हिल्सचर अल्ट्रासाउन्ड टेक्नोलोजी

ऊतक र सेल संस्कृतिबाट अल्ट्रासोनिक प्रोटीन निकासी

  • प्रोटीन निकासी एक प्रोटोपिक्स मा आवश्यक नमूना तयारी चरण हो।
  • प्रोटीनहरू बिरुवा र पशु ऊतक, तरकारी र सूक्ष्मजीवहरूबाट निकालिन्छन्।
  • Sonication एक विश्वसनीय, कुशल प्रोटीन निष्कर्षण विधि हो जुन सानो निष्कर्ष समय भित्र उच्च प्रोटीन उपज दिन्छ।

 

टिश्यू र सेलहरूबाट प्रोटीन निकासी

ऊतक र संस्कृत कोशिकाहरूबाट प्रोटीन निकासी एक आवश्यक नमूना तयारी चरण हो जुन धेरै जीवविज्ञान र विश्लेषणात्मक प्रविधिहरू जस्तै एलिसा, पृष्ठ, पश्चिमी blotting, ठूलो स्पेक्ट्रोमेट्री, वा प्रोटीन शुद्धि। अल्ट्रासोनिक सेल विच्छेद, lysis र निष्कर्षण प्रोटीनको उच्च उत्पादन सुनिश्चित गर्न एक निश्चित नियन्त्रित प्रविधी हो।

पशु ऊतक देखि प्रोटीन निकासी

सम्पूर्ण आकारको ऊतकको तयारीको लागि (जस्तै गुर्दे, हृदय, फेफड़ों, मांसपेशी आदि), ऊतकले सानो उपकरणको साथमा सानो टुक्रामा विच्छेदित हुनु पर्छ, र अधिग्रहणको रूपमा बिस्तारै सम्भवतः प्रोटीजहरु द्वारा गिरावट को लागी (जस्तै RIPA वा हाइपोटोनिक lysis बफर जस्तै प्रोसेज र फास्फेटेस अवरोधक ककटेल जस्ता लिस बफर)। विच्छेदन पछि, नमूना स्न्याप फ्रीज को लागि तरल नाइट्रोजन मा डूब छ। नमूना पछिको प्रयोगको लागि -80 डिग्री सेल्सियस भण्डारण गर्न सकिन्छ वा तत्काल homogenization को लागि बर्फ मा राख्नुहोस्। अल्ट्रासोनिक निष्कर्षणमा तुरुन्तै पहिले आइस सर्दी लिइस बफर (प्रोटेज इन्स्टाप्टर डीटीटी, लेप्पिपिन्सन र एप्रिनिनिन) को नमूना ट्यूब (तीव्रताको प्रति ~ 10 मिलीग्राम अनुमानित हुन्छ। बफरको 600 μL सिफारिस गरिएको छ)। लगभग। प्रति नमूना ट्यूबको 20-60 मिलीग्राम ऊतक सिफारिस गरिएको छ।
अल्ट्रासोनिक homogenization, एक अल्ट्रासोनिक homogenizer जस्तै lysis र निष्कर्षण जस्तै Uf200 ः टी वा UP200St, एक माइक्रो टिप सोनाट्रोड संग लैस। Sonication अवधि 60- 9 0 सेकेन्ड हो। 15 सेकेण्डको अल्ट्रासोनिक चक्र मोडमा। सनराइज र 10 सेकेन्ड। विश्राम समय। नमूना सबै समय बर्फमा राख्नुपर्छ।
अल्ट्रासोनिक homogenization / निष्कर्षण पछि, lysate लगभग 27,000g मा approrif। 20 मिनेट। पछि अन्वेषक को एकत्रित गरिन्छ, ताकि प्रोटीन एकाग्रता प्रोटीन परख जस्तै पियर्स प्रोटीन परस्पर बीसीए द्वारा निर्धारित हुन सक्छ।

प्रोटीन Sonication नमूना तयारी को एक महत्वपूर्ण तरीका हो

को साथ सेलबाट अल्ट्रासोनिक प्रोटीन निकासी UP200St

सूचना अनुरोध




हाम्रो नोट गर्नुहोस् गोपनीयता नीति


रगत सीरमबाट प्रोटीन निकासी

सीरम र फास्फेट बफर को एक समृद्ध मिश्रण को लागि, नमूना अल्ट्रासोनिक सेल lysis को पहिले पहिले vortexed छ। अल्ट्रासोनिक lysis को लागि, नमूना अल्ट्रासोनिक ल्याब होमगेनजर संग sonicated छ जस्तै UP100H 8 चक्रको लागि 20% आयाममा, प्रत्येक 5 सेकेन्डको चक्र र 15 सेकेण्ड अफको लागि। सोनटनले चाउचाउण्डमा सोनिक्सगगद्वारा र बर्फमा नमूना राखेर सोचेका छन् ताकि नमूनाको ओभरहेटिङ र थर्मल गिरावटबाट टाढा छ। किनकी सीरमले ठूलो मात्रामा उच्च आणविक भार प्रोटीनहरू (जस्तै एल्बमिन, α1-एटीमिडियापिनिन, ट्रांसिनिन, हेप्लगोग्लोबिनिन, इम्युनोग्लोब्लिन जी र इम्युनोग्लोब्लिन ए) समावेश गर्दछ जुन आईईईएफको दौरामा कम आणविक वजन प्रोटीनको विभाजनमा हस्तक्षेप गर्दछ। एक पूर्ण स्तम्भ प्रयोग गरेर सीरम बाट।

बिरुवाको ऊतकबाट प्रोटीन निकासी

ताजा, नरम बिरुवाको ऊतक, जस्तै मिस आदि, सजिलै संग कटा नमूना सामाग्री लाई राख्ने को लागी लोसिस बफर मा सजिलै संग बाधित हुन सक्छ। बिरुवाहरू, बीउ, भाँडा सुत्ने आदि जस्ता ठुलो, ठूलो पौष्टिक ऊतकहरू, जमीनलाई सुखार्नुपर्छ। केहि कठोर, काठको बिरुवाको सामग्री सोनिक नाइट्रोजन भन्दा पहिले तरल नाइट्रोजनमा जमेको र जमीन हुनुपर्छ। पौडी सेल संस्कृति निलम्बनका लागी, लिस बफरमा 30 देखि 150 सेकेन्डको बीच एक अल्ट्रासोनिक उपचार धेरैजसो पर्याप्त छ। कडा पदार्थ जस्तै कद्दीको बीउले तलका वर्णित अधिक तीव्र ध्वनिकरणको आवश्यकता छ।

कद्दीको बीउबाट एल्बमिनको अल्ट्रासोनिक निकासीको लागि प्रोटोकॉल

अल्ट्रासोनिक ऊतक homogenizer UP400St S24d40 संग - बिरुवा र पशु ऊतक देखि प्रोटीन निकासी को लागि (विस्तार गर्न को लागि क्लिक गर्नुहोस!)अल्प-कद्दू बीउ पाउडरबाट अलिकतिसोनिक प्रोटीन निकासीको लागि, डिटेप्टेड कद्दी बीउ पाउडरको 10 ग्राम र डीयनियन पानीको 100 मिलीलीटर जस्तै विलायक 250 एमएल ग्लास बीकरमा जोडिएको छ। प्रोटीन निकासी दुई चरणहरुमा हुन्छन्: पहिले, नमूना एक प्रकार को अल्ट्रासोनिकरेटर संग sonicated छ UP400St (400W, 24kHz) संग माउन्ट सोयोट्रोड S24d7। अल्ट्रासोनिक homogenization को समयमा गिलास बीकर एक ठंडा पानी को स्नान मा राखयो। अल्ट्रासोनिकरेटरको सेटिङ UP400St प्लगइन तापमान सेन्सरसँग यो सुनिश्चित भएको छ कि नमूना तापमान सधैँ 30 डिग्री सेल्सियस तल राखिएको छ। Sonication को समयमा सटीक तापमान नियन्त्रण द्वारा, एल्बमिन को डेनरेर्मरबाट बचाइएको छ। दोस्रो, निष्कर्षण 200 rpm गति र 30 डिग्री सेल्सियस मा एक मिक्सर संग गरियो। त्यसपछि बेकरले थर्मोस्टेटिक शिकारीलाई हस्तान्तरण गर्यो। गिलाबिन डिलिजन को माध्यम ले आसुत पानी संग हटाइयो। विश्वब्यापी हटाउन पछि, प्रोटीन निकाल्दा एल्बमिन प्रोफाईलको निर्धारणका लागि नमूना गर्न सकिन्छ र त्यसपछि पछि एल्बम आईओग्युलेशनको लागि 0.1 एम एचसीएलको प्रयोग गरेर pI = 3.0 लाई समायोजित गरिएको छ। ठोस चरण 5000 सेन्टर, 20 डिग्री सेल्सियस र खनिज पानीमा पुनरुत्थान केन्द्रित जलविद्युतद्वारा अलग गरिएको छ। एल्बमिन ध्यानमा प्रोटीन अनुपात बढाउन दुई पटक प्रदर्शन गरिएको एल्बमिन कोग्युसन।

चावलको चोकबाट प्रोटीन को ध्यान को लागि अल्ट्रासोनिक अल्ल्किन प्रोटीन निकासी देखि थाहा हुन्छ कि अल्ट्रासोनिक उपचार परिणाम एकदम कम निष्कर्षण समय मा उच्च प्रोटीन उपज मा परिणाम – पारंपरिक निष्कर्षण विधिहरु को तुलना मा।

अल्ट्रासोनिक उपकरण ऊतकबाट प्रोटीन निकासीको लागि VialTweeter (विस्तार गर्न क्लिक गर्नुहोस्!)

VialTweeter अप्रत्यक्ष सोनिकेशनको लागि।

फाइदा

  • छिटो
  • उच्च उपज
  • अति कुशल
  • परिमितिहरूमा सटीक नियन्त्रण
  • reproducible परिणामहरू
  • linear scalability

कार्यात्मक आईएनओएस एंजाइमको लागि नमूना तयारी प्रोटोकॉल

पूर्ण कार्यात्मक आईएनओएस एंजाइम (उदाहरणका लागि दबाइ स्क्रीनिंगको लागि), निम्न प्रोटोकॉल सिफारिस गरिएको छ: सेल निलम्बन बर्फ र सोनीमा राखिएको हुनुपर्छ। UP100H 5 सेकेण्डको चक्र मोडमा 10μm आयाममा। सनराइज र 25 सेकेन्ड। बर्फमा बाक्लो यो प्रक्रिया लगभग दोहोर्याइनु पर्छ। 3 पटक। Sonication चक्र को बीच मा आराम समय तापमान वृद्धि को कम गर्दछ र यसैले denaturation को जोखिम को कम गर्नेछ।

अल्ट्रासोनिक प्रोटीन Solubilization

Sonication प्रोटीन घुलनशील प्रक्रिया को तेज गर्न सक्छ, जसलाई सामान्यतया धेरै घण्टा चाहिन्छ। आदेशमा नमूना हटाउन र प्रोटोन विकृति र संशोधन रोक्न यूरिया सहित समाधानमा रोक्न, अल्ट्रासोनिक फटस्टहरू केही सेकेन्ड भन्दा लामो हुदैन।

सामान्य निर्देशनहरू

तापमान नियन्त्रण: तापनि डेनरेसन बिना उच्च प्रोटीन उपज सुनिश्चित गर्न, निकासीको समयमा तापमान नियन्त्रणमा राख्नु पर्छ। हेलसिचको आन्तरिक अल्ट्रासोनिक homogenizers – पनि अल्ट्रासोनिक विनाशक वा श्वेतवादी भनिन्छ – सटीक रूपमा नियन्त्रित छन्। तिनीहरू एक प्लगइन तापमान सेन्सरसँग आउँछन्। अल्ट्रासोनिक homogenizer को सेटिङ विकल्पमा, अधिकतम तापमान सेट गर्न सकिन्छ। जब यो तापमान अधिकतम पुग्यो, अल्ट्रासोनिकरेटर स्वचालित रूपमा बन्द हुन्छ जब सम्म नमूना ठुलो छ।
बफर: उपयुक्त बफरको चुरोट र बफरको दायाँ भोल्युम ऊतक देखि ऊतक देखि भिन्न हुन्छ र परीक्षण-र-त्रुटि परीक्षणको लागी लगाइन्छ।
अलगाव / शुद्धीकरण: प्रोटीन lysates डीएनए वा कार्बोहाइड्रेट, जो बायोमाइकल्युलेज को एक अतिरिक्त हुन सक्छ, जो प्रोटीन वर्षा (डाइओक्सचिचेट-ट्रिच्लोरोएक्टेटिक एसिड) वा बफर विनिमय द्वारा हटाई जान सक्छ।

Chittapalo र Noomhorm (200 9) ले भन्यो कि प्रोटीन उपज सोनिकेशन को उपयोग मा बढयो र अल्ट्रासोनिक ऊतक homogenization र lysis प्रक्रिया को मौजूदा निष्कर्षण प्रक्रियाहरु लाई बढावा दिन सक्छ – नयाँ व्यापार निकासी अवसरों को लागी सक्षम।

हेलसेस्टरको ध्वनि बाडेको साथ आवाज सुरक्षा SPB-L र अल्ट्रासोनिक उपकरण UP200St। (विस्तार गर्न क्लिक गर्नुहोस्!)

अल्ट्रासोनिक ऊतक homogenizer UP200St कुशल प्रोटीन निकासी को लागि

अल्ट्रासोनिक उपचारको सटीक नियन्त्रण (विस्तार गर्न क्लिक गर्नुहोस्!)

सटीक अपरेशनको लागि ब्राउजर नियन्त्रण र sonication प्रक्रिया को निगरानी

प्रोटीन निष्कर्षण को लागि अल्ट्रासोनिक उपकरण

हेलसेस्टर अल्ट्रासोनिक्स को कोशिकाओं, ऊतकों, जीवाणुओं, सूक्ष्मजीवविज्ञान, खमीर और स्पेस के विघटन के लिए अल्ट्रासोनिक homogenizers की एक विस्तृत श्रृंखला प्रदान करते हैं।
Hielscher प्रयोगशाला अल्ट्रासोनिक्स शक्तिशाली र संचालित गर्न सजिलो छन्। 24/7 अपरेसनको लागि बनाइयो, तिनीहरू ठोस र कुशल प्रयोगशाला र बेंच-शीर्ष यन्त्रहरूको रूपमा डिजाइन गरिएका छन्। सबै उपकरणहरूको लागि, ऊर्जा आउटपुट र आयाम निश्चित रूपमा नियन्त्रण गर्न सकिन्छ। विस्तृत दायरा सामान थप सेट अप विकल्पहरू खोल्नुहोस्। डिजिटल यन्त्रहरू जस्तै VialTweeter, Uf200 ः टी, UP200St, र UP400St स्वचालित डेटा रेकर्डिङको लागि एक एकीकृत तापमान नियन्त्रण र निर्मित निर्मित एसडी कार्ड छ।
अप्रत्यक्षको लागि, क्रस-प्रदूषण-रहित र बहुविध नमूनाहरूको साथमा सोकेसनका लागि हामी प्रस्ताव गर्छौँ VialTweeter वा अल्ट्रासोनिक कपहर्न
तपाईंको अनुप्रयोग, सामग्री, र नमूना भोल्युमको आधारमा, हामी तपाईंलाई तपाईंको नमूना प्रर्दशनको लागि सबैभन्दा उपयुक्त सेटअप सिफारिस गर्नेछौं। आज हामीलाई सम्पर्क गर्नुहोस्!

हामीलाई सम्पर्क गर्नुहोस! / हामीलाई सोध्नुहोस्!

यदि तपाई अल्ट्रासोनिक समोजनको बारे थप जानकारी अनुरोध गर्न चाहनुहुन्छ भने कृपया तल फारम प्रयोग गर्नुहोस्। हामी तपाईंलाई एक अल्ट्रासोनिक प्रणाली प्रस्ताव गर्न खुसी हुनुहुनेछ।









कृपया ध्यान दिनुहोस् गोपनीयता नीति


साहित्य / सन्दर्भ

  • Chittapalo टी, Noomhorm ए (200 9): प्रोटीन को अल्ट्रासोनिक संग समर्थित प्रोटीन को चावल को चारा र प्रोटीन को गुण मा केंद्रित छ। इंट जे फूड साइई टेक्नोलॉजी 44: 1843-184 9।
  • Simões, André ES:; पेरिएरा, डिएन एम .; अमरल, जोआना डी .; नुन, एना एफ .; गोम्स, सोफिया ई .; Rodrigues, Pedro एम .; लो, एड्रियन सी .; डी ह्यूज, रुडी; स्टीयर, क्लिफर्ड जे .; थिबोयोउ, स्टीफन एन .; Borralho, Pedro M .; Rodrigues, Cecilia MP (2013): धेरै स्रोत नमूने देखि प्रोटीन को कुशल रिकवरी पछि trizol या trizol एल एस आरएनए निष्कर्षण र दीर्घकालिक भण्डारण। बीएमसी जेनोमिक्स 2013, 14: 18 1।


तथ्यहरू थाह छ

प्राटोमिक्स

प्रोटोनोम रिसर्च फिल्ड हो जसले प्रोटीन र प्रोटोमको जाँच गर्दछ। प्रोटीन जीव विज्ञान को भित्र एक महत्वपूर्ण सरणी को महत्वपूर्ण कार्य पूरा गर्छन। प्रोटोमोन एक निश्चित समय मा एक जीनोम, सेल, ऊतक, या जीव द्वारा व्यक्त प्रोटीन को पूरा सेट हो। प्रोमोम समय र फरक आवश्यकताहरु, वा तनाव संग भिन्न हुन्छ, जुन सेल वा जीवविहीन हुन्छ। विशेष गरी, यो एक दिए प्रकारको सेल या जीवमा व्यक्त प्रोटीनहरूको सेट, दिइएको समयमा, परिभाषित अवस्थामा। शब्द प्रोटीन र जीनोमको मिश्रण हो। प्राटोमिक्स प्रोमोमको अध्ययन हो।

प्रोटिन

प्रोटीनहरू ठूलो बायोमाइकुलुलिकहरू हुन्, जसमा तथाकथित म्याक्रोकोल्युलहरू – जुन अमीनो एसिड अवशिष्टहरु मध्ये एक या अधिक लामो श्रृंखलाहरु देखि बनाइन्छ। प्रोटीन दुवै वनस्पति र जनावर मूलको सबै जीवमा उपस्थित छन् र तिनीहरू जैविक कार्यहरु को अधिकांश लागि महत्त्वपूर्ण छन्। किनकि प्रोटीनहरूले धेरै जीवविज्ञानको जानकारी समावेश गर्दछ, तिनीहरू विश्लेषणात्मक उद्देश्यका लागि निकालेका छन्, उदाहरणका लागि प्रोटोमिक अनुसन्धानका लागि। प्रोटीन द्वारा प्रदर्शन गरिएको सबै भन्दा महत्वपूर्ण प्रकार्यले चयापचय प्रतिक्रियाहरु को उत्प्रेरक, डीएनए प्रतिकृति, उत्तेजना को प्रतिक्रिया, र एक स्थान देखि एक अणु को परिवहन। प्रोटीनहरू मुख्यतः अम्नो एसिडको क्रममा एकअर्काबाट अलग हुन्छ, जुन तिनीहरूको जीनको न्यूक्लिओइडिस अनुक्रम द्वारा गरिन्छ, र जसमा सामान्यतया प्रोटीनले विशेष तीन-आयामी संरचनामा यसको गतिविधि निर्धारण गर्दछ। प्रोटीन हो – पेप्टाइड्सको अलावा – खानाको प्रमुख घटक मध्ये एक। यसैले, प्रोटोमिक्स खाद्य विज्ञान मा एक शक्तिशाली उपकरण प्रक्रियाहरु, खाद्य सुरक्षा र पोषण मूल्यांकन को अनुकूलन गर्न को लागी हो।

जेल इलेक्ट्रोफोरिस

जेल इलेक्ट्रोफोरिसको आकार र चार्जमा आधारित डीएनए, आरएनए र प्रोटीनहरू साथै तिनीहरूका टुक्राहरूको रूपमा विभाजन र विश्लेषणका लागि मुख्य विधि हो। यो क्लिनिकल रसायन विज्ञानमा प्रविधि र / वा साइज (आईईएफ एररोस, अनिवार्य रूपमा आकार आकार) द्वारा अलग प्रोटीनमा प्रयोग गरिन्छ र जैव रसायन मा आणविक जीवविज्ञान र प्रोटोमाटिक्स डीएनए र आरएनए टुकडाहरूको मिश्रित जनसंख्या अलग गर्न को लागी, डीएनए को आकार अनुमान गर्न र आरएनए टुक्राहरू वा प्रोटिनहरू चार्ज गरेर अलग गर्न।

सेल संस्कृतिहरू

कक्ष संस्कृति नियन्त्रण गरिएको प्रक्रिया हो जसको द्वारा कक्षहरू नियन्त्रण गरिएका परिस्थितियोंमा खेती गरिन्छ। सेल संस्कृति सर्तहरू प्रत्येक सेल प्रकारको लागि भिन्न हुन्छन्। सामान्यतया, सेल संस्कृतिको वातावरणले उपयुक्त पोत (जस्तै पेट्री डिश) समावेश गर्दछ जुन सब्सट्रेट वा माध्यम संग आवश्यक पोषक तत्वहरू (अमीनो एसिड, कार्बोहाइड्रेट, भिटामिन, खनिज), वृद्धि कारकहरू, हार्मोन र ग्यासहरू (CO2, O2), र भौतिक - रासायनिक वातावरण (पीएच बफर, ओमोटिक दबाव, तापमान) को विनियमित गर्दछ। अधिकांश कक्षहरू सतह वा कृत्रिम सब्सट्रेट चाहिन्छ, जबकि अन्य सेल संस्कृतिहरू संस्कृति माध्यम (निलम्बन संस्कृति, सेल निलम्बन) मा निःशुल्क फ्लोटिंग खेती गर्न सकिन्छ।
पशु सेल लाइनहरु को मास संस्कृतिहरु वायरल टीकाहरु र अन्य जैव प्रौद्योगिकी को व्युत्पन्न उत्पादनहरु को औद्योगिक उत्पादन मा प्रयोग गरिन्छ। मानव स्टेम सेलहरू कोशिकाहरूको संख्या विस्तार गर्न र कोशिकाहरू अलग-अलग कक्ष प्रकारहरूमा प्रत्यारोपण प्रयोजनका लागि अलग गर्न सङ्कलन गरिएका छन्।

ऊतक नमूनाहरू

ऊतक शब्द सेलुलर मध्यवर्ती वर्णन गर्दछ, जहाँ सेल सामग्री कोशिका र पूर्ण अंग को बीच संगठनात्मक स्तर मा छ। ऊतकमा, समान कक्षहरू, एउटै मूलबाट, सँगै एक विशेष प्रकार्य लिन्छ, इकट्ठा गरिन्छ। एकाधिक ऊतकों को कार्यात्मक समूह द्वारा, अंगहरु को जटिल संरचनाहरु को गठन गरिन्छ।
जीव विज्ञान, हिस्टोलोजी / हिस्टोपैथोलोजी, परजीवीविज्ञान, जैव रसायन, इम्युनोहोस्टियोम्याटिकल मा अनुसन्धान को लागि ऊतक खेती र डीएनए निकालन को लागि ऊतक को नमूना छ। यो जानवर (उप-विभाजन: स्तनपान ऊतक) र बिरुवाको ऊतक बीचको भिन्नता हुन सक्छ। पशु ऊतकहरू चार आधारभूत प्रकारको कनेक्टिविटी, मांसपेशी, तंत्रिका र एपिटलियल ऊतकमा समूहबद्ध हुन्छन्। प्लांट ऊतक निम्न तीन ऊतक प्रणालीहरुमा विभाजित छ: एपिडर्मिस, ग्राउन्ड ऊतक, र वासुलर ऊतक।
ऊतक नमूने जनावर वा बिरुवाको भागबाट तयार हुन सक्छ, उदाहरणका लागि हड्डी, मांसपेशी, पत्तियां, आदि।

शरीरको द्रव

रक्त, सीरम, प्लाज्मा, सेरिब्रोपिनल द्रव, लारा र सिओवाइलियल द्रव शरीर तरल पदार्थ हुन्, जसले निदान सम्बन्धी जानकारीको एक महान स्रोत प्रदान गर्दछ। यसैले, विश्लेषण को लागि शरीर तरल पदार्थ नमूने को एक परिष्कृत तैयारी महत्वपूर्ण छ। पहिलो कठिनाई शरीर तरल पदार्थहरू अवस्थित घटकको व्यापक गतिशील दायरासँग सम्बन्धित छ।

प्रोटीन एकाग्रता निर्धारण

ब्रैडफोर्ड ग्यारेन्टी, लोअर्री एस्ले र बिकिन्चोनिनिक एसिड (बीसीए) परामर्श प्रोटीन को एकाग्रता को निर्धारण गर्न को लागि आम गहिरो हो। बोभिन सीरम एल्बमिन (बीएसए) सबैभन्दा धेरै प्रयोग गरिएको प्रोटीन मानक हो।

