បច្ចេកវិទ្យាអ៊ុលត្រាសោនហេលស៊ឺរ។

ការស្រង់ចេញប្រូតេអ៊ីន Ultrasonic ពីកោសិកាក្រពេញនិងកោសិកា

  • ការស្រង់ប្រូតេអ៊ីនគឺជាជំហានរៀបចំគំរូមួយដ៏សំខាន់នៅក្នុងប្រូតេអ៊ីន។
  • ប្រូតេអ៊ីនអាចត្រូវបានគេយកចេញពីរុក្ខជាតិនិងសត្វជាលិកាម្រិតនិងអតិសុខុមប្រាណ។
  • Sonication គឺជាវិធីសាស្រ្តទាញយកប្រូតេអ៊ីនមួយដែលអាចទុកចិត្តបានដែលអាចទុកចិត្តបានផ្តល់ទិន្នផលប្រូតេអ៊ីនខ្ពស់ក្នុងរយៈពេលខ្លីមួយ។

 

ការទាញយកប្រូតេអ៊ីនចេញពីជាលិកានិងកោសិកា។

ការស្រង់ចេញប្រូតេអ៊ីនពីជាលិកានិងកោសិកាវប្បធម៌គឺជាជំហានការរៀបចំសំណាកដ៏សំខាន់ដែលត្រូវបានអនុវត្តកំឡុងពេលបច្ចេកទេសគីមីជីវៈនិងវិភាគជាច្រើនដូចជា ELISA, PAGE, ស្បៀងបស្ចិមប្រទេស, spectrometry ដ៏ធំឬការធ្វើឱ្យប្រូតេអ៊ីន។ Ultrasonic ការរំខានកោសិកា, ការបែងចែកនិងការស្រង់ គឺជាបច្ចេកទេសដែលអាចគ្រប់គ្រងបានយ៉ាងប្រាកដដើម្បីធានាបាននូវទិន្នផលខ្ពស់នៃប្រូតេអ៊ីន។

ការទាញយកប្រូតេអ៊ីនពីជាលិកាសត្វ

សម្រាប់ការរៀបចំជាលិកាដែលមានទំហំទាំងមូល (ឧទាហរណ៍ក្រលៀនបេះដូងសួតសាច់ដុំ។ ល។ ) ជាលិកាគួរតែត្រូវបានបែងចែកទៅជាបំណែកតូចៗជាមួយឧបករណ៍ស្អាតនៅលើទឹកកកនិងអាចធ្វើទៅបានលឿនដើម្បីការពារការរិចរិលដោយសារធាតុការពារ (ឧ។ lysis buffer ដូចជា RIPA ឬ hypotonic lysis buffer ដែលមានផ្ទុកនូវប្រូតេអ៊ីននិងអ៊ីដ្រូហ្សែន (phosphatase inhibitor) ។ បន្ទាប់ពីការបំបែកចេញគំរូត្រូវបានដាក់បញ្ចូលទៅក្នុងអាសូតរាវសម្រាប់ការបង្កក។ គំរូនេះអាចត្រូវបានរក្សាទុកនៅ -៨០ អង្សាសេសម្រាប់ការប្រើប្រាស់នៅពេលក្រោយឬត្រូវបានគេយកទៅ Keept លើទឹកកកសម្រាប់ភាពដូចគ្នាភាវូបនីយកម្មភ្លាមៗ។ ភ្លាមៗមុនពេលការទាញយករ៉ែ ultrasonic, សតិបណ្ដោះអាសន្នលីសសឺរត្រជាក់ (ជាមួយប្រូសេស្តេរ៉ូន DTT, leupeptin និង aprotinin) ត្រូវបានបញ្ចូលទៅក្នុងបំពង់គំរូ (ក្នុងមួយ ~ ១០ មីលីក្រាមនៃជាលិកាប្រហាក់ប្រហែល។ ~ ៦០០ μអិល។ ប្រហាក់ប្រហែល។ 20-60 មីលីក្រាមនៃជាលិកាត្រូវបានណែនាំក្នុងបំពង់គំរូ។
សភាគ ultrasonic, lysis និងការស្រង់ត្រូវបានអនុវត្តជាមួយ homogenizer ultrasonic ដូចជា Uf200 ःមិនUP200St, បំពាក់ដោយ sonotrode micro-tip ។ រយៈពេល sonication គឺ 60-90 វិ។ នៅក្នុងរបៀបវដ្តមួយ ultrasonic នៃ 15 វិ។ sonication និង 10 វិ។ សម្រាកពេល។ គំរូនេះគួររក្សាទុកក្នុងទឹកកកគ្រប់ពេលវេលា។
បន្ទាប់ពីការសភាគ / ultrasonic ultrasonic lysate ត្រូវបាន centrifuged នៅ 27,000g សម្រាប់ប្រហែល។ 20 នាទី។ បន្ទាប់មកគេត្រូវបានគេប្រមូលផ្ដុំដើម្បីឱ្យកំហាប់ប្រូតេអ៊ីនអាចត្រូវបានកំណត់ដោយពិសោធន៍ប្រូតេអ៊ីនដូចជាប្រូតេអ៊ីន Pierce BCA ។

