បច្ចេកវិទ្យាអ៊ុលត្រាសោនហេលស៊ឺរ។

ultrasonic DNA បានកាត់

  • ក្នុងកំឡុងពេលកាត់ DNA និង RNA ម៉ូលេគុលឌីអិនអេត្រូវបានបំបែកទៅជាបំណែកតូចៗ។ បំណែក DNA / RNA គឺជាផ្នែកមួយនៃជំហានជំហានគំរូដ៏សំខាន់ដែលតម្រូវឱ្យបង្កើតបណ្ណាល័យសម្រាប់លំដាប់បន្តបន្ទាប់ (NGS) ។
  • ការកាត់ DNA DNA ultrasonic ប្រើកម្លាំងនៃ cavitation សូរសញ្ញាដើម្បីបំបែក DNA ឬ RNA ទៅជាបំណែកនៃ 100 – 5 គីឡូបៃ bp ។
  • កាត់កាត់ Ultrasonic អនុញ្ញាតឱ្យបំណែក DNA ច្បាស់លាស់និងការសម្របទៅនឹងប្រវែង DNA ដែលចង់បាន។

ultrasonic DNA បានកាត់

Hielscher Ultrasonics ផ្តល់ជូននូវដំណោះស្រាយជាច្រើនដែលមានមូលដ្ឋានលើអ៊ុលត្រាសោនសម្រាប់ DNA, RNA និង chromatin កាត់។ ជ្រើសរវាង ultrasonic ម៉ាស៊ីនស៊ើបអង្កេតប្រភេទ (ឧ។ UP100H) សម្រាប់ការ sonication ដោយផ្ទាល់ដោយប្រើ microtip មួយឬប្រើ VialTweeeter ឬ cuphorn ultrasonic សម្រាប់ការរៀបចំ DNA ដោយប្រយោលនៃគំរូជាច្រើនក្នុងពេលដំណាលគ្នា។ Hielscher ផ្តល់ជូននូវឧបករណ៍ដ៏ល្អបំផុតដែលត្រូវនឹងតំរូវការរបស់អ្នក: អ្នកអាចមានគំរូ 1 ឬ 10 ដែលមានបរិមាណពីមីលីលីទ័ររហូតដល់បរិមាណលីត្រ – Hielscher វាយ ultrasonic គឺអាចរកបានដើម្បីបំពេញតាមតម្រូវការរបស់អ្នកដើម្បីរៀបចំ DNA, RNA និងបំណែក chromatin នៅប្រវែងត្រឹមត្រូវ។ ភាពប្រែប្រួលប្រតិបត្តិការងាយស្រួលនិងការគ្រប់គ្រងច្បាស់លាស់អនុញ្ញាតឱ្យមានបណ្ណាល័យដែលអាចទុកចិត្តបានសម្រាប់ការបង្កើតជំនាន់ក្រោយ។
ផ្ទុយទៅនឹងបំណែកឌីអេមអេហ្ស៊ីមកាត់ចេញ ultrasonic ប្រើកងកម្លាំងកាត់មេកានិចសុទ្ធដោយមិនចាំបាច់បន្ថែមសារធាតុគីមីណាមួយឡើយ។ ដោយការកំណត់ច្បាស់លាស់នៃប៉ារ៉ាម៉ែត្រដំណើរការ ultrasonic shearing បង្កើតបំណែក DNA ម៉ូលេគុលម៉ូលេគុលខ្ពស់ (plasmid និង DNA ពន្ធុ) ។
បន្សុទ្ធអាស៊ីត nucleic អាចត្រូវបានពង្រីកមុនឬបន្ទាប់ពីជំហានបំណែកមួយ។
ប៉ារ៉ាម៉ែត្រ sonication (អំណាច, វដ្តជីពចរ / ការផ្ទុះពេលវេលានិងសីតុណ្ហភាព) អាចត្រូវបានគ្រប់គ្រងដោយសុវត្ថិភាពតាមរយៈការកំណត់កម្មវិធី។

គុណសម្បត្តិ:

