បច្ចេកវិទ្យាអ៊ុលត្រាសោនហេលស៊ឺរ។

Sonication Lysis: ការរំខានកោសិកា។ & ទាញយក

ការបំផ្លាញកោសិកាឬការបែងចែកសាច់ដុំគឺជាផ្នែកមួយនៃការរៀបចំគំរូប្រចាំថ្ងៃនៅក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍ជីវវិទ្យា។ គោលបំណងនៃការបែងចែកគឺដើម្បីរំខានដល់ផ្នែកខ្លះនៃជញ្ជាំងក្រឡាឬកោសិកាពេញលេញដើម្បីដោះលែងម៉ូលេគុលជីវសាស្រ្ត។ Lysate ដែលគេហៅថាអាចមាននៅក្នុងឧទាហរណ៍ plasmid, ការទទួល receptor, ប្រូតេអ៊ីន, DNA, RNA ជាដើម។ ល។ ជំហានខាងក្រោមនៃការបែងចែកសារធាតុ lyse គឺការបំបែក, ឯកោ organelle និង / និងការស្រង់ចេញប្រូតេអ៊ីននិងការបន្សុត។ សម្ភារៈដែលបានស្រង់ចេញ (= lysate) ត្រូវបានបំបែកចេញហើយត្រូវស្ថិតនៅក្រោមការស៊ើបអង្កេតឬកម្មវិធីបន្ថែមដូចជាការស្រាវជ្រាវប្រូតេអ៊ីន។ homogenizers Ultrasonic គឺជាឧបករណ៍ទូទៅសម្រាប់ lysis កោសិកាដែលទទួលបានជោគជ័យ។ ក្នុងនាមជាអាំងតង់ស៊ីតេ ultrasonic អាចត្រូវបាន leveled ដោយលៃតម្រូវប៉ារ៉ាម៉ែត្រដំណើរការអាំងតង់ស៊ីតេ sonic ល្អប្រសើរបំផុតពីទន់ខ្លាំងណាស់អាចពិបាកក្នុងការកំណត់បុគ្គលសម្រាប់សារធាតុនិងមធ្យមដើម្បីបំពេញតាមតម្រូវការកម្មវិធីជាក់លាក់។

រចនាសម្ព័ន្ធកោសិកា

ក្រឡាត្រូវបានការពារដោយភ្នាសផ្លាស្ទិចពាក់កណ្តាលដែលមាននៅក្នុងប៊ីលីហ្វាលលីបិត (ប្រូតេអ៊ីននិងខ្លាញ់ទ្វេដងដែលត្រូវបានបង្កើតឡើងដោយម៉ូលេគុលប្រូតេអ៊ីននិងម៉ូលេគុលផូស្វ័រដែលមានអ៊ីដ្រូហ្វីលជាមួយម៉ូលេគុលប្រូតេអ៊ីនដែលបង្កប់) និងបង្កើតរបាំងការពាររវាងផ្នែកខាងក្នុងកោសិកា (cytoplasm) និង បរិយាកាស extracellular នេះ។ កោសិការុក្ខជាតិនិងកោសិកា prokaryotic ត្រូវបានហ៊ុំព័ទ្ធដោយជញ្ជាំងកោសិកា។ ដោយសារតែស្រទាប់កោសិកាក្រាស់ក្រាស់របស់ cellulose កោសិការុក្ខជាតិគឺពិបាកក្នុងការកំចាត់កោសិកាជាងកោសិការបស់សត្វ។ ផ្នែកខាងក្នុងកោសិកាដូចជា organelles, nucleus, mitochondrion, ត្រូវបានរក្សាស្ថេរភាពដោយឆ្អឹងកង។
ដោយការបោសសំអាតកោសិកាវាមានបំណងទាញយកនិងបំបែកសារពាង្គកាយប្រូតេអ៊ីន DNA អិមរ៉ាអិនអេឬជីវម៉ូលេគុលផ្សេងៗទៀត។

Sonication ត្រូវបានប្រើជាទូទៅសម្រាប់ការរៀបចំគំរូនៃរូបធាតុកោសិកា។

រូបភាពទី 1: ទាញយក ultrasonic ពីកោសិកា: ផ្នែកតាមមីក្រូទស្សន៍ (TS) នៃដើម apical នៃ mint (Mentha piperita) បង្ហាញយន្តការនៃសកម្មភាពក្នុងអំឡុងពេលស្រង់ចេញ ultrasonic ពីកោសិកា (ការពង្រីក 2000x) [ធនធាន: Vilkhu et al ។ ឆ្នាំ 2011]