sonic ប្រូតេអ៊ីនគឺជាវិធីសាស្ត្រសំខាន់មួយនៃការរៀបចំគំរូ។

ការទាញយកប្រូតេអ៊ីន Ultrasonic ពីកោសិកាជាមួយ។ UP200St

ស្នើសុំព




ចំណាំរបស់យើង គោលការណ៍​ភាព​ឯកជន


ការទាញយកប្រូតេអ៊ីនពីសេរ៉ូមឈាម

ចំពោះការលាយបញ្ចូលគ្នានៃសេរ៉ូមនិងសតិបំបាក់ផូស្វ័រគំរូត្រូវបានផ្តុំគ្នាជាលើកដំបូងមុនការបែងចែកកោសិកា ultrasonic ។ សម្រាប់ការ lysis ultrasonic, គំរូនេះត្រូវបាន sonicated ជាមួយ homogenizer មន្ទីរពិសោធន៍ ultrasonic ដូចជា UP100H សម្រាប់ 8 វដ្តនៅទំហំ 20%, សម្រាប់វដ្តនៃរយៈពេល 5 វិនាទីនិង 15 វិនាទីបិទ។ Sonocation ត្រូវបានអនុវត្តដោយ sonicationg នៅក្នុងវដ្តនិងដោយការដាក់គំរូនៅលើទឹកកកដូច្នេះការកំដៅសីតុណ្ហភាពឡើងកំដៅនិងកំដៅនៃគំរូត្រូវបានជៀសវាង។ ដោយសារជាតិប្រូតេអ៊ីនមានប្រូតេអ៊ីនម៉ូលេគុលម៉ូលេគុលខ្ពស់ (ដូចជាអាល់ប៊ុមអាល់អ៊ីដឺរីទីសស៊ីន, transferrin, haptoglobulin, immunoglobulin G និង immunoglobulin A) ដែលរំខានដល់ការបំបែកប្រូតេអ៊ីនម៉ូលេគុលទាបក្នុងអំឡុងពេល IEF ។ ពីសេរ៉ូមដោយប្រើជួរឈរហត់នឿយ។

ការទាញយកប្រូតេអ៊ីនពីជាលិការុក្ខជាតិ

ជាលិការុក្ខជាតិស្រស់ៗទន់ឧទាហរណ៍ស្លែ។ ល។ អាចងាយបែកបាក់ដោយគ្រាន់តែដាក់សម្ភារៈគំរូដែលបានច្របាច់បញ្ចូលទៅក្នុងសតិបណ្ដោះអាសន្នលីសស៊ីសសម្រាប់ sonic ។ ជាលិការុក្ខជាតិដែលតឹងរឹងដូចជាគ្រាប់ពូជម្ជុលស្ងួតជាដើមគួរតែស្ងួតនៅលើដី។ សមា្ភារៈរុក្ខជាតិរឹងនិងឈើខ្លះត្រូវតែកកហើយដាក់ក្នុងអាសូតរាវមុនពេលស្រង់ចេញដោយ sonic ។ ចំពោះការផ្អាកវប្បធម៌កោសិការុក្ខជាតិការព្យាបាល ultrasonic រវាង ៣០ និង ១៥០ វិនាទីក្នុងសតិបណ្ដោះអាសន្នលីសស៊ីគឺភាគច្រើនគ្រប់គ្រាន់ហើយ។ សម្ភារៈ Tougher ដូចជាគ្រាប់ល្ពៅតម្រូវឱ្យមានការ sonication ខ្លាំងបន្ថែមទៀតដូចដែលបានពិពណ៌នាខាងក្រោម។

