Nthuts'i nkohi pa ar inactivación ar coronavirus SARS — CoV — 2 ko sonicación

Hielscher VialTweeter ge 'nar ar xe̲ni ho̲ntho nt'ot'e ultrasónica múltiples muestras, ne bí gi japu̲'be̲fi pa inactivar coronavirus SARS — COV — 2. Ar VialTweeter permite hoki asta 10 viales muestra simultáneamente ne, ir ge ar ar xe̲ni ideal pa ar procesamiento masivo muestras.

Inactivación coronavirus SARS — CoV — 2 ko ar VialTweeter

'Mefa xta retirar ar fijador, ya monocapas ar lavaron hñu ya 'nandi ko njäts'i salina tamponada ko fosfato (PBS) 'be̲tho da t'a̲fi ya células 1 ml MEM/5% FBS ne sonicar (3 × 10 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i ar encendido, 10 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i ar apagado ar 100% nts'edi ne amplitud) utilizando ar procesador ultrasónico Hielscher UP200St ko VialTweeter archivo adjunto. Ya sobrenadantes ar clarificaron centrifugando da 3000 ya t'× g Nxoge 10 t'olo ora. 

Lea nuwa jar Nthuts'i nkohi completo pa ar inactivación ar coronavirus SARS — CoV — 2 Welch et jar ar. (2020) tso̲kwa continuación:

Células ne virus

Celdas Vero E6 (Vero C1008; ATCC CRL — 1586) bí cultivaron jar made mínimo esencial (MEM) ar Eagle modificado suplementado ko suero fetal ternero (FCS) jar 10% (v/v). Ar virus ar utilizado bí cepa ar hCOV — 19 ar ar SARS — CoV — 2 yá England yá 2 yá 2020, aislada ya PHE ar ndu̲i ar Hmunts'i ya pacientes jar ndä mfats'i ar 29 yá 01 yá 2020. Nuna ar virus obtuvo jar pasaje 1 ne da utilizó pa nsadi inactivación jar pasaje 2 wa 3.
Pa ga pädi ya reactivos ne ya productos químicos utilizados pa ar inactivación ar SARS — CoV — 2, nja'bu komongu pa ar eliminación ar citotoxicidad ya reactivos, consulte mfädi dätä mfädi mä Welch et jar ar. (2020).

Inactivación virus ya detergentes – Nthuts'i nkohi inactivación coronavirus SARS — CoV — 2 ya Welch et jar ar. 2020

