हिल्सचर अल्ट्रासाउन्ड टेक्नोलोजी

Sonication Losis: सेल अवरोध & निकासी

कोशिका विघटन वा लिसिटी जीवविज्ञान प्रयोगशालामा दैनिक नमूना तयारीको एक सामान्य भाग हो। Lysis को लक्ष्य सेल पर्खाल को भागहरु लाई बाविक या जैविक अणुहरु को रिलीज गर्न को लागि पूरा कक्ष को बाधा को रूप मा छ। तथाकथित lysate मा प्लाज्मिड, रिसेप्टर assays, प्रोटीन, डीएनए, आरएनए आदि मा शामिल हुन सक्छन्। Lysis को चरणहरु को अंश, organelle अलगाव या / र प्रोटीन निष्कर्षण र शुद्धि हो। निकालेएको सामग्री (= lysate) अलग हुनुपर्छ र थप अनुसन्धान वा अनुप्रयोगहरूको विषय हो, उदाहरणका लागि प्रोटोमिक अनुसन्धानका लागि। अल्ट्रासोनिक homogenizers सफल सेल lysis को लागि एक साधारण उपकरण हो। अल्ट्रासोनिक तीव्रता को रूपमा प्रक्रिया मापदण्ड समायोजन गरेर समतल गर्न सकिन्छ, धेरै मिठो मात्रामा धेरै नरम देखि धेरै नरम देखि तीव्र रूपमा प्रत्येक पदार्थ र माध्यमको लागि विशिष्ट अनुप्रयोग आवश्यकता पूरा गर्न सकिन्छ।

सेल संरचना

कक्षहरू अर्ध-पारगम्य प्लाज्मा झिल्लीद्वारा सुरक्षित गरिन्छ जुन एक फास्फो-लिपिड bilayer (प्रोटीन-लिपिड bilayer; हाइड्रोफोबिक लिपिड र हाइड्रोफिलिक फास्फोरस अणुहरु द्वारा निर्मित एम्बेडेड प्रोटीन अणुहरु संग निर्मित) र सेल इन्टीरियर (साइटोप्लास) को बीच एक बाधा उत्पन्न गर्दछ। एक्सेलसेलुलर वातावरण। प्लांट कक्षहरू र प्रोक्रेरटिक सेलहरू सेल भित्री घेरिएको छ। सेलुलोजको बहु तहमा मोटो सेलको पर्खालले गर्दा, रोपण कक्षहरू जनावरको कोशिकाहरूको तुलनामा लोभ गर्न कठिन हुन्छन्। सेल इंटीरियर, जस्तै organelles, nucleus, mitochondrion, cytoskeleton द्वारा स्थिर छ।
कक्षहरू lysing गरेर, यो निकाल्नु र organelles, प्रोटीन, डीएनए, mRNA वा अन्य बायोकोल्युलकुलेहरू अलग गर्ने उद्देश्य हो।

अल्ट्रासोनिक विच्छेदकर्ता फ्योटो स्रोतहरु (जस्तै बिरुवाहरू, अल्गा, फङी) बाट निकासीका लागि प्रयोग गरिन्छ।

बिरुवा कोशिकाहरूबाट अल्ट्रासोनिक निकासी: माइक्रोस्कोपी ट्रांसवर्सल सेक्शन (टीएस) कक्षहरूबाट अल्ट्रासोनिक निष्कर्षण (म्याग्निज 2000x) को समयमा कार्यहरूको तन्त्रणालाई देखाउँछ। [स्रोत: Vilkhu et al। 2011]

विधिहरू

कोशिकाहरु लाई lysate गर्न धेरै विधिहरू छन्, जुन मेकेनिकल र रासायनिक विधिहरूमा बाँड्न सकिन्छ, जुन डिटर्जेंट वा सल्टेन्टहरू, उच्च दबाबको आवेदन, वा मोती मिलको वा फ्रांसीसी प्रेसको प्रयोग समावेश गर्दछ। यी विधिहरूको सबैभन्दा समस्याग्रस्त विनाश प्रक्रिया प्रक्रिया मापदण्डहरूको कठिन नियन्त्रण र समायोजन हो र यसैले प्रभाव।
साधारण lysis विधिहरु को मुख्य नुकसान:

विभिन्न lysis प्रविधिहरू

तालिका: सेल lysis को पारंपरिक तरिकाहरु को प्रमुख नुकसान छ

यसको विपरीत, sonication सेल विस्थापन को लागि एक धेरै कुशल र विश्वसनीय उपकरण हो कि sonication मापदंडों मा एक पूर्ण नियंत्रण को लागि अनुमति दिन्छ। यसले सामग्री रिलीज र उत्पादन शुद्धतामा उच्च छनौटता सुनिश्चित गर्दछ। [बालासन्डाराम एट अल। 200 9] यो सबै सेल प्रकारका लागि उपयुक्त छ र सजिलै सानो र ठूलो मात्रामा लागू हुन्छ। अल्ट्रासोनिक्स सफा गर्न सजिलो छ। एक अल्ट्रासोनिक homogenizer सधैं स्वच्छ-भित्र-ठाँउ (CIP) र बाँझ-इन-स्थान (SIP) प्रकार्य छ। सोनोट्रोड मा एक विशाल टाइटेनियम सींग समावेश छ जुन पानी या विलायक मा फेंका जा सकता हो (कार्य माध्यम मा निर्भर गर्दछ)। अल्ट्रासोनिक्स को रखरखाव को कारण उनको मजबूती लगभग उपेक्षाजनक छ।

lysis

Lysis एक संवेदनशील प्रक्रिया हो। Lysis को समयमा सेल झिल्ली को संरक्षण को नष्ट गरेको छ, तथापि एक अनौपचारिक पर्यावरण (पीएच-मूल्य देखि विचलन) द्वारा निकाली प्रोटीन को निष्क्रियता, डेनरेट र गिरावट को रोकथाम को रूप मा छ। यसैले, सामान्य lysis मा एक बफर समाधानमा गरिन्छ। सबैभन्दा कठिनाइहरू अनियन्त्रित सेल विच्छेदबाट उत्पन्न हुन्छ जुन सबै इन्ट्रासेलुलर सामग्रीको अप्रचलित रिलीज वा / र लक्षित उत्पादनको अस्वीकरण।

अल्ट्रासोनिक सेल लिसिस प्रयोगशालामा नमूना तयारीको लागि र ठूलो मात्राको उत्पादनको लागि प्रयोग गर्न सकिन्छ। विस्तार गर्न क्लिक गर्नुहोस्!

छवि 1: 200 वाट शक्तिशाली अल्ट्रासोनिक homogenizer Uf200 ः टी डिजिटल नियंत्रण र विश्वसनीय र reproducible सेल lysis को लागि स्वचालित डेटा रेकर्डिंग संग।

सूचना अनुरोध




हाम्रो नोट गर्नुहोस् गोपनीयता नीति


अल्ट्रासोनिक लिसिस

सामान्यतया, लेबुलमा नमूनाहरूको लस 15 सेकेण्ड र 2 मिनेटको बीचमा लिनेछ। सोनसिशनको तीव्रताले आयाम सेटिङ एक sonication समय समायोजन गर्न को लागी धेरै सजिलो छ किनकि सही उपकरण को चयन गरेर, सेल झिल्ली बिस्तारै धेरै वा धेरै अचानक, सेल संरचना र उद्देश्य को आधार मा अवरुद्ध गर्न सम्भव छ ( उदाहरणका लागि डीएनए निकासीले न्यानो सोनिकेशन चाहिन्छ, ब्याक्टेरियाको प्रोटीन निकासी पूर्ण गहन अल्ट्रासाउन्ड उपचार चाहिन्छ)। प्रक्रियाको तापमानले एकीकृत तापमान सेन्सरद्वारा निगरानी गर्न सकिन्छ र ठुलो ठुलो (बर्फको नलीको साथ बर्फ स्नान वा प्रवाह कक्षहरू) द्वारा नियन्त्रणमा राख्न सकिन्छ वा पिउन्ड मोडमा sonication द्वारा। पल्स-मोड सोनिकेशनको समयमा, 1-15 सेकेन्डको छोटो छोटो चक्रको चक्र चल्ने लामो समयसम्मको अवधिमा तापनि प्रजनन र कूलिंगको लागि अनुमति दिन्छ।
सबै अल्ट्रासाउन्ड-चालित प्रक्रियाहरु पुरा तरिकाले reproducible र linearly स्केलेबल हो।

अल्ट्रासोनिक homogenizer VialTweeter एक साथ नमूना 10 परीक्षण ट्यूब को तैयारी को लागि। (विस्तार गर्न क्लिक गर्नुहोस्!)

अल्ट्रासोनिक उपकरण VialTweeter एउटै प्रक्रिया सर्तहरू अन्तर्गत 10 स्लिअलाइन्सको एक साथ नमूना तयारीको लागि अनुमति दिन्छ।

अल्ट्रासोनिक Homogenizers

विभिन्न प्रकारका अल्ट्रासोनिक उपकरणहरू नमूना तयारी लक्ष्यसँग मेल खाने र प्रयोगकर्ता मित्रता आश्वासन र सान्त्वना सुचारु गर्न अनुमति दिन्छ। प्रयोग-प्रकार अल्ट्रासोनिक्स प्रयोगशालामा सबैभन्दा साधारण यन्त्र हुन्। तिनीहरू सानो र मध्य-आकारको नमूनाहरू तयार गर्न सबैभन्दा उपयुक्त छन् 0.1mL सम्म 1000mL सम्मको मात्रा। विभिन्न शक्ति आकारहरू र सोनोट्रोड्सले अल्ट्रासोनिकरेटरलाई नमूना भोल्युम र सबैभन्दा प्रभावी र प्रभावकारी उत्तेजित परिणामहरूको लागि पोर्टल अनुकूलन गर्न अनुमति दिन्छ। जब एक नमूना तयार हुनुको अल्ट्रासोनिक जांच यन्त्र उत्तम छनौट हो।

यदि बढी नमूना तयार हुनुपर्छ भने, जस्तै 8 सेल सेल समाधान, वाियल ट्वीटर वा अल्ट्रोसोनिक कपहोर जस्ता उपकरणहरू lysis को लागि सबैभन्दा उपयुक्त हो homogenizer हुन्। एउटै तीव्रतामा एकै समयमा धेरै भाइरसहरू सोचेका छन्। यसले मात्र बचत गर्दछ, तर यो पनि सबै नमूनाहरूको उपचार सुनिश्चित गर्दछ, जसले नमूनाहरू बीच विश्वसनीय र तुलनात्मक बनाउँछ। यसबाहेक, अल्ट्रासोनिक सोनोटोरोड (अल्ट्रासोनिक जांच, सींग, टिप, वा औंलाको रूपमा पनि चिनिन्छ) को पार गरेर क्रस-प्रदूषणबाट बचाइएको छ। भाइरस प्रयोग गरिसकेपछि, समय-उपभोग सफा-अप र नमूना हानिहरू पोलिसकेका छन्।
उच्च मात्रा को लागि, उदाहरण को लागि सेल निकाय को वाणिज्यिक उत्पादन को लागि निरंतर अल्ट्रासोनिक सिस्टम को प्रवाह सेल रिएक्टर संग सबै भन्दा उपयुक्त छ। संसाधित सामाग्री को निरंतर र यहां सम्म कि प्रवाह पनि sonication को आश्वासन दि्छ। अल्ट्रासोनिक विनाश प्रक्रिया को सबै मापदण्ड अनुकूलित हुन सक्छ र आवेदन को आवश्यकताहरु र विशिष्ट सेल सामाग्री को समायोजित गर्न सक्छन्।
जीवाणु कोशिकाओं को अल्ट्रासोनिक lysing को लागि अनुकरणीय प्रक्रिया:

  • सेल निलम्बन को तयारी: सेल छर्रों को बफर समाधान मा पूर्ण रूप देखि निलम्बन को रूप मा homogenizing (निम्न विश्लेषण संग आफ्नो बफर समाधान संगत छ, जस्तै विशिष्ट क्रोमैटोग्राफी विधि)। यदि आवश्यक हो भने लाइयोसाइमहरू र / वा अन्य additives थप्नुहोस् (तिनीहरू विभाजन / शुद्धिकरण माध्यमको साथ पनि उपयुक्त हुनुपर्छ)। पूरा निलम्बन प्राप्त नभएसम्म समाधानलाई हल्का सनकरण अन्तर्गत समाधान गर्नुहोस्।
  • अल्ट्रासोनिक lysis: नमूना राख्नुहोस् बर्फ स्नानमा। सेल विच्छेदको लागि, 60- 9 0 सेकेन्ड फन्टमा निलम्बनको हिसाब बढाउनुहोस् (तपाईंको अल्ट्रासोनिकरेटरको पल्स मोड प्रयोग गरी)।
  • विभाजन: lysate Centrifugeuge (उदाहरणार्थ 10 मिनेट। 10,000 xg मा; 4degC मा)। सेल गोलीबाट सतहमा अलैंचीलाई सावधानीपूर्वक अलग गर्नुहोस्। चरम्यान्टेंट कुल सेल लयसट हो। अन्वेन्टन्टन्ट को निस्पंदन पछि, तपाईं घुलनशील सेल प्रोटीन को स्पष्ट तरल पदार्थ प्राप्त गर्छन।

जीव विज्ञान र जैव प्रौद्योगिकी मा अल्ट्रासोनिक्स को लागि सबै भन्दा साधारण अनुप्रयोगहरु:

  • कक्ष निकाल्ने तयारी
  • अवरोध खमीर, जीवाणु, रोपण कक्ष, नरम & कडा सेल ऊतक, न्यूक्लिक सामाग्री
  • प्रोटीन निष्कर्षण
  • एंजाइमहरूको तयारी र अलगाव
  • एन्टिगेन्सको उत्पादन
  • डीएनए निष्कर्षण र / वा लक्षित विच्छेदन
  • liposome तैयारी
उच्च शक्ति अल्ट्रासाउन्ड होमगेनसरहरू जस्तै UIP1000hd सेल अवरोध र ब्याच वा निरन्तर प्रवाहमा निकासीको लागि प्रयोग गरिन्छ - यद्यपि मोड। (विस्तार गर्न क्लिक गर्नुहोस्!)

अल्ट्रासोनिक बेंचटट प्रणाली जस्तै UIP1000hd (1kW) जैविक सामाग्री को ठूलो मात्रा मा संसाधित गर्न सक्छ।

जैव प्रौद्योगिकी को क्षेत्र मा बाहिर अल्ट्रासाउंड शाखाहरु को अलग-अलग अनुप्रयोगों, जैवेंगिनरिंग, माइक्रोबायोलॉजी, आणविक जीवविज्ञान, जैव रसायन, इम्युनोलोजी, जीवाणु, प्रोटोमाटिक्स, आनुवंशिकी, फिजियोलोजी, सेलुलर जीवविज्ञान, हेमेटोलोजी र बोटनी।

ग्राहकहरु को आवेदन को मूल्यांकन र अनुकूलन को लागी, हेलसेस्टर अल्ट्रासोनिक्स एक पूरी तरह से लैस प्रदान गर्दछ अल्ट्रासोनिक प्रक्रिया प्रयोगशाला। थप जानकारीको लागि हामीलाई सम्पर्क गर्नुहोस्!

हाम्रो सम्पर्क / थप जानकारी को लागि सोध्नुहोस्

तपाईंको प्रक्रिया आवश्यकताहरु बारेमा कुरा गर्नुहोस्। हामी आफ्नो परियोजनाको लागि सबैभन्दा उपयुक्त सेटअप र प्रशोधन मापदण्डहरु सिफारिस गर्नेछ।





कृपया ध्यान दिनुहोस् गोपनीयता नीति


साहित्य / सन्दर्भ

  • बालासन्डरम, बी .; हरिजन, एस .; ब्रेसवेल, डीजी (200 9): उत्पादन रिलीज रणनीतिहरु मा सुधार र बायोप्रोसेसेस डिजाइन मा प्रभाव। जैव प्रौद्योगिकी मा रुझान 27/8, 200 9। पीपी 477-485।
  • Vilkhu, K .; मनसाह, आर .; Mawson, R .; अशोककुमार, एम। (2011): अल्ट्रासोनिक रिकवरी र खाद्य अवयव को परिमार्जन। यसमा: फेंग / बारबासा-क्यानोभस / वेइस (2011): खाद्य र बायोप्रोसेन्सिंगको लागि अल्ट्रासाउन्ड टेक्नोलोजीहरू। न्यू यर्क: स्प्रिंगर, 2011. पीपी 345-368।