  • ការត្រួតពិនិត្យច្បាស់លាស់
  • វដ្ត sonication និងពេលវេលាអាដាប់ធ័រយ៉ាងជាក់លាក់ទៅនឹងទំហំឌីអិនអេដែលចង់បាន
  • បំណែក DNA ម៉ូលេគុលម៉ូលេគុលខ្ពស់
  • ការគ្រប់គ្រងសីតុណ្ហភាព
  • លឿន
  • លទ្ធផលដែលអាចបន្តពូជបាន
  • autoclavable
  • ដំណោះស្រាយផ្សេងៗ: ប្រភេទស៊ើបអង្កេត,, VialTweeter និង Cuphorn

ពិធីការសម្រាប់ការស្រាវជ្រាវ DNA ultrasonic

សម្រាប់ការវិភាគ Chromatin Immunoprecipitation

ដោយសង្ខេបកោសិកាត្រូវបានគេដាក់នៅក្នុងចាន 60mm - អង្កត់ផ្ចិត (400,000 ក្នុងមួយម្ហូប) និង transfected ជាមួយ RhoA siRNA (ដូចបានរៀបរាប់); បន្ទាប់ពី 72 ម៉ោងពួកគេត្រូវបានគេដាក់បញ្ចូលជាមួយនឹង formaldehyde (កំហាប់ចុងក្រោយ 1%) រយៈពេល 10 នាទីក្នុង 37 អង្សាសេដើម្បីភ្ជាប់ប្រូតេអ៊ីនទៅ DNA ។ ប្រតិកម្មឆ្លងកាត់ត្រូវបានពន្លត់ដោយបន្ថែមបរិមាណ 1 ភាគ 10 នៃ 1.25 មីល្លីលីត្រ / g glycine ផ្តល់ 125 មីលីលីល / លីត្រចុងក្រោយ។ កោសិកាត្រូវបានគេលាងសម្អាតពីរដងដោយប្រើ PBS ត្រជាក់ដែលត្រូវបានដាក់បញ្ចូលក្នុងអង្គធាតុទ្រនាប់ជាតិសំណាកវិទ្យុសកម្ម 150 មីល្លីមល L / NaCl 1% NP40, deoxycholate 0,5% SDS 5 មីលីលីត្រ / លីត្រ EDTA 50 មីលីលីត្រ / លីត្រ Tris-HCl (pH 8.0 ]] ដែលផ្ទុក 1 មីលីលីល / លីត្រហ្វ្រេមូលីសសូលុយឡូនហ្វ្លុយរ៉ីដ 1 ក្រាម / អេលីប្រទីទីនីននិង 1 ក្រាម / មលីត្រ pepstatin A និងរក្សាទុកលើទឹកកកអស់រយៈពេល 30 នាទី។ បន្ទាប់មក lysates កោសិកាត្រូវបាន sonicated លើទឹកកកជាមួយ Hielscher UP200S sonicator អ៊ុលត្រាសោន (3 x 40 s, ទំហំ 40%, វដ្តទី 1; Hielscher Ultrasonics GmbH) រហូតដល់ chromatins ឆ្លងកាត់តំណត្រូវបានកាត់បន្ថយដើម្បីផ្តល់បំណែក DNA រវាង 200 និង 1,000 bp ។ មួយភាគដប់នៃ lysate ទាំងមូលត្រូវបានគេប្រើដើម្បី quantitate បរិមាណ DNA ដែលមានវត្តមាននៅក្នុងគំរូផ្សេងគ្នានិងចាត់ទុកថាជា “DNA បញ្ចូលសរុប”។ អ្នកជំងឺហ្សែនត្រូវបានបង្កាត់ដោយស្នាមប្រឡាក់ទឹកកាម DNA / ប្រូតេអ៊ីនសារ៉ាយស្យុង 50% ដើម្បីកាត់បន្ថយផ្ទៃខាងក្រៅដែលមិនមានលក្ខណៈពិសេស។ ការចាក់ថ្នាំ Immunoprecipitation ត្រូវបានធ្វើរួចជាធំពេញមួយយប់នៅសីតុណ្ហភាព 4 អង្សាសេដោយ 5 ក្រាមប្រឆាំងនឹង NF-nB p65 (Upstate) ឬគ្មានអង់ទីករ (ការត្រួតពិនិត្យអវិជ្ជមាន) ។ ផតថលទាំងនេះត្រូវបានបន្ថែមដោយល្បាយ NaCl 5 មីលីលីត្រនិងកម្តៅក្នុងមួយយប់នៅសីតុណ្ហភាព 65 អង្សាសេដើម្បីត្រឡប់តំណភ្ជាប់ប្រូតេអ៊ីន DNA ។ សារធាតុ immunocomplexes ត្រូវបានព្យាបាលបន្ថែមទៀតជាមួយនឹង DNase និង RNAase ដោយគ្មានប្រូតេអ៊ីន K និង DNA ត្រូវបានគេបន្សុតដោយការទាញយកចេញនូវ phenol / chloroform និងទឹកភ្លៀងអេតាណុល។ PCR ត្រូវបានធ្វើរួចដោយប្រើ primers ជាក់លាក់ដែលត្រូវគ្នាទៅនឹងលំដាប់នៅក្នុងតំបន់ផ្សព្វផ្សាយនៃហ្សែន iNOS របស់មនុស្ស (primer: 5-GAGGGCTTTCCCA-GAACCAAG-3¶; p2 primer: GCTGGGCTACTGACCCAG-CAGTTCCAG-3¶) ។ (Doublier et al ។ , 2008)