Inactivación ar SARS — CoV — 2

Ts'ut'ubi nu'bu ya productos comerciales, preparaciones virus (fluido ar cultivo tejidos, títulos da oscilan entre 1 × 10⁶ ma 1 × 10⁸ PFU/ml) bí trataron ya triplicado ko reactivos ja ya concentraciones ne pa ya tiempos ar contacto recomendados ja ya instrucciones njapu'befi ar fabricante, nu'bu̲ mi da 'mui, wa ya concentraciones ne tiempos específicamente solicitados ir nge ya laboratorios ensayo. Nu'bu̲ ar fabricante umbi 'nar rango concentraciones, ar ensayó nä'ä da 'yadi wa mäs xí hñets'i'i ar producto muestra (es decir, ar concentración mäs xí hñets'i'i recomendada ar producto ntsa̲). Ya reactivos tubo transporte muestras ar probaron utilizando 'nar nä'ä da 'yadi wa ar 'nar volumen fluido cultivo tejidos ya 're̲t'a volúmenes ar reactivo, menos da ar fabricante especificara 'nar nthe volumen líquido muestra da reactivo. Ya detergentes, fijadores ne solventes ar probaron ja ya concentraciones indicadas pa ya tiempos indicados. Ga̲tho ya pasos inactivación ar realizaron da temperatura ambiente (18 – 25 °C). Pa ya pruebas xingu ya muestras alternativas, ar virus introdujo jar matriz muestra indicada 'nar nä'ä da 'yadi wa ar 1:9 ne gem'bu̲ bí bí za̲pi bí hñut'u̲wi ko reactivos ntsa̲ Komo ar indicó ma 'met'o mi. Ya experimentos incluyeron muestras simuladas control ya triplicado ko 'nar volumen equivalente ar PBS en lugar de reactivo ntsa̲. Ngut'a xta thogi ar pa contacto requerido, bí procesó 1 ml ar muestra tratada utilizando ar matriz filtración seleccionada adecuadamente. Ar eliminación ar reactivos pa ya pruebas inactivación bí zits'i da t'ot'e xi hño jar 'nar formato columna centrifugación mäs dätä utilizando columnas centrifugación eliminación detergente Pierce ar 4 ml (Thermo Fisher), wa llenando columnas ar centrífuga vacías 10 ml mfeni Pierce (Thermo Fisher) ko SM2 Bio — Beads, Sephacryl S — 400HR wa Sephadex LH — 20 pa proporcionar perlas yá resina empaquetadas 4 ar mL. Para la purificación con filtros Amicon, se purificaron muestras de 2 × 500 μl utilizando dos filtros centrífugos mediante el método descrito anteriormente, y luego se agruparon. Pa ar formaldehído ne ar formaldehído eliminación glutaraldehído, bí utilizó 'nar filtro ko 'nar volumen muestra 1× 500 μl, bí resuspendió 'mefa xta procesamiento en 500 μl de PBS y se agregó a 400 ul de MEM/5% de FBS. Pa ar inactivación ar infectados monocapas, 12,5 cm² Frascos pilas Vero E6 (2,5 × 10⁶ células/matraz en 2,5 mL de MEM/5% FBS) bí infectaron MOI 0,001 ne incubaron a 37 °C/5% de CO₂ Nxoge 24 ar ora. Ar retiró ar sobrenadante ne ar fijaron ya células 5 mL formaldehído, wa ya formaldehído ne ya glutaraldehído jar mpat'i ambiente Nxoge 15 wa 60 t'olo ora. Ar retiró ar fijador ne ya monocapas ar lavaron hñu ya 'nandi ko PBS nu'bu da t'a̲fi ya células 1 ml MEM/5% fbS ne ar sometieron sonicación (3 × 10 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i ar encendido, 10 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i ar apagado ja ar 100% nts'edi ne amplitud) utilizando 'nar UP200St accesorio VialTweeter (tecnología ar ultrasonido Hielscher). Ya sobrenadantes ar clarificaron centrifugando da 3000 ya t'× g Nxoge 10 t'olo ora.

Detalles ar ar reactivo utilizado pa ar inactivación ar coronavirus SARS — CoV — 2 ko ultrasónico ar VialTweeter nä'ä mä jar Nthuts'i nkohi Welch et jar ar. 2020

Ar Nthuts'i nkohi completo, incluido njapu'befi ar Hielscher VialTweeter, ar tsa̲ da tingigi mbo nuwa:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

Sofisticados desmembradores ultrasónicos ne disruptores celulares

Ultrasonido multimuestra VialTweeter ar ho̲ntho 'na ya dí soluciones ultrasónicas pa jar nt'ot'e muestras jar laboratorios biológicos, bioquímicos ne ar clínicos. Hielscher Ultrasonics ofrece ar desmembrador ultrasónico ideal pa ár nt'ot'e, ngu, lisis celular, extracción celular, homogeneización tejidos, solubilización ar lisados, disolución, desgasificación muestras, etcétera.
Da ga ga pädi Tengu ar muestras pe̲ts'i da procesar ya ora ne pa, nu'bu̲ prefiere sonicación directa wa ya indirecta ne Teme ra objetivo ar nt'ot'e ultrasónico ar muestra. Bí recomendaremos ar ar xe̲ni ar ultrasonidos xí adecuada pa ár rutina hyax'bu̲ 'be̲fi!
Ya procesadores ultrasónicos digitales ar Hielscher Ultrasonics gi equipados ko software inteligente, registro automático datos, sencillas opciones preajuste pa control ar mpat'i, ar duración ar sonicación, ar modo ciclo yá pulso, nja'bu Komo ar iluminación ar muestras ne ar control remoto ar navegador. Ga esforzamos ya da da HMUNTS'UJE dispositivos ultrasónicos 'bu̲hu̲ nä'ä mäs inteligentes tsa̲ pa da ár rutina nthoni ne 'be̲fi da nä'ä mäs cómoda ne exitosa tsa̲.
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