Ultrasónico lisis ar e. Coli

  • Bacteria e. coli ge ar bacteria xí comúnmente utilizada Microbiología ne ar biotecnología.
  • Disruptores endocrinos ar célula ultrasonidos proporcionan resultados fiables ne reproducibles pa ar lisis ar e. coli.
  • Intensa aún mi precisamente controlables cavitación esquileo ya ndu nzafi ne ocasionar nxo̲ge ar interrupción ne ar extracción mar hñets'i rendimiento (ngu proteínas, ADN).

¿Yogo'ä ar interrupción celular ultrasónica ar E. coli ge ár nt'ot'e Temu?

Ya homogeneizadores ultrasónicos wa ya ultrasonidos ar klase sonda ofrecen ndunthe ventajas pa ar lisis ar E. coli, ya da ultrasonido ar intenso k'ats'i ma eficientemente ya paredes ne membranas celulares. Ya ultrasonidos ar klase sonda ya ampliamente utilizados pa ar lisis ar E. coli nu'bya nuya ya razones:

  • Interrupción nt'ot'e xi hño ja ya paredes celulares: E coli pe̲ts'i 'nar Jot'i celular semirrígida compuesta ar peptidoglicano, nä'ä to da hñei ar romper utilizando nt'ot'e hneise̲ ar lisis. 'Nar ultrasonido ar klase sonda genera ondas ultrasónicas hmä da crean ya burbujas cavitación ja ar líquido da rodea ya células. Nu'bu̲ gi burbujas colapsan, generan chorros líquido mextha ar velocidad ne ar ondas ar choque nä'ä da hneki jar interrupción mecánica ya paredes celulares, liberando bí contenidos celulares komongu ya biomoléculas.
  • Penetración mejorada: Ya ondas ultrasónicas generadas ir nge ar sonda yá sonotrodo xi penetrar profundamente jar muestra, alcanzando 'nar dätä 'bede ya células ar E. coli ne mpädi ya ar bí uniforme. 'Me̲hna ayuda jar garantizar ne ar lisis da mäs uniforme nga̲tho ar muestra, nä'ä resulta ja 'nar dätä dätä nt'ot'e ar interrupción celular.
  • Reducción ar pa procesamiento: Energía suministrada ya ultrasonido ar klase sonda ar altamente concentrada ne localizada, da lleva 'nar lisis celular ngut'a ne ya nt'ot'e xi hño. Ja ar comparación ko ma'ra ya nt'ot'e komongu ar batido cuentas wa ar lisis enzimática, ar sonicación to da tsoni ya lisis ar E. coli ja ya nt'ot'e nuya ya t'olo ora wa 'nehe ya 'na̲te ya mfe̲ts'i. Mente ne dí técnicas alternativas, komongu ar congelación ne ar descongelación, requieren ndunthe rondas ár nt'ot'e, ar lisis ultrasónica gi xoki ya células 'nar Honto bi thogi ar ar proceso.
  • Control mpat'i: Ultrasonidos ar ngäts'i ar generación gi 'bu̲hu̲ equipados ko sensores mpat'i ne software inteligente, nä'ä permite da t'ot'e 'nar mpat'i máxima ar proceso. Ar ultrasonido ar detiene automáticamente nu'bu̲ bí alcanza ar límite mpat'i ne gi du̲i proceso sonicación nu'bu̲ bí alcanza 'nar punto ar mpat'i establecido. Enfriar ya muestras 'nar nsaha hielo ge 'nar nt'ot'e simple pa da zeti xí hñets'i'i ar mpat'i jar muestra ne nu'bu ar degradación ar muestra inducida ir nge ar pa.
  • Escalabilidad: Ya ultrasonidos ar klase sonda gi 'bu̲hu̲ da 'mui jar varios tamaños, dispositivos portátiles asta modelos industriales ndezu̲ tso̲kwa gran escala. 'Me̲hna ya xí adecuados pa procesar t'olo volúmenes ja ar laboratorio ntu̲ngi ya pa aplicaciones ar bioprocesamiento mäs mña dätä, ngu, producción vacunas wa biosíntesis moléculas.
  • Versatilidad: Ya ultrasonidos ar xi utilizar pa ya 'na'ño aplicaciones ma'bu̲ ar lisis celular, komongu ar cizallamiento ar ADN, ar extracción proteínas, ar homogeneización tejidos, ar dispersión ar nanopartículas ne ar emulsificación. Ir invertir ja 'nar ultrasonido ar klase sonda proporciona versatilidad entornos industriales wa nthoni.
  • Ya ultrasonidos ar klase sonda komongu ar UP200St ya homogeneizadores tejidos ne trituradoras celulares confiables, ir ampliamente utilizados pa jar nt'ot'e muestras jar genética, ngu, pa ar lisis ar E. coli.