ការស្រាវជ្រាវការបញ្ចេញមតិ EGFP

ចំពោះការស្រាវជ្រាវការបញ្ចេញមេរោគហ្សែន L. tarentolae p10 :: F9Begfp1.4dBsat # 12 (Jena Bioscience ប្រទេសអាល្លឺម៉ង់) ជាមួយនឹងហ្សែនសម្រាប់ EGFP (ប្រូតេអ៊ីនពន្លឺព៌ត័មានពន្លឺព្រះអាទិត្យប្រសើរឡើង) ឆ្អឹងក្រូម៉ូសូមសិតត្រូវបានគេដាំនៅក្នុងប្រព័ន្ធផ្សព្វផ្សាយជាច្រើនដូចដែលបានពិពណ៌នាពីមុននិង បន្ថែមដោយបន្ថែម 100 មីលីក្រាម-1 Nourseothricin (Jena Bioscience, ប្រទេសអាល្លឺម៉ង់) ។ ក្នុងកំឡុងពេលដាំដុះសំណាក 1 មីលីលីត្រត្រូវបានគេនាំយកមកប្រើដោយ centrifuged (2000 × g, 20 ° C និង 10 នាទី) និងលាងសម្អាតជាមួយនឹងដំណោះស្រាយ NaCl 0,9% ។ ម្សៅត្រូវបានគេដាក់បញ្ចូលក្នុងសតិបណ្ដោះអាសន្ន (20 mM HEPES, 5 mM EDTA, 2 mM DTT) និងបានបែកបាក់ដោយ sonification ជាមួយដំណើរការ ultrasonic UP400S (ការប្រើថាមពល 400 វ៉ាត់) ។ កំទេចកោសិកាត្រូវបានយកចេញដោយកកិតដោយកណ្តាល (6000 ×ក្រាម, 4 អង្សាសេ, 5 នាទី) និងវិភាគដោយឌីសូស៊ីស៊ីលស៊ុលអេដ - អេឌីអេភីអេសអេដអេឡិចត្រូសែន (SDS-PAGE) នៅក្រោមការកាត់បន្ថយល័ក្ខខ័ណ្ឌដោយយោងតាមវិធី Laemmli (1970) ជាមួយនឹងជ័រប្រូតេអ៊ីន polyacralamide ចំនួន 12,5% ។ កន្សោម EGFP ត្រូវបានគេពិនិត្យមើលក្នុងវប្បធម៌រារែក។ (Fritsche et al ។ , 2007)

Hielscher's UP100H was used to prepare EHEC DNA for chip array analysis

ការវិភាគអេឡិចត្រូម៉ាញ៉េទិចនៃឌីអិនអេហ្សែននៃ E. coli EDL933 បានទទួលរងបច្ចេកវិទ្យា ultrasonication ពី 0 ទៅ 15 នាទី។ L បង្ហាញចំនុច DNA ។ (Basselet et al ។ 2008)

