Transformación mediada ya agrobacterias asistida ya sonicación (SAAT) ge 'nar nt'ot'e nt'ot'e xi hño pa infectar células vegetales ko genes extraños utilizando Agrobacterium komongu ar transportador. Ar cavitación ultrasónica causa sonoporación, nä'ä to bädi ar komongu micro-herida dirigida tejido vegetal. A través de nuya micro-heridas ultrasónicamente creadas, ar ADN ne ya vectores ADN xi da transportados eficientemente bí matriz ar celular.

sonoporación – Transformación celular mejorada ya ultrasonidos

Ya efectos ar cavitación acústica nu'bu̲ da t'uni ar ultrasonido xí hñets'i'i frecuencia (aprox. 20 ar kHz) jar suspensiones celulares, causan 'nar permeabilización transitoria ar membrana tejidos celulares Nuna ntsoni ultrasónico pädi komongu sonoporación ne bí gi japu̲'be̲fi pa ar transferencia genes ja ya células wa ya tejidos.
Ya ventajas ar ultrasonicación bí basan jar ár ndui funcionamiento mecánico hingi térmico, o̲t'e ne ar sonicación tso̲kwa menudo da mäs versátil ne menu dependiente ja ya xingu ya células. Ár nt'ot'e versátil ar sonoporación gi xoki ar posibilidad da utilización ya do̲ni transgénicas, mi pe̲ts'i ár hne 'nar significativo jar bioproducción proteínas terapéuticas humanas complejas. Nuya biorreactores 'rini vegetal xi manipular ar genéticamente hingi hembi da, da mä 'met'o tsa̲ contaminación ko patógenos humanos, hingi dañan ya bacterias mediadoras transformación (nt'udi, Agrobacterium) ne ya 'nar nt'ot'e Bojä ne xi hño ar biosíntesis.

Transformación celular asistida ya ultrasonidos

Ar sonicación ge 'nar técnica da t'uni ya ondas ultrasonido xí hñets'i'i frecuencia pa agitar partículas jar njäts'i, pa nda mezclar soluciones, aumentando nja'bu̲ bí tasa ar transferencia ya masa ne ya disolución. Simultáneamente, ar sonicación to da hñäki ya gases disueltos ya líquidos. Ar transformación do̲ni, ar sonicación causará ar formación microbobinas ja ar tejido vegetal ne mejorará ar entrega ADN desnudo jar protoplasto ar planta.

Pa ar transformación genética, ar Transformación Mediada ya Agrobacterias Asistida ya Sonicación (SAAT) ge ár nt'ot'e Temu ne pe̲ts'i 'nar dätä nt'ot'e significativamente dätä sonicación utilizada pa transferir ADN desnudo ne vectores ADN Hmunts'i ja ar protoplasto. Numerosos ya nsadi xi demostrado da transformación asistida ya sonicación mediada ya Agrobacterium (SAAT) tsa̲ da utilizar ar pa inducir ar interrupción ar mecánica ne ar formación heridas ja ya células vegetales ir nge ya ondas ultrasonido ne ár cavitación acústica resultante. 'Nar nt'ot'e ultrasónico hingi maa crea microheridas jar superficie ya explantes. Komo ya células heridas permitirán ar penetración Agrobacterium jar xeni mäs profunda ya tejidos vegetales, aumentando nja'bu̲ probabilidad ke ya células vegetales ar infecten. 'Nehe, ya compuestos fenólicos secretados mejoran ar transformación. Ya microheridas generadas ya ultrasonidos o̲t'e ne ar penetración bacterias ja ar explante 'nehe da mäs factible. SaaT ar utilizó ko éxito pa ar transformación genética jar especies ya do̲ni particularmente consideradas komongu resistentes da Agrobacterium.
Da ar 'nar nt'ot'e xi simple ne ya bojä, nja'bu Komo ar mejora significativa ar transferencia ar genes mediada ya Agrobacterium ya ndu'mi ya ventajas ar SAAT. 'Nehe ar nt'ot'e exitosa ar SAAT jar transformación Chenopodium rubrum L. ne Beta vulgaris L., nuna ar enfoque 'nehe ar xi 'yot'e ar Ts'ut'ubi ja ar producción holotoxinas termolábiles ar klase salvaje recombinante Escherichia coli ne adyuvantes ar bakunä LT mutante ar Escherichia coli jar Nicotiana tabacum, mi detectaron ya títulos sistémicos ar IgG específicos ar LT — B mäs altos ja ya ts'ints'u̲.
(cf. Laere et jar el., 2016; M. Klimek — Chodacka ne R. Baranski, 2014)

Nt'ot'e Nxoge pa ar transferencia genes a través de sonoporación jar células vegetales

