Lisis ultrasónica ar E. coli
- Ya bacterias E. coli ge ya bacterias mäs utilizadas microbiología ne ar biotecnología.
- Ya disruptores celulares ultrasónicos ofrecen resultados fiables ne reproducibles pa ar lisis ar E. coli.
- Ya ndu nzafi cavitación ne cizallamiento hmä pe controlables ko precisión gi komongu ar nt'uni 'nar interrupción nxo̲ge ne altos rendimientos extracción (nt'udi, proteínas, ADN).
¿Yogo'ä ar disrupción celular ultrasónica ar E. coli ge ár nt'ot'e Temu?
Ya homogeneizadores ultrasónicos wa ultrasonidos ar klase sonda ofrecen ndunthe ventajas pa ar lisis ar E. coli, ya da ultrasonidos ya intensos alteran eficazmente paredes ya celulares ne ya membranas. Ya ultrasonidos ar klase sonda ar utilizan ampliamente pa ar lisis ar E. coli nu'bya nuya ya razones:
Extracción proteínas ya células ar E. coli ar realiza ar bí nt'ot'e xi hño ko ar sonda ultrasónica UP200St
Ar ultrasonido ar klase sonda ofrece xingu ventajas pa ar lisis ar E. coli. Ar control fiable ne preciso ya parámetros ar proceso ultrasónico permite optimizar ya parámetros funcionamiento, komongu ár nts'edi, ar duración ne ar manipulación ya muestras, pa da tsoni ya resultados deseados.
Análisis electroforético ar ADN genómico ar E. coli EDL933 'na jar ultrasonidos 0 jar 15 min. L indica 'rede ADN.
(estudio ne ya tsita: ©Basselet et jar el. 2008)
Disrupción celular ir nge ya cavitación ultrasónica
Ya homogeneizadores ultrasónicos ar klase sonda funcionan ko 'ra 20.000 ciclos ya mfe̲tsi (ma 20 kHz) ne provocan cavitación jar líquidos wa ya suspensiones. Cavitación acústica: áreas microscópicas presiones similares 'na jar vacío ne altas temperaturas da desgarran ya células. Anke ya temperaturas ar xi alcanzar varios miles ya grado ar centígrados, ya volúmenes cavitación ya ngut'ä t'olo ke hingi calientan ar proceso ar bí significativa. Ya ndu nzafi cavitación ne cizallamiento acústicas generadas ya ultrasonidos perforan wa rompen membrana celular células bacterianas komongu E. coli. Ya ultrasonidos Hielscher permiten 'nar control preciso ya parámetros ar proceso, komongu ar intensidad ultrasónica, ar amplitud, ar entrada ar energía ne ar mpat'i. Ar nuna modo, proceso lisis ultrasónica to ajustar ar ar nt'ot'e óptima ar klase ar célula, ar cultivo celular ne ar objetivo ar proceso.
- Control preciso lisis (intensidad, amplitud, mpat'i)
- Resultados fiables ne reproducibles
- Adaptación óptima ma muestras específicas
- Control mpat'i
- para muestras muy pequeñas a muy grandes (μL a litros)
- Ár nt'ot'e puramente mecánico
- Operación segura ne hei ar zu̲di
- Escalado lineal ndezu̲ ar laboratorio asta ar producción
VialTweeter pa lisis ultrasónica
Homogeneizador ultrasónico Hä ma 'ra técnicas lisis
Mente da lisis química ne enzimática to da problemática – Dado da lisis ar química ar tsa̲ da alterar ya estructuras ya proteínas ne ya introducir hñäki purificación, ar lisis enzimática requiere largos tiempos incubación ne hingi ar reproducible – Ar disrupción ultrasónica ge 'nar nt'ot'e sofisticado ne rápido disrupción celular.
