Fragmentación alfa – sinucleína ir nge ar sonicador VialTweeter
Ya fibrillas ne cintas α – sinucleína ar fragmentan jar ár nthoni científica pa generar fragmentos ar fibrillas mäs t'olo wa 'nehe moléculas proteínas Nthuts'i, da xi analizar ar hingi hembi mäs da utilizando ya 'na'ño técnicas experimentales. VialTweeter Sonicator ge 'na ya ultrasonidos mäs utilizados pa ar fragmentación nt'ot'e xi hño ne ya fiable ar alfa – sinucleína.
α – Sinucleína jar nthoni
Ya fibrillas alfa – sinucleína ya agregados proteínas nä'ä gi 'bu̲hu̲ fuertemente asociados trastornos neurodegenerativos komongu ar enfermedad Parkinson ne ciertas formas demencia, incluida ar demencia cuerpos Lewy. Ár nthoni centrada ya fibrillas alfa – sinucleína pe̲ts'i ngu objetivo t'ode ár he̲'mi progresión ár ne da te posibles intervenciones terapéuticas. Ma jar descomponer ya fibrillas alfa – sinucleína jar fragmentos mäs t'olo, ya investigadores xi hyoni yá características estructurales específicas. Ngu, ar fragmentación fibrillas alfa – sinucleína permite ja ya investigadores hyoni yá interacciones ko ma 'ra ya moléculas, komongu ar proteínas, lípidos wa moléculas t'olo. Ya ar producir fragmentos mäs t'olo, ya sitios mfats'i ne ya afinidad nuya socios interactúan ar xi sondear ar bí mäs efectiva. Ya fribrilas ne cintas mäs t'olo α – Syn 'nehe xi mostrar toxicidad alterada ne efectos bioquímicos. Ir ar crucial 'nar técnica fragmentación fiable ne ya nt'ot'e xi hño, da produzca ya resultados reproducibles ja 'nar nt'ot'e ya muestras rápido ne sencillo.
Fragmentación ultrasónica Alpha – Syn: Sonicador VialTweeter ar ko ya nt'ot'e muestras ya ultrasonidos establecido da sonica ga 10 ar viales simultáneamente jar exactamente da ehese̲ ya nkohi. Ya ajustes programables permiten ar repetición sencilla ne ngut'a ya xkagentho experimentos, nä'ä proporciona resultados altamente fiables ne reproducibles jar fragmentación fibrillas alfa – sinucleína.

Sonicador VialTweeter pa ar fragmentación ultrasónica simultánea ar múltiples muestras alfa – sinucleína.
Nt'ot'e muestras α – sinucleína ko 'nar sonicador
'Nar enfoque studya ya fibrillas alfa – sinucleína ir bo̲ni ár extracción ne fragmentación ir nge ya técnicas komongu ar sonicación. Ar sonicación ge 'nar proceso gi japu̲'be̲fi ondas ultrasónicas mextha intensidad ne baja frecuencia pa interrumpir ne descomponer ya agregados proteínas, da conduce ar liberación fibrillas mäs t'olo wa moléculas proteínas Nthuts'i. Sonicador VialTweeter ge 'nar dispositivo njapu'befi hne ngatho ja ya nsadi nthoni relacionados ko ar α – sinucleína pa nuna 'mu̲i.
Numerosos nsadi nthoni describen protocolos precisos nt'ot'e muestras ar sonicación fibrillas alfa – sinucleína, pa da utilizan ar VialTweeter Hielscher pa 'nar fragmentación nt'ot'e xi hño ne ya fiable ya fibrillas α – sinucleína. Ar fragmentar ya fibrillas ya ultrasonidos, ya investigadores xi analizar ya productos da t'ot'e 'na ne examinar ár estructura, toxicidad ne interacciones ko ma 'ra ya moléculas. Nuna nthoni proporciona ungumfädi mahyoni dige ya mecanismos subyacen jar neurodegeneración ne, potencialmente, identifica ya 'ra'yo dianas terapéuticas. Ya protocolos ar sonicación α – sinucleína xi hño establecidos da utilizan ar sonicador VialTweeter permiten da resultados fiables ne reproducibles.

Imágenes t'uti hñe̲he̲: fibrillas alfa – sinucleína hindi fragmentadas
Imágenes inferiores: Fibrillas ar alfa – sinucleína fragmentadas ya ultrasonidos ko ar sonicador VialTweeter
(estudio ne imágenes: ©Dieriks et jar el., 2022)
Fragmentación ultrasónica fibrillas α – sinucleína – Protocolos
Dado da numerosos ar investigadores utilizan sonicador VialTweeter komongu técnica fragmentación preferida pa producir fragmentos uniformes fibrillas α – sinucleína, ya protocolos establecidos gi 'bu̲hu̲ hingi hembi da da 'mui. Tso̲kwa continuación to tingigi mbo 'ra ya protocolos ar fragmentación ejemplares.
