Tecnología ultrasonido Hielscher

Lisis ya sonicación: Interrupción celular & Extracción

Desintegración ar célula wa lisis ge 'nar xeni hne ngatho ar ga̲tho ya pa nt'ot'e muestras laboratorios biotecnología. Objetivo lisis ar alterar ya xeni Jot'i celular wa ar célula completa da liberar ya moléculas biológicas. Llamado ar lisado ar tsa̲ da consistir ya ejemplo, plásmido, ensayos ar receptores, proteínas, DNA, RNA etcetera. Nuya pasos ar lisis ya fraccionamiento, aislamiento organelas wa yá ne extracción ya proteínas ne ya depuración. Ar hñei extraído (= lisado) pe̲ts'i nä'ä to hñe̲gi ne xí zedi ja ma 'ra ya investigaciones wa aplicaciones, ngu, pa investigaciones proteómicas. Homogeneizadores ultrasónicos ge 'nar herramienta hne ngatho pa lisis acertado ar célula. Komo ar intensidad ultrasónica to nivelar da ajustando ya parámetros ar proceso, intensidad óptima sonicación ar na za̲tho ja xi me tsa̲ da ajustar ar individualmente pa kadu̲ 'nar sustancia ne ár nt'uni pa da tsoni ar requisito ar nt'ot'e específico.

Estructura ar célula

Ya células gi protegidas ir nge 'nar membrana plasmática semipermeable ir bo̲ni jar 'nar bicapa Fosfo — lípidos ('nehe bicapa ar proteínas-lípidos; formada ya lípidos hidrofóbicos ne fósforo hidrofílico moléculas ko ya moléculas proteínas mfaxte) ne crea 'nar barrera ja ar ar interior ar célula (citoplasma) ne ar mbo jar ximha̲i extracelular. Células procariotas ne ya células vegetales gi 'bu̲hu̲ rodeadas ya ora Jot'i 'nar celular. Nu'bya múltiples capas gruesa Jot'i celular ya celulosa, ya células vegetales ya mäs difíciles ar lisar ya células animales. Ar interior ar célula, komongu ar orgánulos, núcleo, mitocondria, ar estabilizado ir nge ar citoesqueleto.
Ya lisis ya células, xi dirigido jar extraer ne separar ya organelos, proteínas, ADN, ARNm wa ma'ra ya biomoléculas.

Ar sonicación ar gi japu̲'be̲fi comúnmente pa jar nt'ot'e ar muestra ar materia celular.

Figura 1: Extracción ultrasónica ya células: ar sección transversal microscópica (TS) ar tallo apical menta (Mentha piperita) gi 'ñudi ar nt'ot'e mbo acciones Nxoge ar extracción ultrasónica ya células (ampliación x 2000) [hño: Vilkhu et jar el., 2011]

Nt'ot'e

'Bu̲i varios nt'ot'e pa lisado células, ne bí xi gi jar nt'ot'e mecánicos ne químicos, da incluyen njapu'befi detergentes wa ya solventes, ár nt'ot'e mextha presión, wa njapu'befi 'nar ju̲ni grano wa 'nar prensa francesa. Ar desventaja xí problemática nuya nt'ot'e ar hñei ar control ne ar za ya parámetros ne nuna ar modo impacto.
Ya ndu'mi desventajas ja ya nt'ot'e pa ngatho lisis:

Técnicas ya 'na'ño lisis

Tabla: Ya nt'ot'e convencionales lisis celular pe̲ts'i ya dätä desventajas

Ya ar contrario, ar sonicación ge 'nar herramienta xi nt'ot'e xi hño ne ya confiable pa ar desintegración ar célula da permite 'nar control Nxoge dige ya parámetros sonicación. 'Me̲hna asegura 'nar mextha selectividad jar materiales pureza versión ne ar producto. [Balasundaram et jar el. 2009] Ar mfädi pa nga̲tho ar klase ar celular ne hingi hembi da aplicable jar t'olo ne Nar dätä hño escala. Ultrasonicators ya fáciles ar limpiar. 'Nar homogenizador ultrasónico Gi pede nzäm'bu̲ limpio — jar — lugar (CIP) ne esterilización in situ (SIP) función. Ar sonda ir bo̲ni jar 'nar ndäni titanio masiva nä'ä to da limpiado wa lavado jar dehe wa solvente (nä'ä mä ar nt'uni 'be̲fi). Nt'ot'e ultrasonicators ge nu'bya ár robustez kasu̲ neglectable.

lisis ar

Lisis ge 'nar proceso sensible. Nxoge lisis ke ár mfa̲ts'i ar membrana ar célula ar destruida, ne nuna ar inactivación, ar desnaturalización ne ar degradación ya proteínas extraídas ja 'nar mbo jar ximha̲i unphysiological (desviación ar hmädi pH) tsa nu'bu da. Ir da general lisis ar lleva da t'ot'e xi hño jar 'nar njäts'i tampón. Mäs dificultades interrupción celular incontrolada di lugar ma 'nar liberación hingi focalizada hñei intracelular nga̲tho o yá ne ar desnaturalización ar producto objetivo.

Lisis celular ultrasónico xi da utilizado pa nt'ot'e muestras jar laboratorio ne da producción ya dätä ar volúmenes. 'Yot'e click pa agrandar!

Ya homogeneizador ultrasónico ar potente ar Fig. 1:200 vatios UP200Ht control ya 'bede ne automática datos grabación lisis celular confiable ne reproducible.

Lisis ultrasonidos

Ir 'me̲t'o general, ar llevará da lisis ya muestras jar laboratorio entre 15 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i ne 2 t'olo ora. Komo ar intensidad nsaha ultrasonidos ar na hei ar ajustar ja 'nar pa sonicación amplitud, nja'bu ngu 'na ar da 'ñets'i ar equipo adecuado, ar tsa̲ ga alterar ya membranas celulares xi za̲tho wa xi abruptamente, dependiendo de ar estructura celular ne ár 'mu̲i lisis () ngu, ar extracción ADN requiere mäs za̲tho sonicación, extracción proteína nxo̲ge ar bacterias requiere 'nar nt'ot'e mäs intenso ya ultrasonido). Ar mpat'i Nxoge ar proceso to da monitoreada ja 'nar sensor ar mpat'i mfaxte ne to da hingi hembi da controlada ya refrigeración (hielo baño flujo ya células wa ko chaquetas enfriamiento) wa ja ya sonicación jar modo pulsado. Nxoge ar sonicación ar modalidad impulso, sonicación corta explosión ciclos duración 1 jar 15 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i permiten pa disipación pa ne tse̲t'i ar Nxoge ya largos tseti intermitentes.
Ga̲tho ya procesos basados ar ecografía ya linealmente escalable ne totalmente reproducible.

Homogeneizador ultrasónico VialTweeter pa jar nt'ot'e muestra simultánea asta 10 tubos ar ensayo. (Click pa agrandar!)

Ar dispositivo ultrasónico VialTweeter permite ar nt'ot'e muestra simultánea asta 10 viales jár da ehese̲ ar nkohi proceso.

Homogeneizadores ultrasónicos

Varios xingu ya Aparatos ultrasonidos permiten pa emparejar objetivo mfädi jar muestra ne xi hño comodidad operación ne facilidad njapu'befi. Ultrasonicators ar klase sonda ge ya dispositivos pa mäs ngatho ja ar laboratorio. Ya mäs adecuados pa jar nt'ot'e muestras t'olo ne tamaño mediano ko 'nar volumen 0,1 mL asta 1000 ar mL. Sonotrodos ne nts'edi 'na'ño tamaños permiten pa adaptar ultrasonicador pa ar volumen ar muestra ne ar buque pa ar mäs pädi ne eficientes resultados sonicando. Dispositivo ár nts'ä ntsa̲ ultrasónica ge mäs xi hño opción nu'bu̲ ya muestras ho̲ntho pe̲ts'i da 'bu̲i xi preparados.

Nu'bu̲ mäs muestras pe̲ts'i da 'bu̲i preparados, ngu, 8 frascos njäts'i celular, dispositivos Komo ar VialTweeter wa 'nar cuphorn ultrasónico gi 'bu̲hu̲ ar homogeneizador xí adecuado pa ar lisis. Ar sonicó varios frascos jar xkagentho pa, jar xkagentho ar intensidad. Nuna ahorra hingi Honto pa, pe 'nehe asegura xkagentho ar nt'ot'e ya ga̲tho ya muestras, o̲t'e da resultados ja ya muestras confiables ne comparables. 'Nehe, bí evita contaminación sumergiendo ar ultrasónico sonda (sonda ultrasónica 'nehe conocido komongu, ndäni, nts'ä wa dedo). Nxa̲di ke ar utilizan frascos, desperdiciador pa limpieza ne pérdida muestra nu'bya ar decantación ya buques ar omiten.
Pa pe̲ts'i volúmenes, ngu, da producción yá 'ma extractos celulares, ya sistemas ultrasónicos ar continuo ko 'nar reactor celda flujo ya mäs convenientes. Ar flujo continuo ne uniforme ar hñei procesado asegura 'nar sonicación 'nehe. Ga̲tho ya parámetros proceso desintegración ultrasónica xi da optimizados ne ajustados yá requerimientos ya nt'ot'e ne ar he̲'mi específico ar célula.

Nt'ot'e ejemplar pa ultrasonidos lisis ya células bacterianas:

  • Nt'ot'e ar suspensión celular: gránulos ar célula tsa da totalmente suspendidas ja 'nar njäts'i tampón ya homogeneización (elija ár njäts'i buffer compatible ko ar Xtí análisis, nt'ot'e cromatografía 'nar nt'udi específico). Añadir lisozimas ne yá wa ma'ra ya aditivos, nu'bu mahyoni (da to 'nehe ja ya xeni separación yá nt'ot'e purificación). Mezcla yá homogeneizar ár njäts'i suavemente jár za̲tho sonicación ga logra 'nar suspensión nxo̲ge.
  • Lisis ultrasonidos: hoki ar muestra 'nar nsaha hielo. Ar interrupción ar célula, pa da t'uni jar ultrasonidos ar suspensión ja ar 60 — 90 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i estalla (usando modo pulso ár ultrasonicador).
  • Separación: Centrifugar ar lisado (ngu 10 min ma 10.000 x g; jar 4degC). Separar ar sobrenadante ar precipitado células cuidadosamente. Ar sobrenadante ge ar lisado celular Nxoge. 'Me̲fa ar filtración ar sobrenadante, gí uni 'nar líquido clarificado proteína soluble ar célula.

Ya aplicaciones mäs pa ngatho ya ultrasonicators jar biología ne biotecnología ge:

  • Nt'ot'e extracto celular
  • Interrupción ar levadura, bacterias, células ar planta ar za̲tho & tejido célula dura, hñei nucleico
  • Extracción proteínas
  • Mfädi ne aislamiento enzimas
  • Producción ar antígenos
  • Extracción ADN ne / wa fragmentación dirigida
  • nt'ot'e liposomas
Homogeneizadores ultrasonidos mextha nts'edi komongu ar UIP1000hd ya utilizados pa ar interrupción ar célula ne ar extracción jar batch wa continuo — anke ar modo. (Click pa agrandar!)

Sistemas ultrasonido sobremesa Komo ar UIP1000hd (1kW) ar tsa̲ da procesar pe̲ts'i volúmenes hñei biológico.

Ya múltiples aplicaciones ar ultrasonido ramifica nu'bu fuera ja ya sectores ar biotecnología, bioingeniería, microbiología, biología molecular, bioquímica, Inmunología, bacteriología, virología, proteómica, genética, fisiología, biología celular, hematología, ne ar botánica.

Pa ar evaluación ne ar optimización aplicaciones ya clientes, ultrasonidos Hielscher ofrece 'nar completo equipamiento Laboratorio proceso ultrasónico. Ga japi ar jar contacto ko ngekagihe pa mäs ungumfädi!

Ot'a yá referencias

  • Balasundaram, b; Harrison, S.; Bracewell, D. G. (2009): Avances jar producto Honja lanzamiento ne impacto jar diseño bioprocesos. Ar tendencias jar biotecnología 27 yá 8, 2009. PP. 477 — 485.
  • Vilkhu, ë.; Manasés, r.; Mawson, r.; Ashokkumar, M. (2011): ingredientes ultrasónico recuperación ne Kadu ar nts'i. Jar: Feng yá Barbosa — Cánovas yá Weiss (2011): tecnologías ultrasonido pa ar alimentación ne ar bioprocesamiento. Nueva York: Springer, 2011. págs. 345 — 368.

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Ñö ko ngekagihe dige yá ndu procesamiento. Recomendamos ya parámetros configuración ne ar proceso xí adecuados pa ár 'be̲fi.





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