Ar lisis ar ultrasónica ar basa únicamente ja ya ndu nzafi mecánicas. Hingi ar añaden productos químicos, ar sonicación 'wagi Jot'i celular ya nsani cizallamiento. Lisis ar química ar tsa̲ da alterar ar estructura ya proteínas ne ya introducir hñäki purificación. Ar disrupción enzimática requiere largos tiempos incubación ne hingi ar reproducible. Ar disrupción celular ultrasónica ja ya células bacteria E. coli ar ngut'a, ar sencilla, ya fiable ne ya reproducible. 'Bu̲ nä'ä di 'bui, ya ultrasonidos Hielscher ar utilizan jar laboratorios biológicos ne bioquímicos ar nga̲tho ar ximha̲i da mfädi muestras, preanlíticos, diagnósticos in vitro ne ensayos múltiples.
Uni mfädi Nxoge pa ar lisis ultrasónica
Ar sonicación ge ar técnica mäs njohya yá 'mu̲ise̲ pa lisar cantidades xi t'olo, medianas ne ya dätä suspensiones celulares – ndezu̲ ar pico-litros asta 100 L yá hr (utilizando 'nar celda flujo ultrasónico). Ya células da lisan ya cizallamiento líquido ne ar cavitación. Ar ADN 'nehe ar tseki Nxoge jar sonicación, nä'ä Hingar mahyoni añadir DNasa bí suspensión ar celular.
Control ar mpat'i Nxoge ar lisis ultrasónica ar E. coli
Ar preenfriar ar muestra ne da zeti Nxoge ar sonicación jar hielo, ar tsa̲ da nu'bu hingi hembi da degradación térmica ar muestra.
Idealmente, ya muestras tsa da zeti ar heladas Nxoge jar lisis, pe pa mäs xingu ya muestras ar xingu nu'bu̲ ar mpat'i hingi supera ar mpat'i ar cultivo wa ar fuente tejido. Ir ar recomienda da zeti ar suspensión hielo ne sonicar ko varios pulsos ultrasónicos cortos 5 — 10 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i ne pausas 10 — 30 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i. Nxoge ya pausas, ar mpa tsa̲ da disipar ar pa da t'ot'e 'nar mpat'i xí hñets'i'i. Pa muestras celdas mäs mña dätä, mahyoni da 'mui varios reactores celda flujo ko da enfriamiento.
Lea nuwa consejos detallados ne uni mfädi pa 'nar lisis ultrasónica exitosa.
Protocolos pa jar nt'ot'e ultrasónica lisados ar E. coli
Ya investigadores utilizan homogeneizadores ultrasónicos Hielscher pa disrupción celular ar E. coli. Tso̲kwa continuación to tingigi mbo varios protocolos probados ne comprobados pa ar lisis ar E. coli utilizando homogeneizadores ultrasónicos Hielscher pa ya 'na'ño aplicaciones relacionadas ko E. coli.
Crecimiento celular, ya reticulación ne ya nt'ot'e extractos celulares ar E. coli ir nge ya ultrasonidos
Para la SeqA y la ARN polimerasa, ChIP-Chip, E. coli MG1655 o MG1655 ΔseqA se cultivó a 37 °C hasta un OD600 ar aproximadamente 0,15 jar 50 ml LB (+ 0,2% ar glucosa) Ante nda añadieran 27 bi μl de formaldehído (37%) ya ml de medio (concentración final 1%). Ar reticulación ar realizó da agitación lenta (100 rpm) jar mpat'i ambiente Nxoge 20 min, seguida ar enfriamiento ko 10 ml glicina 2,5 M (concentración final 0,5 M). Para los experimentos de choque térmico, E. coli MG1655 se cultivó en un medio LB de 65 ml a 30 °C hasta un OD600 ar aproximadamente 0,3. Posteriormente, bí transfirieron 30 ml de cultivo a un matraz precalentado a 43 °C y el resto se mantuvo a 30 °C. Ar reticulación ne ar enfriamiento bí realizaron nu'u̲ bí describió ma 'met'o mi, menu ne ya células ar mantuvieron da 30 wa 43 °C durante 5 minutos antes de una nueva agitación lenta a temperatura ambiente. Ya células recogieron ya centrifugación ne da lavaron yoho ya 'nandi ko TBS ntse̲t'i (pH 7,5). Ir resuspensión jar 1 ml