    Extracción proteínas ya células ar E. coli ar realiza ar bí nt'ot'e xi hño ko ar sonda ultrasónica UP200St

    Ar ultrasonido ar klase sonda ofrece xingu ventajas pa ar lisis ar E. coli. Ar control confiable ne preciso dige ya parámetros ar proceso ultrasónico permite optimizar ya parámetros operativos, komongu ár nts'edi, ar duración ne ar manejo muestras, pa da tsoni ya resultados deseados.
     

    Nu'bu da 'yadi ungumfädi




    Pets'i ja ma Nt'eje privacidad.


     

    Nuna tutorial gi mä Temu̲ ar klase ar sonicador ar mäs xi hño pa yá tareas ya nt'ot'e muestras, komongu ar lisis, interrupción celular, aislamiento proteínas, fragmentación ya ADN ne ya ARN jar laboratorios, análisis ne nthoni. Elija ar klase ar sonicador ideal pa ár nt'ot'e, volumen muestra, ya 'bede ya muestra ne ya rendimiento. Hielscher Ultrasonics pe̲ts'i ar homogeneizador ultrasónico ideal pa gí!

    Tema tingigi mbo jar sonicador perfecto pa ar disrupción ar celular ne ar extracción proteínas ar ciencia ne ar análisis

    Miniatura vídeo

    Fragmentación ultrasónica ar ADN ar gi japu̲'be̲fi xi frecuencia komongu bi thogi nt'ot'e muestras jar secuenciación Nu'bu̲ Xtí generación (NGS)

    Análisis electroforéticos ar ADN genómico ar E. coli EDL933 'na jar ultrasonidos 0 — 15 ma min. L indica 'rede ADN.
    (estudio ne ya tsita: ©Basselet et jar el. 2008)

    Disrupción celular ir nge ya cavitación ultrasónica

    Ya homogeneizadores ultrasónicos ar klase sonda funcionan ko aprox. 20.000 ar ciclos ya mfe̲tsi (ma 20 kHz) ne causan cavitación jar líquidos wa ya suspensiones. Áreas microscópicas ar cavitación acústica presiones similares 'na jar vacío ne altas temperaturas da desgarran ya células. Anke ya temperaturas ar xi alcanzar varios miles ya grado ar centígrados, ya volúmenes cavitación ya ngut'ä t'olo ke hingi calientan ar proceso significativamente. Ar cavitación acústica generada ya ultrasonido ne ya ndu cizallamiento perforan wa rompen membrana celular células bacterianas komongu E. coli. Ya ultrasonidos Hielscher permiten ar control preciso ya parámetros ar proceso, komongu ar intensidad ultrasónica, ar amplitud, ar entrada ar energía ne ar mpat'i. Ar nuna modo, proceso lisis ultrasónica ar tsa̲ da ajustar ar bí óptima ar klase ar célula, ar cultivo ar celular ne ar objetivo ar proceso.
     

    Ventajas lisis ultrasónico

    • control preciso lisis (intensidad, amplitud, mpat'i)
    • Resultados fiables ne reproducibles
    • óptima adaptación ma muestras específicas
    • control mpat'i
    • pa muestras xi t'olo ma na dätä (μL ma litros)
    • Ár nt'ot'e puramente mecánico
    • Operación segura ne hei ar zu̲di
    • escalado lineal ndezu̲ ar laboratorio ar producción
    Ar dispositivo ultrasónico VialTweeter permite ar nt'ot'e muestra simultánea asta 10 viales jár da ehese̲ ar nkohi proceso. (Click pa agrandar!)

    VialTweeter pa lisis ultrasónico

    Nu'bu da 'yadi ungumfädi




    Pets'i ja ma Nt'eje privacidad.


