Ya fibrillas ne cintas α — sinucleína ar fragmentan jar ár nthoni científica pa generar fragmentos ar fibrillas mäs t'olo wa 'nehe moléculas proteínas Nthuts'i, da xi analizar ar hingi hembi mäs da utilizando ya 'na'ño técnicas experimentales. Sonicador VialTweeter ge 'na ya ultrasonidos mäs utilizados pa 'nar fragmentación nt'ot'e xi hño ne ya confiable alfa — sinucleína.

α — sinucleína jar ár nthoni

Ya fibrillas alfa — sinucleína ya agregados proteínas nä'ä gi 'bu̲hu̲ fuertemente asociados trastornos neurodegenerativos komongu ar enfermedad Parkinson ne ciertas formas demencia, incluida ar demencia cuerpos Lewy. Ár nthoni centrada ya fibrillas alfa — sinucleína pe̲ts'i ngu objetivo t'ode ár he̲'mi progresión ár ne da te posibles intervenciones terapéuticas. Ma jar descomponer ya fibrillas alfa — sinucleína jar fragmentos mäs t'olo, ya investigadores xi hyoni yá características estructurales específicas. Ngu, fragmentación ya fibrillas alfa — sinucleína permite ja ya investigadores hyoni yá interacciones ko ma 'ra ya moléculas, komongu ar proteínas, lípidos wa moléculas t'olo. Ya ar producir fragmentos mäs t'olo, ya sitios mfats'i ne ya afinidad ir nge nuya socios interactúan ar xi probar ar bí mäs efectiva. Ya fribrillas ne cintas α — Syn mäs t'olo 'nehe xi mostrar toxicidad alterada ne efectos bioquímicos. Ir 'nar técnica fragmentación confiable ne ya nt'ot'e xi hño, da produzca ya resultados reproducibles ja 'nar nt'ot'e ya muestra rápido ne simple, ar crucial.
Fragmentación ultrasónica alfa — syn: Sonicador VialTweeter ar ko ya nt'ot'e muestras ultrasónico establecido da sonica ga 10 ar viales simultáneamente jar exactamente da ehese̲ ya nkohi. Ya ajustes programables permiten ar repetición simple ne ngut'a ya xkagentho experimentos, nä'ä proporciona resultados altamente confiables ne reproducibles jar fragmentación fibrillas alfa — sinucleína.

Nt'ot'e muestras α — sinucleína ko 'nar sonicador

'Nar enfoque studya ya fibrillas alfa — sinucleína implica ár extracción ne fragmentación utilizando técnicas komongu ar sonicación. Ar sonicación ge 'nar proceso gi japu̲'be̲fi ondas ultrasonido mextha intensidad ne baja frecuencia pa interrumpir ne descomponer ya agregados proteínas, da lleva ar liberación fibrillas mäs t'olo wa moléculas proteínas Nthuts'i. Sonicador VialTweeter ar dispositivo comúnmente utilizado ja ya nsadi nthoni relacionados ko ar α — sinucleína pa nuna 'mu̲i.

Numerosos nsadi nthoni describen protocolos precisos nt'ot'e muestras sonicación fibrillas alfa — sinucleína, da utilizan ar Hielscher VialTweeter pa 'nar fragmentación nt'ot'e xi hño ne ya confiable ya fibrillas α — sinucleína. Ar fragmentar ya fibrillas ultrasónicamente, ya investigadores xi analizar ya productos da t'ot'e 'na ne examinar ár estructura, toxicidad ne interacciones ko ma 'ra ya moléculas. Nuna nthoni proporciona ungumfädi mahyoni dige ya mecanismos subyacentes 'na jar neurodegeneración ne potencialmente identifica 'ra'yo ya 'befi terapéuticos. Ya protocolos ar sonicación α — sinucleína xi hño establecidos da utilizan ar sonicador VialTweeter permiten da resultados confiables ne reproducibles.