ស្នើសុំព




ចំណាំរបស់យើង គោលការណ៍​ភាព​ឯកជន


ការព្យាបាលដោយថ្នាំ Chromatin

គ្រឿងរំខានកោសិកា Ultrasonic UP100H (100W) សម្រាប់ការបែងចែក, ការរំខានកោសិកានិង DNA កាត់។ការពិសោធន៍ immunoprecipitation chromatin ត្រូវបានអនុវត្តដោយប្រើប្រាស់ ChIP-ITTM Express (Active Motif, Carlsbad, CA សហរដ្ឋអាមេរិក) យោងទៅតាមការណែនាំរបស់អ្នកផលិតដោយមានការកែប្រែមួយចំនួន។ រយៈពេលខ្លី, បន្ទះសរីរាង្គមនុស្សដែលមានភាពខុសគ្នាត្រូវបានផ្សារភ្ជាប់គ្នាជាមួយនឹងសារធាតុ Formaldehyde 1% ក្នុងរយៈពេល 10 នាទីនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់។ កោសិកាត្រូវបានលាងសម្អាតដោយ PBS ត្រជាក់ហើយប្រតិកម្មត្រូវបានបញ្ឈប់ដោយបន្ថែម 0,125 មីលីក្រាមសម្រាប់រយៈពេល 5 នាទីនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់។ កោសិកាត្រូវបានសម្អាតម្តងទៀតដោយ PBS ត្រជាក់និងត្រាំចេញពីម្ហូប។ កោសិកាត្រូវបានធ្វេសប្រហែសដោយ centrifugation និង resuspended នៅក្នុងសតិបណ្ដោះអាសន្ន។ បន្ទាប់ពីការ centrifugation, ស្នូល pelleted ត្រូវបាន resuspended នៅក្នុងសតិបណ្ដោះអាសន្នដែលបានកាត់, incubated លើទឹកកកសម្រាប់ 30 នាទីនិង chromatin ត្រូវបានកាត់តាមដោយ sonication ឧ។ UP100H (Hielscher Ultrasonics GmbH, Teltow ប្រទេសអាល្លឺម៉ង់) នៅថាមពល 25% 5 ជីពចរនៃ 20 វិនាទីគ្នាលើទឹកកកចូលទៅក្នុងបំណែកប្រហែល 200-600 bp ។ បន្ទាប់មកក្រូម៉ូសូមត្រូវបានប្រមូលផ្តុំហើយប្រមូលផ្តុំគ្នា។ ចំពោះភាពស៊ាំ immunoprecipitation, 60 μlនៃក្រូម៉ូសូមត្រូវបានគេបង្កាត់ដោយ 1 pg នៃសារធាតុ chromatin (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA), NF-κB p65 (Abcam, Cambridge, ចក្រភពអង់គ្លេស) ឬ NF-κB p50 (Abcam) antibodies ឬជាមួយទន្សាយ IgG (Zymed Laboratories, South San Francisco, CA សហរដ្ឋអាមេរិក) ជាការត្រួតពិនិត្យអវិជ្ជមាន, មួយយប់នៅ 4 ° C ជាមួយនឹងការបង្វិលសុភាពរាប។ សារធាតុ Immunocomplexes ភ្ជាប់ទៅនឹងអង្កត់ផ្ចិតម៉ាញ៉េទិចត្រូវបានគេប្រមូលដោយប្រើម៉ាញ៉េទិកដែលត្រូវបានគេលាងយ៉ាងហ្មត់ចត់ហើយតំណភ្ជាប់ប្រូតេអ៊ីន / DNA ត្រូវបានដាក់បញ្ច្រាសហើយ DNA ត្រូវបានគេយកចេញដើម្បីវិភាគ PCR ។ (Ristola et al ។ , 2009)

