Hielscher Хэт авианы технологи

Sonication lysis: эсийн тасалдал & Хандлах

Эсийн задрал эсвэл лизис нь биотехнологийн лабораторид өдөр тутмын дээж бэлтгэлийн нэг хэсэг юм. Лизийн зорилго нь биологийн молекулыг гаргахын тулд эсийн хананд эсвэл бүрэн эсийн хэсгийг таслахад оршино. Лизат гэж нэрлэгддэг нь плазмид, рецептор, антагонист, уураг, ДНХ, РНХ гэх мэт орно. Лисисын дараах алхмууд нь фракци, организмын тусгаарлалт буюу уураг ба цэвэршүүлэлтийг агуулдаг. Олборлосон материал (= lysate) салангид байх ёстой бөгөөд цаашид судлах, эсвэл хэрэглээ, жишээлбэл протеомын судалгаанд хамаарна. Хэт авианы нэгэн төрлийн төхөөрөмж нь эсийн задралын үр дүнтэй арга хэрэгсэл юм. Хэт авианы эрчимийг үйл явцын параметрийг тохируулах замаар түвшинг нь тогтоож болох тул хамгийн оновчтой, sonication intensity нь маш зөөлөн хүртэл маш их бодисыг тус бүрийг тусгай хэрэглээний шаардлагад нийцүүлэн тохируулах боломжтой байдаг.

Гар зохион байгуулалт

Селектууд нь хагас нэвчилттэй плазмын мембранаар бүрхэгдэж фосфо-липидийн давхаргад (мөн уураг-липидийн давхаргад, гидрофобусын липидууд, гидрофизмийн фосфорын молекулуудаас тогтсон уураг молекулуудаар үүсгэгддэг) эсийн дотоод интерферон (цитоплазм) хоорондын зайг үүсгэдэг. эсийн гаднах орчин. Ургамлын эс ба прокариотик эсүүд нь эсийн ханаар хүрээлэгдсэн байдаг. Целлюлозын олон давхаргын зузаан эсийн ханын улмаас ургамлын эсүүд амьтдын эсээс ч илүү хэцүү байдаг. Органик эс, тухайлбал, цитозкелетрийн эсүүд, цөцгий, митохондрон зэрэг тогтворжсон эсүүд.
Материалыг оноодогоор энэ нь organelles, уурагууд, ДНХ, мRNA эсвэл бусад биомолкулуудыг ялгах, задлахад чиглэгддэг.

Sonication нь эсийн бодисын дээж бэлтгэхэд ихэвчлэн хэрэглэгддэг.

Зураг 1: Хэт авианы олборлолт: Mintha (Mentha piperita) нь микроскоп хөндлөн огтлолын (TS) хэмээх микроскоп хөндлөн огтлол (TS) нь эсээс хэт авианы олборлолт хийх үйлдэл хийх механизмыг харуулж байна (resource: Vilkhu et al. 2011]

Арга зүй

Лизат эсийг хэд хэдэн аргууд байдаг бөгөөд энэ нь механик болон химийн аргуудад хуваагддаг бөгөөд үүнд угаагч бодис эсвэл уусгагч хэрэглэх, өндөр даралтын хэрэглээ, ирмэгийн тээрэм, эсвэл франц хэл дээр хэвлэгддэг. Эдгээр аргын хамгийн хүндрэлтэй асуудал бол процессын параметрүүдийг хянах, зохицуулах нь хэцүү, улмаар нөлөөлнө.
Нийтлэг лизикийн аргын гол сул талууд:

Лизисын янз бүрийн арга

Хүснэгт: эсийн задралын уламжлалт аргууд нь гол сул талуудтай байдаг

Харин sonication нь sonication параметрийг бүрэн хянах боломжийг олгодог эсийн задалдаг маш үр дүнтэй бөгөөд найдвартай арга хэрэгсэл юм. Энэ нь материалын сулрал, бүтээгдэхүүний цэвэршилтийг сонгон шалгаруулах боломжийг нэмэгдүүлдэг. [Balasundaram et al. 2009] Энэ нь бүх төрлийн эсэд тохиромжтой ба жижиг, том хэмжээний хувьд амархан хэрэглэх боломжтой. Ultrasonicators нь цэвэрлэхэд хялбар байдаг. Хэт авианы нэгэн төрлийн болгогч нь цэвэр газар (CIP), ариутгах (SIP) функцийг үргэлж ашигладаг. Sonotrode нь их хэмжээний титанан эвэртэй бөгөөд ус эсвэл уусгагчаар (ажлын орчиноос хамаарч) усыг арчиж, эсвэл угааж болно. Ultrasonicators засвар үйлчилгээ бараг харамсах боломжгүй тэдний хүч чадлаас хамаардаг.

лизис

Лизис бол эмзэг үйл явц юм. Лислийн үед эсийн мембраны хамгаалалт устгагдана. Гэвч олборлож байгаа уураг нь идэвхгүйжүүлэлт, денатураци, задралын уураг нь фффсиологийн орчин (рН-ийн утгаас хазайх) -аас сэргийлэх ёстой. Тиймээс ерөнхий лизисийг буферийн уусмалд хийнэ. Ихэнх бэрхшээл нь хяналтгүй эсийн тасалдалтаас үүдэлтэй бөгөөд үүнд бүх эсийн материалын товчлол болон / эсвэл зорилтот бүтээгдэхүүнийг денатурацид оруулаагүй болно.

Хэт авианы эсийн лизийг лабораторид дээж бэлтгэх болон их хэмжээгээр үйлдвэрлэхэд ашиглаж болно. Томруулж дарна уу!

Зураг 1: 200 ватт хүчтэй хэт авианы нэгэн төрлийн болгогч Uf200 ः т найдвартай, дахин боловсруулсан эсийн лизентэд тоон хяналт, автоматаар мэдээллийг автоматаар бүртгэх боломжтой.

Хэт авианы Lysis

Ерөнхийдөө лабораторийн дээжийг 15 секунд 2 минутын хооронд авах болно. Sonication-ийн эрчимийг далайцыг тохируулах нь маш хялбар байдаг учраас sonication хугацааг тохируулах, түүнчлэн зөв тоног төхөөрөмж сонгох нь эсийн бүтэц, лизингийн зорилгоос хамааран эсийн мембраныг маш зөөлөн эсвэл маш хурдан зогсоох боломжтой байдаг ( Жишээ нь: ДНХ-ийн олборлолт нь илүү зөөлрүүлсэн sonication, бактерийн бүрэн уургийн олборлолтыг илүү хүчтэй хэт авианы эмчилгээ шаарддаг). Үйл явцын температурыг нэгдсэн температурын мэдрэгчээр хянах боломжтой бөгөөд хөргөх (мөсний банн эсвэл хөргөлтийн хүрэмтэй урсгалын эсүүдээр) хяналтыг хялбархан хянах боломжтой эсвэл импульсийн горимоор sonication ашиглан хянах боломжтой. Пульс-горимын sonication үед 1-15 секундын хугацааны богино хугацааны sonication тэсрэлт мөчлөг нь урт хугацааны завсарлагааны туршид халаах, хөргөх боломжийг олгодог.
Бүх хэт авиан шинжилгээнд тулгуурласан процессууд нь бүрэн хэмжээгээр дахин боловсруулж, шугаманаар өргөтгөх боломжтой.

Хэт авианы нэгэн төрлийн болгогч VialTweeter 10 хүртэл хуруу шилний дээжийг нэгэн зэрэг бэлтгэх. (Дарна уу!)

Хэт авианы төхөөрөмж VialTweeter үйл явцын нөхцөлд 10 хуруу шилийг нэгэн зэрэг дээж бэлтгэх боломжийг олгодог.

Хэт авианы нэгэн төрлийн болгогч

Төрөл бүрийн Хэт авианы төхөөрөмж дээжийг бэлтгэх зорилготой нийцүүлэх, хэрэглэгчийн ээлтэй, үйл ажиллагааны тайвшралыг хангахад тусална. Сорьцын төрөл ultrasonicators бол лабораторийн хамгийн түгээмэл төхөөрөмжүүд юм. Эдгээр нь жижиг, дунд хэмжээний дээжийг 0.1 мл хүртэл 1000мл хүртэл бэлтгэхэд тохиромжтой байдаг. Төрөл бүрийн эрчим хүчний хэмжээ, sonotrodes нь хамгийн үр дүнтэй, үр ашигтай sonicating үр дүн нь дээжний хэмжээ болон хөлөг онгоцны ultrasonicator дасан зохицох боломжийг олгодог. Нэг дээжийг бэлтгэх шаардлагатай үед хэт авианы сорьц төхөөрөмж нь хамгийн сайн сонголт юм.

Хэрэв илүү олон дээж бэлтгэх шаардлагатай бол жишээлбэл, эсийн уусмалаас 8 хуруу шил, VialTweeter, эсвэл хэт авианы аягаhorn зэрэг төхөөрөмжүүд нь лизентэд хамгийн тохирсон нэгэн төрлийн болгодог. Хэд хэдэн хуруу шилнүүд ижил эрчимтэй ижил хугацаанд sonicated байна. Энэ нь зөвхөн цаг хугацааг хэмнэхээс гадна бүх дээжийн адил эмчилгээг баталгаажуулдаг бөгөөд ингэснээр дээжүүдийн үр дүнг найдвартай, харьцуулж болох юм. Цаашилбал, хэт авианы sonotrode (бас хэт авианы шалгалт, илрүүлэлтийн, эвэр, үзүүр, эсвэл хуруугаараа гэж нэрлэдэг) дамжин халдвар дамжихаас зайлсхийж байна. Уг хуруу шилийг ашигласнаас хойш хөлөг онгоцыг задлахад цаг хугацаа их шаарддаг цэвэрлэгээ ба дээжийн алдагдал ороогүй болно.
Өндөр эзлэхүүнтэй, жишээлбэл эсийн олборлолтыг үйлдвэрлэхийн тулд урсгалын эсийн реактор бүхий тасралтгүй хэт авианы систем хамгийн тохиромжтой байдаг. Боловсруулсан материалын тасралтгүй, бүр урсгал нь бүр sonication болно. Хэт авианы эвдрэлийн процессын бүх параметрүүдийг оновчтой болгож, програмын болон тусгай эсийн материалын шаардлагуудад тохируулан өөрчилж болно.