    Homogeneizador ultrasónico vs ma 'ra técnicas lisis

    Mente da lisis química ne enzimática to da problemática – lisis químico xi alterar estructuras proteínas ne presenta hñäki purificación ne lisis enzimática requiere pa incubación bes ne hingi ar reproducible – disrupción ultrasónica ge 'nar nt'ot'e ár interrupción ar sofisticada, ngut'a ja ar célula.
    Ar lisis ar ultrasónica ar basa únicamente ja ya ndu nzafi mecánicas. Hingi ar agregan productos químicos, ar sonicación 'wagi Jot'i celular ya nsani cizallamiento. Lisis ar química ar tsa̲ da alterar ar estructura ya proteínas ne ya introducir hñäki purificación. Ar disrupción enzimática requiere largos tiempos incubación ne hingi ar reproducible. Ar disrupción celular ultrasónica ja ya células bacteria E. coli ar ngut'a, ar simple, ya confiable ne ya reproducible. Es jange da ultrasonidos ar Hielscher bí utilizan jar laboratorios biológicos ne bioquímicos ar nga̲tho ar ximha̲i da mfädi muestras, preanlíticos, diagonísticos in vitro ne ensayos múltiples.

    Uni mfädi Nxoge pa ar lisis ultrasónica

    Sonicación ar técnica mäs njohya yá 'mu̲ise̲ pa lisis cantidades xi t'olo, medianas ne ya dätä suspensiones celulares – ya ar pico-litros asta 100 litros yá ora (utilizando 'nar celda flujo ultrasónico). Ya células ya t'ot'e jar lisis cavitación ne esquileo líquido. ADN 'nehe ar cortado Nxoge jar sonicación, nja'bu da Hingar mahyoni agregar ADNasa bí suspensión ar células.
     

    Control mpat'i Nxoge ar lisis ultrasónica ar E. coli
    Disruptor celular ultrasónico UP100H (100W) pa disrupción celular ne extracción compuestos vegetales.Dá gi 'ñudi ya prerefrigeración ne manteniendo ar muestra Nxoge ar sonicación hielo, degradación térmica ar muestra ar muestra to da mä 'met'o ar hingi hembi da.
    Idealmente, ya muestras tsa da zeti ar heladas Nxoge jar lisis, pe pa mäs xingu ya muestras ar xingu nu'bu̲ ar mpat'i hingi ar eleva por encima de ar mpat'i ar cultivo wa ar fuente tejido. Ir ar recomienda da zeti ar suspensión hielo ne sonicar ko varios pulsos cortos ultrasonidos 5 — 10 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i ne pausas 10 — 30 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i. Nxoge ya pausas, ar mpa tsa̲ da disipar ar pa da t'ot'e 'nar mpat'i xí hñets'i'i. Pa muestras celdas mäs mña dätä, mahyoni da 'mui varios reactores celda flujo ko da enfriamiento.
    Lea nuwa consejos detallados ne uni mfädi pa 'nar lisis ultrasónica exitosa.

    Protocolos pa jar nt'ot'e ultrasónica lisados ar E. coli

    Ya investigadores utilizan homogeneizadores ultrasónicos Hielscher pa interrupción celular ar E. coli. Tso̲kwa continuación to tingigi mbo varios protocolos probados ne probados pa ar lisis ar E. coli utilizando homogeneizadores ultrasónicos Hielscher pa ya 'na'ño aplicaciones relacionadas ko E. coli.
     

    Nuna ar videoclip gi 'ñudi ar homogeneizador ultrasónico Hielscher UP100H, ultrasonido ampliamente utilizado pa jar nt'ot'e muestras jar laboratorios.

    Homogeneizador ultrasónico UP100H

    Miniatura vídeo

    Crecimiento celular, ya reticulación ne ya nt'ot'e extractos celulares ar E. coli usando ultrasonidos