ពិធីការសម្រាប់ការស្រង់ ultrasonic នៃអាល់ប៊ុមពីគ្រាប់ល្ពៅ

សភាគជាលិកា Ultrasonic UP400St ជាមួយ S24d40 - សម្រាប់ការស្រង់ចេញប្រូតេអ៊ីនពីជាលិការុក្ខជាតិនិងសត្វ (ចុចដើម្បីពង្រីក!)សម្រាប់ការស្រង់ប្រូតេអ៊ីន ultrasonic នៃអាល់ប៊ុនពីម្សៅគ្រាប់ល្ពៅដីល្អ 10 ក្រាមនៃម្សៅគ្រាប់ល្ពៅ defatted និង 100 មីលីលីត្រនៃទឹក deionized ជាសារធាតុរំលាយត្រូវបានបន្ថែមនៅក្នុង beaker កញ្ចក់ 250mL ។ ការស្រង់ចេញប្រូតេអ៊ីនមានពីរជំហាន: ដំបូង, គំរូនេះត្រូវបាន sonicated ជាមួយ ultrasonicator ស៊ើបអង្កេតប្រភេទ UP400St (400W, 24kHz) ជាមួយ sonotrode ម៉ោន S24d7 ។ beaker កញ្ចក់ត្រូវបានដាក់ក្នុងអាងងូតទឹកទឹកត្រជាក់ក្នុងកំឡុងពេល homogeneous ultrasonic ។ ការកំណត់នៃ ultrasonicator នេះ UP400St ជាមួយនឹងឧបករណ៏សីតុណ្ហភាពដែលអាចដោតជាប់បានធានាថាសីតុណ្ហភាពគំរូត្រូវបានរក្សាទុកនៅក្រោម 30 អង្សាសេ។ ដោយការត្រួតពិនិត្យសីតុណ្ហភាពច្បាស់លាស់ក្នុងអំឡុងពេលការ sonication, denaturation នៃ albumin ត្រូវបានជៀសវាង។ ទីពីរការស្រង់ចេញត្រូវបានអនុវត្តជាមួយឧបករណ៍លាយល្បឿន 200 នាទីនិង 30 អង្សាសេ។ បន្ទាប់មកកែច្នៃ beaker ត្រូវបានផ្ទេរចូលទៅក្នុងឧបករណ៍កែច្នៃសីតុណ្ហភាព។ Globulin ត្រូវបានយកចេញតាមរយៈការលាងឈាមជាមួយទឹកចម្រោះ។ ក្រោយពីការដកចេញពីប្រូតេអ៊ីនការច្រិបជាតិប្រូតេអ៊ីនអាចត្រូវបានគេយកគំរូសម្រាប់ការកំណត់ប្រូតេអ៊ីនអាល់ប៊ុនហើយត្រូវបានគេកែសម្រួលជាបន្តបន្ទាប់ទៅ pI = 3.0 ដោយប្រើ HCl 0.1 M សម្រាប់ការស្រូបយកអាល់ប៊ុន។ ដំណាក់កាលរឹងត្រូវបានបំបែកដោយ centrifugation នៅ 5000 ក្រាម, 20 ° C និង redissolved នៅក្នុងទឹក deionized ។ ការស្រូបយកអាល់ប៊ុយមីងត្រូវបានធ្វើពីរដងដើម្បីបង្កើនប្រូតេអ៊ីននៅក្នុងការប្រមូលផ្តុំអាលុយមីញ៉ូម។

ការទាញយកប្រូតេអ៊ីនអាល់កាឡាំង ultrasonic សម្រាប់ការរៀបចំប្រូតេអ៊ីនប្រមូលផ្តុំពី bran ស្រូវបានបង្ហាញថាការព្យាបាល ultrasonic លទ្ធផលនៅក្នុងទិន្នផលខ្ពស់ប្រូតេអ៊ីននៅក្នុងពេលស្រង់ខ្លីមួយយ៉ាងខ្លាំង – បើប្រៀបធៀបទៅនឹងវិធីសាស្រ្តទាញយកធម្មតា។

ឧបករណ៍ Ultrasonic VialTweeter សម្រាប់ការស្រង់ប្រូតេអ៊ីនពីសំណាកជាលិកា (ចុចដើម្បីពង្រីក!)

VialTweeter សម្រាប់ sonic ដោយប្រយោល។

គុណសម្បត្តិ

  • ឆាប់រហ័ស
  • ទិន្នផលខ្ពស់
  • មានប្រសិទ្ធិភាពខ្ពស់
  • ការត្រួតពិនិត្យជាក់លាក់លើប៉ារ៉ាម៉ែត្រ
  • លទ្ធផលដែលអាចបន្តពូជបាន
  • លទ្ធភាពពង្រីកលីនេអ៊ែរ

គំរូរៀបចំគំរូសម្រាប់អង់ស៊ីម iNOS ដែលមានមុខងារ

ដើម្បីទទួលបានអង់ហ្ស៊ីម iNOS ដែលមានមុខងារពេញលេញ (ឧទាហរណ៏សំរាប់ការត្រួតពិនិត្យថ្នាំ) ពិធីការខាងក្រោមត្រូវបានណែនាំ: ការព្យួរកោសិកាគួរតែត្រូវបានដាក់នៅលើទឹកកកនិង sonication ជាមួយ UP100H នៅទំហំ10μmនៅក្នុងរបៀបវដ្តនៃ 5 វិ។ sonication និង 25 វិ។ សម្រាកនៅលើទឹកកក។ នីតិវិធីគួរត្រូវបានធ្វើឡើងវិញប្រហែល។ 3 ដង។ ពេលវេលាសម្រាកនៅរវាងវដ្តនៃការ sonication កាត់បន្ថយការកើនឡើងសីតុណ្ហាភាពហើយដូច្នេះនឹងកាត់បន្ថយហានិភ័យនៃការ denaturation នេះ។

Solubilization ប្រូតេអ៊ីន Ultrasonic

sonication អាចពន្លឿនដំណើរការរលាយប្រូតេអ៊ីនដែលជាធម្មតាតម្រូវឱ្យមានជាច្រើនម៉ោង។ នៅក្នុងលំដាប់មិនត្រូវ overheat គំរូនិងបងា្ករការរិចរិលប្រូតេអ៊ីននិងការកែប្រែនៅក្នុងដំណោះស្រាយដែលផ្ទុកអ៊ុយនោះការផ្ទុះ ultrasonic មិនគួរមានរយៈពេលយូរជាងពីរបីវិនាទី។