ការរៀបចំ DNA របស់ EHEC សម្រាប់ការវិភាគអារេបន្ទះ

ការរៀបចំ lysates កោសិកានិង DNA ដែលស្រង់ចេញ
គ្រាប់ម្ស៉ៅបាក់តេរីត្រូវបានផ្អាកនៅ PBS ទៅជាកំហាប់ចុងក្រោយដែលចង់បានត្រូវបានព្យាបាលដោយ អ៊ុលត្រាសោររំខាន UP100H (Hielscher GmbH, ប្រទេសអាល្លឺម៉ង់) បំពាក់ដោយ microtip MS1 (អង្កត់ផ្ចិត 1mm) ។ ប្រេកង់ប្រតិបត្ដិគឺ 30 kHz និងថាមពលដែលមានប្រសិទ្ធិភាពគឺ 100 វ៉ាត់។ ក្នុងកំឡុងពេលប្រតិបត្តិការគំរូត្រូវបានគេធ្វើឱ្យត្រជាក់នៅក្នុងទឹកកកទឹកលាយនិង centrifuged ។ សំណាកត្រូវបានប្រើប្រាស់សម្រាប់ការសិក្សាលំហូរស៊ីស្ទូម៉ិចខណៈពេលដែលការវះកាត់ក្រោយមកទៀតត្រូវបានគេទទួលយកការព្យាបាលដោយកំដៅ (95 ° C, 5 នាទី) ។ ចំនែកកោសិកាប្រេងឆៅត្រូវបានគេដំណើរការដោយល្បាយនៃប៉េណុល: chloroform: អាល់កុលអ៊ីសូយ៉ាម (25: 24: 1) ។ បរិមាណសមល្មមនៃល្បាយនេះត្រូវបានបន្ថែមទៅសំណាក lysate ដំណោះស្រាយត្រូវបានផ្លាស់ប្តូរយ៉ាងខ្លាំងក្លាអស់រយៈពេល 15 វិនាទីនិងត្រូវបានគេកកិតនៅ 15,000 ស។ ក្រ។ ក្នុងរយៈពេល 2 នាទីនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ (RT) នៅជុំវិញ 22 អង្សាសេ។ តំណាក់កាលនីមួយៗដែលមានផ្ទុកហ្សែន DNA ត្រូវបានបំបែកដោយប្រុងប្រយ័ត្ននិងប្រមូលបាននៅក្នុងបំពង់ Eppendorf មើមថ្មី។
បន្ទាប់មកសំណាកត្រូវបាន sonicated ដើម្បីបំណែកឌីអិនអេ។ ជំហាននៃការ sonication ត្រូវបានគេដឹងថានៅក្នុងលក្ខខណ្ឌដូចគ្នាដូចដែលបានពណ៌នាខាងលើ។ ដើម្បីវាយតម្លៃផលប៉ះពាល់នៃការបែងចែកនៅលើឌីអិនអេហ្សែនគំរូត្រូវបានគេវិភាគដោយប្រើអេឡិត្រូអេសហ្ស័រជែរី។
(…) សំណាកដែលគេស្រាវជ្រាវមុននេះ 2,5 នាទីត្រូវបានគេយកទៅបោះចោលក្នុងជំហានបន្ទាប់ពីការព្យាបាលដោយកំដៅនិងការប្រមូលផ្តុំ។ DNA ដែលបានចេញផ្សាយត្រូវបានគេស្រង់ចេញពីរដងដោយប៉ូត៉ុល: chloroform: ល្បាយសុរាអ៊ីសូមូលីហើយក្រោយមកត្រូវបាន sonication ទីពីរសម្រាប់ 0-15 នាទី។ Agarose gel electrophoresis ត្រូវបានគេប្រើដើម្បីកំណត់ការចែកចាយទំហំនៃឌីអិនអេដែលត្រូវបានគេទាញយកក្រោយការបែងចែកបំណែក ultrasonic (រូបភាពនៅផ្នែកខាងស្តាំខាងលើ) ។ ឌីអេនអេដែលបានបែកខ្ចាត់ខ្ចាយត្រូវបានគេមើលឃើញយ៉ាងច្បាស់ពីវត្តមានរបស់ឌីអេនអេលឺរជាជាងដុំទម្ងន់ម៉ូលេគុលខ្ពស់ដែលត្រូវបានគេកាត់ចេញពីសំណាកស្រូបសំឡេងមានរយៈពេល 2.5 នាទីឬយូរជាងនេះ។ ការ sonication យូរកាត់បន្ថយបន្តិចម្តងបំណែកបំណែកប្រវែងប្រហែល 150 - 600 ផោននិង sonication សម្រាប់ 15 នាទីបន្ថែមទៀតការបំផ្លាញបំណែកទាំងនេះជាអាចត្រូវបានគេមើលឃើញថាភាគច្រើនដោយផ្នែកខាងលើនៃការលាបនេះ។ ដូចេនះទំហំបំណែកឌីអិនអេជាមធ្យមបានថយចុះជាលំដាប់ជាមួយនឹងរយៈពៃលពៃលអៃរុរសេរហើយការពៃយាបាល 5 នាទីតេូវបានអនុញ្ញេតឱេយបានទំហំបំណែកឌីអិនអេដេលសមសេបបំផុតសមេប់ការសាករកអាម៉ូញ។ នៅចុងបញ្ចប់នីតិវិធីការរៀបចំវិភាគ DNA ដែលរួមបញ្ចូលដំបូង 2 នាទីនៃការព្យាបាល ultrasonic ការទាញយកឌីអិនអេ (2 ×) និង sonication 5 នាទីជាបន្តបន្ទាប់ត្រូវបានបង្កើតឡើង។ (Basselet et al ។ 2008)