    Pa coli SeqA ne E. ar viruta RNA polimerasa MG1655 wa MG1655 ΔseqA bí hñuts'i jar 37° C ja 'nar OD600 ar dige 0.15 jar 50 ml LB (+ 0.2% glucosa) 'be̲tho 27 μl formaldehído (37%) ir nge ya ml ar agregaron (concentración final 1%). Entrecruzamiento ar realizó jar agitación lenta (100 rpm) jar mpat'i ambiente Nxoge 20 min, seguido ar Temple ko 10 ml glicina 2,5 M (concentración final ar 0,5 M). Pa experimentos choque térmico, e. coli MG1655 bí crecida da medio 65 ml LB 30° C ja 'nar OD600 ar aproximadamente 0,3. Posteriormente, bí transfirieron 30 ml de cultivo a un matraz precalentado a 43 °C y el resto a 30 °c. La reticulación y el enfriamiento fueron como se describió anteriormente, excepto que las células se mantuvieron a 30 o 43 ° C durante 5 minutos antes de agitar lentamente a temperatura ambiente. Ya células recogieron ya centrifugación ne da lavaron yoho ya 'nandi ko TBS ntse̲t'i (pH 7.5). 'Mefa xta resuspensión jar tampón lisis 1 ml (10 mM Tris (pH 8,0), sacarosa ar 20%, NaCl 50 mM, EDTA 10 mM, lisozima 10 mg yá ml) ne incubación 37 °C durante 30 ar t'olo ora seguida ar adición tampón IP ar 4 ya ml, ya células ar sonicaron jar hielo ko roturas 12 ar bes 30 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i ne 30 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i utilizando ar procesador ultrasónico UP400St Hielscher ko 'nar za nts'edi 100%. Después de la centrifugación durante 10 min a 9000 g, se almacenaron 800 μl de alícuotas del sobrenadante a -20 °C. (Waldminghaus 2010)
     

    Sobreproducción ne purificación enzimas ko 'nar sonda ultrasónica

    Ultrasonido UP100H ge 'nar homogeneizador laboratorio utilizado tso̲kwa menudo pa jar nt'ot'e muestras placas cultivo celular.Pa ar sobreproducción proteínas marcadas ko decahistidina (His10), E. coli BL21 (DE3) bí transformó ko construcciones pET19b. Bí cosechó 'nar precultivo nocturno ya centrifugación ne da utilizó 'nar 1% pa inocular 'nar cultivo ya hmä. Ya células portadoras pET19mgtB ar cultivaron da 22 °C hasta una densidad óptica a 600 nm (OD600) de 0,7. El cultivo fue transferido a 17°C e inducido por 100 μM IPTG. 'Mefa xta 16 h, ar cultivo sofo ya centrifugación a 7.500 × g a 4°C. Ya células resuspendieron ja ya njäts'i salina ar tamponada ko fosfato (PBS) ar 50 mM ko NaCl 0,3 M ma pH 7,4 ne interrumpieron ir nge ya ultrasonidos ko 'nar sonotrodo micropunta S2 ja ar ultrasonido UP200St ar Hielscher 'nar ciclo 0,5 ne 'nar amplitud 75%.
    Sobreproducción decahistidine tagged GtfC bí inducida bí 37° C ja 'nar OD600 ya ar 0,6 ko 100 μM IPTG. Ya células ma gem'bu̲ incubadas Nxoge 4 h sofo ne lisis nu'u̲ bí indicó ma 'met'o mi pa MgtB.
    Ya extractos células crudas ar centrifugaron da 15.000 × g ne 4 ° C para sedimentar los restos celulares. Ya extractos clarificados ar cargaron jar columnas HisTrap FF Crude ar 1 ml utilizando 'nar ko ya ÄKTAprime Plus. Ya enzimas ar purificaron ir nge ar Nthuts'i nkohi fabricante pa ar elución ya gradiente proteínas marcadas ko ya His. Ya soluciones proteínas eluidas da dializaron ya yoho ya 'nandi kontra 1.000 volúmenes 50 mM PBS, pH 7,4, con 0,3 M NaCl a 4 °C. Ar purificación bí analizada ya 12% SDS — PAGE. Ar concentración ar proteína bí determinó ir nge ar nt'ot'e Bradford utilizando Roti — Quant. (Rabausch et jar el. 2013)
     

    Extracción ultrasónica proteínas bacterias E. coli
    'Nar proteína cebo ya 'befi (da este caso, MTV1 ar Arabidopsis thaliana) ar fundida 'nar etiqueta GST ne nt'untho nä'ä mä jar células BL21 Escherichia coli (e. coli).

