PMCA pa ar detección priones mar hñets'i rendimiento ir nge ar UIP400MTP Sonicator
Ar UIP400MTP sonicador placas multipocillos ofrece 'nar potente njäts'i pa jar nt'ot'e muestras mar hñets'i rendimiento jar amplificación cíclica plegamiento incorrecto proteínas (PMCA). Ar proporcionar 'nar NTHEGE uniforme ar energía a través de múltiples me̲he̲ ne da parámetros ar sonicación precisos, nuna ko ya permite ar procesamiento simultáneo numerosas muestras ko 'nar reproducibilidad excepcional. Gi capacidades ya críticas pa optimizar ar PMCA pa detectar priones bajas concentraciones ja ya muestras biológicas ar difíciles, komongu ar saliva, hogem'bu̲ ya inhibidores ya ensayos xi oscurecer ya resultados.
Ya enfermedades priónicas, komongu ar emaciación crónica (CWD) ja ya cérvidos ne ar enfermedad ar Creutzfeldt — Jakob (CJD) ja ya jä'i, ya trastornos neurodegenerativos causados ya proteínas priónicas mal plegadas (PrPSc). Gi enfermedades tso̲kwa menudo involucran niveles bajos priones infecciosos jar fluidos corporales, komongu ya saliva, ya ji ne mpit'i, nä'ä complica jar diagnóstico ne ár nthoni. Transmisión horizontal CWD a través de ya priones arrojados ya matrices ambientales pe̲ts'i implicaciones particularmente significativas pa ar manejo ar nzaki silvestre ne ar nzaki ecológica. Ar xkagentho modo, ja ya enfermedades komongu ar enfermedad Creutzfeldt — Jakob, amplificación fiable ya proteínas priónicas ar mal plegadas ar muestras humanas ar crucial pa avanzar jar diagnóstico ne t'ode progresión ár.
Amplificación plegamiento incorrecto proteínas mextha dätä nt'ot'e ko ar UIP400MTP Sonicator ya mar hñets'i rendimiento
Ár nt'ot'e 'nar nthuts'i nkohi PMCA modificado permite eludir ya inhibidores ensayos pa ngatho (nt'udi, mucinas jar ar saliva) ne da tsoni 'nar mextha sensibilidad jar detección priones ke ar ma'na modo serían indetectables wa ambiguos utilizando técnicas Komo ar conversión inducida ya terremotos ja ya pa real (RT — QuIC). Nuya avances mejoran ar detección priones pa ya 'na'ño enfermedades, nä'ä bi pa̲ti ma PMCA ja 'nar herramienta indispensable pa ár nthoni ne diagnóstico priones. Sonicador placas multipocillo UIP400MTP facilita sonicado PMCA mar hñets'i rendimiento numerosas muestras jar microplacas (nt'udi, placas ar 6, 24 wa 96 pocillos) wa viales ja 'nar gradilla tubos.
Nthuts'i nkohi pa amplificación cíclica plegamiento incorrecto proteínas mar hñets'i rendimiento (PMCA)
Ar Xtí nthuts'i nkohi permite ar procesamiento ya nt'ot'e xi hño ja ya Nar dätä hño 'nar 'bede ya muestras jar exactamente da ehese̲ ya nkohi pa da resultados nthoni sólidos.
Nt'ot'e ar muestra
He̲'mi partida:
Prepare ya muestras ya Xtí bí:
- Resuspensión pellets extracción sarkosyl jar sustrato PMCA.
- Homogeneización directa ar cerebro wa muestras ya ji ko semillas priónicas.
Sustrato:
- Utilice 'nar homogeneizado cerebral ma 10% (be̲xu yá vol) preparado a partir de ratones transgénicos da sobreexpresen PrPC (nt'udi, ratones Tg).
- Homogeneizar ar tejido cerebral jar:
– 1 × PBS.
– 150 mM ar NaCl.
– 1% tritón X — 100. - Almacenar el sustrato a -80ºC hasta su uso.
Configuración muestra jar microplaca wa tubos:
Tubos:
- Agregue 90 μL de sustrato de homogeneizado de cerebro y siembre con 10 μL de muestra (por ejemplo, sangre, homogeneizado de cerebro o gránulos de sarkosyl).