tampón lisis (10 mM Tris (pH 8,0), 20% ar sacarosa, 50 mM NaCl, 10 mM EDTA, 10 mg yá ml ya lisozima) ne ar incubación 37°C Nxoge 30 min seguida ar adición 4 ml tampón IP, ya células ar sometieron da sonicación jar hielo ko pausas 12 ar bes 30 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i ne 30 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i utilizando ar procesador ultrasónico Hielscher UP400St ja ar 100% ar nts'edi. Después de la centrifugación durante 10 min a 9000 g, se almacenaron 800 μl de alicócuotas del sobrenadante a -20 °C. (Waldminghaus 2010)
Sobreproducción ne purificación enzimas ko 'nar sonda ultrasónica
Pa ar sobreproducción proteínas marcadas ko decahistidina (His10), E. coli BL21 (DE3) bí transformó ko construcciones pET19b. Bí cosechó 'nar precultivo nocturno ya centrifugación ne da utilizó 'nar 1% pa inocular 'nar cultivo ya hmä. Las células portadoras de pET19mgtB se cultivaron a 22 °C hasta alcanzar una densidad óptica a 600 nm (OD600) de 0,7. El cultivo ar transfirió da 17°C ne se indujo con IPTG 100 μM. 'Mefa xta 16 h, ar cultivo bí cosechó ya centrifugación a 7.500 × g a 4°C. Ya células resuspendieron ja ya njäts'i salina ar tamponada ko fosfato (PBS) ar 50 mM ko NaCl 0,3 M ma pH 7,4 ne interrumpieron ir nge ya ultrasonidos ko 'nar sonotrodo micropunta S2 ja ar ultrasonido UP200St ar Hielscher 'nar ciclo 0,5 ne 'nar amplitud 75%.
La sobreproducción de GtfC marcada con decahistidina se indujo a 37 °C a una DO600 de 0,6 con 100 μM de IPTG. Tso̲kwa continuación, ya células incubaron Nxoge 4 h, bí cosecharon ne lisaron nu'u̲ bí indicó ma 'met'o mi pa MgtB.
Ya extractos celulares crudos ar centrifugaron da 15.000 × g ne 4 °C para sedimentar los restos celulares. Ya extractos clarificados ar cargaron jar columnas HisTrap FF Crude ar 1 ml utilizando 'nar ko ya ÄKTAprime Plus. Ya enzimas ar purificaron ir nge ar Nthuts'i nkohi fabricante pa ar elución gradiente proteínas marcadas ko ya His. Ya soluciones proteicas eluidas da dializaron ya dos bes hä 1.000 volúmenes de 50 mM de PBS, pH 7,4, con 0,3 M de NaCl a 4°C. Ar purificación ar analizó ko SDS — PAGE jar 12%. Ar concentración ar proteína bí determinó ir nge ar nt'ot'e Bradford utilizando Roti — Quant. (Rabausch et jar el. 2013)
Extracción ultrasónica proteínas bacterias E. coli
'Nar proteína cebo 'befi (jar nuna ar nt'ot'e, MTV1 Arabidopsis thaliana) fusiona ko 'nar etiqueta GST ne expresa jar células BL21 ar Escherichia coli (E. coli).
- Gi 'nar pellet GST — MTV1 ne GST (correspondiente ma 50 ml cultivo bacteriano) ne vuelva suspender kadu 'na jar 2,5 ml tampón extracción jar tse̲ ar hielo.
- Utilice 'nar ultrasonido UP100H (equipado ko 'nar microsonotrodo MS3 pa t'olo volúmenes ar aprox. 2 — 5 ml) da interrumpir ya células bacterianas Asta ke bí lisen, da indica ya reducción ar opacidad ne ar aumento ar viscosidad. 'Me̲hna da t'ot'e jar hielo, ne bí recomienda sonicular intervalos (nt'udi, 10 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i ar sonicación seguida ar 10 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i ar pausa jar hielo, etc.). Mahyoni da njapkaso ar hingi sonicar ko 'nar intensidad xki mextha. Nu'bu̲ ar detecta espuma wa ar formación precipitado 'nar blanco, ar mahyoni ga reducir ar intensidad.
- Transfiera la solución de bacterias lisadas tubos de microcentrífuga de 1,5 ml y centrifugue a 4 °C, 16.000 x g durante 20 min.