    1. Gi 'nar pellet GST — MTV1 ne GST (correspondiente ja 'nar cultivo bacteriano 50 ml) ne resuspenda kadu 'na jar 'nar tampón extracción jar tse̲ helado 2,5 ar ml.
    2. Use 'nar ultrasonido UP100H (equipado ko sonotrodo micropunta MS3 pa volúmenes t'olo ar aprox. 2 — 5 ml) da interrumpir ya células bacterianas Asta ke bí lisen, da indica ya reducción ar opacidad ne ar aumento ar viscosidad. 'Me̲hna da t'ot'e jar hielo, ne bí recomienda sonicar jar intervalos (nt'udi, sonicación ar 10 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i seguida ja 'nar pausa 10 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i jar hielo, etc.). Ar da njapkaso ar hingi sonicar ko 'nar intensidad xki mextha. Nu'bu̲ ar detecta espuma wa ar formación precipitado 'nar blanco, ar intensidad da reducir ar.
    3. Transfiera la solución de bacterias lisadas tubos de microcentrífuga de 1,5 ml y centrifuga a 4 °C, 16.000 x g durante 20 min.

     

    Ya sondas ultrasónicas utilizan ya ndu nzafi ar cavitación acústica pa interrumpir jar célula ne extraer moléculas ne ADN ar E. coli.

    Ultrasonidos ar klase sonda komongu ar UP400St utilizar ya ndui funcionamiento ar cavitación acústica pa lisis nt'ot'e xi hño ar E. coli.

    Análisis ya hmä ne purificación proteínas recombinantes ir nge ya sonicación

    Ar pellet ar E. coli bí sonicado ko ar ultrasonido Hielscher UP100H. Pa nuna 'mu̲i, ar pellet celular bí resuspendió jár tampón ar lisis refrigerado (50 mM Tris-HCl pH = 7.5, 100 mM NaCl, 5 mM DTT, 1 mM PMSF) ne da enfrió jar hielo Nxoge 10 min. Ne gem'bu̲ bí suspensión ar celular bí sonilizó ko 10 ze̲di cortas 10 s seguidas 'nar intervalo 30 s pa enfriamiento. Finalmente, ya restos celulares ar eliminaron ir nge ya ultracentrifugación a 4 ° C durante 15 minutos a 14000 rpm. Pa confirmar jar hmä rPR, ar sobrenadante bí ejecutó jar gel poliacrilamida jar 12% ne analizó ir nge ya SDS — PAGE ne Western blotting. Purificación rPR ar realizó utilizando resina Ni2 + — NTA (Invitrogen, EE.UU.) ir nge ar guía ar fabricante. Ja xí etapa, bí utilizó ar nt'ot'e purificación nativo. Ar pureza ar proteína purificada ar evaluó ir nge ya electroforesis gel poliacrilamida 12% ne 'mefa ár njäts'i Tange'u ar tinción ar azul Coomassie. Concentración proteína purificada ar midió ir nge ar kit ensayo proteínas Micro BCA (PIERCE, EE. (Azarnezhad et jar el. 2016)
     

    Nuna ar video gi 'ñudi cuphorn ultrasónico 200 vatios pa dispersar, homogeneizar, extraer wa desgasificar muestras laboratorio.

    Cuphorn ultrasónico (200 vatios)

    Miniatura vídeo

    Homogeneizadores ultrasónicos pa ar lisis ar E. coli

    Hielscher Ultrasonics diseña, fabrica ne suministra homogeneizadores ultrasónicos mar hñets'i rendimiento pa ar lisis confiable ne ya nt'ot'e xi hño bacteria E. coli ne ma'ra xingu ya células, ar tejidos ne ar cultivos celulares.
    Ar nt'ot'e ho 'bui ndunthe cartera sondas ultrasónicas, nja'bu ngu ya sistemas sonicación indirecta, ga permite bí ofrecer ar homogeneizador ya tejido ultrasónico ar ideal pa ár nt'ot'e ya interrupción ne ya extracción celular.

    Diseño, Fabricación ne Consultoría – Hño Made in Germany

    Ya ultrasonidos Hielscher ar xi controlar ya nt'ot'e remota a través de ar control ar navegador. Ya parámetros sonicación ar xi monitorear ne ajustar ko ya precisión ja ya requisitos ar proceso.Ya ultrasonidos Hielscher ya conocidos ya mäs altos yá estándares ya hño ne ya diseño. Software inteligente, menú intuitivo, configuraciones programables ne nthuts'i nkohi automático ar datos ya Honto algunas ja ya características ya ultrasonidos Hielscher. Ar robustez ne ar hei operación permiten integración 'ñotho ar hñäki HMUNTS'UJE ultrasonidos instalaciones nthoni ne ya biotecnología. 'Nehe ya nkohi difíciles ne ya entornos exigentes ya hingi hembi da manejados ir nge ya ultrasonidos Hielscher.

