Fragmentación alfa – sinucleína ir nge ar sonicador VialTweeter

Ya fibrillas ne cintas α – sinucleína ar fragmentan jar ár nthoni científica pa generar fragmentos ar fibrillas mäs t'olo wa 'nehe moléculas proteínas Nthuts'i, da xi analizar ar hingi hembi mäs da utilizando ya 'na'ño técnicas experimentales. VialTweeter Sonicator ge 'na ya ultrasonidos mäs utilizados pa ar fragmentación nt'ot'e xi hño ne ya fiable ar alfa – sinucleína.

α – Sinucleína jar nthoni

Ya fibrillas alfa – sinucleína ya agregados proteínas nä'ä gi 'bu̲hu̲ fuertemente asociados trastornos neurodegenerativos komongu ar enfermedad Parkinson ne ciertas formas demencia, incluida ar demencia cuerpos Lewy. Ár nthoni centrada ya fibrillas alfa – sinucleína pe̲ts'i ngu objetivo t'ode ár he̲'mi progresión ár ne da te posibles intervenciones terapéuticas. Ma jar descomponer ya fibrillas alfa – sinucleína jar fragmentos mäs t'olo, ya investigadores xi hyoni yá características estructurales específicas. Ngu, ar fragmentación fibrillas alfa – sinucleína permite ja ya investigadores hyoni yá interacciones ko ma 'ra ya moléculas, komongu ar proteínas, lípidos wa moléculas t'olo. Ya ar producir fragmentos mäs t'olo, ya sitios mfats'i ne ya afinidad nuya socios interactúan ar xi sondear ar bí mäs efectiva. Ya fribrilas ne cintas mäs t'olo α – Syn 'nehe xi mostrar toxicidad alterada ne efectos bioquímicos. Ir ar crucial 'nar técnica fragmentación fiable ne ya nt'ot'e xi hño, da produzca ya resultados reproducibles ja 'nar nt'ot'e ya muestras rápido ne sencillo.
Fragmentación ultrasónica Alpha – Syn: Sonicador VialTweeter ar ko ya nt'ot'e muestras ya ultrasonidos establecido da sonica ga 10 ar viales simultáneamente jar exactamente da ehese̲ ya nkohi. Ya ajustes programables permiten ar repetición sencilla ne ngut'a ya xkagentho experimentos, nä'ä proporciona resultados altamente fiables ne reproducibles jar fragmentación fibrillas alfa – sinucleína.

Nt'ot'e muestras α – sinucleína ko 'nar sonicador

'Nar enfoque studya ya fibrillas alfa – sinucleína ir bo̲ni ár extracción ne fragmentación ir nge ya técnicas komongu ar sonicación. Ar sonicación ge 'nar proceso gi japu̲'be̲fi ondas ultrasónicas mextha intensidad ne baja frecuencia pa interrumpir ne descomponer ya agregados proteínas, da conduce ar liberación fibrillas mäs t'olo wa moléculas proteínas Nthuts'i. Sonicador VialTweeter ge 'nar dispositivo njapu'befi hne ngatho ja ya nsadi nthoni relacionados ko ar α – sinucleína pa nuna 'mu̲i.

Numerosos nsadi nthoni describen protocolos precisos nt'ot'e muestras ar sonicación fibrillas alfa – sinucleína, pa da utilizan ar VialTweeter Hielscher pa 'nar fragmentación nt'ot'e xi hño ne ya fiable ya fibrillas α – sinucleína. Ar fragmentar ya fibrillas ya ultrasonidos, ya investigadores xi analizar ya productos da t'ot'e 'na ne examinar ár estructura, toxicidad ne interacciones ko ma 'ra ya moléculas. Nuna nthoni proporciona ungumfädi mahyoni dige ya mecanismos subyacen jar neurodegeneración ne, potencialmente, identifica ya 'ra'yo dianas terapéuticas. Ya protocolos ar sonicación α – sinucleína xi hño establecidos da utilizan ar sonicador VialTweeter permiten da resultados fiables ne reproducibles.

