Nthuts'i nkohi pa inactivación coronavirus SARS — CoV — 2 ko sonicación

Inactivación coronavirus SARS — CoV — 2 ko ar VialTweeter

'Mefa xta retirar ar fijador, ya monocapas ar lavaron hñu ya 'nandi ko njäts'i salina tamponada ko fosfato (PBS) 'be̲tho da t'a̲fi ya células 1 ml MEM/5% FBS ne sonicadas (3 × 10 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i encendido, 10 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i ar descuento 100% ar amplitud nts'edi ne amplitud) utilizando ar procesador ultrasónico Hielscher) utilizando ar procesador ultrasónico Hielscher) UP200St ko VialTweeter archivo adjunto. Ya supernadantes ar clarificaron centrifugando da 3000 ya g × 10 ya t'olo ora. 

Lea ar Nthuts'i nkohi completo nuwa pa ar inactivación ar coronavirus SARS — CoV — 2 ya Welch et jar ar. (2020) tso̲kwa continuación:

Células ne virus

Células Vero E6 (Vero C1008; ATCC CRL — 1586) bí cultivaron jar ar made esencial mínimo (MEM) modificado ar Eagle complementado ko 10% (v/v) suero ternera fetal (FCS). Ar virus ar utilizado bí SARS — CoV — 2 cepa hCOV — 19 yá England yá 2 yá 2020, aislado ya PHE ar ndu̲i ar Hmunts'i ya pacientes jar ndä mfats'i ar 29 yá 01 yá 2020. Nuna ar virus obtuvo jar ar bi thogi 1 ne da utilizó pa nsadi inactivación ja ya pasajes 2 wa 3.
Pa ya reactivos ne ya productos químicos utilizados pa ar inactivación ar SARS — CoV — 2, nja'bu Komo ar eliminación ar citotoxicidad ya reactivos, ga ar mfädi dätä mfädi mä Welch et jar ar. (2020).

Inactivación ar virus ya detergentes – SARS — CoV — 2 Coronavirus ko ya Inactivación ya Welch et jar ar. 2020

Inactivación SARS — CoV — 2

Pa productos comerciales, preparaciones virus (fluido ar cultivo tejido, títulos nä'ä da ndezu̲ 1 × 10)⁶ ma 1 × 10^8. PFU yá ml) ma tratados ya triplicado ko reactivos jar concentraciones ne ya tiempos ar contacto recomendados ja ya instrucciones njapu'befi ar fabricante, nu'bu̲ 'yo da 'mui, wa pa concentraciones ne tiempos solicitados específicamente ir nge ya laboratorios ensayo. Nu'bu̲ ar fabricante umbi 'nar serie concentraciones, bí probó ar nthe mäs xí hñets'i'i entre ar producto ne ar muestra (es decir, ar concentración recomendada mäs xí hñets'i'i ar producto ensayo). Ya reactivos tubo transporte especímenes ar probaron utilizando 'nar nä'ä da 'yadi wa ar 'nar volumen fluido cultivo tisular ma 're̲t'a volúmenes ar reactivo, menos da ar fabricante especificara 'nar nthe volumen fluido muestra da reactivo. Ar probaron detergentes, ar fijadores ne ar disolventes ja ya concentraciones indicadas pa ya tiempos indicados. Ga̲tho ya pasos inactivación ar realizaron da mpat'i ambiente ambiente (18 — 25 oC). Pa ya pruebas xingu ya muestras alternativos, ar virus bí disparó jar matriz muestra indicada ja 'nar nä'ä da 'yadi wa ar 1:9, xu̲ki ar bí za̲pi bí hñut'u̲wi ko reactivos ntsa̲ Komo ar indica mañä. Ya experimentos incluyeron muestras tratadas simuladas ar control triplicado ko 'nar volumen equivalente ar PBS en lugar de reactivo ntsa̲. Ngut'a xta thogi ar pa contacto requerido, bí procesaron 1 ml ar muestra tratada ga utilizando ar matriz filtración seleccionada adecuadamente. Ar eliminación ar reactivos pa pruebas inactivación bí zits'i da t'ot'e xi hño jar 'nar formato columna espín mäs dätä utilizando Columnas giro eliminación detergente Pierce 4mL (Thermo Fisher), wa rellenando columnas centrífugas mfeni Pierce 10mL vacías (Thermo Fisher) ko SM2 Bio — Beads, Sephacryl S — 400HR wa Sephadex LH — 20 pa gi perlas yá resina 4mL empacadas. Pa ar purificación utilizando filtros Amicon, ar purificaron muestras 2 × 500 l utilizando yoho filtros centrífugos ir nge ar nt'ot'e descrito ma 'met'o mi, ne gem'bu̲ bí juntaron. Pa ar eliminación formaldehído ne formaldehído ko ar glutaraldehído, bí utilizó 'nar filtro ko 'nar volumen muestra 1× 500 l, resuspended 'mefa xta procesamiento jar 500 l PBS, ne bí añadió 400ul MEM/5% FBS. Pa ar inactivación ar infectados monocapas, 12,5 cm² frascos células Vero E6 (2,5 × 10⁶ células/matraz jar 2,5 ml MEM/5% FBS) bí infectaron 0,001 ar MOI ne ar incubaron 37oC/5% CO₂ Nxoge 24 ar ora. Ar eliminó ar sobrenadante ne ar fijaron ya células 5 ml formaldehído, wa ya formaldehído ne ya glutaraldehído jar mpat'i ambiente Nxoge 15 wa 60 t'olo ora. Ar fijador bí removido, ne ya monocapas ar lavaron hñu ya 'nandi ko PBS nu'bu da t'a̲fi ya células 1 mL MEM yá 5% FBS ne sonicaron (3 × 10 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i encendido, 10 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i apagados ar 100% nts'edi ne amplitud) usando 'nar UP200St accesorio VialTweeter (Hielscher Ultrasound Technology). Ya supernadantes ar clarificaron centrifugando da 3000 ya g × 10 ya t'olo ora.

Detalles ar ar reactivo utilizado pa ar inactivación ar coronavirus SARS — CoV — 2 ko ar VialTweeter ultrasónico nä'ä mä jar Nthuts'i nkohi Welch et jar ar.

Ar Nthuts'i nkohi completo da mfa̲ts'i 'bu̲i njapu'befi ya Hielscher VialTweeter ar tsa̲ da tingigi mbo nuwa:
Welch, Stephen R.; Davies, Katherine A.; Buczkowski, Hubert; Hettiarachchi, Nipunadi; Green, Nicole; Arnold, Ulrike; Jones, Matthew; Hannah, Matthew J.; Evans, Reah; Burton, Christopher; Burton, Jane E.; Guiver, Malcolm; Cane, Patricia A.; Woodford, Neil; Bruce, Christine B.; Roberts, Allen D. G.; Killip, Marian J. (2020): Inactivation analysis of SARS-CoV-2 by specimen transport media, nucleic acid extraction reagents, detergents and fixatives. Journal of Clinical Microbiology. Accepted Manuscript Posted Online 24 August 2020.

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