    Hielscher Ultrasonics ge 'nar empresa certificada ISO ne pone hontho énfasis jar ultrasonidos mar hñets'i rendimiento tecnología nts'ä ne facilidad njapu'befi. Hä, ya ultrasonidos Hielscher cumplen ko ár CE ne cumplen ko ya requisitos ar UL, ar CSA ne ar RoHs.

    Xtí tabla bí xta ar 'nar indicación ya mfeni ya procesamiento aproximado HMUNTS'UJE ultrasonicators:

    Volumen lote Tasa flujo Dispositivos recomendados
    placas multipocillo yá microtitulador n.a. UIP400MTP
    CupHorn pa viales wa ya Baso ar precipitados n.a. Cuphorn ultrasónico
    Reactor ultrasónico microflujo n.a. GDmini2
    asta 10 viales ko 0,5 ma 1,5 ml n.a. VialTweeter
    0.5 1.5mL n.a. VialTweeter
    1 jar 500mL 10 200 mL yá min UP100H
    10 da 2000mL 20 400 mL yá min. UP200Ht, UP400St
    0.1 da 20L 0.2 4 L yá min UIP2000hdT
    10 da 100L 2 10 L yá min UIP4000
    n.a. 10 100 L yá min UIP16000
    n.a. mäs dätä Cluster ar UIP16000

    Ja ar contacto ko ngekihe! Yá preguntar ga!

    Da 'yadi mäs ungumfädi

    Utilice da ku̲hu̲ formulario pa da 'yadi ungumfädi adicional dige ar homogeneizadores tejidos ultrasónicos ne trituradoras ar células, aplicaciones ya lisis ne ya precios. Estaremos encantados da mä ár proceso ko nu'i ne bí ofrecer 'nar homogeneizador ultrasónico da cumpla ko yá requisitos!









    Pets'i ja ma Nt'eje privacidad.


    Ar video gi 'ñudi ko ya nt'ot'e muestras ultrasónicas UIP400MTP, da permite ar nt'ot'e confiable muestras 'na placa estándar múltiples pocillos utilizando ultrasonido mextha ar intensidad. Ya aplicaciones típicas ar UIP400MTP incluyen lisis celular, ADN, ARN ne cizallamiento cromatina, nja'bu komongu extracción proteínas.

    Ultrasonicador UIP400MTP pa sonicación placas múltiples me̲he̲

    Miniatura vídeo

    Protocolos ar Nthuts'i da lisis ultrasónica ar E. coli

    Proteínas modificadas ko ya alicina jar E. coli usando 'nar VialTweeter ultrasónico

    VialTweeter ja ar procesador ultrasónico UP200STNjäts'i contenido sulfidrilo ya 5, 5 — Dithiobis(2-nitrobenzoic acid) (DTNB) ensayo
    Bí utilizó 'nar cultivo nocturno ar E. coli MG1655 pa inocular ar made mínimo MOPS (1:100). Ar cultivo ar cultivó aeróbicamente asta alcanzar 'nar A600 0,4. Ar cultivo ar dividió jar hñu cultivos 15 ml pa ar nt'ot'e ar estrés. 'Nar jár 'mui hingi tratada sirvió komongu 'nar control negativo. Se añadieron 0,79 mM de alicina (128 μg ml-1) o 1 mM de diamida a uno de los dos cultivos restantes cada uno. Ya cultivos ar incubaron durante 15 ma min. 5 ml de cada cultivo se cosecharon por centrifugación (8.525 × g, 4°C, 10 min). Ya células da lavaron ya yoho ya 'nandi ko 1 ml PBS (137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4, pH 7,4, almacenado anaeróbicamente 'bu̲ 'be̲tho ár njapu'befi) ne centrifugados (13.000 × g, 4°C, 10 min). Ya células ar resuspendieron jar tampón lisis (PBS con 6 mM HCl de guanidinio, pH 7,4) antes de la interrupción a 4 °C por ultrasonido ()VialTweeter ultrasonido, Hielscher GmbH, nu Alemäña) (3 × 1 min). Ya restos celulares da granularon ya centrifugación (13.000 × g, 4 °C, 15 min). Ar sobrenadante bí transfirió 'nar cubeta QS — macro ar 3,5 ml (10 mm) ko 'nar barra xí agitación magnética ne mezcló ko 1 ml tampón lisis. Extinción ya muestras ar monitoreó da 412 nm ko 'nar espectrofotómetro Jasco V — 650 equipado ko ar soporte celda PSC — 718 ko mpat'i controlada mpat'i ambiente. Se añadieron 100 μl de una solución de 3 mM de ditiobis (ácido 2-nitrobenzoico). Ar extinción ar bí monitoreada asta da alcanzó ar saturación. Ar cálculo ar concentración tiol ar realizó utilizando coeficiente extinción ε412 = M 13.700— 1 cm— 1 TiO — 2 — nitrobenzoico ácido (TNB). Ya concentraciones tioles celulares ar calculan en base a 'nar volumen células ar e. coli 6,7 × 10— 15 litro ne una densidad celular A600 = 0,5 (equivalente a 1 × 108. ml células— 1 jár 'mui). (Müller et jar el. 2016)
     