សេចក្តីណែនាំទូទៅ

ការគ្រប់គ្រងសីតុណ្ហភាព: ដើម្បីធានាបាននូវទិន្នផលប្រូតេអ៊ីនខ្ពស់ដោយគ្មានការបម្លែងកំដៅ, សីតុណ្ហភាពក្នុងកំឡុងពេលទាញយកត្រូវបានគ្រប់គ្រង។ សភាគ ultrasonic Hielscher របស់រដ្ឋ – ហៅផងដែរថា disintegrator ultrasonic ឬ sonificator – គឺអាចគ្រប់គ្រងបានយ៉ាងពិតប្រាកដ។ ពួកគេមកជាមួយឧបករណ៏សីតុណ្ហភាពដែលអាចបញ្ចូលបាន។ នៅក្នុងជម្រើសការកំណត់នៃសភាគ ultrasonic សីតុណ្ហាភាពអតិបរមាអាចត្រូវបានកំណត់។ នៅពេលដែលឈានដល់សីតុណ្ហភាពអតិបរមានេះ ultrasonicator ឈប់ដោយស្វ័យប្រវត្តិរហូតដល់គំរូបាន cooled ចុះ។
សតិបណ្តោះអាសន្ន: ការជ្រើសរើសឈុតសតិបណ្ដោះអាសន្នសមស្របនិងទំហំនៃសតិបណ្ដោះអាសន្នប្រែប្រួលពីជាលិកាទៅជាលិកាហើយត្រូវបានកំណត់ដោយការធ្វើតេស្តសាកល្បងនិងកំហុស។
ការញែកចេញ / ការបន្សុទ្ធ: Lysates ប្រូតេអ៊ីនអាចផ្ទុកនូវបរិមាណជីវម៉ាសច្រើនដូចជា DNA ឬកាបូអ៊ីដ្រាតដែលអាចត្រូវបានយកចេញដោយរបបទឹកភ្លៀង (Deoxycholate-trichloroacetic acid) ឬការផ្លាស់ប្តូរសតិបណ្ដោះអាសន្ន។

Chittapalo និង Noomhorm (2009) បានរាយការណ៍ថាទិន្នផលប្រូតេអ៊ីនបានកើនឡើងដោយប្រើការ sonication និងថាការបង្កើតសភាគជាលិកានិង ultrasonic ultrasonic អាចបង្កើនដំណើរការទាញយកដែលមានស្រាប់យ៉ាងខ្លាំង។ – អនុញ្ញាតសម្រាប់ឱកាសទាញយកពាណិជ្ជកម្មថ្មី។

ការការពារសំឡេងជាមួយឧបករណ៍ស្តាប់សំឡេង Hielscher របស់ SPB -L និងឧបករណ៍ ultrasonic UP200St ។ (ចុចដើម្បីពង្រីក!)

សភាគជាលិកា Ultrasonic UP200St សម្រាប់ការស្រង់ប្រូតេអ៊ីនមានប្រសិទ្ធិភាព

ការត្រួតពិនិត្យច្បាស់លាស់នៃការព្យាបាល ultrasonic នេះ (Click to enlarge!)

ការត្រួតពិនិត្យកម្មវិធីរុករកសម្រាប់ប្រតិបត្ដិការច្បាស់លាស់និងការត្រួតពិនិត្យដំណើរការ sonication នេះ

ឧបករណ៍ Ultrasonic សម្រាប់ការស្រង់ចេញប្រូតេអ៊ីន

Hielscher Ultrasonics ផ្តល់នូវជួរធំទូលាយនៃ homogenizers ultrasonic សម្រាប់ disintegration នៃកោសិកាជាលិកា, បាក់តេរី, microorganisms, ផ្សិតនិង spores ។
Hielscher មន្ទីរពិសោធន៍ ultrasonic គឺមានអនុភាពនិងងាយស្រួលក្នុងការតិបត្តិការ។ ត្រូវបានកសាងឡើងសម្រាប់ប្រតិបត្តិការ 24 ម៉ោងហើយពួកគេត្រូវបានរចនាឡើងជាឧបករណ៍ពិសោធន៍រឹងមាំនិងប្រសិទ្ធភាពនិងឧបករណ៍លេងជាកីឡាករបម្រុង។ សម្រាប់ឧបករណ៍ទាំងអស់ថាមពលនិងទំហំអាចត្រូវបានគ្រប់គ្រងបានយ៉ាងច្បាស់។ ជួរធំទូលាយនៃ េ្រគងបន បើកជម្រើសការដំឡើងបន្ថែម។ ឧបករណ៍ឌីជីថលដូចជា VialTweeter,, Uf200 ःមិន,, UP200St, និង UP400St មានការត្រួតពិនិត្យសីតុណ្ហភាពរួមបញ្ចូលគ្នានិងកាត SD បានសាងសង់ក្នុងសម្រាប់ការថតទិន្នន័យស្វ័យប្រវត្តិ។
ចំពោះការប្រយោលការឆ្លងកាត់គ្មានការចម្លងរោគដោយឥតគិតថ្លៃនិងដំណាលគ្នានៃសំណាកច្រើនយើងផ្តល់ជូន VialTweeterUltrasonic CupHorn
អាស្រ័យលើកម្មវិធីសម្ភារៈនិងទំហំសំណាករបស់អ្នកយើងនឹងណែនាំអ្នកនូវការរៀបចំដែលសមរម្យបំផុតសម្រាប់គំរូគំរូរបស់អ្នក។ ទាក់ទងយើងនៅថ្ងៃនេះ!

ទាក់ទង​មក​ពួក​យើង! / សួរយើងខ្ញុំ!

សូមប្រើប្រាស់សំណុំបែបបទខាងក្រោមប្រសិនបើអ្នកចង់ស្នើសុំបន្ថែមអំពីការ homogenization ultrasonic ។ យើងនឹងរីករាយក្នុងការផ្តល់ជូនលោកអ្នកនូវប្រព័ន្ធ ultrasonic ការជួបតម្រូវការរបស់អ្នក។









សូមចំណាំរបស់យើង គោលការណ៍​ភាព​ឯកជន


អក្សរសិល្ប៍ / ឯកសារយោង

  • Chittapalo T, Noomhorm A (ឆ្នាំ 2009): ការស្រូបយកសារធាតុប្រូតេអ៊ីន Ultrasonic ពីប្រូតេអ៊ីនពីកន្ទក់អង្ករនិងលក្ខណៈសម្បត្តិនៃប្រូតេអ៊ីន។ Int J Food Sci Technol 44: 1843-1849 ។
  • ស៊ឹមសឹសអាន់ឌ្រអេសៈ; Pereira, Diane M;; Amaral, Joana D; ណុនអាណាអេហ្វ; ហ្គូមសឺសូអ៊ីអ៊ី ;; Rodrigues, Pedro អិម; Lo, Adrian C; ដឹហូហូ, រូឌ; កាច់ចង្កូត Clifford J ;; Thibodeau, Stephen N .; Borralho, Pedro អិម; Rodrigues, MP Cecília (ឆ្នាំ ២០១៣)៖ ការស្តារប្រូតេអ៊ីន ឲ្យ មានប្រសិទ្ធិភាពពីសំណាកប្រភពជាច្រើនបន្ទាប់ពីការទាញយក trizol ឬ trizol LS RNA និងរក្សាទុករយៈពេលយូរ។ ប៊ីអឹមស៊ីហ្សែនឆ្នាំ ២០១៣, ១៤: ១៨១ ។


ហេតុការណ៍តម្លៃដោយដឹងថា

ប្រូតេអ៊ីន

ប្រូតេអ៊ីនគឺជាវាលស្រាវជ្រាវដែលស៊ើបអង្កេតប្រូតេអ៊ីននិងប្រូតេអ៊ីន។ ប្រូតេអ៊ីនបំពេញបន្ថែមនូវអារេដ៏ធំធេងនៃមុខងារសំខាន់ៗនៅក្នុងសារពាង្គកាយ។ ប្រូតេអ៊ីនគឺជាប្រូតេអ៊ីនទាំងមូលដែលសម្តែងដោយហ្សែនក្រឡាជាលិការឬសារពាង្គកាយក្នុងពេលជាក់លាក់ណាមួយ។ ប្រូតេអ៊ីនប្រែប្រួលទៅតាមតម្រូវការពេលវេលានិងភាពខុសគ្នាឬភាពតានតឹងដែលកោសិការឬសារពាង្គកាយឆ្លងកាត់។ ជាងនេះទៅទៀតវាគឺជាសំណុំនៃប្រូតេអ៊ីនដែលបានសម្តែងនៅក្នុងប្រភេទនៃកោសិកាឬសារពាង្គកាយដែលបានផ្តល់ឱ្យនៅពេលវេលាណាមួយដែលស្ថិតនៅក្រោមលក្ខខណ្ឌដែលបានកំណត់។ ពាក្យនេះគឺជាការបញ្ចូលគ្នានៃប្រូតេអ៊ីននិងហ្សែន។ ប្រូតេអ៊ីនគឺជាការសិក្សាអំពីប្រូតេអ៊ីន។

ប្រូតេអ៊ីន

ប្រូតេអ៊ីនគឺជាជីវឧស្ម័នធំដែលគេហៅថាម៉ូលេគុល – ដែលត្រូវបានផ្សំឡើងពីច្រវ៉ាក់មួយឬច្រើននៃកាកសំណល់អាមីណូ។ ប្រូតេអ៊ីនមានវត្តមាននៅក្នុងគ្រប់សារពាង្គកាយទាំងដើមកំណើតរុក្ខជាតិនិងរុក្ខជាតិហើយវាមានសារៈសំខាន់សម្រាប់មុខងារជីវសាស្រ្តភាគច្រើន។ ដោយសារប្រូតេអ៊ីនមានផ្ទុកព័ត៌មានជីវវិទ្យាជាច្រើនវាត្រូវបានគេយកចេញសម្រាប់គោលបំណងវិភាគដូចជាការស្រាវជ្រាវខាងប្រូតេអ៊ីនជាដើម។ មុខងារដ៏សំខាន់បំផុតដែលត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រូតេអ៊ីនរួមមាន catalysis នៃប្រតិកម្មមេតាប៉ូលីសការចម្លង DNA ជាការឆ្លើយតបទៅនឹងការរំញោចនិងការដឹកជញ្ជូនម៉ូលេគុលពីទីតាំងមួយទៅកន្លែងមួយទៀត។ ប្រូតេអ៊ីនមានភាពខុសប្លែកពីគ្នាទៅវិញទៅមកជាចម្បងក្នុងលំដាប់អាមីណូអេតដ៍ដែលត្រូវបានបញ្ជាដោយលំដាប់នុយក្លេអ៊ែរនៃហ្សែនរបស់ពួកគេហើយជាធម្មតាវាបណ្តាលឱ្យប្រូតេអ៊ីនចូលទៅក្នុងរចនាសម្ព័ន្ធបីជាន់ជាក់លាក់ដែលកំណត់ពីសកម្មភាពរបស់វា។ ប្រូតេអ៊ីនមាន – ក្រៅពី peptides – មួយនៃសមាសភាគសំខាន់នៃអាហារ។ ដូច្នេះប្រូតេអ៊ីនគឺជាឧបករណ៍ដ៏មានឥទ្ធិពលមួយនៅក្នុងវិទ្យាសាស្ត្រម្ហូបអាហារដើម្បីបង្កើនប្រសិទ្ធភាពដំណើរការសុវត្ថិភាពចំណីអាហារនិងការវាយតម្លៃអាហារូបត្ថម្ភ។