Бактерийн эсийн хэт авианы lysing нь үлгэр жишээ журам:

  • Нүдний түдгэлзүүлэлтийг бэлтгэх: Сорьцыг буферын уусмалд нэгэн төрлийн болгоно. Үүнд (жишээ нь, хроматографийн арга гэх мэт) дараахь шинжилгээнд тохирох буфер уусмалыг сонгоно. Шаардлагатай бол lysozymes ба / эсвэл бусад нэмэлтүүд нэмнэ (тэдгээр нь тусгаарлах / цэвэршүүлэх аргатай нийцэх ёстой). Бүрэн түдгэлзүүлэлтийг дуустал зөөлөн зөөлрүүлэх уусмалыг зөөлөн болгоно.
  • Хэт авианы lysis: Дээжийг мөстэй банн дээр байрлуул. Эсийн тасалдалын хувьд, 60-90 дахь тэсрэлтийг (таны ultrasonicator-ийн импульсийн горимыг ашиглан) түдгэлзүүлэх sonicate.
  • Холилолт: Лисатын центрифуг (жишээ нь, 10 минутад 10 минутанд 4 центнер). Холгогчийг анхааралтай болго. Лавлах нь нийт эсийн лизат юм. Шүршигчийг шүүхийн дараа уусдаг эсийн уургийг тодруулсан шингэнийг авна.

Биологи, биотехнологийн ultrasonicators хамгийн түгээмэл хэрэглээ нь:

  • Гараас гаргаж авах
  • Гэнэтийн Мөөгөнцөр, бактери, ургамлын эс, зөөлөн & хатуу эсийн эд, нуклеотидын материал
  • Protein олборлолт
  • Ферментүүдийг бэлтгэх, тусгаарлах
  • Антигенийг үйлдвэрлэх
  • ДНХ-ийн олборлолт ба / эсвэл зорилтот хуваагдал
  • липосомын бэлтгэл
UIP1000hd гэх мэт өндөр хүчдэлийн хэт авианы нэгэн төрлийнжүүлэлтийг эсийн тасалдал болон багц дахь олборлолт, тасралтгүй урсгал-гэхдээ горимд ашигладаг. (Дарна уу!)

Ийм хэт авианы benchtop систем UIP1000hd (1kW) нь биологийн материалыг их хэмжээгээр боловсруулах боломжтой.

Биотехнологи, биоидинжлэх, микробиологи, молекулын биологи, биохими, дархлал судлал, бактериологи, вироологи, протомомикс, генетик, физиологи, эсийн биологи, гематологи, botany зэрэг салбарт хэт авианы салбарыг олон талт хэрэглээ.

Хэрэглэгчийн хүсэлтийг үнэлэх, оновчтой болгохын тулд Hielscher Ultrasonics нь бүрэн тоноглогдсон хэт авианы процесс лаборатори. Дэлгэрэнгүй мэдээллийг бидэнтэй холбогдоорой!

Уран зохиол / Ашигласан материал

  • Balasugaaram, B .; Харрисон, С .; Bracewell, DG (2009): Бүтээгдэхүүний хувилбарын стратеги болон био-боловсруулалтын загварт үзүүлэх нөлөө. Биотехнологийн чиг хандлага 27/8, 2009. хуудас 477-485.
  • Vilkhu, K .; Манассе, Р .; Mawson, R .; Ашоккумар, М. (2011): Хэт авианы боловсруулалт, хүнсний найрлагад тохируулга хийх. In: Feng / Barbosa-Cánovas / Weiss (2011): Хоол хүнс, био боловсруулалтын хэт авианы технологи. Нью Йорк: Springer, 2011. pp. 345-368.

Дэлгэрэнгүй мэдээллийг Холбоо барих / асуу

Таны боловсруулах шаардлагын талаар бидэнтэй ярилц. Бид таны төслийн хамгийн тохиромжтой тохиргоог, боловсруулах параметрүүдийг санал болгож болно.





Биднийг анхаарна уу Нууцлалын бодлого.