- Coloque 3 perlas teflón (1,59 mm wa 2,38 mm diámetro) ja ya tubo 0,2 ar ml.
- Monte ya tubos ja 'nar rack compatible ko ar UIP400MTP sonicador.
Microplaca 6 pocillos:
- Añadir 5 mL de sustrato de homogeneizado cerebral y nda mot'i i con 500 μL de muestra por pocillo.
- Agrega 3 cuentas teflón ja ya pocillo.
Nt'ot'e PMCA
Colocación:
Coloque ar gradilla tubos wa ar microplaca 6 pocillos ja ar sonicador UIP400MTP ir nge ya instrucciones ar fabricante.
Programa ciclismo:
Realice 144 ciclos PMCA ar Xtí bí:
- Incubación: 29 minutos ne 30 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i da 37°C.
- Sonicación: 30 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i ja ar 60% ar amplitud.
- Controle ar mpat'i: Utilice sensor mpat'i enchufable pa controlar ar mpat'i jar muestra ne programe ar UIP400MTP 'nar mpat'i máxima 48 — 50 °c.ndunthe
Rondas subsiguientes:
'Mefa xta completar ar ndui ronda 144 ciclos, transfiera 'na alícuota ar hñei amplificado:
- Diluir 10 ya 'nandi ja ya sustrato homogeneizado ar nxa ar cerebro t'u̲ngu transgénico.
- Realice 96 ciclos ar PMCA pa ya rondas posteriores, manteniendo ya xkagentho parámetros sonicación.
- Continúe Nxoge ar 'bede deseado ar rondas (normalmente asta 5).
Detección de PrPSc
- Digestión ar proteinasa K:
– Tratar las muestras con proteinasa K (50 μg/mL) a 37 °C durante 1 hora.
– Finalice ar digestión agregando tampón muestra SDS ne hirviendo Nxoge 10 t'olo ora. - Análisis ar Western Blot:
– Analice ya muestras digeridas mediante:
– Anticuerpos anti — PrP 6 H 4 wa ya PRC1.
– Realice SDS — PAGE ne transferir nä'ä da membranas PVDF ár detección.
Ar UIP400MTP garantiza 'nar nt'ot'e fiable ya muestras ne 'nar hei integración ko ya flujos ar 'be̲fi laboratorio 'bui
Ar UIP400MTP hingi ge 'nar nsaha ultrasónico. Ge 'nar bocina copa mextha intensidad pa 'nar sonicación focalizada. Nuna potente sonicador hinda contacto ofrece 'nar sonicación uniforme jar ga̲tho ya pocillos ár placa pocillo estándar. Pe̲ts'i 'nar control preciso dige ar amplitud, ár nts'edi ne ar pulso. 'Nar temporizador incorporado ne 'nar sonda mpat'i garantizan resultados consistentes. Sonicador placa UIP400MTP enfría ya muestras ko 'nar nsaha ar dehe (enfriador externo opcional).
Procese mäs muestras da uni ar resultados xí sólidos
Ar UIP400MTP sonicador placa multipocillo mejora significativamente ar dätä nt'ot'e ne ar escalabilidad amplificación cíclica plegamiento incorrecto proteínas (PMCA), abordando jar 'mui tradicionalmente lenta ar ar nt'ot'e. Ya ar hegi nuna ar Hmunts'i procesamiento simultáneo asta 96 muestras ja 'nar placa 96 pocillos, ko ya agiliza ya flujos ar 'be̲fi PMCA ya pa da mantiene 'ra ya nkohi sonicación precisas ne ya uniformes ja ya pocillos. Nuna ar mfeni mar hñets'i rendimiento minimiza ar manipulación manual, reduce ya pasos da requieren ndunthe ya 'ye̲ ar obra ne ar garantiza ar reproducibilidad, nä'ä dá bi pa̲ti ja 'nar herramienta indispensable pa ár nthoni priones. Ya da ne da trate ja 'nar enfermedad desgaste crónico wa ar enfermedad Creutzfeldt — Jakob, ar UIP400MTP facilita nsadi tso̲kwa gran escala ko ar dätä dätä nt'ot'e, nä'ä permite ja ya investigadores satisfacer ya demandas ya aplicaciones científicas ne diagnóstico modernas.