Imágenes t'uti hñe̲he̲: fibrillas alfa — sinucleína hindi fragmentadas
Imágenes inferiores: Fibrillas ar alfa — sinucleína fragmentadas ya ultrasonidos ko ar sonicador VialTweeter
(estudio ne imágenes: ©Dieriks et jar el., 2022)

Fragmentación ultrasónica fibrillas α — sinucleína – protocolos

Dado da numerosos ar investigadores utilizan sonicador VialTweeter komongu técnica fragmentación preferida pa producir fragmentos uniformes fibrillas α — sinucleína, ya protocolos establecidos gi 'bu̲hu̲ hingi hembi da da 'mui. Tso̲kwa continuación to tingigi mbo 'ra ya protocolos ar fragmentación ejemplares.
 

 
Nt'ot'e semillas ClearTau: Las fibrillas ClearTau se diluyeron a 10 μM en dH2O y se sonicaron a una amplitud del 70 % durante 50 s con 1 s ON 1 s ciclo OFF en tubo utilizando el sonicador UP200St con VialTweeter. Ya semillas da caracterizaron ya microscopía electrónica.
T'e̲ni fluorescencia ThS: Las fibrillas ClearTau se diluyeron a 2,5 μM en dH2O y se sonicaron a una amplitud del 70 % durante 50 s con 1 s ON 1 s ciclo OFF en tubo utilizando UP200St con VialTweeter. Se utilizó el monómero Tau 4R2N de longitud completa de 2,5 μM como control. A la reacción de 100 μl, se añadieron 100 μl de ThS (10 μM), produciendo concentraciones finales de proteína de 1,25 μM. Ar fluorescencia ThS ar Honto 'nar punto ar midió utilizando 96 placas inferiores xi hño transparentes configuradas lector microplacas FLUOstar Omega excitación 445 ar nm ne ar emisión bí 485 ar nm.
(cf. Limorenko et jar el., 2023)
 
Longitud uniforme ar α — sinucleína ir nge ya sonicación: Heterogeneidad longitud ya fibrillas ne ya cintas α — syn ar redujo ir nge ya sonicación Nxoge 20 ya t'olo ora jar hielo jar tubos Eppendorf ar 2 ml jar VialTweeter establecido 75% ar amplitud, pulsos 0,5 s.
(cf. Bousset et jar el., 2013)
 
Ar realizó ar control ya ya monoméricos humanos recombinantes WT wa S129A a — Syn ne ya polimorfos fibrilares da generan, nja'bu̲ komongu ar ar a — Syn 1 — 110. 'Mefa, polimorfos ya fibrilares da fragmentaron ya sonicación Nxoge 20 min jar tubos Eppendorf ar 2 ml jar ultrasonido VialTweeter pa generar partículas fibrilares ko 'nar tamaño promedio 42 — 52 nm ke ya mäs ar za pa ar endocitosis.
(cf. Shrivastava et jar el., 2020)
 

Caracterización ku̲t'a polimorfos fibrilares α — Syn. (A) bí muestran micrografías electrónicas transmisión fibrillas polimorfas fibrilares α — Syn teñidas negativamente, cintas, fibrillas — 91, fibrillas — 65 ne fibrillas — 110 nu'bu̲ (carril mäs xi ngu) ne 'mefa xta fragmentación ko ar VialTweeter (carril inferior). (B) bí gi 'ñudi NTHEGE longitud ya polimorfos fibrilares fragmentados. Ar indica ar 'bede (n) ya ensamblajes fibrilares ya nä'ä mi derivaron ya histogramas.
(estudio ne imágenes: Shrivastava et jar el., 2020)

 
Ya fibrillas α — Syn da fragmentaron ya sonicación Nxoge 20 min jar tubos Eppendorf ar 2 ml ja 'nar VialTweeter pa generar partículas fibrilares ko 'nar tamaño promedio 42 — 52 nm nä'ä mä nä'ä evaluado ya análisis ar TEM.
(cf. Negrini et jar el., 2022)
 
Ya fibrillas resuspendidas91 (jar PBS) bí fragmentaron 'bu̲ 'be̲tho ár adición cultivos celulares ya sonicación Nxoge 20 min jar tubos Eppendorf ar 2 ml utilizando sonicador Vial Tweeter, alícuota, congelado nitrógeno líquido ne almacenado asta ár njapu'befi — 80 °C.
(cf. Vajhøj et al., 2021)
 

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