Formación de fibrillas de amiloide utilizando el sonicador de microplacas UIP400MTP

Ya fibrillas amiloide, getho bí thogi goho ya cristales mi o̲t'e a través de 'nar proceso nucleación ne 'mefa ár njäts'i Tange'u ar crecimiento. Wat'i, nu'bya ar mextha barrera ar energía mpe̲fi jar nucleación, ar formación espontánea fibrillas amiloides ocurre ho̲ntho 'me̲fa 'nar fase ya dá tso̲ho̲ prolongada. Ar ultrasonicación ar xi convertido jar poderosa 'nar herramienta pa inducir ar nucleación amiloide, acelerando nja'bu̲ bí significativamente ar formación fibrillas. Nu'bu̲ ar combina ko 'nar lector ar microplacas nä'ä gi japu̲'be̲fi fluorescencia tioflavina T (ThT), ar ultrasonicación permite detección mar hñets'i rendimiento fibrillas amiloide jar ndunthe ya muestras simultáneamente.

Formación fibrillas amiloide inducida ya ultrasonidos ko ar sonicador microplacas UIP400MTP

Ko ar UIP400MTP sonicador placas multipocillo, ar xi sintetizar rápidamente fibrillas amiloide xkagentho ar hño jar dätä cantidades ko ar ngäts'i nthoni. Nuna ar enfoque nt'ot'e xi hño permite estudiar ar amiloidogenicidad ya proteínas. Esta técnica facilita la fibrilación amiloide rápida ne reproducible, como se ha demostrado con la β2-microglobulina (β2-m), una proteína amiloidogénica asociada a la amiloidosis relacionada con la diálisis.

Enfoque experimental sencillo: fibrilación amiloide inducida ya ultrasonidos

Pa inducir ar formación fibrillas, bí colocó 'nar microplaca 96 pocillos jar made ar UIP400MTP sonicador placa multipocillo, da garantiza 'nar exposición ultrasónica uniforme ja ya pocillos. Ya nkohi experimentales ma ya nuya:

1. Cada pocillo contenía 0,2 ml de solución de β2-microglobulina (0,3 mg/ml, pH 2,5) suplementada con 5 μM de ThT.
2. Ar placa ar sometió bí ciclos ar ultrasonidos, komongu ar ultrasonicación ar 1 t'olo ora seguida ar 9 ya t'olo ora ar pausa.
3. 'Mefa xta sonicación, ar fluorescencia ThT ar midió utilizando 'nar lector microplacas.

(cf. So et jar el., 2011)

Comparación ko ar agitación convencional

Ja ar comparación ko ya nt'ot'e ar agitación hneise̲, ar ultrasonicación redujo drásticamente fase dá tso̲ho̲ formación fibrillas. Ja convencionales ya agitación microplacas, Honto 1 kadu̲ 'nar 10 pocillos mostró 'nar aumento ar fluorescencia ThT 'mefa xta 20 ar ora. Ya contrario, utilizando ar ultrasonicación cíclica (15 ya t'olo ora ar sonicación seguida ar 5 ya t'olo ora ar inactividad), bí detectó 'nar aumento significativo ar fluorescencia ThT ngut'a 'mefa xta ndu̲i ar nt'ot'e ya sonicación.

Aceleración ngut'a cinética fibrilación

Ya resultados obtenidos de So et jar el. (2011) demostraron que la formación espontánea de fibrillas de β2-microglobulina a pH 2,5 puede acelerar ar de varias horas a sólo 10-15 minutos con ultrasonidos.
Ya imágenes microscopía ya ndu nzafi atómica (AFM) confirmaron ke ya fibrillas generadas ir nge ya ultrasonidos 10 t'olo ora nu'bu̲ 15 t'olo ora mi morfológicamente indistinguibles ja ya formadas ir nge ya ultrasonidos 1 t'olo ora nu'bu̲ 10 t'olo ora. 'Me̲hna pone ar manifiesto ar reproducibilidad ne ar robustez ar fibrilación amiloide inducida ya ultrasonidos.

Imágenes AFM ar fibrillas ar amiloide producidas ya ultrasonidos 1 min ya 10 min (i), sonicación 10 min nu'bu̲ 15 min (ii) ne ya reacción 'bot'i hinda ultrasonicación (iii). La barra de escala blanca representa 1 μm.
Estudio ne imágenes: ©So et jar el., 2011

Fibrilación ja ya pH neutro

'Nehe ja ya pH neutro, ar formación fibrillas ar logró 'mefa xta 'nar pa dá tso̲ho̲ 1,5 ya ora, nä'ä demuestra ne ar ultrasonicación reduce significativamente barrera energética ar nucleación ne ar crecimiento. 'Me̲hna apoya aún mi mäs ar hipótesis ne ar fibrilación amiloide bi principalmente 'nar reacción física, limitada gran da medida ya barrera energía nucleación, nä'ä ar ultrasonicación reduce eficazmente.

Impacto jar nthoni enfermedades relacionadas ko ar amiloide

Ar formación hei ne fiable fibrillas amiloide utilizando sonicador microplacas UIP400MTP pe̲ts'i implicaciones significativas pa ár nthoni enfermedad ar Alzheimer (EA) ne ma'ra trastornos relacionados ko ar amiloide, komongu ár ar Parkinson, ar diabetes ar klase II ne ya amiloidosis sistémicas. Jar EA, agregación amiloide β (Aβ) ge 'nar sello patológico clave, pe estudio ár cinética fibrilación te̲ni komongu 'nar desafío nu'bya ya largas fases dá tso̲ho̲ ne ar variabilidad ya nt'ot'e convencionales. Ar formación ar fibrillas impulsada ya ultrasonidos acelera ar nucleación, garantizando 'nar mextha reproducibilidad ne 'nar variabilidad reducida, nä'ä ar crucial pa ar detección posibles inhibidores ne da 'yo̲de ya mecanismos amiloidogénicos. 'Nehe, mfeni ya mar hñets'i rendimiento ar UIP400MTP permite investigaciones tso̲kwa gran escala dige ar ts'o plegamiento ne ar agregación proteínas, nä'ä facilita descubrimiento agentes terapéuticos ne xi modular ar formación fibrillas ne potencialmente mitigar ar progresión neurodegenerativa.

Nuna ar estudio establece ultrasonicación utilizando ar UIP400MTP sonicador placas multipocillos komongu 'nar nt'ot'e xi na hño pa acelerar ar formación fibrillas amiloides. Ya ndu'mi ventajas nuna ar enfoque ge ya nuya:

• Reducción drástica ya pa dá tso̲ho̲ ar fibrilación.
• Exposición uniforme da ultrasonidos jar ga̲tho ya pocillos, nä'ä permite ar formación fibrillas reproducibles.
• Ar mfeni cribado mar hñets'i rendimiento, nä'ä bí thogi adecuado pa búsquedas amiloidogenicidad proteínas jar nga̲tho ar genoma.

Ya ar integrar ar ultrasonicación ar detección fluorescencia ThT, nuna ar nt'ot'e proporciona 'nar plataforma ngut'a, escalable ne fiable studya ar fibrilación amiloide. Dada ár dätä nt'ot'e ne ár hne mar hñets'i rendimiento, nuna ar enfoque to ár hño ja ar síntesis hei fibrillas amiloide pa ár nthoni biofísica ne farmacéutica, ofreciendo 'nar herramienta prometedora pa ya nsadi relacionados ko ar amiloide ne cribado fármacos.