Ultrasonidos ar klase sonda komongu ar UP400St utilizar ya ndui funcionamiento ar cavitación acústica pa lisis nt'ot'e xi hño ar E. coli.
Análisis ya hmä ne purificación proteínas recombinantes ir nge ya sonicación
Ar pastilla ar E. coli ar sonicó ko ar ultrasonido UP100H ar Hielscher. Pa nä'ä di 'bui, ar pellet celular bí resuspendió jár tampón ar lisis refrigerado (50 mM tris-HCl pH = 7,5, 100 mM NaCl, 5 mM DTT, 1 mM PMSF) ne da enfrió jar hielo Nxoge 10 min. Tso̲kwa continuación, ar suspensión celular ar sonicó ko 10 ze̲di cortas 10 s, seguidas 'nar intervalo 30 s pa ar enfriamiento. Finalmente, ya restos células da eliminaron ya ultracentrifugación a 4 °C durante 15 min a 14000 rpm. Pa confirmar jar hmä rPR, ar sobrenadante bí ejecutó jar gel poliacrilamida jar 12% ne analizó ir nge ya SDS — PAGE ne Western blot. Purificación rPR ar realizó utilizando resina Ni2 + — NTA (Invitrogen, EE. UU.) ir nge ar guía ar fabricante. Jar nuna ar etapa bí utilizó ar nt'ot'e purificación nativo. Ar pureza ar proteína purificada ar evaluó ir nge ya electroforesis jar gel poliacrilamida 12% ne 'mefa ár njäts'i Tange'u tinción ko azul Coomassie. Concentración proteína purificada ar midió ir nge ar kit ensayo proteínas Micro BCA (PIERCE, EE. UU.). (Azarnezhad et jar el. 2016)
Homogeneizadores ultrasónicos pa ar lisis ar E. coli
Hielscher Ultrasonics diseña, fabrica ne suministra homogeneizadores ultrasónicos mar hñets'i rendimiento pa ar lisis fiable ne ya nt'ot'e xi hño bacterias E. coli ne ma'ra xingu ya células, ar tejidos ne ar cultivos celulares.
Ar nt'ot'e ho 'bui ndunthe gama ar sondas ultrasónicas, nja'bu komongu ar sistemas sonicación indirecta, ga permite bí ofrecer ar homogeneizador ar tejidos ultrasónico ideal pa ár nt'ot'e ya disrupción ne ya extracción celular.
Diseño, Fabricación ne Consultoría – Hño Made in Germany
Ya ultrasonidos Hielscher ya conocidos ya mäs altos yá estándares ya hño ne ya diseño. Ar software ar inteligente, ar menú intuitivo, ajustes ya programables ne ar protocolización automática datos ya ho̲nda algunas ya características ya ultrasonidos Hielscher. Ár robustez ne facilidad manejo permiten integración fluida ar HMUNTS'UJE ultrasonidos jar instalaciones ya nthoni ne ya biotecnología. 'Nehe ya nkohi adversas ne ya entornos exigentes ya hingi hembi da manejables ir nge ya ultrasonidos Hielscher.
Hielscher Ultrasonics ge 'nar empresa certificación ISO ne pone hontho énfasis ja ya ultrasonidos mar hñets'i rendimiento da pede yá 'bede tecnología vanguardia ne facilidad njapu'befi. Hä, ya ultrasonidos Hielscher cumplen ko ar normativa CE ne cumplen ya requisitos ar UL, ar CSA ne ar RoHs.
Xtí tabla bí xta ar 'nar indicación ya mfeni ya procesamiento aproximada ar HMUNTS'UJE ultrasonidos:
| Volumen lote | Gasto | Dispositivos recomendados |
|---|---|---|
| Placas multipocillo yá ar microtitulación | n.d. | UIP400MTP |
| CupHorn pa viales wa ya Baso ar precipitados | n.d. | cupHorn ultrasónico |
| reactor ultrasónico microflujo | n.d. | GDmini2 |
| asta 10 viales ko 0,5 ma 1,5 ml | n.d. | VialTweeter |
| 0.5 1.5mL | n.d. | VialTweeter |
| Ar 1 jar 500 ml | Ar 10 200 ml yá min | UP100H |
| Ar 10 da 2000 ml | Ar 20 400 ml yá min | UP200Ht, UP400St |
| 0.1 da 20L | 0.2 4 L yá min | UIP2000hdT |
| Ar 10 da 100L | Ar 2 10 l yá min | UIP4000 |
| n.d. | Ar 10 100 L yá min | UIP16000 |
| n.d. | Mar dätä | Racimo ar UIP16000 |
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Protocolos ar Nthuts'i da lisis ultrasónica ar E. coli
Proteínas modificadas ko ya alicina jar E. coli ir nge 'nar vial ultrasónicoTweeter
Njäts'i del contenido de sulfhidrilo mediante el ensayo de 5,5′-dithiobis (ácido 2-nitrobenzoico) (DTNB)
Bí utilizó 'nar cultivo nocturno ar E. coli MG1655 pa inocular MOPS jar made mínimo (1:100). Ar cultivo ar cultivó aeróbicamente Asta ke bí alcanzó 'nar A600 0,4. Ar cultivo ar dividió jar hñu cultivos 15 ml pa ar nt'ot'e ar estrés. 'Nar cultivo hingi tratado sirvió komongu control negativo. Se añadió 0,79 mM de alicina (128 μg ml-1) o 1 mM de diamida a uno de los dos cultivos restantes cada uno. Ya cultivos ar incubaron durante 15 ma min. Se cosecharon 5 ml de cada cultivo por centrifugación (8.525 × g, 4°C, 10 min). Ya células da lavaron ya yoho ya 'nandi ko 1 ml PBS (137 mM ar NaCl, 2,7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4, pH 7,4, almacenadas anaeróbicamente 'bu̲ 'be̲tho ár njapu'befi) ne da centrifugaron (13.000 × g, 4 °C, 10 min). Ya células ar resuspendieron jar tampón lisis (PBS con 6 mM guanidinio HCl, pH 7,4) antes de la interrupción a 4 °C por ultrasonidos ()VialTweeter ultrasonido, Hielscher GmbH, nu Alemäña) (3 × 1 min). Ya restos celulares da peletizaron ya centrifugación (13.000 × g, 4 °C, 15 min). Ar sobrenadante bí transfirió 'nar cubeta QS — macro ar 3,5 ml (10 mm) ko 'nar barra xí agitación magnética ne mezcló ko 1 ml tampón lisis. Extinción ya muestras ar monitoreó da 412 nm ko 'nar espectrofotómetro Jasco V — 650 equipado ko ar soporte celda PSC — 718 ko control mpat'i ma mpat'i ambiente. Se añadieron 100 μl de una solución de 3 mM de ditiobis (ácido 2-nitrobenzoico). Ar extinción ar bí monitoreada asta da alcanzó ar saturación. Ar cálculo ar concentración tiol ar realizó utilizando coeficiente extinción ε412 = 13.700 m-1 cm-1 pa ar ácido tio — 2 — nitrobenzoico (TNB). Ya concentraciones celulares tiol ar calcularon a partir de 'nar volumen células ar E. coli 6,7 × 10-15 litro ne una densidad celular A600 = 0,5 (equivalente a 1 × 108 Células ML-1 jár 'mui). (Müller et al. 2016)
Njäts'i glutatión in vivo ir nge 'nar trituradora ar células ultrasónica