ការចាក់ថ្នាំ Chromatin Immunoprecipitation (ChIP)

ដំណើរការ ultrasonic UP100H សម្រាប់ DNA, RNA និង chromatin កាត់។ (ចុចដើម្បីពង្រីក!)កោសិកា HEK293 ត្រូវបានដាំដុះដូចដែលបានរៀបរាប់ខាងលើហើយត្រូវបានគេជួសជុលជាមួយនឹង 2mM disuccinimidyl glutarate រយៈពេល 45 នាទីនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់។ បនា្ទាប់មកកោសិកាត្រូវបានសំអាតពីរដងដោយ PBS ។ Chromatin ត្រូវបានគេភ្ជាប់គ្នាអស់រយៈពេល 10 នាទីនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ដោយប្រើ 1% (v / v) formaldehyde និងត្រូវបានលាងពីរដងជាមួយទឹកកកត្រជាក់ PBS ។ ប្រតិកម្មឆ្លងកាត់ត្រូវបានបញ្ឈប់ដោយការញ៉ាំជាមួយ glycine នៅឯកំហាប់ចុងក្រោយនៃ 0,125 មីលីក្នុងរយៈពេល 5 នាទីនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់។ បន្ទាប់ពីពន្លកជាមួយ trypsin កោសិកាត្រូវបានយកចេញពីអាហារវប្បធម៌កោសិកានិងលាងសម្អាតពីរដងដោយប្រើ PBS ។ គ្រាប់ក្រឡាត្រូវបានដាក់ក្នុងសម័តសូលុយស្យុង (5 mM Pipes, pH 8.0, 85 mM KCl និង 0.5% (v / v) Nonidet P-40) ដែលត្រូវបានចាក់លើទឹកកកអស់រយៈពេល 10 នាទីនិងត្រូវបានធ្វើសភាគជាមួយនឹងឧបករណ៍ឌីសដូស។ ក្រោយមកស្នូលត្រូវបានគេជីកដោយ centrifugation (3500 xg, 5 នាទី, 4 អង្សាសេ) និងត្រូវបានដាក់បញ្ចូលក្នុងសតិបណ្ដោះអាសន្ន nuclei (Tris-HCl 50 mM, pH 8.1, 10 mM EDTA និង 1% (w / v) SDS) ។ ស្នូលត្រូវបានបង្អាក់ដោយការ sonication ជាមួយអំពូលចំនួន 20 ក្នុងមួយ sonic UP50H (Hielscher Ultraschall បច្ចេកវិទ្យា) នៅការកំណត់នៃវដ្ត 0.5 និងទំហំ 30%, ផ្តល់បំណែក DNA ឌីអិនអេដែលមានទំហំច្រើនពី 200 ទៅ 1000 ប៊ីប។ ចំពោះ ChIP អាប់ឌីអេស 50 ក្រាមត្រូវបានគេលាយបញ្ចូលក្នុងអង្គការពារទ្រទ្រង់ immunoprecipitation ចំនួន 4 ដង (Tris-HCl 16,7 មីលីត្រ pH 8,1, 167 មីលាតត្រីត្រ NaCl 1,2 មីលីលីត្រអេទីតអិម 1.1% (v / v) Triton X- 100 និង 0,01% (w / v) SDS) ។ (Weiske et al ។ 2006)

ការវិភាគកែប្រែអ៊ីដ្រូនដោយការធ្វើ immunoprecipitation chromatin (ChIP)