វិធីសាស្រ្ត

មានវិធីជាច្រើនដើម្បី lysate កោសិកាដែលអាចត្រូវបានបែងចែកទៅជាវិធីសាស្រ្តមេកានិចនិងគីមីដែលរួមបញ្ចូលទាំងការប្រើ detergents ឬសារធាតុរំលាយការអនុវត្តសម្ពាធខ្ពស់ឬការប្រើនៃរោងម៉ាស៊ីនកិនឬកាសែតបារាំងមួយ។ គុណវិបត្តិដែលមានបញ្ហាបំផុតនៃវិធីសាស្រ្តទាំងនេះគឺការត្រួតពិនិត្យពិបាកនិងការកែតម្រូវប៉ារ៉ាម៉ែត្រដំណើរការនិងផលប៉ះពាល់។
គុណវិបត្តិចម្បងនៃវិធីសាស្រ្តឡៃហ្សីធម្មតា:

បច្ចេកទេសកាកសំណល់ផ្សេងៗគ្នា

តារាង: វិធីសាស្រ្តនៃការបំផ្លាញកោសិកាមានគុណវិបត្តិយ៉ាងធ្ងន់ធ្ងរ

ផ្ទុយទៅវិញការ sonication គឺជាឧបករណ៍ដែលមានប្រសិទ្ធភាពនិងអាចទុកចិត្តបានសម្រាប់ការបែកបាក់កោសិកាដែលអនុញ្ញាតឱ្យមានការត្រួតពិនិត្យពេញលេញលើប៉ារ៉ាម៉ែត្រ sonic ។ នេះធានានូវជម្រើសខ្ពស់លើការបញ្ចេញវត្ថុធាតុដើមនិងភាពបរិសុទ្ធនៃផលិតផល។ [Balasundaram et al ។ ឆ្នាំ ២០០៩] សមស្របសម្រាប់ប្រភេទកោសិកាទាំងអស់និងអាចអនុវត្តបានយ៉ាងងាយស្រួលទាំងខ្នាតតូចនិងធំ។ ម៉ាស៊ីនកំដៅទឹកមានភាពងាយស្រួលក្នុងការសម្អាត។ សភាគ ultrasonic គឺតែងតែមានលក្ខណៈស្អាតនៅក្នុងកន្លែង (CIP) និងមុខងារមាប់មគក្នុងកន្លែង (SIP) ។ sonotrode មាននៅក្នុងស្នែងទីតានីញ៉ូមដ៏ធំមួយដែលអាចត្រូវបានជូតឬហូរក្នុងទឹកឬសារធាតុរំលាយ (អាស្រ័យលើឧបករណ៍ផ្ទុកការងារ) ។ ការថែរក្សានៃឧបករណ៍ ultrasonic គឺដោយសារតែភាពរឹងមាំរបស់ពួកគេស្ទើរតែមិនអាចបំភ្លេចបាន។

lysis

Lysis គឺជាដំណើរការរសើបមួយ។ ក្នុងកំឡុងពេល lyse ការការពារនៃភ្នាសកោសិកាត្រូវបានបំផ្លាញទោះបីជាយ៉ាងណាក៏ដោយត្រូវតែបញ្ឈប់ការអសកម្មការបម្លែងនិងការរិចរិលនៃប្រូតេអ៊ីនដែលបានស្រង់ចេញដោយបរិយាកាស unphysiological (គម្លាតពីតម្លៃ pH) ។ ដូច្នេះនៅក្នុងទូទៅ lysis ត្រូវបានអនុវត្តនៅក្នុងដំណោះស្រាយសតិបណ្តោះអាសន្នមួយ។ ការលំបាកភាគច្រើនកើតឡើងពីការបំផ្លាញកោសិកាដែលមិនអាចទប់ស្កាត់ដែលជាលទ្ធផលនៃការដោះលែងសម្ភារៈក្នុងរង្វង់អវយវៈទាំងអស់ដែលមិនមានគោលដៅឬ / និងការបំបាត់ចោលនូវផលិតផលគោលដៅ។

ការលីយ៉ាសកោសិកា Ultrasonic អាចត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការរៀបចំគំរូនៅក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍និងសម្រាប់ការផលិតបរិមាណធំ។ ចុចដើម្បីពង្រីក!