Lysis Buffer

सेल सामाग्री वा ऊतक (ऊतक संस्कृति, बिरुवा, जीवाणु, कवक, आदि) को अनुसार लेस बफर को छनौट हुनु पर्छ, र क्या कोशिकाओं संरचना मा हो र संरचना को प्रकार हो। प्रोटीन, झिल्ली र आयोजन निकासी को लागि एक विस्तृत श्रृंखला को बफर एक या एक डिटर्जेंट संग तैयार गरिन्छ। डिटर्जेंट सामान्यतया परीक्षण-र-त्रुटि परीक्षण वा मार्फत चयन गरिन्छ – यदि उपलब्ध छ – अवस्थित प्रोटीन निकासी प्रोटोकलको अनुसार। डिटर्जेंट ऊतक स्रोत र प्रोटीनसँग मिल्दो हुनुपर्छ। सामान्यतया, हल्का डिटर्जेंट जसले विशिष्ट ऊतक / प्रोटीनको लागि काम गर्दछ, निकाल्नुको अधिकतम कार्यक्षमता कोयम राख्न को लागी रोजिएको छ। यसबाहेक, झिल्ली र आयल निकासी को मामला मा, एक हल्का डिटर्जेंट झिल्ली बरकरार राख्छ। सामान्यतया प्रयोग डिटर्जेंटहरू lysis buffers मा प्रायः नैनोनिक वा ज्वेरेरियन हुन्, उदाहरणका लागि CHAPS, डाइओक्स्यालिलेट, ट्राइटन ™ एक्स -100, एनपी 40 र बीचको 20।
उदाहरणका लागि, मस्तिष्क, लिभर, इन्टिस्टिन, गुर्दे, धुरी आदि जस्ता ऊतकहरू सजिलैसँग RIPA सँग बफर गर्न सकिन्छ। – तर प्रोटेज अवरोध र डीटीटी (उदाहरणका लागि जेल इलेक्ट्रोफोरिसका लागि) समावेश गर्नुपर्छ।
कंकाल मांसपेशी ऊतक (बर्फ ठंडा) को लागि लिस बफर: 20 मिमी ट्रिस (पीएच 7.8), 137 मिमी एनएलसी, 2.7 एमएम केएलसी, 1 मिलीग्राम MgCl2, 1% टाइटन X-100, 10% (w / v) ग्लिसरसो, 1 एमएम EDTA , 1 एमएम dithiothreitol प्रोटेज र फास्फेटase अवरोधक ककटेल संग पूरक
साधारण बफर र तिनीहरूको पीएच दायरा तालिका। सामान्यतया, यी बफरहरू सामान्यतया 20-50 एमएमको सावधानीमा प्रयोग गरिन्छ।

बफर पीएच दायरा
सिट्रिक एसिड – NaOH 2.2 – 6.5
सोडियम सिटरेट – सिट्रिक एसिड 3.0 – 6.2
सोडियम एसीटेट – एसिटिक एसिड 3.6 – 5.6
कोकोडील एसिड सोडियम नमक – HCl 5.0 – 7.4
MES – NaOH 5.6 – 6.8
सोडियम डायहाइड्रोजन फास्फेट – अपोडियम हाइड्रोजन फास्फेट 5.8 – 8.0
इमिदिजोल – HCl 6.2 – 7.8
MOPS – KOH 6.6 – 7.8
त्रिथानोलामिन हाइड्रोक्लोराइड – NaOH 6.8 – 8.8
Tris – HCl 7.0 – 9.0
HEPES – NaOH 7.2 – 8.2
Tricine – NaOH 7.6 – 8.6
सोडियम tetraborate – बोरिक एसिड 7.6 – 9.2
Bicine – NaOH 7.7 – 8.9
Glycine – NaOH 8.6 – 10.6

अधिक बफरहरूले तापमानसँग पीएच-निर्भरता देखाउँछन्। यो Tris बफरहरूको लागि विशेष गरी साँचो हो। पीकेए 8.06 बाट 25 डिग्री सेल्सियस देखि 8.85 सम्म 0 डिग्री सेल्सियस सम्म परिवर्तन हुन्छ।
(पीएच र पीएए को एक बफर: पीएचएड हाइड्रोजन आयनों को एक जलीय समाधान मा एकाग्रता को उपाय गर्दछ। पीके (= एसिड अपजोरी निरंतर) एक सम्बन्धित छ, तर अधिक विशिष्ट उपाय हो, यस मा यसले एक अणु मा एक अणु कसरी कार्य गर्नेछ भविष्यवाणी गर्न मा मदद गर्दछ पीएच मूल्य।)

TRIzol

TRIzol एक रासायनिक समाधान हो जुन guanidinium thiocyanate-phenol-chlororo निष्कर्षण समयमा आरएनए / डीएनए / प्रोटीन निकाल्न प्रयोग गरिन्छ। अल्ट्रासोनिक रूप देखि सहायता वाला TRIzol निष्कर्षण को परिणाम को एक नै नमूना देखि उच्च डीएनए, आरएनए, र प्रोटीन को उत्पादन मा उपयोग गर्दछ र यसैले अन्य निष्कर्षण विधिहरु लाई उत्तेजित गर्दछ।