Nt'ot'e semillas ClearTau: Las fibrillas de ClearTau se diluyeron a 10 μM en dH2O y se sonicaron al 70 % de amplitud durante 50 s con un ciclo de 1 s ON 1 s OFF en el tubo utilizando el sonicador UP200St con VialTweeter. Ya semillas ar caracterizaron ir nge ya microscopía electrónica.
T'e̲ni fluorescencia ThS: Las fibrillas de ClearTau se diluyeron a 2,5 μM en dH2O y se sonicaron al 70 % de amplitud durante 50 s con un ciclo de 1 s ON 1 s OFF en el tubo utilizando UP200St con VialTweeter. Se utilizó como control un monómero Tau 4R2N de longitud completa de 2,5 μM. A la reacción de 100 μl se añadieron 100 μl de ThS (10 μM), lo que dio lugar a concentraciones finales de proteína de 1,25 μM. Ar fluorescencia ThS ar Honto 'nar punto ya pa ar midió utilizando 96 placas inferiores transparentes instaladas lector microplacas FLUOstar Omega excitación 445 ar nm ne ar emisión bí 485 ar nm.
(cf. Limorenko et jar el., 2023)
Longitud uniforme ar α – sinucleína ir nge ya sonicación: Ar heterogeneidad ar longitud ya fibrillas ne ya cintas α – syn ar redujo ir nge ya sonicación Nxoge 20 ya t'olo ora jar hielo jar tubos Eppendorf ar 2 ml jar VialTweeter ajustado ar 75% ar amplitud, pulsos 0,5 s.
(cf. Bousset et jar el., 2013)
Bí zits'i da t'ot'e xi hño control ya ar WT monomérica recombinante jä'i wa S129A a – Syn ne ya polimorfos fibrilares da generan, nja'bu̲ komongu ar ar a – Syn 1 – 110. 'Mefa, polimorfos ya fibrilares ar fragmentaron ir nge ya sonicación Nxoge 20 min jar tubos Eppendorf ar 2 mL jar ultrasonido VialTweeter pa generar partículas fibrilares ko 'nar tamaño made 42 – 52 nm ke ya mäs ar za pa ar endocitosis.
(cf. Shrivastava et jar el., 2020)

Caracterización ku̲t'a polimorfos fibrilares α – Syn. (A) bí muestran micrografías electrónicas transmisión ar fibrillas, cintas, fibrillas – 91, fibrillas – 65 ne fibrillas – 110 polimorfas α – Syn teñidas negativamente nu'bu̲ (carril mäs xi ngu) ne 'mefa xta fragmentación ko ar VialTweeter (carril inferior). (B) bí gi 'ñudi NTHEGE longitud ya polimorfos fibrilares fragmentados. Ar indica ar 'bede (n) ya conjuntos fibrilares ya nä'ä mi derivaron ya histogramas.
(estudio ne imágenes: Shrivastava et jar el., 2020)
Ya fibrillas α – Syn da fragmentaron ya sonicación Nxoge 20 min jar tubos Eppendorf ar 2 ml ja 'nar VialTweeter pa generar partículas fibrilares ko 'nar tamaño made 42 – 52 nm, evaluado ir nge ya análisis TEM.
(cf. Negrini et jar el., 2022)
Ya fibrillas resuspendidas91 (jar PBS) bí fragmentaron 'bu̲ 'be̲tho ár adición ya cultivos celulares ir nge ya sonicación Nxoge 20 min jar tubos Eppendorf ar 2 mL utilizando sonicador Vial Tweeter, alícuotas, ultracongeladas nitrógeno líquido ne almacenadas asta ár njapu'befi – 80 ̊C.
(cf. Vajhøj et al., 2021)
VialTweeter ne sonicadores laboratorio pa fragmentación α – Syn
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Xtí tabla bí xta ar 'nar indicación ya mfeni ya procesamiento aproximada ar HMUNTS'UJE ultrasonidos tamaño laboratorio:
Dispositivos recomendados | Volumen lote | Gasto |
---|---|---|
UIP400MTP | Placas multipocillo yá ar microtitulación | n.d. |
cupHorn ultrasónico | CupHorn pa viales wa ya Baso ar precipitados | n.d. |
GDmini2 | reactor ultrasónico microflujo | n.d. |
VialTweeter | 0.5 1.5mL | n.d. |
UP100H | Ar 1 jar 500 ml | Ar 10 200 ml yá min |
UP200Ht, UP400St | Ar 10 da 2000 ml | Ar 20 400 ml yá min |
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Ar VialTweeter ar usa comúnmente pa fragmentar fibrillas alfa – sinucleína komongu bi thogi ar nt'ot'e muestras preanalíticas
Bibliografía yá Referencias
- Emil Dandanell Agerschou, Marie P. Schützmann, Nikolas Reppert, Michael M. Wördehoff, Hamed Shaykhalishahi, Alexander K. Buell, Wolfgang Hoyer (2021): β-Turn exchanges in the α-synuclein segment 44-TKEG-47 reveal high sequence fidelity requirements of amyloid fibril elongation. Biophysical Chemistry, Volume 269, 2021.