1. Mfädi hñei genético: Comience nge hoki ar hñei genético nä'ä gi introducir ya células vegetales. 'Me̲hna dar tsa̲ da ADN plásmido, ARN wa ma'ra ácidos nucleicos.
2. Aislamiento células vegetales: Aísle ya células vegetales ya nä'ä gi gi 'yot'i. Dependiendo de ár experimento, gi células xi aislar ar tejidos wa cultivos vegetales.
3. Suspensión celular: Suspender ya células vegetales ja 'nar nt'uni wa tampón adecuado. Nuna gehna esencial pa garantizar ke ya células 'yo xí hño ne 'nar Dähnini propicio pa ar absorción genes.
4. Configura ir Sonicator: Prepare ár sonicador ar klase sonda ir nge ya parámetros preajuste sonicación komongu ar amplitud, pa, energía ne mpat'i. Sumerja sonda ultrasónica jar suspensión ar celular.
5. Nsaha ultrasonidos: Inicie ar nt'ot'e sonicación. Ar ngut'a oscilación mañä jar sonda genera burbujas cavitación ja ar líquido. Gi burbujas ar expanden ne colapsan nu'bya ya ondas ultrasónicas, creando ndu mecánicas ne microstreaming ja ar suspensión.
6. Sonoporación: Ya ndu nzafi mecánicas ne ar microtransmisión generada ir nge ar cavitación crean temporalmente poros ne agujeros ja ya membranas ya células vegetales. Ar hñei genético 'mui ja ar suspensión to entrar ja ya células vegetales a través de nuya poros.
7. Incubación: 'Me̲fa ar nt'ot'e ya sonoporación, incubar ya células vegetales pa hegi nuna ar Hmunts'i bí recuperar bí ne estabilizar yá membranas. Nuna gehna 'nar bi thogi crucial pa garantizar ar supervivencia ar celular ne ar transferencia exitosa genes.

Transferencia genes a través de agrobacterias wa ya liposomas

Jawa yoho formas pa ngatho ya transfectar células vegetales. Utilizan agrobacterias, 'nar género bacterias gramnegativas, wa liposomas komongu ar portadores ar hñei genético.

• Sonoporación mediada ya agrobacterias: Agrobacterium tumefaciens ge 'nar bacteria comúnmente utilizada jar ingeniería genética vegetal. Jar nuna nt'ot'e, ar ADN plásmido da contiene ar gen deseado ar introduce jar Agrobacterium, ne gem'bu̲ bí mezcla ko células vegetales. Ar suspensión ar celular bí somete bí sonoporación utilizando 'nar sonicador ar klase sonda. Ar energía ultrasónica mejora ar transferencia ar he̲'mi genético Agrobacterium ja ya células vegetales. Nuna ar nt'ot'e ar ampliamente utilizado pa ar nyokwi nthoki genética do̲ni.
• Sonoporación mediada ya liposomas: Ya liposomas ya vesículas nthe jar lípidos ne xi transportar hñei genético. Nuna nt'ot'e ja ya liposomas cargados ko ADN plásmido wa ma'ra ácidos nucleicos ar mezclan ko células vegetales. Sonoporación ko 'nar sonicador ar klase sonda ar emplea pa ár hño ja ar absorción liposomas ir nge ya células vegetales. Ar ultrasonido k'ats'i ma ya bicapas lipídicas ya liposomas, liberando hñei genético ja ya células vegetales. Nuna ar enfoque ar útil pa nsadi nthogi ya hmä génica jar células vegetales.

Njapu'befi científicamente probados transformación mediada ya agrobacterias asistida ya sonicación (SAAT)

Transformación mediada ya agrobacterias asistida ya sonicación (SAAT) bí xi 'yot'e ar Ts'ut'ubi da numerosas especies do̲ni. 'Nar nt'ot'e ultrasónico hingi maa ne relativamente za̲tho ya cultivos células vegetales causa sonoporación, da 'mefa permite 'nar penetración profunda Agrobacterium komongu transportador genes. Tso̲kwa continuación to lei nsadi ejemplares da demuestran ya efectos beneficiosos ar SAAT.