1: 200 វ៉ាត់ homogenizer ដ៏មានឥទ្ធិពល ultrasonic Uf200 ःមិន ជាមួយនឹងការត្រួតពិនិត្យឌីជីថលនិងការថតទិន្នន័យដោយស្វ័យប្រវត្តិសម្រាប់ការបែងចែកកោសិកាដែលអាចទុកចិត្តបាននិងអាចបន្តពូជបាន។

Ultrasonic Lysis

ជាទូទៅការឆ្លងមេរោគនៃសំណាកនៅក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍នឹងចំណាយពេលពី 15 វិនាទីទៅ 2 នាទី។ ក្នុងនាមជាអាំងតង់ស៊ីតេនៃការ sonication គឺមានភាពងាយស្រួលក្នុងការលៃតម្រូវដោយការកំណត់ទំហំកំណត់ពេលវេលា sonication ក៏ដូចជាដោយការជ្រើសរើសឧបករណ៍ត្រឹមត្រូវវាអាចធ្វើទៅបានដើម្បីរំខានដល់ភ្នាសកោសិកាយ៉ាងខ្លាំងឬយ៉ាងឆាប់រហ័សអាស្រ័យលើរចនាសម្ព័ន្ធក្រឡានិងនៅលើគោលបំណងនៃការ lyse នេះ ( ឧទាហរណ៏ការស្រង់ DNA ជាការចាំបាច់ត្រូវការ sonication ទន់ជ្រាបការទាញយកប្រូតេអ៊ីនពេញលេញនៃបាក់តេរីតម្រូវឱ្យមានការព្យាបាលអ៊ុលត្រាសោខ្លាំង) ។ សីតុណ្ហាភាពក្នុងអំឡុងពេលដំណើរការអាចត្រូវបានត្រួតពិនិត្យដោយឧបករណ៏សីតុណ្ហភាពរួមបញ្ចូលគ្នានិងអាចត្រូវបានគ្រប់គ្រងដោយងាយស្រួលដោយត្រជាក់ (ងូតទឹកទឹកកកឬកោសិកាលំហូរជាមួយអាវត្រជាក់) ឬដោយការ sonication នៅក្នុងរបៀបជីពចរ។ ក្នុងអំឡុងពេល sonication របៀប pulse, វដ្ដ burst sonication ខ្លីនៃរយៈពេល 1-15 វិនាទីអនុញ្ញាតឱ្យ dissipation កំដៅនិងត្រជាក់ក្នុងអំឡុងពេលរយៈពេលយូរជាងនេះ។
ដំណើរការអ៊ុលត្រាសោនទាំងអស់ត្រូវបានដំណើរការទាំងស្រុងហើយអាចពង្រីកបានតាមលំដាប់លំដោយ។

សភាគ Ultrasonic Ultrasonic VialTweeter សម្រាប់ការរៀបចំគំរូដំណាលគ្នានៃបំពង់សាកល្បងរហូតដល់ទៅ ១០ ។ (ចុចដើម្បីពង្រីក!)

ឧបករណ៍ ultrasonic នេះ VialTweeter អនុញ្ញាតឱ្យមានការរៀបចំគំរូដំណាលគ្នារហូតដល់ 10 ចានក្រោមលក្ខខណ្ឌនៃដំណើរការដូចគ្នា។

Ultrasonic សរីរាង្គ

ប្រភេទផ្សេងៗនៃ ឧបករណ៍ Ultrasonic អនុញ្ញាតឱ្យផ្គូផ្គងនឹងគោលដៅការរៀបចំសំណាកគំរូនិងដើម្បីធានាភាពរួសរាយរាក់ទាក់និងភាពងាយស្រួលក្នុងប្រតិបត្តិការ។ ឧបករណ៍ស៊ើបអង្កេតប្រភេទ ultrasonic គឺជាឧបករណ៍ទូទៅបំផុតនៅក្នុងមន្ទីរពិសោធន៍។ ពួកវាគឺសមបំផុតសម្រាប់ការរៀបចំសំណាកគំរូតូចនិងមធ្យមដែលមានបរិមាណនៃ 0.1mL រហូតដល់ 1000mL ។ ទំហំអំណាចផ្សេងគ្នានិង sonotrodes អនុញ្ញាតឱ្យសម្រួល ultrasonicator ទៅកម្រិតសំឡេងគំរូនិងនាវាសម្រាប់លទ្ធផល sonicating មានប្រសិទ្ធិភាពបំផុតនិងមានប្រសិទ្ធិភាព។ ឧបករណ៍ស៊ើបអង្កេត ultrasonic គឺជាជម្រើសដ៏ល្អបំផុតនៅពេលដែលគំរូតែមួយត្រូវបានរៀបចំ។