Imágenes t'uti hñe̲he̲: fibrillas alfa – sinucleína hindi fragmentadasImágenes inferiores: Fibrillas ar alfa – sinucleína fragmentadas ya ultrasonidos ko ar sonicador VialTweeter(estudio ne imágenes: ©Dieriks et jar el., 2022)

Fragmentación ultrasónica fibrillas α – sinucleína – Protocolos

Dado da numerosos ar investigadores utilizan sonicador VialTweeter komongu técnica fragmentación preferida pa producir fragmentos uniformes fibrillas α – sinucleína, ya protocolos establecidos gi 'bu̲hu̲ hingi hembi da da 'mui. Tso̲kwa continuación to tingigi mbo 'ra ya protocolos ar fragmentación ejemplares.
 

 
Nt'ot'e semillas ClearTau: Las fibrillas de ClearTau se diluyeron a 10 μM en dH2O y se sonicaron al 70 % de amplitud durante 50 s con un ciclo de 1 s ON 1 s OFF en el tubo utilizando el sonicador UP200St con VialTweeter. Ya semillas ar caracterizaron ir nge ya microscopía electrónica.
T'e̲ni fluorescencia ThS: Las fibrillas de ClearTau se diluyeron a 2,5 μM en dH2O y se sonicaron al 70 % de amplitud durante 50 s con un ciclo de 1 s ON 1 s OFF en el tubo utilizando UP200St con VialTweeter. Se utilizó como control un monómero Tau 4R2N de longitud completa de 2,5 μM. A la reacción de 100 μl se añadieron 100 μl de ThS (10 μM), lo que dio lugar a concentraciones finales de proteína de 1,25 μM. Ar fluorescencia ThS ar Honto 'nar punto ya pa ar midió utilizando 96 placas inferiores transparentes instaladas lector microplacas FLUOstar Omega excitación 445 ar nm ne ar emisión bí 485 ar nm.
(cf. Limorenko et jar el., 2023)
 
Longitud uniforme ar α – sinucleína ir nge ya sonicación: Ar heterogeneidad ar longitud ya fibrillas ne ya cintas α – syn ar redujo ir nge ya sonicación Nxoge 20 ya t'olo ora jar hielo jar tubos Eppendorf ar 2 ml jar VialTweeter ajustado ar 75% ar amplitud, pulsos 0,5 s.
(cf. Bousset et jar el., 2013)
 
Bí zits'i da t'ot'e xi hño control ya ar WT monomérica recombinante jä'i wa S129A a – Syn ne ya polimorfos fibrilares da generan, nja'bu̲ komongu ar ar a – Syn 1 – 110. 'Mefa, polimorfos ya fibrilares ar fragmentaron ir nge ya sonicación Nxoge 20 min jar tubos Eppendorf ar 2 mL jar ultrasonido VialTweeter pa generar partículas fibrilares ko 'nar tamaño made 42 – 52 nm ke ya mäs ar za pa ar endocitosis.
(cf. Shrivastava et jar el., 2020)
 

Caracterización ku̲t'a polimorfos fibrilares α – Syn. (A) bí muestran micrografías electrónicas transmisión ar fibrillas, cintas, fibrillas – 91, fibrillas – 65 ne fibrillas – 110 polimorfas α – Syn teñidas negativamente nu'bu̲ (carril mäs xi ngu) ne 'mefa xta fragmentación ko ar VialTweeter (carril inferior). (B) bí gi 'ñudi NTHEGE longitud ya polimorfos fibrilares fragmentados. Ar indica ar 'bede (n) ya conjuntos fibrilares ya nä'ä mi derivaron ya histogramas.(estudio ne imágenes: Shrivastava et jar el., 2020)

 
Ya fibrillas α – Syn da fragmentaron ya sonicación Nxoge 20 min jar tubos Eppendorf ar 2 ml ja 'nar VialTweeter pa generar partículas fibrilares ko 'nar tamaño made 42 – 52 nm, evaluado ir nge ya análisis TEM.
(cf. Negrini et jar el., 2022)
 
Ya fibrillas resuspendidas91 (jar PBS) bí fragmentaron 'bu̲ 'be̲tho ár adición ya cultivos celulares ir nge ya sonicación Nxoge 20 min jar tubos Eppendorf ar 2 mL utilizando sonicador Vial Tweeter, alícuotas, ultracongeladas nitrógeno líquido ne almacenadas asta ár njapu'befi – 80 ̊C.
(cf. Vajhøj et al., 2021)
 

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