    Njäts'i glutatión in vivo ga utilizando 'nar trituradora ar células ultrasónica

    E.coli MG1655 ar cultivó jar made mínimo MOPS ja 'nar volumen Nxoge 200ml asta alcanzar 'nar A600 0,5. Ar cultivo ar dividió jar cultivos 50 ml pa ar nt'ot'e ar estrés. 'Me̲fa 15 min incubación ko 0,79 mM alicina, 1 mM diamida wa dimetilsulfóxido (control), ya células ar cosecharon bí 4.000 ar g a 4 °C durante 10 min. Las células se lavaron dos veces con tampón KPE antes de la resuspensión de pellets en 700μl de tampón KPE. Pa ar desproteinización, ar agregaron 300 l ácido sulfosalicílico ma 10% (p/v) 'be̲tho ar interrupción ya células ya ultrasonido (3 x 1 min;) VialTweeter ultrasonicador). Sobrenadantes ma recogidos 'mefa xta ar centrifugación (30 ar min, 13, 000 g, 4 º C). Concentraciones ácido sulfosalicílico disminuyeron 1% ir nge ar adición 3 volúmenes tampón KPE. Ar realizaron mediciones glutatión Nxoge ne GSSG nu'u̲ bí describió ma 'met'o mi. Ya concentraciones glutatión celular ar calculan en base a 'nar volumen células ar e. coli 6.7×10— 15 litro ne 'nar densidad celular A600 0.5 (equivalente jar 1×108. ml células— 1 jár 'mui). Ar calcularon ya concentraciones GSH ya substracción 2 [GSSG] ar glutatión Nxoge. (Müller et jar el. 2016)

    Hmä mAspAT humano jar E. coli utilizando 'nar homogeneizador ultrasónico

    Disruptor celular ultrasónico UP400St (400W) pa ar extracción ar materia intracelular (proteínas, organelos, DNA, RNA etcetera.)Ho̲ntho ar colonia ar E. coli BL21 (DE3) albergando jar hmä vector jar 30 ar mL ampicilina 100μg yá mL ko made Luria — Bertani (LB) ne gem'bu̲ cultivadas ma 37 º c asta ar densidad óptica (OD600) alcanzó 0.6. Ya células ma cosechadas ya centrifugación ma 4.000 x g Nxoge 10 t'olo ora ne resuspendió jar 3L xi 'ru̲ki LB made da contiene ampicilina 100μg yá mL.
    Posteriormente, se indujo la expresión de proteínas con 1 mM de isopropil β-ᴅ-1-tiogalactopiranósido (IPTG) durante 20 h a 16ºC. Ya células da cosecharon ya centrifugación 8.000 × g Nxoge 15 ar min ne ar lavaron ko tampón (20 mM NaH2PO4, 0,5 M NaCl, pH 7,4). Ar obtuvieron aproximadamente 45 g (be̲xu nxa) ar células cultivo 3 ar L. 'Mefa xta centrifugación, ya gránulos celulares resuspendieron jar 40 ml (pa 'nar cultivo 1 L) ar tampón A ar extracción helada, ne da lisaron ya ultrasonidos mpat'i helada utilizando trituradora ultrasónica células Hielscher UP400St. Ar lisis ar celular bí centrifugó bí 12.000 ar rpm Nxoge 15 ar min da separar ya fracciones solubles (sobrenadante) ne precipitadas (pellets). (Jiang et jar el. 2015)
     