ដោយសង្ខេប 6 x 106 កោសិកាត្រូវបានគេលាងសំអាតពីរដងដោយ PBS និងឆ្លងកាត់លើបន្ទះវប្បធម៌រយៈពេល 15 នាទីនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់ដោយមានវត្តមាននៃសារធាតុ Formaldehyde ចំនួន 0,5% ។ ប្រតិកម្មឆ្លងកាត់ត្រូវបានបញ្ឈប់ដោយការបន្ថែម 0,125 មីលីក្រាម។ ជំហានបន្តបន្ទាប់ទាំងអស់ត្រូវបានអនុវត្តនៅ 48 ° C ។ សតិបណ្តោះអាសន្នទាំងអស់ត្រូវបានគេធ្វើឱ្យត្រជាក់និងមានផ្ទុកនូវ Protease inhibitors (Complete Mini, Roche) ។ កោសិកាត្រូវបានគេលាងសំអាតពីរដងជាមួយ PBS ហើយបន្ទាប់មកកោស។ គ្រាប់រំលាយដែលប្រមូលបានត្រូវរំលាយនៅក្នុងអង្គធាតុសរីរាង្គ 1 មីលីលីត្រ (SDS 1%, EDTA 5 មីលីលីត្រ, Tris ភីលីពីន 50 មីលីម៉ែត្រ) និងត្រូវបាន sonicated នៅក្នុងអាងងូតទឹកត្រជាក់អេតាណុលសម្រាប់វដ្ត 10 ក្នុងទំហំ 100% sonic UP50H (Hielscher, Teltow ប្រទេសអាល្លឺម៉ង់) ។ ការបែងចែក Chromatin ត្រូវបានគេមើលឃើញក្នុងជែល agarose% 1 ។ បំណែកដែលទទួលបានមាននៅក្នុងជួរ 200-500 ផែម។ ក្រូម៉ូសូមរលាយត្រូវបានគេប្រមូលដោយសំណាកគំរូ sonicated នៅកម្រិត 14,000 ក្រាមក្នុងរយៈពេល 10 នាទីនៅសីតុណ្ហភាព 48 អង្សាសេ។ ប្រភាគរលាយត្រូវបានគេលាយពពុះ 1/10 ក្នុង 1 ថ្រីស្តូន X-100, 2mM EDTA, 20 មីលីត្រម៉ុងត្រីត្រ pH 8, 150 មីល្លីម៉ត្រ NaCl) បន្ទាប់មកត្រូវបានគេកត់សំគាល់និងរក្សាទុកនៅសីតុណ្ហភាព 80 អង្សាររហូតដល់ប្រើ។ (Rodriguez et al ។ 2008)

ឧបករណ៍ ថាមពល [W] វាយ កម្រិតសម្លេង [mL]
VialTweeter 200 ឈរតែឯង 0.5 1.5
UP50H 50 ឧបករណ៍យួរដៃឬឈរជាប់ 0.01 250
UP100H 100 ឧបករណ៍យួរដៃឬឈរជាប់ 0.01 500
Uf200 ःមិន 200 ឧបករណ៍យួរដៃឬឈរជាប់ 0.1 1000
UP200St 200 stoodmounted 0.1 1000
UP400St 400 stoodmounted 5.0 ឆ្នាំ 2000
Cuphorn 200 CupHorn, sonoreactor 10 200
GDmini2 200 កោសិកាលំហូរដោយគ្មានការចម្លងរោគ

ស្នើសុំព




ចំណាំរបស់យើង គោលការណ៍​ភាព​ឯកជន


Hielscher's VialTweeter is is´deal for the simultaneous preparation of multiple samples

VialTweeter សម្រាប់គំរូគំរូ ultrasonic

ទាក់ទង​មក​ពួក​យើង! / សួរយើងខ្ញុំ!