E.coli MG1655 ar cultivó jar made mínimo MOPS ja 'nar volumen Nxoge 200 ml asta alcanzar 'nar A600 0,5. Ar cultivo ar dividió jar cultivos 50 ml pa ar nt'ot'e ar estrés. 'Me̲fa 15 min incubación ko 0,79 mM alicina, 1 mM diamida wa dimetilsulfóxido (control), ya células ar cosecharon bí 4.000 ar g a 4 °C durante 10 min. Ya células ar lavaron dos bes ko tampón KPE antes de la resuspensión de los gránulos en 700 μl de tampón KPE. Pa ar desproteinación, ar añadieron 300 l ácido sulfosalicílico ma 10% (p/v) 'be̲tho ar ruptura ya células ya ultrasonidos (3 x 1 min;) VialTweeter ultrasonidos). Los sobrenadantes se recogieron después de la centrifugación (30 min, 13.000 g, 4 °C). Ya concentraciones ácido ar sulfosalicílico ar redujeron da ar 1% ir nge ar adición 3 volúmenes tampón KPE. Ya mediciones glutatión Nxoge ne GSSG ar realizaron nu'u̲ bí describió ma 'met'o mi. Ya concentraciones celulares glutatión ar calcularon a partir de 'nar volumen células ar E. coli 6,7×10-15 litro ne 'nar densidad celda A600 0,5 (equivalente jar 1×108 Células ML-1 jár 'mui). Ya concentraciones GSH ar calcularon restando 2 [GSSG] ar ar glutatión Nxoge. (Müller et al. 2016)
Hmä mAspAT humano jar E. coli utilizando 'nar homogeneizador ultrasónico
Colonia única ar E. coli BL21 (DE3) alberga ar vector ya hmä jar 30 mL ar made Luria — Bertani (LB) contiene 100μg/mL ar ampicilina, ne gem'bu̲ bí cultivó bí 37ºC asta alcanzar ar densidad óptica (OD600) alcanzó ar 0,6. Ya células da recolectaron ya centrifugación 4.000 × g durante 10 min ne resuspendieron ja 'nar medio LB xi 'ru̲ki ar 3 litros da contenía 100 μg/mL de ampicilina.
Posteriormente, se indujo la expresión proteica con 1 mM de isopropilo β-ᴅ-1-tiogalactopiranósido (IPTG) durante 20 h a 16ºC. Ya células da recolectaron ya centrifugación 8.000 × g Nxoge 15 ar min ne ar lavaron ko tampón (20 mM NaH2PO4, 0,5 M NaCl, pH 7,4). Ar obtuvieron células aproximadas 45 g (be̲xu nxa) a partir de 'nar cultivo 3 ar L. 'Mefa xta centrifugación, ya gránulos ar célula bí resuspendieron jar 40 mL (pa 1 L ar cultivo) ar tampón extracción jar tse̲ A ne da lisaron ya ultrasonidos mpat'i helada utilizando ar trituradora células ultrasónicas UP400St. Ar lisis ar celular bí centrifugó bí 12.000 ar rpm Nxoge 15 ar min da separar ya fracciones solubles (sobrenadantes) ne precipitadas (pellets). (Jiang et jar el. 2015)
Datos da Bale ar penä ga pädi
E.coli
Escherichia coli (E. coli) ge 'nar bacteria coliforme gramnegativa, facultativamente anaeróbica, ja ya bastoncillo, ya ar género Escherichia da o comúnmente jar intestino inferior Hmunts'i ya ji mpa (endotermos). Nuna ar dängo Nar dätä hño 'nar 'bede ya cepas (wa subtipos) ar E. coli ko características 'na'ño. Mäs xingu ya cepas ar E. coli ya inofensivas pa ya jä'i, ngu, ya cepas B ne ë — 12 da ar utilizan comúnmente pa aplicaciones nthoni jar laboratorios. Wat'i, ra cepas ya dañinas ne xi causar enfermedades graves.
Ar E. coli desempeña 'nar he̲'mi mahyoni ar ingeniería biológica ja xí 'ño ne ar microbiología industrial, ya ke ar bacteria xí hei ar manipular. Aplicaciones pa ngatho ya laboratorio ne da menudo implican njapu'befi ya E. coli, ya ejemplo, pa da t'ot'e ya ácido desoxirribonucleico (ADN) recombinante wa da nu'u hingi nthe komongu organismo modelo.
E coli ge 'nar huésped xi versátil pa ar producción proteínas heterólogas, ne bí mä ar múltiples sistemas ya hmä proteínas pa producir proteínas recombinantes jar E. coli. Utilizando plásmidos da permiten 'nar mar hñets'i za̲ ár nthe̲ hmä proteínas, ar xi introducir genes ja ya bacterias, nä'ä permite producir hmä proteínas jar dätä cantidades ja ya procesos fermentación industrial.