    Hechos Bale ar penä ga pädi

    E coli

    Escherichia coli (e. coli) ge 'nar bacteria gram negativa, facultativamente anaerobia, ja ya barra xí, coliforme ar género Escherichia da o comúnmente jar intestino mäs hñets'i'i ja ya hmunts'i ya ji mpa (ya endotherms). Jawa Nar dätä hño 'nar 'bede ya cepas ar e. coli (wa subtipos) ko 'na'ño ya características. Mäs xingu ya cepas ar e. coli ar inofensiva ja ya jä'i, e.g. B ne ë — 12 cepas ne ar utilizan comúnmente pa aplicaciones jar laboratorios nthoni. Wat'i, ra cepas ya perjudiciales ne xi causar enfermedades graves.
    E coli 'ñeni 'nar he̲'mi mahyoni ja ar ja xí 'ño ingeniería biológica ne Microbiología industrial ndezu̲ ya bacterias ar hei ar manipular. Laboratorio aplicaciones pa ngatho da implican tso̲kwa menudo njapu'befi ya e. coli, ngu, pa da t'ot'e ya ácido desoxirribonucleico recombinante (ADN) wa da nu'u hingi nthe komongu 'nar organismo modelo.
    E coli ge 'nar huésped xi versátil pa ar producción proteínas heterólogas, ne sistemas ya hmä proteínas múltiples gi 'bu̲hu̲ da 'mui da producción proteínas recombinantes jar e. coli. Utilizando plásmidos da permiten jar hmä za̲ ár nthe̲ mar hñets'i proteína, genes xi introducir ar ja ya bacterias, da permite producir ya proteínas jar dätä cantidades jar procesos fermentación industrial.
    E coli ar utilizan komongu fábricas células pa producir insulina. Ma 'ra ya aplicaciones incluyen njapu'befi ar células modificadas ar E. coli pa nte ne producir vacunas ne enzimas inmovilizadas, pa nda producir biocombustibles, komongu pa ar biorremediación.
    Ar cepa ë — 12 ge 'nar dets'e mutante e. coli da sobre — expresa ar enzima fosfatasa alcalina (ALP). Nuna ar mutación bí produce nu'bya 'nar defecto jar gen codifica pa ar enzima constantemente. Nu'bu̲ 'nar gen produce 'nar producto hinda ni 'na jar inhibición ar pädi komongu ya nt'ot'e constitutiva. Nuna ar nt'ot'e mutante específica ar gi japu̲'be̲fi pa aislar ne purificar ar enzima fosfatasa alcalina.
    Ya bacterias E. coli 'nehe ya ampliamente utilizadas komongu fábricas celulares. Ya microbios modificados (nt'udi, bacterias) ne ya células vegetales ar xi utilizar komongu ya llamadas fábricas celulares. Gi células modificadas genéticamente producen moléculas, productos químicos, polímeros, proteínas ne ma'ra sustancias, ne bí utilizan, ngu, jar industria farmacéutica, alimentaria ne ar química. Pa liberar ya moléculas producidas interior ya células bioingeniería, ar lisis ultrasónica ge 'nar nt'ot'e hne ngatho pa interrumpir ya paredes celulares ne transferir ya sustancias diana bí líquido ar circundante. Lea mäs dige ar lisis ya células bioingeniería!

    Ultrasónico ADN Ts'ut'ubi

    Ya ndu nzafi ar cizallamiento ultrasónicas ya nt'ot'e comúnmente utilizado pa liberar moléculas, ar orgánulos ne ar proteínas ar interior ar célula, nja'bu Komo pa romper hebras ADN jar pedazos. Ar cavitación acústica 'wagi paredes ya celulares ne ya membranas pa extraer ADN ya células ne generar fragmentos 'ra ya 600 – 800 bp ar longitud, nä'ä ar ideal pa ar análisis.
    'Yot'e clic nuwa da uni mäs ungumfädi dige homogeneizadores ultrasónicos fragmentación ar ADN!

    Ot'a yá Referencias


    Ultrasonidos ya mar hñets'i ar rendimiento! Gama productos Hielscher cubre nga̲tho ar espectro, ndezu̲ ar ultrasonido ar laboratorio xí nze̲di dige unidades sobremesa asta ya sistemas ultrasónicos completamente industriales.

    Hielscher Ultrasonics fabrica homogeneizadores ultrasónicos mar hñets'i rendimiento Laboratorio Pa tamaño industrial.


    Estaremos encantados ar da mä ár proceso.

    Ga japi ga jar contacto.