សួររកព័ត៌មានបន្ថែម

សូមប្រើប្រាស់សំណុំបែបបទខាងក្រោមប្រសិនបើអ្នកចង់ស្នើសុំបន្ថែមអំពីការ homogenization ultrasonic ។ យើងនឹងរីករាយក្នុងការផ្តល់ជូនលោកអ្នកនូវប្រព័ន្ធ ultrasonic ការជួបតម្រូវការរបស់អ្នក។









សូមចំណាំរបស់យើង គោលការណ៍​ភាព​ឯកជន


អក្សរសិល្ប៍ / ឯកសារយោង

  • Basselet P. , Wegrzyn G. , Enfors S.- អូ។ , Gabig-Ciminska M. (ឆ្នាំ 2008): ការកែច្នៃគំរូសម្រាប់ការវិភាគតាមអារ៉េបន្ទះឈីបដែលមានមូលដ្ឋានលើអារ៉េហ្សូអេសស៊ីឈៀហ្គីស៊ី (Escherichia coli) (EHEC) ។ រោងចក្រផលិតក្រឡាតូចៗ 7:29 ។ ឆ្នាំ 2008 ។
  • Doublier S. , Riganti Ch, Voena C. , Costamagna C. , Aldieri E. , Pescarmona G. , Ghigo D. , Bosia A (008): RhoA Silencing ផ្តល់ភាពផ្ទុយគ្នាចំពោះថ្នាំ Doxorubicin នៅក្នុងកោសិកាមហារីកពោះវៀនធំ។ ការស្រាវជ្រាវនៃជំងឺមហារីកម៉ូលេគុល 6 (10), ឆ្នាំ 2008 ។
  • Fredlund E. Gidlund A. Olsen M. Börjesson T. , Spliid NHH, Simonsson M. (2008): ការវាយតម្លៃវិធីសាស្ត្រនៃការស្រង់ចេញ Fusarium ADN ពី Mycelia និងស្រូវសាលីសម្រាប់ការធ្វើបរិមាណ PCR ក្នុងពេលវេលាពិតចុះក្រោមនិងការជាប់ទាក់ទងទៅនឹងកម្រិត mycotoxin ។ ទិនានុប្បវត្តិនៃវិធីសាស្រ្តអតិសុខុមជីវសាស្រ្តឆ្នាំ 2008 ។
  • Fritsche C, Sitz M. , Weiland N. , Breitling R. , Pohl H.-D. (2007): លក្ខណៈនៃឥរិយាបទកំណើននៃ Leishmania tarentolae - ប្រព័ន្ធបញ្ចេញមតិថ្មីមួយសម្រាប់ប្រូតេអ៊ីន recombinant ។ ទិនានុប្បវត្តិមីក្រូជីវវិទ្យាជាមូលដ្ឋាន 47, ឆ្នាំ 2007 384-393 ។
  • Ristola M. , Arpiainen S. , Saleem MA, Mathieson PW, វេល GI, Lehtonen S. , Holthöfer H. (ឆ្នាំ 2009): ការកំណត់ហ្សែន Neph3 នៅក្នុងផូដ្យូត - តួនាទីសំខាន់នៃកត្ដាចម្លងកត់សំគាល់ NF-κBនិង Sp1 ។ ជីវវិទ្យាម៉ូលេគុល BMC 10:83, 2009 ។
  • Rodriguez J, Vives L. , Jorda M. , Morales C. , Munoz M. , Vendrell E. , Peinado MA (ឆ្នាំ 2008): ការតាមដានហ្សែនរបស់អេនអេដែលមិនមានអេដអេអ៊ីតធ្វើឡើងវិញនៅក្នុងកោសិកាមហារីកនិងមហារីក។ Nucleic Acids Research Vol ។ 36, លេខ 3, ឆ្នាំ 2008 ។ 770-784 ។
  • Weiske J. Huber O. (ឆ្នាំ 2006): ម្ជុលប្រូតេអ៊ីនអ៊ីត្រីទីនវីនទី 3 បង្កឱ្យមានអរម៉ូនអាភីប៉ូសដោយឯករាជ្យពីសកម្មភាពអេណាហ្ស៊ីម។ ទិនានុប្បវត្តិគីមីវិទ្យាជីវសាស្រ្ត។ លេខ។ 281, លេខ 37, 2006. 27356-27366 ។


ហេតុការណ៍តម្លៃដោយដឹងថា

cavitation Ultrasonic / សូរបង្កើតកងកម្លាំងខ្លាំងដែលជំរុញដំណើរការគ្រីស្តាល់និងរបបទឹកភ្លៀង (ចុចដើម្បីពង្រីក!)

ការកាត់ DNA DNA ultrasonic ត្រូវបានផ្អែកលើ cavitation សូរស័ព្ទនិងកងកម្លាំងកាត់ hydrodynamic របស់ខ្លួន