Bibliografía yá Referencias
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Sonicador de microplacas UIP400MTP pa PMCA mar hñets'i rendimiento
Ya nt'a̲ni frecuentes
¿Temu̲ ya ya priones?
Ya priones ya proteínas mal plegadas mar tsa̲ ndi inducir 'nar plegamiento anormal proteínas celulares normales, particularmente jar ar cerebro. Ar diferencia ya bacterias wa ya virus, ya priones carecen ar ácidos ar nucleicos ne ar propagan a través de 'nar nt'ot'e mbo autoplantilla, nä'ä conduce enfermedades neurodegenerativas progresivas komongu ar enfermedad Creutzfeldt — Jakob, ar encefalopatía espongiforme bovina (enfermedad ja ya baga pa locas) ne ar tembladera ya de̲ti. Ár resistencia ya procesos esterilización estándar subraya ár patogenicidad ho̲ntho ne plantea desafíos significativos entornos médicos ne nthoni.
¿Ter 'me'ä ar técnica PMCA?
Amplificación cíclica plegamiento incorrecto proteínas (PMCA) ge 'nar técnica ar laboratorio utilizada pa amplificar proteínas priónicas mal plegadas (PrP^Sc) in vitro. Imita la conversión de la proteína priónica celular normal (PrP^C) en su forma infecciosa mal plegada (PrP^Sc), un sello distintivo de las enfermedades priónicas. Ar proceso implica ciclos incubación ne sonicación pa acelerar ar agregación PrP^Sc, nä'ä nä'ä bi pa̲ti ja 'nar potente herramienta pa detectar niveles bajos ar priones.
¿Temu̲ plegamiento incorrecto ar proteínas causa ar enfermedad Creutzfeldt Jakob?
Ar enfermedad ar Creutzfeldt — Jakob (ECJ) ar causada ir nge ar ts'o plegamiento ar proteína priónica (PrP). Ar isoforma normal (PrPC) adopta 'nar conformación anormal tu jar láminas β (PrPSc) nä'ä bí japi infeccioso, formando agregados amiloide jar cerebro, da conduce ar neurodegeneración.
¿Temu̲ ar amplificación cíclica priones infecciosos ir nge ya plegamiento incorrecto ar proteínas?
Amplificación cíclica plegamiento incorrecto proteínas (PMCA) ge 'nar nt'ot'e da amplificar ar dets'e infecciosa ya priones (PrPSc) ir nge ar incubación repetida PrP normalC ko t'olo cantidades PrPSc. Nxoge kadu̲ 'nar ciclo, ar PrPSc cataliza ar ts'o plegamiento ar PrPCne ar sonicación fragmenta ya agregados, creando mäs sitios 'bot'i. 'Me̲hna imita ar replicación priones in vivo ne permite detección sensible priones jar muestras biológicas.
¿Temu̲ o̲t'e ke ar PrP ar pliegue incorrectamente?
Ar PrP ar pliega erróneamente ja ar PrP patógenaSc Ar formulario to da activado ya:
- Ts'o plegamiento espontáneo jar enfermedades priónicas esporádicas.
- Mutaciones genéticas jar gen PRNP (nt'udi, enfermedades priónicas familiares).
- Exposición PrP infecciosaSc a través de ar nts'i contaminados, ar nt'ot'e médicos wa ma'ra ya nt'ot'e.
- Factores ambientales wa estructurales Komo ar pH, iones metálicos wa cofactores da desestabilizan ar PrPC.
¿Ter 'me'ä ar ntsa̲ RT — QuIC?
Conversión inducida ya terremotos ja ya pa real (RT — QuIC) ge 'nar ensayo diagnóstico altamente sensible pa enfermedades priónicas. Detecta PrPSc amplificando jár mfeni pa convertir ar PrP recombinanteC jar agregados mal plegados. Ar ntsa̲ gi japu̲'be̲fi detección basada fluorescencia ar formación fibrillas amiloides, nä'ä dá xí útil pa diagnosticar enfermedades komongu ar enfermedad Creutzfeldt — Jakob ja ar líquido cefalorraquídeo (LCR) wa ma'ra ya tejidos.
Hielscher Ultrasonics fabrica homogeneizadores ultrasónicos mar hñets'i rendimiento ma partir ar laboratorio Pa tamaño industrial.