Ya E. coli ar utilizan komongu fábricas células pa producir insulina. Ma 'ra ya aplicaciones incluyen njapu'befi ar células modificadas ar E. coli pa nte ne producir vacunas ne enzimas inmovilizadas, pa nda producir biocombustibles, komongu pa ar biorremediación.
Ar cepa ë — 12 ge 'nar dets'e mutante E. coli da sobreexpresa ar enzima fosfatasa alcalina (ALP). Nuna ar mutación bí produce nu'bya 'nar defecto ja ar gen da codifica constantemente ar enzima. Nu'bu̲ 'nar gen produce 'nar producto hinda ni 'na jar inhibición, 'me̲hna ar pädi komongu ya nt'ot'e constitutiva. Nuna ar nt'ot'e mutante específica ar gi japu̲'be̲fi pa ar aislamiento ne ar purificación ar enzima ALP.
Ya bacterias E. coli 'nehe ar utilizan ampliamente komongu fábricas células. Ya microbios modificados genéticamente (nt'udi, ya bacterias) ne ya células vegetales xi utilizar ar komongu ya llamadas fábricas células. Gi células modificadas genéticamente producen moléculas, productos químicos, polímeros, proteínas ne ma'ra sustancias, ne bí utilizan, ngu, jar industria farmacéutica, alimentaria ne ar química. Pa liberar ya moléculas producidas interior gi células ar bioingeniería, ar lisis ultrasónica ge 'nar nt'ot'e hne ngatho pa romper ya paredes celulares ne transferir ya sustancias objetivo bí líquido ar circundante. Lea mäs dige ar lisis células bioingeniería!
Cizallamiento ultrasónico ar ADN
Ya ndu nzafi ar cizallamiento ultrasónicas ya nt'ot'e comúnmente utilizado pa liberar moléculas, ar orgánulos ne ar proteínas ar interior ar célula, nja'bu ngu da romper ya cadenas ADN jar pedazos. Ar cavitación acústica 'wagi paredes ya celulares ne ya membranas pa extraer ADN ya células ne generar fragmentos 'ra ya 600 – 800 pb longitud, nä'ä ar ideal pa ar análisis.
'Yot'e clic nuwa da uni mäs ungumfädi dige ya homogeneizadores ultrasónicos pa ar fragmentación ar ADN.
Bibliografía yá Referencias
- Azarnezhad A., Sharifi Z., Seyedabadi R., Hosseini A., Johari B., Sobhani Fard M. (2016): Cloning and Expression of Soluble Recombinant HIV-1 CRF35 Protease-HP Thioredoxin Fusion Protein. Avicenna J Med Biotechnol. 8(4), 2016. 175–181.
- Jiang X., Wang J., Chang H.; Zhou Y. (2016): Recombinant expression, purification and crystallographic studies of the mature form of human mitochondrial aspartate aminotransferase. BioScience Trends 2016.
- Müller A., Eller J., Albrecht F., Prochnow P., Kuhlmann K., Bandow J.E., Slusarenko A.J., Leichert L.I.O. (2016): Allicin Induces Thiol Stress in Bacteria through S-Allylmercapto Modification of Protein Cysteines. Journal of Biological Chemistry Vol. 291, No. 22, 2016. 11477–11490.
- Rabausch U., Juergensen J., Ilmberger N., Böhnke S., Fischer S., Schubach B., Schulte M., Streit W. R. (2013): Functional Screening of Metagenome and Genome Libraries for Detection of Novel Flavonoid-Modifying Enzymes. Applied and Environmental Microbiology 79(15), 2013. 4551–4563.
- Sauer M. (2014): MTV1 Pull-down Assay in Arabidopsis. bio-protocol Vol 4, Iss 12, Jun 20, 2014.
- Waldminghaus T., Skarstad K. (2010): ChIP on Chip: surprising results are often artifacts. BMC Genomics 11, 2010. 414.
Hielscher Ultrasonics fabrica homogeneizadores ultrasónicos mar hñets'i rendimiento ma partir ar laboratorio Pa tamaño industrial.