ជែលអេឡិចត្រូរីស

វិធីសាស្រ្តអេឡិចត្រូម៉ាសអេឡិចត្រូម៉ាសគឺជាវិធីសាស្រ្តដ៏សំខាន់ក្នុងការបំបែកនិងការវិភាគលើម៉ូលេគុលដូចជា DNA, RNA និងប្រូតេអ៊ីនក៏ដូចជាបំណែករបស់វាអាស្រ័យលើទំហំនិងបន្ទុករបស់វា។ វាត្រូវបានប្រើក្នុងគីមីសាស្ត្រដើម្បីបំបែកប្រូតេអ៊ីនដោយបន្ទុកនិង / ឬទំហំ (អ៊ីហ្វែរអេហ្វាហ្សែសដែលមានទំហំឯករាជ្យសំខាន់) និងក្នុងជីវគីមីសាស្ត្រជីវវិទ្យាម៉ូលេគុលនិងប្រូម៉ូមដើម្បីបំបែកជាបំណែកនៃ DNA និង RNA បំណែកតាមប្រវែងដើម្បីប៉ាន់ស្មានទំហំ DNA ។ និងបំណែក RNA ឬដើម្បីបំបែកប្រូតេអ៊ីនដោយបន្ទុក។

កោសិកាកោសិកា

វប្បធម៌កោសិកាគឺជាដំណើរការដែលកំពុងគ្រប់គ្រងដោយកោសិកាដែលត្រូវបានដាំដុះក្រោមលក្ខខណ្ឌគ្រប់គ្រង។ ស្ថានភាពកោសិកាខុសគ្នាចំពោះប្រភេទកោសិកានីមួយៗ។ ជាទូទៅបរិយាកាសនៃកោសិការបស់កោសិកាមានសមស្រប (ឧទាហរណ៍ Petri) ជាមួយស្រទាប់ខាងក្រោមឬមធ្យមដែលផ្គត់ផ្គង់ជីវជាតិសំខាន់ៗ (អាស៊ីតអាមីណូកាបូអ៊ីដ្រាតវីតាមីនជាតិរ៉ែ) កត្តាលូតលាស់អ័រម៉ូននិងឧស្ម័ន (CO2, O2) និងធ្វើនិយ័តកម្មបរិស្ថានជីវសាស្រ្តគីមី (សតិបណ្តោះអាសន្ន pH, សម្ពាធ osmotic សីតុណ្ហភាព) ។ កោសិកាភាគច្រើនត្រូវការស្រទាប់ខាងក្រោមឬសិប្បនិម្មិតខណៈដែលកោសិកាផ្សេងទៀតអាចត្រូវបានដាំដុះដោយឥតគិតថ្លៃអណ្តែតនៅក្នុងវប្បធម៌មធ្យម (វប្បធម៌ផ្អាកការព្យួរក្រឡា) ។
វប្បធម៌ដ៏ធំនៃបន្ទាត់កោសិកាសត្វត្រូវបានគេប្រើនៅក្នុងការផលិតវ៉ាក់សាំងឧស្សាហកម្មនិងផលិតផលិតផលជីវសាស្រ្តផ្សេងៗទៀត។ កោសិកាដើមរបស់មនុស្សត្រូវបានពង្រីកដើម្បីពង្រីកចំនួនកោសិកានិងធ្វើឱ្យកោសិកាខុសគ្នាទៅនឹងប្រភេទកោសិកា somatic ជាច្រើនសម្រាប់គោលបំណងប្តូរសរីរាង្គ។

