos (nt'udi, ar Alzheimer), cardiopatías ya congénitas ne ya enfermedades renales.
Nuya factores Xká 'yot'u̲hu̲ ir 'be̲fi ar c.ndunthe elegans 'nar modelo xi valioso pa xingu campos nthoni. Da consecuencia, c.ndunthe elegans bí ar ndu̲i organismo multicelular jar ga ár genoma completo secuenciado. Ar estima ne ar genoma contiene 20.470 genes codificadores ar proteínas. Alrededor ar ar 35% ja ya genes c.ndunthe elegans pe̲ts'i homólogos humanos. Sorprendentemente, ar xi demostrado ngu da genes ya humanos reemplazan yá homólogos ya c.ndunthe elegans nu'bu̲ introducen jar c.ndunthe elegans. Ya ar contrario xingu genes c.ndunthe elegans xi funcionar ar bí similar ja ya genes ya mamíferos.

Ar esperanza ar nzaki c.ndunthe elegans ar aproximadamente 3 ya su̲mänä ne tsu̲di hñu ya 'rato etapas ar nzaki: embriogénesis (etapa ar t'axi), goho etapas larvales (L1 ma L4) ne ar etapa adulta. Ya nematodos eclosionan ya huevos komongu larvas L1 compuestas ya 560 ar células. Crecimiento Nxoge ya etapa larvaria ocurre división celular ne ya hipertrofia celular. Ar muda cuticular marca ya etapa larvaria. Nu'bu̲ ya nkohi ambientales adversas bí indican ya zu'we jar nte ne xähmä tx'u̲tho ke ya nkohi apoyen ar fertilidad adulta, c.ndunthe elegans to alterar ár nte ne formar 'nar etapa larvaria L3 alternativa, hogem'bu̲ ya larvas ku̲t'i ja 'nar etapa dauer. Nuna ar hnini, ya me̲ti ya extraordinariamente tolerantes 'na jar estrés ne longevos, ne xi sobrevivir ar hñu ma gu̲to ya zänä. Ya larvas dauer bí aíslan ar adversidad ar sellando yá cavidades bucal ne anal, encogiendo ár intestino ne activando 'nar programa genético dependiente daf — 16 yá FOXO nä'ä da ja ma 'ra ya conduce jar hmä 'nar cutícula específica dauer. (cf. Henderson et jar el., 2006)

Larvas c.ndunthe elegans Dauer

Larvas Dauer ge ar ngäts'i pa ya larvas nematodos, bi ñut'i ja 'nar etapa nte alternativa. Ar ngäts'i "larvas ar Dauer" ar gi japu̲'be̲fi particularmente pa ya zu'we 'wadá ya mengu ja ya rabdítidos, incluido ar Caenorhabditis elegans. Po̲ts'e "Dauer" ar 'rini alemän ne ir bo̲ni jar hmä "duración"” Ja ar o ár 'ñu ar “'nar período ya pa". Ya larvas Dauer ku̲t'i ja 'nar zu'we Dar estasis ne xi sobrevivir jar nkohi adversas. Ar ora da 'nar larva ku̲t'i ja ar fase incubación bi jagu̲ju̲ ya nkohi xi ambientales. Ya larvas dauer ar 'mu̲i nxa̲di ampliamente jar biología ngetho muestran 'nar mfeni extraordinaria pa sobrevivir entornos hostiles ne 'bu̲i Nxoge largos períodos ya pa. Ngu, ya larvas ar c.ndunthe elegans dauer xi sobrevivir asta ar goho ya zänä, xingu mäs da ár esperanza ar nzaki promedio aproximadamente hñu ya su̲mänä Nxoge ár nte reproductivo normal.

Visión Nxoge ar ciclo ar nzaki c.ndunthe elegans

Nte c.ndunthe elegans jar ambientes favorables:
Caenorhabditis elegans (c.ndunthe elegans) gi 'ñudi 'nar progresión ár nte diferente jar nkohi ambientales favorables ne desfavorables.

Respuesta c.ndunthe elegans jar nkohi favorables:
Jar nkohi favorables, ar zu'we redondo microscópico Caenorhabditis elegans (c.ndunthe elegans) te̲ni ar 'ñu nte hño definido. El nematodo suele pasar por su ciclo de vida con bastante rapidez cuando las condiciones ambientales son óptimas, normalmente a temperaturas entre 15 °C y 20 °c.

Nte reproductivo: C.ndunthe elegans comienza ár ciclo ar nzaki komongu 'nar embrión. 'Me̲fa progresa a través de goho etapas larvales distintas, abreviadas komongu ar L1 da L4.
Etapa adulta: 'Mefa xta completar ya goho etapas larvarias, c.ndunthe elegans alcanza etapa adulta jar Honto 3 jar 5 pa. Xí etapa ya mar tsa̲ ndi reproducir da ne continúan viviendo Nxoge ma'ra 2 ma 3 ya su̲mänä, dependiendo de factores ambientales.

Respuesta c.ndunthe elegans jar nkohi desfavorables:

'Ñotho ar embargo, c.ndunthe elegans ge 'nar organismo resistente ne tsa̲ da adaptar ar jar nkohi desfavorables a través de proceso llamado formación dauer.

Formación Dauer: Nu'bu̲ ya nkohi ambientales ar vuelven desfavorables, komongu ar hacinamiento, ar suministro limitado ar nts'i wa ya altas temperaturas, c.ndunthe elegans to entrar ja 'nar tercera etapa larvaria extraordinaria llamada “dauer,” abreviado komongu ar L3d.
Supervivencia ar Dauer: Ya larvas Dauer gi 'bu̲hu̲ hontho adaptadas pa sobrevivir jar nkohi adversas. Xi 'bu̲i Nxoge varios ya zänä jar xí etapa, conservando energía ne soportando entornos desafiantes.

Ar recuperación jar entornos favorables:
Aspecto notable c.ndunthe elegans ge ár mfeni pa volver ja 'nar ciclo ar nzaki normal nu'bu̲ ya nkohi mejoran.

Volver nkohi favorables: Nu'bu̲ ya larvas c.ndunthe elegans dauer vuelven tini nkohi favorables, komongu abundante alimento, zu'we densidad nthogi ne temperaturas adecuadas, perciben ar cambio ar entorno.
Recuperación ne Reproducción: Ar respuesta jar nkohi gi mejoradas, ja ya larvas dauer ar someten ja 'nar proceso llamado “recuperación.” Nxoge jar recuperación, vuelven ya etapas larvales ne, ar ngäts'i, ar convierten ja ya dätä jä'i reproductivos ko 'nar esperanza ar nzaki normal.

Nuna mfeni mpa̲ti entre etapas nte jar respuesta ya nkohi ambientales ge 'nar aspecto hontho biología c.ndunthe elegans. Bí permite sobrevivir ne reproducir ar eficazmente ja 'nar nt'ot'e ho 'bui ndunthe gama nkohi, nä'ä ya bi pa̲ti ja 'nar valioso organismo modelo pa ár nthoni científica, particularmente jar estudio ár nte, ar genética ne ar envejecimiento.

Nt'ot'e ultrasónica muestras c.ndunthe elegans