ប្រសិនបើមានគំរូបន្ថែមទៀតត្រូវបានរៀបចំឧទាហរណ៏ 8 ចាននៃដំណោះស្រាយកោសិកាឧបករណ៍ដូចជា VialTweeter ឬ cuphorn ultrasonic គឺ homogenizer សមរម្យបំផុតសម្រាប់ lysis ។ ចានជាច្រើនត្រូវបាន sonicated នៅពេលជាមួយគ្នា, នៅអាំងតង់ស៊ីតេដូចគ្នា។ នេះរក្សាទុកមិនត្រឹមតែពេលវេលានោះទេប៉ុន្តែក៏ធានានូវការព្យាបាលដូចគ្នានៃសំណាកទាំងអស់ដែលធ្វើឱ្យលទ្ធផលក្នុងចំណោមគំរូដែលអាចទុកចិត្តបាននិងអាចប្រៀបធៀបបាន។ លើសពីនេះទៅទៀតឆ្លងកាត់ការចម្លងរោគដោយ immersing sonotrode ultrasonic (ត្រូវបានគេស្គាល់ផងដែរថាជាការស៊ើបអង្កេត ultrasonic, ស្នែង, ព័ត៌មានជំនួយឬម្រាមដៃ) ត្រូវបានជៀសវាង។ ដោយសារតែប្រើចានប្រើការលាងសំអាតពេលវេលានិងការបាត់បង់គំរូដោយសារតែការលាងសំអាតនាវាត្រូវបានលុបចោល។
សម្រាប់ទំហំខ្ពស់ឧ។ សម្រាប់ផលិតកម្មពាណិជ្ជកម្មនៃការដកស្រង់កោសិកាប្រព័ន្ធ ultrasonic ជាបន្តជាមួយ reactor ក្រឡាលំហូរគឺសមបំផុត។ លំហូរបន្តនិងសូម្បីតែលំហូរនៃសម្ភារៈដំណើរការធានានូវការ sonication សូម្បីតែមួយ។ ទាំងអស់ប៉ារ៉ាម៉ែត្រនៃដំណើរការ disintegration ultrasonic អាចត្រូវបានធ្វើឱ្យប្រសើរនិងបានលៃតម្រូវទៅនឹងតម្រូវការនៃកម្មវិធីនិងសម្ភារៈកោសិកាជាក់លាក់។

នីតិវិធីគំរូសម្រាប់ lysing ultrasonic នៃកោសិកាបាក់តេរី:

  • ការរៀបចំនៃការព្យួរកោសិកា: គ្រាប់ក្រឡាត្រូវតែត្រូវបានផ្អាកទាំងស្រុងក្នុងដំណោះស្រាយសតិបដ្ឋានមួយដោយការធ្វើសភាគ (ជ្រើសដំណោះស្រាយសតិបណ្តោះអាសន្នរបស់អ្នកដែលឆបគ្នាជាមួយការវិភាគខាងក្រោមឧទាហរណ៍វិធីសាស្រ្ត Chromatography ជាក់លាក់) ។ បន្ថែម lysozymes និង / ឬគ្រឿងផ្សំដទៃទៀតប្រសិនបើត្រូវការ (ពួកគេត្រូវតែឆបគ្នាជាមួយនឹងការបំបែក / ការបន្សុទ្ធ) ។ លាយ / ដោះស្រាយដំណោះស្រាយដោយទន់ភ្លន់នៅក្រោម sonic ស្រាលរហូតដល់ការព្យួរពេញលេញត្រូវបានសម្រេច។
  • ultrasonic lysis: ដាក់គំរូក្នុងទឹកកក។ សម្រាប់ការរំខានកោសិកា sonicate ការផ្អាកនៅ 60-90 លើកទីពីរការផ្ទុះ (ដោយប្រើរបៀបជីពចរ ultrasonic របស់អ្នក) ។
  • ការបែងចែក: Centrifuge lysate (ឧ។ 10 នាទីនៅ 10,000 xg នៅ 4degC) ។ ញែកព្បឹងថង់ពីបន្ទះកោសិកាដោយប្រុងប្រយ័ត្ន។ supernatant គឺជាលីកកោសិកាសរុប។ បន្ទាប់ពីការកំចាត់មេរោគនៃ supernatant អ្នកទទួលបានសារធាតុរាវដែលបញ្ជាក់ច្បាស់ពីប្រូតេអ៊ីនកោសិការលាយ។

កម្មវិធីទូទៅបំផុតសម្រាប់ ultrasonic ក្នុងជីវវិទ្យានិងជីវបច្ចេកវិទ្យាគឺ:

  • ការរៀបចំដកស្រង់កោសិកា
  • ការរំខាន នៃផ្សិតបាក់តេរីកោសិការុក្ខជាតិទន់ & ជាលិកាកោសិការឹងសម្ភារៈ nucleic
  • ការស្រង់ចេញប្រូតេអ៊ីន
  • ការរៀបចំនិងភាពឯកោនៃអង់ស៊ីម
  • ផលិតកម្មអង់ស៊ីម
  • ការស្រង់ DNA និង / ឬការបែងចែកគោលដៅ
  • ការរៀបចំសារធាតុប្រូតេអ៊ីន
homogenizers អ៊ុលត្រាសោថាមពលខ្ពស់ដូចជា UIP1000hd ត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការរំខានកោសិកានិងការស្រង់ចេញនៅក្នុងបាច់ឬជាបន្តលំហូរទោះបីរបៀប។ (ចុចដើម្បីពង្រីក!)

ប្រព័ន្ធ benchtop Ultrasonic ដូចជា UIP1000hd (1kW) អាចដំណើរការបាននូវបរិមាណជីវសាស្ត្រកាន់តែច្រើន។

កម្មវិធីជាច្រើននៃសាខាអ៊ុលត្រាសោនស្ថិតនៅក្នុងវិស័យនៃជីវបច្ចេកវិទ្យាជីវវិទូអតិសុខុមជីវវិទ្យាជីវវិទ្យាម៉ូលេគុលជីវរសាយនវិទ្យាប្រព័ន្ធភាពស៊ាំបាក់តេរីវីរុសប្រូតេអ៊ីនពន្ធុវិទ្យាសរីរវិទ្យាជីវវិទ្យាកោសិកាជីវសាស្ត្រ hematology និងរុក្ខសាស្ត្រ។

ចំពោះការវាយតម្លៃនិងការបង្កើនប្រសិទ្ធភាពនៃកម្មវិធីរបស់អតិថិជន Hielscher Ultrasonics ផ្តល់ជូននូវគ្រឿងបរិក្ខារយ៉ាងពេញលេញ មន្ទីរពិសោធន៍ដំណើរការ Ultrasonic។ សូមទាក់ទងមកយើងខ្ញុំសម្រាប់ព័ត៌មានបន្ថែម!

អក្សរសិល្ប៍ / ឯកសារយោង

  • Balasundaram, B .; Harrison, S .; Bracewell, DG (ឆ្នាំ 2009): ភាពជឿនលឿននៃយុទ្ធសាស្រ្តនៃការផលិតផលិតផលនិងផលប៉ះពាល់លើការរចនាប្លង់។ និន្នាការក្នុងជីវបច្ចេកវិទ្យាថ្ងៃទី 27 ខែសីហាឆ្នាំ 2009 ទំព័រ 477-485 ។
  • Vilkhu, K .; ម៉ាណាស្ស, រ៉ា។ ; Mawson, R .; Ashokkumar, M. (ឆ្នាំ 2011): ការងើបឡើងវិញ ultrasonic និងការកែប្រែគ្រឿងផ្សំអាហារ។ នៅក្នុង: Feng / Barbosa-Cánovas / Weiss (ឆ្នាំ 2011): បច្ចេកវិទ្យាអ៊ុលត្រាសសម្រាប់អាហារនិងជីវបច្ចេកវិទ្យា។ ញូវយ៉ក: Springer, 2011. ទំព័រ 345-368 ។

ទំនាក់ទំនងយើងខ្ញុំ / សួរសម្រាប់ពបន្ថែម

និយាយទៅពួកយើងអំពីតម្រូវការដំណើរការរបស់អ្នក។ យើងនឹងផ្តល់អនុសាសន៍ឱ្យការដំឡើងនិងដំណើរការប៉ារ៉ាម៉ែត្រសមរម្យបំផុតសម្រាប់គម្រោងរបស់អ្នក។





សូមចំណាំរបស់យើង គោលការណ៍​ភាព​ឯកជន