- Bousset, L., Pieri, L., Ruiz-Arlandis, G. et al. (2013): Structural and functional characterization of two alpha-synuclein strains. Nature Communications 4, 2575 (2013).
- Vajhøj, Charlott; Schmid, Benjamin; Alik, Ania; Melki, Ronald; Fog, Karina; Holst, Bjørn; Stummann, Tina (2021): Establishment of a human induced pluripotent stem cell neuronal model for identification of modulators of A53T α-synuclein levels and aggregation. PLOS ONE 16, 2021.
- Dieriks B.V.; Highet B.; Alik A.; Bellande T.; Stevenson T.J.; Low V.; Park T.I.; Correia J.; Schweder P.; Faull R.L.M.; Melki R.; Curtis M.A.; Dragunow M. (2022): Human pericytes degrade diverse α-synuclein aggregates. PLoS One, Nov 18;17(11), 2022.
- Amulya Nidhi Shrivastava, Luc Bousset, Marianne Renner, Virginie Redeker, Jimmy Savistchenko, Antoine Triller, Ronald Melki (2020): Differential Membrane Binding and Seeding of Distinct α-Synuclein Fibrillar Polymorphs. Biophysical Journal, Volume 118, Issue 6, 2020. 1301-1320.
- Negrini M, Tomasello G, Davidsson M, Fenyi A, Adant C, Hauser S, Espa E, Gubinelli F, Manfredsson FP, Melki R, Heuer A. (2022): Sequential or Simultaneous Injection of Preformed Fibrils and AAV Overexpression of Alpha-Synuclein Are Equipotent in Producing Relevant Pathology and Behavioral Deficits. Journal of Parkinsons Disease 12(4), 2022. 1133-1153.
- Limorenko G, Tatli M, Kolla R, Nazarov S, Weil MT, Schöndorf DC, Geist D, Reinhardt P, Ehrnhoefer DE, Stahlberg H, Gasparini L, Lashuel HA (2023): Fully co-factor-free ClearTau platform produces seeding-competent Tau fibrils for reconstructing pathological Tau aggregates. Nature Communications 4;14(1), July 2023.
Ya nt'a̲ni frecuentes
¿Ge ar alfa – sinucleína 'nar amiloide?
Yes, alpha-synuclein can form amyloid-like fibrils. It is a key component of Lewy bodies, the pathological hallmark of Parkinson’s disease and other synucleinopathies. Its aggregation follows a nucleation-dependent polymerization process similar to classical amyloids.
¿Teme ra diferencia entre beta – amiloide ne alfa – sinucleína?
Amyloid-beta (Aβ) and alpha-synuclein (α-syn) are distinct proteins that form pathological aggregates in neurodegenerative diseases. Aβ, derived from the amyloid precursor protein (APP), is primarily associated with Alzheimer’s disease and forms extracellular plaques. In contrast, α-syn is a presynaptic neuronal protein that aggregates intracellularly in Parkinson’s disease and related disorders. While both exhibit β-sheet-rich amyloid structures, they differ in their sequences, aggregation pathways, and disease-specific pathology.
¿Temu̲ ar klase ar proteína ge ar amiloide?
Ar amiloide ge 'nar proteína fibrilar mal plegada adopta 'nar estructura β hojas cruzadas ne agrega jar fibrillas insolubles. Gi proteínas ar derivan típicamente ar precursores normalmente solubles da sufren cambios conformacionales, da conduce ar autoensamblaje ne ar deposición. Ya amiloides ar asocian ko 'na'ño enfermedades neurodegenerativas ne sistémicas, ho ár agregación contribuye ar toxicidad celular ne ár ngi tisular. Descubra Temu̲ ar UIP400MTP sonicador placas 96 pocillos ayuda ma formar rápidamente fibrillas ar amiloide estandarizadas ko ar ngäts'i nthoni.
¿Temu̲ ar enfermedades ya causadas ja ya amiloides?
Ya amiloides gi 'bu̲hu̲ implicados jar numerosas enfermedades, denominadas colectivamente amiloidosis. Entre Nuyu̲ bí 'bu̲i:
- Enfermedades neurodegenerativas: Alzheimer’s disease (Aβ), Parkinson’s disease (α-syn), Huntington’s disease (mutant huntingtin), and prion diseases (PrPSc). (Mäs ungumfädi dige ar detección priones mar hñets'i rendimiento ko PMCA asistida ya sonicación.)
- Amiloidosis sistémicas: Amiloidosis cadenas ligeras (ma ar), amiloidosis ya transtiretina (ATTR) ne amiloidosis secundaria (AA).
- Amiloidosis localizadas: Polipéptido amiloide ja ya islotes (IAPP) ja ar diabetes ar klase 2.
Nu'bu̲ enfermedad asociada ar amiloide bí caracteriza ya ts'o 'nar plegamiento, agregación ne njwati proteínas, da conduce ar disfunción ar celular ne ar toxicidad.

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