គំរូក្រពេញ

ជាលិការយៈកាលពិពណ៌នាអំពីមជ្ឈដ្ឋានកោសិកាដែលជាកន្លែងសម្ភារៈរបស់កោសិកាស្ថិតនៅលើកម្រិតនៃការរៀបចំរវាងកោសិកានិងសរីរាង្គពេញលេញ។ នៅក្នុងជាលិកាកោសិកាដែលស្រដៀងគ្នាពីប្រភពដើមដូចគ្នាដែលរួមគ្នាអនុវត្តមុខងារជាក់លាក់ត្រូវបានជួបប្រជុំគ្នា។ តាមរយៈការបង្កើតជាលិកាជាច្រើនមុខងាររចនាសម្ព័ន្ធសរីរាង្គស្មុគស្មាញត្រូវបានបង្កើតឡើង។
ជាលិកាត្រូវបានយកធ្វើជាគំរូសម្រាប់ការស្រាវជ្រាវផ្នែកជីវវិទ្យាប្រវត្តិវិទ្យា / អ៊ីស្តូថូទិក, ធាតុបង្កជំងឺជីវរសាយនវិទ្យា immunohistochemistry ក៏ដូចជាដើម្បីដាំដុះនិងទាញយកឌីអិនអេ។ វាអាចត្រូវបានសម្គាល់រវាងសត្វ (ផ្នែករង: ជាលិកាថនិកសត្វ) និងជាលិការុក្ខជាតិ។ ជាលិកាសត្វត្រូវបានដាក់ជាក្រុមទៅជាបួនប្រភេទមូលដ្ឋាននៃជាលិកាភ្ជាប់សាច់ដុំសរសៃប្រសាទនិងជាលិការ។ ជាលិការុក្ខជាតិត្រូវបានបែងចែកទៅជាប្រព័ន្ធជាលិកា ៣ ដូចខាងក្រោមៈអេពីដេសជាលិការដីនិងជាលិការសរសៃឈាម។
សំណាកជាលិកាអាចត្រូវបានរៀបចំពីផ្នែកសត្វឬរុក្ខជាតិឧទាហរណ៍ឆ្អឹងសាច់ដុំស្លឹក។ ល។

វត្ថុរាងកាយ

ឈាមសេរ៉ូមប្លាស្មារាវសារ៉ាយស្បូនទឹកមាត់និងសារធាតុរាវ synovial គឺជាសារធាតុរាវរាងកាយដែលផ្តល់ជូននូវប្រភពដ៏អស្ចារ្យនៃព័ត៌មានទាក់ទងនឹងរោគវិនិច្ឆ័យ។ ដូច្នេះការរៀបចំស្មុគស្មាញនៃសំណាកវត្ថុរាវក្នុងរាងកាយសម្រាប់ការវិភាគគឺមានសារៈសំខាន់។ ការលំបាកទីមួយត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់ទៅនឹងជួរថាមវន្តនៃសមាសធាតុដែលមានវត្តមាននៅក្នុងវត្ថុរាវរាងកាយ។

ការកំណត់កំហាប់ប្រូតេអ៊ីន

ការធ្វើតេស្ត Bradford, ការពិសោធន៍ Lowry និងអាស៊ីត bicinchoninic (BCA) គឺជាការធ្វើតេស្តទូទៅដើម្បីកំណត់ពីការប្រមូលផ្តុំប្រូតេអ៊ីន។ អាល់ប៊ុមអាល់កាឡាំង (BSA) គឺជាប្រភេទមួយក្នុងចំណោមស្តង់ដារប្រូតេអ៊ីនដែលគេនិយមប្រើច្រើនបំផុត។

Lysis Buffer

សាប៊ូ Lysis ត្រូវតែត្រូវបានជ្រើសរើសយោងតាមសម្ភារៈរបស់កោសិកាឬជាលិកា (ជាលិកាវប្បធម៌រោងចក្របាក់តេរីផ្សិតជាដើម) និងថាតើកោសិកាមាននៅក្នុងរចនាសម្ព័ន្ធនិងប្រភេទនៃរចនាសម្ព័ន្ធ។ ជួរដ៏ធំទូលាយមួយនៃសតិបណ្ដោះអាសន្នសម្រាប់ការស្រង់នៃប្រូតេអ៊ីនភ្នាសនិងសរីរាង្គត្រូវបានបង្កើតដោយសារធាតុសាប៊ូមួយឬច្រើន។ ជាធម្មតាការសម្អាតជាតិត្រូវបានជ្រើសរើសតាមរយៈតេស្តសាកល្បងនិងកំហុស – ប្រសិនបើមាន – នេះបើយោងតាមសារធាតុប្រូតេអ៊ីនដែលមានស្រាប់។ សារធាតុសាប៊ូត្រូវតែឆបគ្នាជាមួយនឹងប្រភពជាលិកានិងប្រូតេអ៊ីន។ ជាទូទៅសារធាតុសូលុយស្យុងដែលល្អបំផុតដែលធ្វើការសម្រាប់ជាលិកា / ប្រូតេអ៊ីនជាក់លាក់ត្រូវបានជ្រើសរើសដើម្បីរក្សាមុខងារអតិបរមានៃសារធាតុចម្រាញ់។ លើសពីនេះទៀតនៅក្នុងករណីនៃការស្រង់ចេញនៃភ្នាសនិង organelles មួយ detergent ស្រាលរក្សាអន្ទាក់ដដែល។ សារធាតុសូលុយស្យុងដែលត្រូវបានគេប្រើជាទូទៅនៅក្នុងសតិបណ្ដោះអាសន្នគឺភាគច្រើនមិនមែនជាអ៊ីយ៉ូដឬហ្សីវរីតេនីកឧទាហរណ៍ CHAPS, deoxycholate, Triton ™ X-100, NP40 និង Tween 20 ។
ឧទាហរណ៍ជាលិកាដូចជាខួរក្បាលថ្លើមពោះវៀនតម្រងនោមល្លីលជាដើមអាចត្រូវបានចងចាំជាធម្មតាជាមួយ RIPA – ទោះជាយ៉ាងណាក៏ដោយគួរតែត្រូវបានបញ្ចូលក្នុង protease inhibitors និង DTT (ឧ។ សម្រាប់អេឡិចត្រូម៉ាញ៉េទិច) ។
លីសឺសឺរសឺរសម្រាប់ជាលិកាសាច់ដុំឆ្អឹង (ត្រជាក់)៖ ២០ ម។ ម។ ទ្រី (ទំ .៨ .៨) ១៣៧ ម។ អិល។ អិល។ ក ២,៧ ម។ អិលខេអិល ១ ម។ ម។ ម។ អិល .២, ១ ភាគរយទ្រីថុន - ១០០, ១០ ភាគរយ (វ៉។ ម។ ) គ្លីសេរីន ១ ម។ ល។ , មីងឌីធូថូលុលបន្ថែម ១ មីលីក្រាមជាមួយនឹងស្រាក្រឡុក protease និង phosphatase ។
តារាងសតិបណ្ដោះអាសន្នធម្មតានិងជួរ pH របស់ពួកគេ។ ជាទូទៅសតិបណ្ដោះអាសន្នទាំងនេះត្រូវបានប្រើជាធម្មតានៅកំហាប់ ២០-៥០ ម។

សតិបណ្ដោះអាសន្ន។ ជួរ pH ។
អាស៊ីតនៃក្រូចឆ្មា។ – ណាអូអេ។ ២.២ – ៦.៥
សូដ្យូម citrate ។ – អាស៊ីតនៃក្រូចឆ្មា។ ៣.០ – ៦.២
សូដ្យូមអាសេតាត។ – អាស៊ី​ត​អា​សេ​ទិច ៣.៦ – ៥.៦
អំបិលអាស៊ីតកាកាឌីលីក។ – អេសអិល 5.0 – ៧.៤
អិមអេស។ – ណាអូអេ។ ៥.៦ – ៦.៨
ផូស្វាតសូដ្យូមឌីដ្រូហ្សែន។ – ផូស្វ័រអ៊ីដ្រូសែនឌីអុកស៊ីត។ ៥.៨ – ៨.០
Imidazole ។ – អេសអិល ៦.២ – ៧.៨
MOPS ។ – កូ ៦.៦ – ៧.៨
Triethanolamine hydrochloride ។ – ណាអូអេ។ ៦.៨ – ៨.៨
ទ្រីស។ – អេសអិល ៧.០ – ៩.០
ហេ – ណាអូអេ។ ៧.២ – ៨.២
ទ្រីលីន។ – ណាអូអេ។ ៧.៦ – ៨.៦
សូដ្យូម tetraborate ។ – អាស៊ីត boric ។ ៧.៦ – ៩.២
ប៊ីស៊ីន។ – ណាអូអេ។ ៧.៧ – ៨.៩
glycine – ណាអូអេ។ ៨.៦ – ១០.៦

សតិបណ្ដោះអាសន្នភាគច្រើនបង្ហាញពីការពឹងផ្អែក pH ជាមួយសីតុណ្ហភាព។ នេះជាការពិតជាពិសេសសម្រាប់សតិបណ្ដោះអាសន្នទ្រីស។ pKa ផ្លាស់ប្តូរពី ៨.០៦ នៅ ២៥ អង្សាសេទៅ ៨.៨៥ នៅ ០ អង្សាសេ។
(pH និង pKa នៃសតិបណ្ដោះអាសន្ន: pH វាស់កំហាប់អ៊ីយ៉ុងអ៊ីដ្រូសែនក្នុងសូលុយស្យុង aqueous ។ pKa (= ការបំបែកអាស៊ីតថេរ) គឺជាការទាក់ទងប៉ុន្តែមានវិធានការជាក់លាក់ជាងនេះក្នុងនោះវាជួយព្យាករណ៍ថាតើម៉ូលេគុលនឹងមានសកម្មភាពជាក់លាក់យ៉ាងដូចម្តេច។ តម្លៃ pH ។ )

TRIzol ។

TRIzol គឺជាដំណោះស្រាយគីមីដែលត្រូវបានប្រើដើម្បីទាញយក RNA / DNA / ប្រូតេអ៊ីនក្នុងកំឡុងពេលទាញយករ៉ែ guanidinium thiocyanate-phenol-chloroform ។ ការប្រើប្រាស់នៃការទាញយក TRIzol ដែលបានជួយជាលទ្ធផលនៅក្នុង DNA ខ្ពស់ RNA និងទិន្នផលប្រូតេអ៊ីនពីគំរូដូចគ្នានិងហួសពីវិធីសាស្រ្តទាញយកផ្សេងទៀត។