हिल्सचर अल्ट्रासाउन्ड टेक्नोलोजी

सी। एल्गन्स नमूनाहरूको अल्ट्रासोनिक तयारी

सी। एलिगन्स, नेमाटोड गँड्यौला, जीवविज्ञानमा व्यापक प्रयोग हुने मोडल जीव हो। नमूना तयारी विश्लेषण अघि lिसिन, प्रोटीन र लिपिड निकासी साथै आरएनए विखंडन आवश्यक छ, जुन विश्वसनीयताका साथ Sonication मार्फत गर्न सकिन्छ। अल्ट्रासोनिक सेल अवरोधकर्ताहरू सी, एलिगन्स नमूनाहरूको द्रुत तयारीको लागि भरपर्दो, परिष्कृत र सजिलै प्रयोग गर्न सक्ने उपकरणहरू छन्।

सी। एल्गन्स नमूनाहरूको अल्ट्रासोनिक तयारी

सी। एलिगन्स राउन्डवार्महरू हुन्, जुन जीनोमिक्स, विकासात्मक जीवविज्ञान, र रोगहरूको अनुसन्धान गर्न अनुसन्धान प्रयोगशालाहरूमा व्यापक रूपमा प्रयोग गरिन्छ। एलिगन्सको जीनोममा धेरै जीनको मानवमा कार्यकारी समकक्षहरू हुन्छन्। यसैले, नेमाटोड गँड्यौला मानव रोगहरूको लागि अत्यन्त उपयोगी मोडेल हो। सी। एलिगन्सको फराकिलो प्रयोगका अन्य फाइदाहरू भनेको ब्याक्टेरिया (जस्तै, इ। कोलाई) भएको प्लेटहरूमा यसको सजिलो र सस्तो खेती हो, यसको पारदर्शिता, सुविधाजनक ह्यान्डलिंग, साथै गँड्यौलाहरू स्थिर गर्न र लामो अवधिसम्म भण्डारन गर्ने सम्भावना।
प्रोटीन र लिपिड विश्लेषण प्रयोगशालामा नियमित प्रक्रियाहरू हुन् र अल्ट्रासोनिक नमूना तयारी प्रत्येक विकास चरणमा सी एलिगन्स नेमाटोडहरूको स्थापना विधि हो (जसमा भ्रुण, लार्भा L1-L4, वयस्कहरू)। सी। एलिगन्स पनि प्रोटीन अभिव्यक्ति प्रणाली को रूप मा अधिक अभिव्यक्त लक्षित प्रोटीन को रूप मा प्रयोग भएको छ, एक विश्वसनीय, प्रजनन lysis र प्रोटीन निकासी विधि, जो उच्च प्रोटीन उत्पादन दिन्छ, आवश्यक छ। अल्ट्रासोनिक सेल अवरोध र निकासी प्रणाली प्रोब-प्रकार homogenizer को रूप मा र बहु-नमूना अल्ट्रासोनिकेटरहरूको रूपमा उपलब्ध छन्। सुविधाजनक नमूना तयारी र सबै प्रकारका नमूना आकार संख्याहरू पूरा गर्ने, हिल्सचर अल्ट्रासोनिक्ससँग तपाईंको प्रयोगशाला प्रक्रियाको लागि आदर्श अल्ट्रासोनिक सेल बिघटनकर्ता छ।
C. elegans is a widely used model organism in biological research. Ultrasonic lysis is a sophisticated, reliable, reproducible and rapid technique to prepare high-quality protein extracts from C. elegans.

अल्ट्रासोनिक सी

  • गँड्यौला homogenates को तयारी
  • प्रोटीन निष्कर्षण
  • लिपिड निकासी
  • प्रोटीन परिमाण
  • इम्यूनोप्रिसिपिटेशन
  • पश्चिमी blotting
  • आरएनए निकासी
  • एन्जाइमेटिक Assays
Sonotrode MTP-24-8-96 मा माइक्रोटिटर प्लेटको इनोकेसनको Sonication लागि आठ अल्ट्रासोनिक प्रोबहरू छन्।

Sonotrode MTP-24-8-96 मा माइक्रोटिटर प्लेटको इनोकेसनको Sonication लागि आठ अल्ट्रासोनिक प्रोबहरू छन्।

सूचना अनुरोध




हाम्रो नोट गर्नुहोस् गोपनीयता नीति


सी। एल्गन्स विघटन र विश्लेषणको लागि अल्ट्रासोनिक प्रोटोकोलहरू

अल्ट्रासोनिक होमोजीनाइजेसन र सी। एलिगन्सको लिसनस र त्यसपछिको प्रोटीन र लिपिड निकाल्ने प्रक्रिया फरक फरक प्रक्रिया प्रयोग गरेर गर्न सकिन्छ जुन विभिन्न होमोजिनाइजेसन र लीसिस बफरहरू आदि प्रयोग गर्दछ। सबै लीसिस प्रोटोकलमा सामान्य कुरा छ कि नमूनाहरू निरन्तर राख्नुपर्दछ प्रोटीनको गिरावट रोक्न। तल, हामी तपाइँलाई केहि भरपर्दो र द्रुत अल्ट्रासोनिक लीसीस र एक्स्ट्र्यासन प्रोटोकल प्रस्तुत गर्छन उच्च-गुणवत्ताको प्रोटीन वा लिपिड युक्त सी एलिगन्स नमूनाहरूको तयारीको लागि।

अल्ट्रासोनिक सी को लाभ एलिगन्स Lysis

  • विश्वसनीय
  • reproducible
  • सटीकरूपमा नियन्त्रण-नियन्त्रण
  • विश्वसनीय प्रक्रिया नियन्त्रण
  • कोमल विधि
  • लागू गर्न सजिलो
  • सुरक्षित

सी। एलिगन्स नमूनाहरूबाट अल्ट्रासोनिक प्रोटीन निकासी

अल्ट्रासोनिक लीसीस र सी। एलिगन्स वर्म्सको प्रोटीन निकासी विभिन्न प्रोटोकल प्रयोग गरेर गर्न सकिन्छ। हामी तल तपाईलाई केहि भरपर्दो र द्रुत लिनस प्रोटोकल प्रस्तुत गर्न सक्छौं।

सीनबाट साइटोसोलिक एक्स्ट्र्याक्टको द्रुत तयारी तयारी एलिगन्स वर्म्स सोनिकेशन द्वारा

निम्न प्रोटोकलको साथ तपाईं सी। एलिगन्स lysates 30० मिनेट भन्दा कममा तयार गर्न सक्नुहुन्छ।
सी। एलिगन्सको संग्रह
इच्छित सी एलिगन्स गँड्यौलाहरू १.ml मिलीलीटर ट्यूब फास्फेट बफेर्ड सलाईन (पीबीएस) मा लिनुहोस् वा १.ml एमएल पीबीएस भएको प्लेटबाट धुनुहोस्। १ मिनेटको लागि २००० बजेको गोलामा सेन्टिफ्यूज। नमूनाहरू सबै समयमा बरफमा राख्नुहोस्।
त्यसो भए, गँड्यौलाहरू दुई पटक PBS सँगै धुनुहोस्।
पछि, गँड्यौलाहरू दुई पटक DDH मा धुनुहोस्2O.
होमोजीनाइजेसन बफर (HB) को कम्तिमा ul००ul मा गँड्यौलाहरू पुन: भेट्नुहोस्। गँड्यौलाका नमूनाहरू अब अल्ट्रासोनिक लीसिसका लागि तयार छन्।
उच्च प्रोटीन निकासी गुणस्तरको लागि, तपाईले गँड्यौलाहरू धुने को लागी PBS र बाँझ, अल्ट्रा-शुद्ध पानी (डीडीएच) मा प्रत्येक min मिनेट को लागी ब्याक्टेरिया प्रदूषण कम गर्न सक्नुहुन्छ।2O) वा सुक्रोज फ्लोटेसन प्रदर्शन गर्नुहोस्। गँड्यौलाको नमूनाहरू लगातार बरफमा राख्नुहोस्।

अल्ट्रासोनिक सी। एलिसन प्रोटोकल

  • यो निश्चित गर्नुहोस् कि तपाई अल्ट्रासोनिक्याटर अप्रन्ट तयार गर्नुहुन्छ ताकि अल्ट्रासोनिक होमोजिनाइजर प्रयोगको लागि तयार छ (प्रोब माउन्ट गरिएको, सोनीकेशन प्रोग्राम प्रि-सेट)।
  • Ultrasonicator UP200Ht (200 watts, 26kHz) with microtip S26d2 for the preparation of biological samplesयदि तपाईंको अल्ट्रासोनिकेटर स्ट्यान्ड-माउन्ट गरिएको छ भने, अल्ट्रासोनिक प्रोबको मुनि तपाईंको नमूना ट्यूबहरूको साथ हिम स्नान राख्नुहोस् र १.ml एमएल ट्यूबमा अल्ट्रासोनिक प्रोब्स राख्नुहोस्।

  • सी २०० ele को UP200St वा UP200Ht को साथ एलिसन्सको विश्लेषणको लागि, अल्ट्रासोनिकेसन माइक्रोटीपको प्रयोग गरिनु पर्छ (उदाहरण, २mm प्रोब S26d2; चित्र बायाँ हेर्नुहोस्) sec०% आयाममा १ सेकेन्डको लागि sec० सेकेन्ड पज बीचमा रोकिन्छ। Sec Sonication चक्र प्रत्येक १ सेकेन्डको लागि sec० सेकेन्ड पज सहित सी एलिगन्स lिसिसको लागि आदर्श हो। यदि तपाइँ पहिलो पटक लिसिस प्रदर्शन गर्नुहुन्छ भने, तपाइँ माइक्रोस्कोप प्रयोग गरेर प्रत्येक पल्स पछि नमूनाको साना एलिकोटहरूमा लीसिस प्रगति जाँच गर्न सक्नुहुन्छ।
  • गँड्यौलाहरू अवरुद्ध भएपछि लीसिस सफलतापूर्वक पूरा हुन्छ। अत्यधिक Sonication परिणामले न्यूक्लीको बिच्छेद हुन्छ र देख्न सकिन्छ जब नमूना चिसो वा फोमहरू हुन्छ। नमूना गिरावट रोक्नको लागि, यदि आवश्यक भएमा थप दालहरू प्रयोग गर्नुहोस्। प्रत्येक-अल्ट्रासोनिक पल्स चक्रको समय बढाउनुहोस् उच्च-स्तरको प्रोटीन एक्स्ट्र्याक्टहरू प्राप्त गर्न।
  • Cellys सेकेन्डमा १० मिनेटको लागि १,000,००० आरपी मा अल्ट्रासोनिक लिस्ड गँड्यौलाको केन्ट्रिफिंग गरेर सेल लाईसेट खाली गर्नुहोस्।
  • त्यसो भए, सतह सतहलाई एक नयाँ ट्यूबमा हस्तान्तरण गर्नुहोस् र इम्यूनोप्रिसिपिटेशन वा अन्य एसेजहरूको लागि तयारी गर्नुहोस्।

होमोजीनाइजेसन बफरको लागि नोट: माथि उल्लिखित अल्ट्रासोनिक लिसिस प्रोटोकलको लागि होमोजाइनेसन बफर तयार पार्नुहोस्:

  • १ m मिटर हेप्स पीएच .6..6 – ०. M M को १ m मिलि
  • १० एमएम केसीएल – २ मिलि को २. 2.5 मिलीलीटर
  • १. m एमएम MgCl2 – 01 M को .75 मिलीलीटर
  • 0.१ एमएम EDTA – ०.० M को १० उल
  • 0.5 एमएम EGTA – ०.० एमएलको २. m मिलीलीटर
  • M 44 मिनेट सुक्रोज – .7०% को १.7. m मिलि
  • सही प्रयोग गर्नु अघि थप्नुहोस्: १ एमएम डीटीटी – १००० को १M
  • प्लस एक प्रोटीज अवरोधकर्ता

सी। को अल्ट्रासोनिक विश्लेषण क्वाटिटेटिव एफ़िनिटी प्युरिफिकेशन एसेसको लागि एलेगन्स

सी। एलिगन्स भ्रुणहरू (प्रतिकृति प्रति ∼२ मिलियन) भर्खरै जैविक ट्रिप्लिकेटमा कच्चा युवा ग्रिभिड हर्माफ्रोडाइट्सलाई ब्लीच गरेर बरफमा सोनिकेट गरिएको थियो (चक्र: ०.० सेकेन्ड, आयाम: –०-–%%, stro स्ट्रोक / सत्र, s सत्र, सत्र बीचको अन्तराल) : S० से; UP200S अल्ट्रासोनिक प्रोसेसर माइक्रो-टिप S26d2 (Hielscher Ultrasonics GmbH) को साथ lysis बफरमा (कुल खण्ड: ∼600 μl; mm० मिमी Tris-HCl, pH .4.,, १०० मिमी KCl, १ मिमी MgCl2, १ मिमी EGTA, १ मिमी डीटीटी, १०% ग्लिसरॉल) , प्रोटीज अवरोधक मिश्रण, ०.१% नॉनिडेट पी-40० विकल्प)। Sonication पछि, Nonidet P-40 विकल्प 1% सम्म जोडियो र lysates टेल टेरिभेट head० डिग्री सेल्सियस मा head डिग्री सेन्टिग्रेडमा टकियो, सेन्ट्रीफ्यूगेशन पछि २००० × g मा २० मिनेट ° डिग्री सेल्सियसमा। क्लियरर्ड लाइसाट त्यसपछि माथिल्लो लिपिड तहलाई गडबड नगरी आकांक्षी बनाइएको थियो र आधा गरेर एन्टि-जीएफपी एगारोज मोती वा अवरुद्ध नियन्त्रण मोती (–०-–० μl) मा विभाजित गर्नुभयो। Tail – डिग्री सेन्टिग्रेड tail० डिग्री सेन्टिग्रेडमा rot०-–० मिनेटमा टाउकोमा टाउको घुमाएपछि, मोतीहरू एक पटक धुईए, ०.१% नोनिडेट पी-40० विकल्प सहितको लीसिस बफरले धुले, त्यसपछि दुई पटक धुने बफर I (२ mm मिमी Tris-HCl, pH) मा .4..4, mm०० मि.मि. NaCl, १ मिमी MgCl2) वा बफर II (१ मिमी Tris-HCl, pH .4..4, १ 150० मिमी NaCl, १ मिमी MgCl2) वा दुबै। GFP का लागि: MBK-२ पुल डाउनहरू, दुई अलग प्रयोगहरू विभिन्न धुलाई शर्तहरूको प्रयोग गरिएको थियो। प्रोटिनहरू कोठाको तापक्रममा m मिटर यूरिया / २ मीठोरियाको μ० μl मा अर्बिटल थरथरी द्वारा गणित गरिएको थियो। MBK-1 :: GFP पुल-डाउन प्रयोगहरूका लागि प्रोटीन twice ० डिग्री सेल्सियसको m मिटर ग्वानिडिनियम क्लोराइडको μ०μl मा मिलाएर दुई चोटि एलिएट गरियो, त्यसपछि इथनॉल वर्षा। इलुटेड प्रोटीन नमूनाहरू त्यसपछि इन-घोलमा पचाए।
(cf. चेन एट अल। २०१ 2016)

VialTweeter at the ultrasonic processor UP200ST

VialTweeter १० टेस्ट ट्यूबहरूको एक साथ Sonication को लागी बहु नमूना तयारी एकाई।

अल्ट्रासोनिक वर्म होमोजिनाइजेसन र Lysis

सीलेगन्स कोष र प्रोटीन निकासी प्रक्रियाको लागि, सम्बन्धित चरणको ,000०,००० नेमोटाड प्रति नमूना संकलन गरेर बरफको चिसो एस-बेसलमा धोइन्थ्यो, १ cent०० आरपीएममा केन्द्रापसारले केन्द्रित २ मिनेटको लागि, आइस-चिसो S- द्वारा छ पटक धोइन्थ्यो। बेसल अवशिष्ट ब्याक्टेरियाहरू हटाउन, र त्यसपछि बरफमा भण्डारण प्रयोगको लागि तयार नभएसम्म। प्रोटीन निकासीको लागि, ग्रेभिड-वयस्क गँड्यौलाहरूलाई अन्तिम एस-बेसल धुने पछि कम्प्याक्ट गोली बनाउने अनुमति दिइयो। गँड्यौला गोलीहरू १ मिलीलीटर आइस-चिसो एक्स्ट्र्यासन बफर [२० एमएम पोटासियम फास्फेट, पीएच .4..4, २ एमएम ईडीटीए, १% ट्राइटन-एक्स -१०, प्रोटीज अवरोधकर्ताहरू (सिग्मा पी २14१))] मा पुन: केन्द्रित गरियो र तुरून्त प्रशोधन गरियो।
∼∼०,००० ग्रेभिड वयस्क गँड्यौलाहरू (∼१० मिलीग्राम भिजेको तौल अनुरूप), आ-प्रोब-प्रकार अल्ट्रासोनिकेटर (उदाहरणका लागि UP50H) माइक्रोटीप MS2 को साथ using०% आयाममा sec सेकेन्डको cy० सेकेन्ड, sec० सेकेन्डको छुटमा, 40०% आयाम प्रयोग गरेर बरफमा Sonication गरिएको थियो। १ मिलीलीटर बरफ चिसो निकासी बफर को। (सीएफ। बास्करण एट अल २०१२)

सी। एलिगन्सबाट अल्ट्रासोनिक लिपिड निकासी

लिपिडोमिक्समा, चयापचयको शाखा, जैविक प्रणालीहरूको लिपिड पूरकको विशेषता र विश्लेषण गरिन्छ। सी। एलिगन्स लेपिडोमिक्समा व्यापक रूपमा प्रयोग गरिन्छ मेटाबोलिक लिपिडको कुराकानी र स्वास्थ्य र आयुमा पार्ने प्रभावहरूको अनुसन्धान गर्न।
अल्ट्रासोनिक लीसीस र एक्स्ट्र्याक्शन लिपिडहरू जारी गर्न प्रयोग गरिन्छ जस्तै सी एलिगन्स भ्रुण, लार्भा र वयस्क गँड्यौलाबाट स्फिंगोलाइपिडहरू। अल्ट्रासोनिकेसन गँड्यौला होमोजेनेटहरू तयार पार्न प्रयोग गरिन्छ र पछि नमूनाबाट लिपिडहरू निकाल्न।
सी। एलिगन्सबाट अल्ट्रासोनिक लिपिड निकासीको लागि प्रोटोकल
सी। एग्गेन्सको गोली बरफमा पगाल्नुहोस् र ०. m मिलीलीटर अल्ट्रावाटरमा फेर्नुहोस्। सी। सोनेटिकेट १,5 एमएल परीक्षण ट्युबमा एलिगन्स नमूनाहरू, जबकि बरफमा नमूनाहरू निरन्तर राख्नुभयो।
Sonication एक प्रोब-अल्ट्रासोनिकस्टोरको रूपमा प्रयोग गर्न सकिन्छ Uf200 ः टी, अल्ट्रासोनिक नमूना प्रस्तुत एकाई VialTweeter (१० नमूनाहरूको एक साथ Sonication) वा UIP400MTP (बहु-राम्रो प्लेटहरू जस्तै 96--वेल प्लेटहरू को Sonication लागि)। UP200Ht को साथ अल्ट्रासोनिक lysis को लागी माइक्रो-टिप S26d2 प्रयोग गर्नुहोस्। डिजिटल मेनूमा अल्ट्रासोनिक चक्र मोड प्रि-सेट गर्नुहोस्। १० सेकेन्ड आयाम सेट गर्नुहोस् र of० सेकेन्डको पजको साथ २० चक्रको २ सेकेन्ड पल्सको सोनिकेशन चक्र मोड। प्रत्येक अल्ट्रासोनिक पल्सेशन फुटेर बीचमा।
सतही सतहहरू लाई पेंच क्यापको साथ गिलास ट्यूबहरूमा हस्तान्तरण गर्नुहोस्। प्रत्येक गिलास ट्यूबमा १ मिलीलीटर अल्ट्रावाटर थपेर फोलच एक्स्ट्र्यासन प्रदर्शन गर्नुहोस्, त्यसपछि प्रत्येक गिलास ट्यूबमा क्लोरोफॉर्म / मेथनॉल (अनुपात = २: १) मिश्रणको m मिलीलीटर थप्नुहोस्।
Glass पटकको लागि sec० सेकेन्डको लागि प्रत्येक गिलास ट्यूब भंवर। १ separa मिनेट (एपेन्डोर्फ, 10 58१० आर) को लागी १ separa२ x xg मा ट्यूबहरू अपकेन्ट गर्नुहोस् चरण बिभाजनलाई अझ बढाउनको लागि। तल्लो हाइड्रोफोबिक अंश सफा गिलास ट्यूबमा गिलास पाश्चर पाइपेटद्वारा स्थानान्तरण गर्नुहोस्। तल्लो हाइड्रोफोबिक अंश नाइट्रोजन प्रवाह अन्तर्गत नाइट्रोजन वाष्पीकरण सुक्नुहोस्। प्रयोग नभएसम्म सुख्खा गोली स्टोर गर्नुहोस् -80° डिग्री सेल्सियस फ्रीजरमा।

कृमि Lysates को अल्ट्रासोनिक तयारी

किराको लाइसेट: L4 चरण गँड्यौलाहरू M9 बफरसँग (.2२.२ m मिमि ना2HPO4, २२.०4 एमएम KH2PO4, .5 85..56 एमएम NaCl, र ०.8787 एमएम MgSO4) सबै ब्याक्टेरियाहरू हटाउनका लागि। एम buff बफरको सकेसम्म हटाएपछि, गँड्यौलाहरू लीसिस बफरमा पुन: स्थापना गरियो: m० एमएम हेप्स, m० एमएम केसीएल, १ एमएम ईडीटीए, १ एमएम ईजीटीए, m एमएम फास्फेट β-ग्लिसरॉल, ०. 0.1% (v / v) ट्राइटन एक्स -१०, M० एमएम सोडियम फ्लोराइड, १ एमएम सोडियम ओर्थोभनाडेट, m एमएम सोडियम पाइरोफोस्फेट, ०.२ एमएम फेनिलमेथेनेसल्फोनीफ्लोराइड र प्रोटीज अवरोधक। गँड्यौलाहरू तरल नाइट्रोजनमा स्थिर गरियो र times 37 डिग्री सेन्टिग्रेडमा तीन पटक पिगियो, तब गँड्यौला सुख्खा बरफमा अल्ट्रासोनिक वायलटवीटर इकाईको साथ १० नमूना ट्यूबहरू सँगै तयारीको लागि प्रयोग गरियो। Sonication sec०% आयाममा २ सेकेन्डको १० चक्रमा गरिएको थियो। ication० सेकेन्ड पज साथ Sonication फट्न बीच। त्यस पछि, नमूनाहरू १000 मिनेटको लागि 000 डिग्री सेल्सियसमा १२००० आरपीएममा केन्द्रित गरियो। सतह सतहलाई स collected्कलन गरिएको थियो र--० डिग्री सेल्सियस मा संग्रहित थियो। ब्रिकफोर्ड परखले प्रोटीन क्वान्टिफिकेसनको लागि एक अलिकोट प्रयोग गरिएको थियो।
कुल ग्लुटाथियोन, GSH, र GSSG को निर्धारण: ग्लुटाथियोन परिमाणको लागि, lysates र दृढ संकल्प एकै दिन बनेको थियो। ग्लुकोज-फेड र नियन्त्रण L4 लार्भा काटियो र M9 बफरसँग तीन पटक धोइन्थ्यो। एम buff बफरलाई सकेसम्म हटाएपछि, गँड्यौलाहरू आइस-चिसो मेटाफोस्फोरिक एसिड (%% डब्ल्यू / वी) मा पुनः देखा पर्‍यो, त्यसपछि गँड्यौलाहरू २ सेकेन्डको दस सोनिक चक्रमा %०% आयाममा अल्ट्रासोनिक वायलटवीटरको साथ बरफमा सोनिकेट गरिएको थियो। sec० सेकेन्डको साथ। प्रत्येक चक्र बीच पज गर्नुहोस्। पछि, १२००० आरपीएममा १ cent मिनेटको लागि ̊ सेन्टिग्रेड।
(cf. Alcántar-Fernández et al।, २०१ 2018)

सी। इग्गेनस नमूना तयारी प्रतिरक्षा प्रतिरोधात्मक क्षमता र पश्चिमी ब्लोटिंग अघि

संक्षेपमा भन्नुपर्दा, भ्रुण निकासहरूको लागि, सी एलिगन्स एल १ लार्भा वयस्कतामा ठूलो मात्रामा तरल पदार्थ एस-मध्यम संस्कृतिमा हुर्कियो। भ्रुणहरू मानक ब्लीच विधि प्रयोग गरी संकलन गरिएको थियो र लीसिस बफरमा निलम्बित गरियो (m० एमएम ट्राइस, पीएच .5..5, १०० एमएम केसीएल, १ एमएम ईडीटीए, १ एमएम एमजीसीएल २, 7.7% ग्लिसरॉल, ०.०5% एनपी--०, १- प्रोटीज अवरोध ककटेल, र १- फास्फेट्यास इनहिबिटर ककटेल I र II), द्रुत नाइट्रोजनमा छिटो फ्रिज गरिएको, र अल्ट्रासोनिक सेल अवरोधले पनी माइक्रोटीपको साथ अल्ट्रासोनिकेटर प्रयोग गरेर Uf200 ः टी S26d2 को साथ १० s भन्दा %०% आयाममा १० दालहरूको लागि। यदि नमूनाहरूको एक ठूलो संख्या अल्ट्रासोनिक तयार गर्नु पर्छ VialTweeter वा मल्टिसाम्पल-अल्ट्रासोनिकेटर UIP400MTP राम्रो प्लेटहरूको लागि सिफारिस गरिन्छ। Sonication पछि, अर्क rif 30 सेन्टिग्रेड २० मिनेटको लागि ,000०,००० सेन्ट्रीफ्यूगेसनद्वारा पूर्व-खाली गरियो। प्रि-क्लीयर एक्स्ट्र्याक्ट (कुल प्रोटीनको µ००µg) µ􏰂० antig एन्टी-सीडीसी २ 25.१ एफेनिटी-प्यूरिफाइड एन्टिबडी (यस अध्ययन) को प्रोटीन ए-एगारोजसँग क्रस-लिंक गरिएको, वा नियन्त्रणको रूपमा, खरासी इम्युनोग्लोबुलिनको समान मात्राको साथ incubated थियो (Ig) G क्रस-लि linked्क गरिएको प्रोटीन A-agarose १% NP-containing० समावेशी लीसिस बफरको २०० totall को कुल भोल्युममा प्रयोग गरिएको थियो, जसको समावेशले मेट्रिक्समा प्रोटीनको nonspecific बाध्यकारी घटायो। नमूनाहरू १ घण्टा 4 डिग्री सेल्सियसको लागि घुमाइएको थियो, मोतीहरू लाईसिस बफरसँग तीन पटक धोइन्थ्यो, र ग्लासिन / एचसीएलको 200० ell र २०० एमएम एनएसीएल, पीएच २.२ का साथ अल्ट्राईएको थियो। प्रतिरक्षा पछि, एल्युएट्सलाई एसडीएस नमूना बफरको µ􏰂०µ􏰂l मा पातलो गरियो, min मिनेटको लागि ° ° डिग्री सेन्टिग्रेडमा गरम गरियो, र सामान्यतया कुल इनपुटको 3% र एलिएट्सका लागि %०% एसडीएस-पृष्ठमा लागू गरियो त्यसपछि पश्चिमी ब्लूटिंगको साथ एन्टि -CDC-२.1.१ (१: )००), anti-LIN-23 (१: 5050०), anti-ubiquitin (१: १०००), anti-GSK3􏰁 (१: )००), वा anti-act-actin (१: २०००) एन्टिबडीहरू। जहाँ अर्कलाई प्रतिरक्षा प्रतिरोधको अधीनमा राखिएको थिएन, त्यस्ता निकासहरूबाट निकालेका जम्मा प्रोटीनको समान मात्रा एसडीएस नमूना बफरमा पुनः सेट गरियो, 95 ° डिग्री सेल्सियसमा तताइएको थियो, र त्यसपछि सिधै एसडीएस-पृष्ठमा लागू गरियो र पश्चिमी ब्लोटिंग द्वारा विश्लेषण गरियो। (cf. Segref et al। २०२०)

Lysis को लागि जांच प्रकार को अपननेपाल UP200St

अल्ट्रासोनिक सेल बिघटनकर्ता UP200St माइक्रो-टिप S26d2 को साथ lysis र प्रोटीन निकासी को लागी

Prescise तापमान नियन्त्रण अन्तर्गत अल्ट्रासोनिक Lysis

The VialTweeter is a MultiSample Ultraonicator that allows for reliable sample preparation under precisely controlled temperature conditions.जैविक नमूनाहरू ह्यान्डल गर्दा सटीक र भरपर्दो तापमान नियन्त्रण महत्त्वपूर्ण छ। उच्च तापक्रम नमूनाहरूमा तापीय प्रेरित प्रोटीन गिरावट शुरू गर्दछ।
सबै मेकानिकल नमूना तयारी प्रविधिको रूपमा, Sonication गर्मी सिर्जना गर्दछ। जहाँसम्म, VialTweeter प्रयोग गर्दा नमूनाको तापक्रम राम्रोसँग नियन्त्रण गर्न सकिन्छ। हामी तपाईलाई बिभिन्न विकल्पहरू प्रस्तुत गर्दछौं तपाईको नमूनाहरूको तापक्रम नियन्त्रण गर्न र नियन्त्रण गर्नको लागि तिनीहरूलाई विश्लेषणको लागि VialTweeter र VialPress सँग।

  1. नमूना तापमान अनुगमन: अल्ट्रासोनिक प्रोसेसर UP200St, जसले VialTweeter ड्राइभ गर्दछ, एक बुद्धिमान सफ्टवेयर र प्लगेबल तापमान सेन्सरले सुसज्जित छ। UP200St मा तापमान सेन्सर प्लग गर्नुहोस् र एउटा नमूना ट्यूबहरूमा तापमान सेन्सरको टिप घुसाउनुहोस्। डिजिटल र colored्गीन टच-डिस्प्ले मार्फत, तपाई UP200St को मेनुमा सेट गर्न सक्नुहुनेछ तपाईको नमूना Sonication को लागी एक विशिष्ट तापमान सीमा। अल्ट्रासोनिकेटर स्वत: रोकिनेछ जब अधिकतम तापमान पुग्यो र रोक्नुहोस् जबसम्म नमूना तापक्रम सेट तापमानको कम मानमा नपर्दछ ∆। त्यसपछि Sonication फेरि स्वत: सुरु हुन्छ। यो स्मार्ट सुविधा गर्मी प्रेरित गिरावट रोक्छ।
  2. VialTweeter ब्लक प्रि-कूल्ड गर्न सकिन्छ। VialTweeter ब्लक (ट्रान्सड्यूसर बिना मात्र Sonotrode!) फ्रिज वा फ्रीजर मा टायटानियम ब्लक राख्न पूर्व नमूना मा तापमान वृद्धि स्थगित गर्न मद्दत गर्दछ। यदि सम्भव छ भने, नमूना पनि प्रि-कूल्ड गर्न सकिन्छ।
  3. Sonication को समयमा चिसो सुक्खा बरफ प्रयोग गर्नुहोस्। सुक्खा बरफले भरिएको एउटा उथले ट्रे प्रयोग गर्नुहोस् र सुख्खा बरफमा VialTweeter राख्नुहोस् ताकि तातो चाँडै लुप्त होस्।

तपाइँको विश्लेषण अनुप्रयोगको लागि इष्टतम अल्ट्रासोनिक सेल बिघटनकर्ता फेला पार्नुहोस्

हिलस्चर अल्ट्रासोनिक्स उच्च-प्रदर्शन अल्ट्रासोनिक सेल अवरोधकहरू र प्रयोगशालाहरू, बेन्च-टप र औद्योगिक स्केल प्रणालीहरूको लागि होमोजिनाइजर्सको लामो समयको अनुभवी निर्माता हो। तपाईंको ब्याक्टेरिया सेल संस्कृति आकार, तपाईंको अनुसन्धान वा उत्पादन लक्ष्य र सेलको मात्रा प्रति घण्टा वा दिनमा प्रक्रिया गर्नको लागि तपाईंको अनुप्रयोगको लागि सही अल्ट्रासोनिक सेल अवरोधक फेला पार्न आवश्यक कारकहरू हुन्।
हिलस्चर अल्ट्रासोनिक्सले बहु-नमूनाहरू (१० व्हील्स सम्म) को साथसाथै सामूहिक नमूनेहरू (अर्थात्, माइक्रोटीटर प्लेट्स / 96 96-वेल प्लेट्स) को क्लासिक प्रोब-प्रकार प्रयोगशाला अल्ट्रासोनिकेटर 50० देखि विभिन्न पावर लेभलको एक साथ Sonication विभिन्न समाधान प्रदान गर्दछ। Cell०० वाट पूर्ण औद्योगिक औद्योगिक अल्ट्रासोनिक प्रोसेसरको साथ १ unit,००० वाटसम्म प्रति इकाई वाणिज्यिक सेल अवरोध र ठूलो उत्पादनमा प्रोटीन निकासीको लागि। सबै हिल्सचर अल्ट्रासोनिकेटरहरू २//7/ .65 operation पूर्ण लोडमा सञ्चालनका लागि निर्माण गरिएका छन्। मजबुतता र विश्वसनीयता हाम्रो अल्ट्रासोनिक उपकरणहरूको मुख्य सुविधाहरू हुन्।
सबै डिजिटल अल्ट्रासोनिक होमोजाइनाइजर स्मार्ट सफ्टवेयर, रंगीन टच डिस्प्ले र स्वचालित डेटा प्रोटोकलिंगले सुसज्जित छन्, जसले अल्ट्रासोनिक उपकरणलाई प्रयोगशाला र उत्पादन सुविधाहरूमा सुविधाजनक कार्य उपकरणको रूपमा गर्दछ।
हामीलाई थाहा दिनुहोस्, कस्तो प्रकारको सेलहरू, कुन खण्ड, कुन आवृत्तिसँग र कुन लक्ष्यसँग तपाईं आफ्नो जैविक नमूनाहरू प्रशोधन गर्न सक्नुहुन्छ। हामी तपाइँको प्रक्रिया को आवश्यकता को लागी सबैभन्दा उपयुक्त अल्ट्रासोनिक सेल बिघटनकर्ता सिफारिस गर्दछौं।

तलको तालिकाले कम्प्याक्ट ह्यान्ड होल्डोजेन्ड होमोजिनाइजर्स र मल्टि नमूना अल्ट्रासोनिकेटरहरूबाट व्यावसायिक अनुप्रयोगहरूको लागि औद्योगिक अल्ट्रासोनिक प्रोसेसरहरूमा हाम्रो अल्ट्रासोनिक प्रणालीहरूको अनुमानित प्रशोधन क्षमताको संकेत दिन्छ:

ब्याच मात्रा बग्ने गति सिफारिस गरिएका उपकरणहरू
---राम्रो / माइक्रोटिटर प्लेटहरू na UIP400MTP
१० शीशाहरू à ०. 1.5 देखि 1.5mL na UP200St मा वैलटाइमर
0.01 देखि 250mL To देखि १०० मिलि / मिनेट UP50H
0.01 बाट 500mL 10 देखि 200 एमएल / मिनेट UP100H
10 देखि 2000 एमएल 20 देखि 400 मिनेट / मिनट Uf200 ः टी, UP400St
0.1 देखि 20L 0.2 देखि 4 एल / मिनेट UIP2000hdT
10 देखि 100 एल 2 देखि 10 एल / मिनेट UIP4000hdT
na 10 देखि 100 एल / मिनेट UIP16000
na ठूलो को क्लस्टर UIP16000

हामीलाई सम्पर्क गर्नुहोस! / हामीलाई सोध्नुहोस्!

थप जानकारीको लागि सोध्नुहोस्

कृपया तलको फारम प्रयोग गर्नुहोस् अल्ट्रासोनिक प्रोसेसर, अनुप्रयोग र मूल्य को बारे मा थप जानकारी अनुरोध गर्न। हामी तपाईंसँग तपाईंको प्रक्रियाको बारेमा छलफल गर्न र तपाईंको आवश्यकताहरू पूरा गर्ने अल्ट्रासोनिक प्रणाली प्रस्ताव गर्न खुशी हुनेछौं!









कृपया ध्यान दिनुहोस् गोपनीयता नीति


Ultrasonic high-shear homogenizers are used in lab, bench-top, pilot and industrial processing.

हिलस्चर अल्ट्रासोनिक्स लेब, पाइलट र औद्योगिक मापनमा मिश्रण अनुप्रयोगहरू, फैलाव, पायसीकरण र निकासीको लागि उच्च प्रदर्शन अल्ट्रासोनिक होमोजिनाइजर बनाउँछ।

साहित्य / सन्दर्भ



तथ्यहरू थाह छ

क्यानोरहाब्डाइटिस एलिगन्स

सी। एलिगन्स एक स्वतन्त्र-जीवित पारदर्शी नेमाटोड (राउन्डवर्म) हो जुन लगभग १ मिलिमिटर लम्बाइ हुन्छ, जुन ब्याक्टेरियाहरू (जस्तै ई। कोलाई) मा खुवाउँदछ र तुलनात्मक रूपमा छोटो जीवन चक्र हुन्छ। २० डिग्री सेन्टिग्रेडमा, सी। एलिगन्स (एन २) को प्रयोगशाला तनावमा औसत आयु २-– हप्ता हुन्छ र generation देखि days दिन सम्मको उत्पादन हुन्छ। जब सी एलिगन्स ठूलो संख्यामा हुर्कन्छन्, जुन सजिलैसँग नियन्त्रित प्रयोगशाला अवस्थाहरू अन्तर्गत सजिलैसँग गर्न सकिन्छ, तिनीहरू उपन्यासका औषधीहरूको कार्य सिद्धान्तका साथै मानव रोगको जटिल अणु प्रक्रियाहरूमा उनीहरूको प्रभाव र अन्तर्क्रियाको लागि सजिलैसँग हेर्न सकिन्छ। छोटो जीनोम, छोटो जीवन चक्र र प्रयोगशाला सेटिंग्समा सरल ह्यान्डलिंगले सी एलिगन्सलाई जेनोमिक्स, प्रोटिओमिक्स, विकास जीवविज्ञान, रोग अनुसंधान, औषधि विकास आदि जस्ता अनुसन्धानका लागि एक आदर्श मोडल जीव बनाउँछ।
क्यानोरहाब्डाइटिस एलिगन्स गँड्यौला या त पुरुष वा हर्माफ्रोडाइट हुन सक्छ। हर्माफ्रोडाइट्स दुबै पुरुष र महिला प्रजनन अंगहरू छन्। यद्यपि महिला गँड्यौलाहरू अवस्थित छैनन्। हर्माफ्रोडाइट्स या त आत्म-उर्वर हुन सक्छ वा नर कीराको साथ पनि प्रजनन गर्न सक्छन्। सी। एलिगन्सले दिन प्रति दिन १,००० भन्दा बढी अन्डा उत्पादन गर्न सक्दछ।
सी। एलिगन्स स्नायु प्रणालीको साथ एक सरल जीवहरू मध्ये एक हो, नेमाटोड गँड्यौला १ 63 .63 देखि अनुसन्धानको लागि एक नमूना जीवको रूपमा प्रयोग गरिन्छ। न्यूरन्सले कार्य क्षमतालाई फायर गर्दैन, र कुनै भोल्टेज-गेट्ड सोडियम च्यानलहरू अभिव्यक्त गर्दैन। हर्माफ्रोडाइटमा, यस प्रणालीमा 2०२ न्यूरन सामिल छन् जसको ढाँचालाई विस्तृत रूपमा म्याप गरिएको छ, जसलाई कनेक्टोम भनेर चिनिन्छ।
सी। एलिगन्स जीनोमका धेरै जीनहरू मानवमा कार्यकारी समकक्षहरू हुन् जसले यसलाई मानव रोगहरूको लागि अत्यन्त उपयोगी मोडेल बनाउँदछ र उदाहरणका लागि विकासात्मक जीवविज्ञान, बुढेसकाल र दीर्घायुलाई असर गर्ने कारकहरूको अध्ययन गर्न प्रयोग गरिन्छ। यसबाहेक, सी एलिगन्स उत्परिवर्तीहरूले न्यूरोलॉजिकल डिसअर्डरहरू (जस्तै अल्जाइमर), जन्मजात हृदय रोग र मृगौलाको रोग जस्ता धेरै मानव रोगहरूको लागि मोडेलहरू प्रदान गर्दछ।
यी कारकहरूले सी। एलिगन्सलाई धेरै अनुसन्धान क्षेत्रहरूका लागि अत्यन्त मूल्यवान मोडेल बनाएका छन्। फलस्वरूप, सी एलिगन्स पहिलो बहु-सेलुलर जीव थियो जसले यसको सम्पूर्ण जीनोम अनुक्रम बनायो। जीनोमले अनुमानित २०,470० प्रोटीन कोडिंग जीन समावेश गर्दछ। एलिगन्सको जीनको लगभग% 35% मानव homologs छ। उल्लेखनीय कुरा के छ भने मानव जीनहरू बारम्बार तिनीहरूका सी एलिगन्स होमोगलहरू प्रतिस्थापन गर्न देखा पर्‍यो जब सी एलिगन्समा परिचित भए। यसको विपरित, धेरै सी एलिगन्स जीनहरू स्तनपायी जीनहरूमा जस्तै कार्य गर्न सक्छन्।

सी। एलिगन्सको आयु लगभग छ। Weeks हप्ता र छ वटा जीवन चरणहरू समावेश गर्दछ: भ्रुणजनन (अण्डा चरण), चार लार्भा चरणहरू (L1 देखि L4), र वयस्क चरण। अण्डाहरूबाट नेमाटोडहरू ह्याच गरेर L1 लार्भा L60० कोषहरू समावेश गर्दछ। प्रत्येक लार्भा चरणको बृद्धि सेल सेल डिभिजन र सेल hypertrophy द्वारा हुन्छ। क्यूटिकुलर पिघलनेले प्रत्येक लार्भा चरण बिरामदार गर्दछ। यदि कठोर वातावरणीय अवस्था विकासशील गँड्यौलाको लागि संकेत गर्दछ कि सर्तहरूले वयस्क प्रजनन क्षमतालाई समर्थन गर्न असम्भव छ, सी। एलिगन्सले यसको विकास बदल्न सक्दछ र एक वैकल्पिक एल la लार्भा अवस्था सिर्जना गर्न सक्छ, जहाँ लार्वा धुरा अवस्थामा जान्छ। यस राज्यमा जनावरहरू असाधारण तनाव सहन सक्ने र दीर्घायु हुन्छन् र तीनदेखि नौ महिनासम्म बाँच्न सक्दछन्। Dauer larvae दुबै आफ्नो buccal र गुदा खड्का सील द्वारा, आफ्नो पेट संकुचन, र एक daf-16 / FOXO- आश्रित आनुवंशिक कार्यक्रम को बारी मा, अन्य चीजहरु को लागी, dauer विशेष कटिकल को अभिव्यक्ति गर्न को लागी कठिनाई देखि आफूलाई अलग। (सीएफ। हेंडरसन एट अल, २०० 2006)

सी। एलिगन्स डोअर लार्भा

Dauer larvae nematode larvae को लागी एक शब्द हो, जो एक वैकल्पिक विकास चरण प्रवेश गर्नुभयो। थर्म टर्म "Dauer larvae" विशेष गरी cenorhabditis एलिगन्स सहित rhabditids परिवार को गँड्यौला को लागी प्रयोग गरीन्छ। शब्द "Dauer" जर्मन मूल हो र यसको अर्थ "अवधि" हो” को अर्थ मा “समयको अवधि "। Dauer लार्वा एक प्रकारको stasis मा जान र कठोर परिस्थितिमा बाँच्न सक्छ। यदि र जब एक larva dauer चरण प्रवेश गर्छ वातावरणीय अवस्था मा निर्भर गर्दछ। डाउर लार्भाको जीवविज्ञानमा विस्तृत रूपमा अध्ययन गरिन्छ किनकि लार्भाले कठोर वातावरणमा बाँच्न र लामो समयसम्म बाँच्न असाधारण क्षमता देखाउँदछ। उदाहरणको लागि, सी एलिगन्स डाउर लार्भा चार महिनासम्म बाँच्न सक्छ, सामान्य प्रजनन विकासको क्रममा उनीहरूको औसत आयु लगभग तीन हप्ता भन्दा लामो।