Transformación asistida ya ultrasonidos Ashwagandha

Pa mejorar dätä nt'ot'e transformación jar W. somnifera (conocida komongu ashwagandha wa cereza ntse̲nthi), Dehdashti ne yá colegas (2016) investigaron njapu'befi ya acetosyringona (AS) ne ar sonicación.
Ar acetosyringona (AS) bí agregó jar hñu ya etapas: cultivo líquido Agrobacterium, infección ya Agrobacterium ne cocultivo explantes ko ya Agrobacterium. Se encontró que la adición de 75 μM as al cultivo líquido de Agrobacterium era óptima para la inducción de genes vir.
Ár nt'ot'e adicional sonicación (SAAT) resultó jar ar dätä hmä génica. Ar bí nthe̲hu̲ nä'ä hmä gen gusA ja ya raíces peludas mar hño nu'bu̲ ya hojas ne yá ñä ya brotes ar sonicaron Nxoge 10 ne 20 ar je̲ya, respectivamente. Dätä nt'ot'e transformación ar Nthuts'i nkohi mejorado bí registró 'nar 66,5% ne 'nar 59,5% Ts'ut'ubi nu'bu ya explantes hoja ne nts'ä brote, respectivamente. Ja ar comparación ko ya protocolos, ar bí nthe̲hu̲ da dätä nt'ot'e transformación nuna nthuts'i nkohi mejorado mar 2,5 ya 'nandi dätä pa ya hojas ne ya 3,7 bes mäs pa yá ñä ar disparo. Ya análisis Southern blot confirmaron 1 — 2 kopya ya transgén gusA ja ya líneas W1 — W4, gem'bu̲ bí detectaron 1 — 4 kopya transgénicas jar ár 'ñu W5 generada ir nge ar Nthuts'i nkohi mejorado.

Ar duración ar transformación mediada ya Agrobacterium asistida ya sonicación (SAAT) dige ar frecuencia transformación ya explantes hoja ar W. somnifera (a) ne nts'ä brote (b)
(estudio ne gráfico: © Dehdashti et jar el., 2016)

Transformación ar algodón asistida ya ultrasonidos

Hussain et jar ar. (2007) demuestran ya efectos beneficiosos ar transformación ar algodón ar asistida ya sonicación. Ar cavitación acústica causada ya ultrasonido xí hñets'i'i frecuencia crea microheridas jar ne debajo de ar superficie ar tejido vegetal (sonoporación) ne permite da Agrobacterium viaje mäs profundo ne completamente a través de ar tejido vegetal. Nuna ar nt'ot'e ar herir aumenta ar probabilidad ar infectar ya células vegetales mi 'bu̲i mäs profundamente jar ar tejido. Pa evaluar dätä nt'ot'e transformación SAAT, bí midió ar hmä génica GUS. Ko reportero GUS ge 'nar ko ya genes reporteros, particularmente útil biología molecular ne microbiología do̲ni. Ajustando varios parámetros ar SAAT, ar hmä transitoria ar GUS jar algodón utilizando embriones maduros komongu ar explante ar mejoró significativamente. GUS ar detectó ya bes 24 h 'mefa xta incubación ya explantes ne ja ya 48 h, ar hmä GUS mar na intensa, sirvió komongu 'nar indicador útil ar transformación exitosa explant algodón 'mefa xta sonicación asistida ya Agrobacterium mediated transformation (SAAT). Ar comparación ndunthe técnicas transformación (tso̲kwa saber, biolística, Agro, BAAT, SAAT), transformación mediada ya agrobacterias asistida ya sonicación (SAAT) mostró, ko ar mucho, ya mpädi mäs xi resultados jar transformación.

Ar nt'ets'i jar nt'ot'e transformación dige ar base jar hmä transitoria GUS. Transformación mediada ya agrobacterias asistida ya sonicación (SAAT) gi 'ñudi 'nar hmä transitoria significativamente dätä.
(estudio ne gráfico: © Hussain et jar el., 2007)

Soluciones ultrasónicas mar hñets'i rendimiento pa sonoporación ne SAAT

Hielscher Ultrasonics pe̲ts'i 'nar maku̲nzaki mfeni ár nte ne fabricación ultrasonidos mar hñets'i rendimiento pa laboratorios, instalaciones nthoni ne producción industrial ko rendimientos xi altos. Pa ar microbiología ne ya ciencias ar nzaki, Hielscher ofrece ndunthe ya soluciones pa adaptar ar ja ya 'na'ño requisitos mahyoni pa tejidos específicos ne yá tratamientos. Pa ar ultrasonicación simultánea numerosas muestras, Hielscher ofrece UIP400MTP pa placas multipozo, VialTweeter pa ar sonicación asta 10 viales (nt'udi, tubos Eppendorf) wa ar cuphorn ultrasónico. Ya ultrasonidos ar klase sonda gi 'bu̲hu̲ da 'mui ar 50 da 400 vatios komongu homogeneizadores laboratorio, mente da sistemas ya industriales cubren rango nts'edi 500 vatios bí 16 ar kW.
Ga japi ar jar contacto ko ngekagihe ne da ga ga pädi dige yá requisitos nu'bu da 'yadi ne ya proceso. Ma jä'i experimentado da encantado ja ar ultrasonido xí adecuado pa ár proceso ar biológico.
Xtí tabla bí xta ar 'nar indicación ya mfeni ya procesamiento aproximado HMUNTS'UJE ultrasonicators: