Transformación genética jar células vegetales ir nge ya ultrasonidos

Ar Transformación Mediada ya Agrobacterias Asistida ya Sonicación (SAAT) ge 'nar nt'ot'e nt'ot'e xi hño pa infectar células vegetales ko genes extraños utilizando Agrobacterium komongu ar transportador. Ar cavitación ultrasónica provoca sonoporación, nä'ä to bädi ar komongu 'nar microherida selectiva ar tejido vegetal. A través de nuya microheridas, ar ADN ne ya vectores ADN xi transportar ar eficazmente bí matriz ar celular.

sonoporación – Transformación celular mejorada ya ultrasonidos

Ya efectos ar cavitación acústica nu'bu̲ bí aplican ar ultrasonidos xí hñets'i'i frecuencia (aprox. 20 ar kHz) da suspensiones ya celulares, provocan 'nar permeabilización transitoria ar membrana tejidos celulares Nuna ntsoni ultrasónico pädi komongu sonoporación ne bí gi japu̲'be̲fi pa ar transferencia genes ma células wa ya tejidos.
Ya ventajas ar ultrasonicación bí basan jar ár ndui funcionamiento mecánico hingi térmico, o̲t'e ne ar sonicación da tso̲kwa menudo mäs versátil ne menu dependiente ja ya xingu ya células. Ár nt'ot'e versátil ar sonoporación gi xoki ar posibilidad da utilización ya do̲ni transgénicas, mi pe̲ts'i ár hne 'nar significativo jar bioproducción proteínas terapéuticas humanas complejas. Nuya biorreactores 'rini vegetal xi manipular ar genéticamente hingi hembi da, evitan tsa̲ contaminación ko patógenos humanos, hingi dañan ya bacterias mediadoras ar transformación (nt'udi, Agrobacterium) ne ya 'nar nt'ot'e Bojä ne xi hño ar biosíntesis.

Transformación celular asistida ya ultrasonidos

Ar sonicación ge 'nar técnica da t'uni ya ondas ar ultrasónicas xí hñets'i'i frecuencia pa agitar partículas jar njäts'i, pa nda mezclar soluciones, aumentando nja'bu̲ bí tasa ar transferencia ya masa ne ya disolución. Ya ar xkagentho pa, ar sonicación to da hñäki ya gases disueltos ya líquidos. Ar transformación ya do̲ni, ar sonicación provocará ar formación microheridas ja ar tejido vegetal ne mejorará ar entrega ADN desnudo bí protoplasto ar planta.

Pa ar transformación genética, transformación mediada ya agrobacterias asistidas ya sonicación (SAAT) ge ár nt'ot'e Temu ne pe̲ts'i 'nar eficacia significativamente dätä sonicación utilizada pa transferir ADN desnudo ne vectores ADN Hmunts'i ja ar protoplasto. Numerosos ya nsadi xi demostrado da transformación mediada ya agrobacterias (SAAT) asistida ya sonicación to utilizar ar pa inducir ar disrupción ar mecánica ne ar formación heridas ja ya células vegetales ir nge ya ondas ultrasónicas ne ar cavitación acústica resultante. 'Nar breve ár nt'ot'e ultrasónico crea microheridas jar superficie ya explantes. Ya da células ya heridas permitirán ar penetración Agrobacterium jar xeni mäs profunda ya tejidos vegetales, aumentando nja'bu̲ probabilidad ke ya células vegetales ar infecten. 'Nehe, ya compuestos fenólicos secretados mejoran ar transformación. Ya microheridas generadas ya ultrasonidos o̲t'e ne ar penetración ya bacterias ar explante 'nehe da mäs factible. Ar SAAT ar utilizó ko éxito pa ar transformación genética jar especies vegetales particularmente consideradas komongu resistentes da Agrobacterium.
Da ar 'nar nt'ot'e xi sencillo ne ya bojä, nja'bu Komo ar mejora significativa ar transferencia ar genes mediada ya Agrobacterium ya ndu'mi ya ventajas ar SAAT. 'Nehe ar nt'ot'e exitosa ar SAAT jar transformación Chenopodium rubrum L. ne Beta vulgaris L., nuna ar enfoque 'nehe ar xi 'yot'e ar Ts'ut'ubi ja ar producción holotoxinas termolábiles ar klase salvaje recombinantes Escherichia coli ne adyuvantes vacunas LT mutantes ar Escherichia coli jar Nicotiana tabacum, mi detectaron ya títulos igG sistémicos específicos LT — B mäs altos ja ya ts'ints'u̲.
(cf. Laere et jar el., 2016; M. Klimek — Chodacka ne R. Baranski, 2014)

Nt'ot'e Nxoge pa ar transferencia genes ir nge ya sonoporación jar células vegetales

1. Mfädi ar hñei genético: Comience nge hoki ar hñei genético nä'ä gi introducir ya células vegetales. To da ADN plasmídico, ARN wa ma'ra ácidos nucleicos.
2. Aislamiento células vegetales: Aísla ya células vegetales ya nä'ä gi ne gi dirigir. Dependiendo de ár experimento, gi células xi aislar ar tejidos wa cultivos vegetales.
3. Suspensión celdas: Suspenda ya células vegetales ja 'nar nt'uni wa tampón adecuado. Nuna gehna esencial pa garantizar ke ya células 'yo xí hño ne 'nar Dähnini propicio pa ar absorción genes.
4. Configura ir Sonicator: Prepare ár sonicador ar klase sonda preconfigurando ar sonicación ko parámetros komongu ar amplitud, pa, ar energía ne ar mpat'i. Sumerja sonda ultrasónica jar suspensión ar celular.
5. Sonicación: Inicie ar nt'ot'e sonicación. Ar ngut'a oscilación mañä jar sonda genera burbujas cavitación ja ar líquido. Gi burbujas ar expanden ne colapsan nu'bya ya ondas ultrasónicas, creando ndu mecánicas ne microflujos ja ar suspensión.
6. Sonoporación: Ya ndu nzafi mecánicas ne ar microflujo generado ir nge ar cavitación crean temporalmente poros ne agujeros ja ya membranas ya células vegetales. Ar hñei genético 'mui ja ar suspensión to entrar ja ya células vegetales a través de nuya poros.
7. Incubación: 'Me̲fa ar nt'ot'e ya sonoporación, incubar ya células vegetales pa ndi bí recuperen ne estabilicen yá membranas. Nuna gehna 'nar bi thogi crucial pa garantizar ar supervivencia ar celular ne ar transferencia exitosa genes.

Transferencia genes a través de agrobacterias wa ya liposomas

Jawa yoho formas pa ngatho ar transfectar ar célula vegetal. Utilizan agrobacterias, 'nar género bacterias Gram — negativas, wa liposomas komongu ar portadores ar hñei genético.

• Sonoporación mediada ya agrobacterias: Agrobacterium tumefaciens ge 'nar bacteria comúnmente utilizada jar ingeniería genética ya do̲ni. Jar nuna nt'ot'e, ar ADN plasmídico da contiene ar gen deseado ar introduce jar Agrobacterium, ne gem'bu̲ bí mezcla ko células vegetales. Ar suspensión ar celular bí somete bí sonoporación utilizando 'nar sonicador ar klase sonda. Ar energía ultrasónica mejora ar transferencia ar he̲'mi genético Agrobacterium ja ya células vegetales. Nuna ar nt'ot'e ar na utilizado pa ar nyokwi nthoki genética do̲ni.
• Sonoporación mediada ya liposomas: Ya liposomas ya vesículas a base de lípidos ne xi transportar hñei genético. Nuna nt'ot'e ja ya liposomas cargados ko ADN plasmídico wa ma'ra ácidos nucleicos ar mezclan ko células vegetales. Sonoporación ir nge 'nar sonicador ar klase sonda ar emplea pa ár hño ja ar absorción liposomas ja ya células vegetales. Ar ultrasonido 'wagi ya bicapas lipídicas ya liposomas, liberando hñei genético ja ya células vegetales. Nuna ar enfoque ar útil pa ya nsadi ya hmä génica ar transitoria jar células vegetales.

Njapu'befi científicamente probados transformación mediada ya agrobacterias asistida ya sonicación (SAAT)

Ar Transformación Mediada ya Agrobacterias Asistida ya Sonicación (SAAT) bí xi 'yot'e ar Ts'ut'ubi da numerosas especies do̲ni. 'Nar nt'ot'e ultrasónico hingi maa ne relativamente za̲tho ya ya cultivos células vegetales provoca ar sonoporación, da 'mefa permite 'nar penetración profunda Agrobacterium komongu transportador genes. Tso̲kwa continuación tsa̲ lei nsadi ejemplares da demuestran ya efectos beneficiosos ar SAAT.

Transformación asistida ya ultrasonidos ar ashwagandha

Pa mejorar dätä nt'ot'e transformación jar W. somnifera (conocida komongu ashwagandha wa cereza ntse̲nthi), Dehdashti ne yá colegas (2016) investigaron njapu'befi ya acetossiringona (AS) ne ar sonicación.
Ar añadió acetosiringona (AS) jar hñu ya etapas: cultivo líquido Agrobacterium, infección ya Agrobacterium ne cocultivo explantes ko ya Agrobacterium. Se encontró que la adición de 75 μM de AS al cultivo líquido de Agrobacterium era óptima para la inducción de genes vir.
Ár nt'ot'e adicional ar sonicación (SAAT) umbi lugar ja ar máxima hmä génica. Ar bí dini nä'ä hmä gen gusA ja ya raíces pilosas mar mäs xi hño nu'bu̲ ya hojas ne yá ñä ya brotes ar sonicaron Nxoge 10 ne 20 ya 'na̲te ya mfe̲ts'i, respectivamente. Dätä nt'ot'e transformación ar Nthuts'i nkohi mejorado ar registró jar 66.5 ne 59.5% Ts'ut'ubi nu'bu ya explantes hoja ne nts'ä brote, respectivamente. Ja ar comparación ko ya protocolos, ar bí nthe̲hu̲ da dätä nt'ot'e transformación nuna nthuts'i nkohi mejorado bí 2,5 ya 'nandi dätä pa ya hojas ne ya 3,7 ya 'nandi dätä pa yá ñä ya brotes. Ya análisis Southern blot confirmaron 1 — 2 kopya ya transgén gusA ja ya líneas W1 — W4, gem'bu̲ bí detectaron 1 — 4 kopya ya transgén jar ár 'ñu W5 generadas ya nthuts'i nkohi mejorado.

Ar duración ar transformación mediada ya Agrobacterium (SAAT) asistida ya sonicación dige ar frecuencia transformación ya explantes hoja (a) ne nts'ä brote (b) ar W. somnifera
(estudio ne gráfico: © Dehdashti et jar el., 2016)

Transformación ultrasónica ar algodón

Hussain et jar ar. (2007) demuestran ya efectos beneficiosos ar transformación ar algodón ar asistida ya sonicación. Ar cavitación acústica causada ya ultrasonidos xí hñets'i'i frecuencia crea microheridas jar ne debajo de ar superficie ar tejido vegetal (sonoporación) ne permite da Agrobacterium viaje mäs profunda ne completamente a través de ar tejido vegetal. Nuna ar nt'ot'e herida aumenta ar probabilidad ar infectar ya células vegetales mi 'bu̲i mäs profundas jar ar tejido. Pa evaluar dätä nt'ot'e transformación SAAT, bí midió ar hmä génica GUS. Ko ya indicador GUS ge 'nar ko ya genes reporteros, particularmente útil biología molecular ne microbiología do̲ni. Ajustando varios parámetros SAAT, ar hmä transitoria ar GUS jar algodón utilizando embriones maduros komongu explante mejoró significativamente. Ar GUS ar detectó ya bes 24 ora 'mefa xta incubación ya explantes ne da 48 ya ora, ar hmä GUS mar na intensa, nä'ä sirvió komongu 'nar indicador útil ar éxito ar transformación ar explante algodón ir transformación mediada ya Agrobacterium (SAAT) asistida ya sonicación. Ar comparación ndunthe técnicas transformación (tso̲kwa saber, biolística, Agro, BAAT, SAAT), transformación mediada ya Agrobacterium asistida ya sonicación (SAAT) mostró ko ya diferencia ya mpädi mäs xi resultados transformación.

Ar nt'ets'i jar nt'ot'e transformación dige ar base jar hmä transitoria GUS. Transformación mediada ya agrobacterias asistida ya sonicación (SAAT) gi 'ñudi 'nar hmä transitoria significativamente dätä.
(estudio ne gráfico: © Hussain et jar el., 2007)

Soluciones ultrasónicas mar hñets'i rendimiento pa sonoporación ne SAAT

Hielscher Ultrasonics pe̲ts'i 'nar maku̲nzaki mfeni ár nte ne ar fabricación ultrasonidos mar hñets'i rendimiento pa laboratorios, instalaciones nthoni ne producción industrial ko rendimientos xi altos. Pa ar microbiología ne ya ciencias ar nzaki, Hielscher ofrece ndunthe ya soluciones pa adaptar ar ja ya 'na'ño requisitos mahyoni pa tejidos específicos ne yá tratamientos. Pa ar ultrasonicación simultánea numerosas muestras, Hielscher ofrece UIP400MTP pa placas multipocillo, VialTweeter pa ar sonicación asta 10 viales (nt'udi, tubos Eppendorf) wa ar CupHorn ultrasónico. Ya ultrasonidos ar klase sonda gi 'bu̲hu̲ da 'mui ar 50 da 400 vatios komongu homogeneizadores laboratorio, mente da sistemas ya industriales cubren rango nts'edi 500 vatios bí 16 ar kW.
Ga japi ar jar contacto ko ngekagihe ne da ga ga pädi dige ya requisitos ár zohni 'nehe ne ya proceso. Ma experimentado jä'i da encantado ja bí ultrasonido mäs adecuado pa ár proceso ar biológico.
Xtí tabla bí xta ar 'nar indicación ya mfeni ya procesamiento aproximada ar HMUNTS'UJE ultrasonidos: