Hielscher Ultrasound Technology

Ultrasjonele proteine-ekstraksje fan tissue- en seldekultueren

  • Protein ekstraksje is in essensjele problemen opstappe yn beskerming.
  • Proteins kinne wurde ûntfongen út planten en dierwissue, dêryn en mikroorganismen.
  • Sonication is in betroubere, effisjoneel proteïnextraasje metoade dy't in heule earmtaking heech heule earmoede jout.

 

Proteinekstraasje út tissue en sellen

Proteinferkiezing fan tissue en kulturearre sellen is in essensjele proaza-stappe stap dy't yn in protte bio-echte en analytyske techniken lykas ELISA, PAGE, western blotting, massespektrometry, of proteinreiniging. Ultrasonic cell-disruption, lysis en ekstraksje is in krekt regelbere technyk om soargen foar hege produkten fan eauwen.

Protein ekstraksje fan dierwiksel

Foar de tarieding fan in gewoane tissue (bygelyks nier, hert, long, muscle ensfh.) Moat it gewicht yn tige lytse stikjes mei skjinne ynstruminten op it iis foarkomme en sa gau as mooglik om degradaasje troch proteasen te foarkommen (bgl. lysis-buffer lykas RIPA of hypotoanyske lysis-buffer mei protease-en phosphatase-inhibitor-cocktail). Nei it skieden wurdt de probleem yn floeistich stof foar in snapfrije yntaopt. De echte probleem kin bewarre wurde op -80 ° C foar lettere gebrûk of sûnder op it iis foar direkte homogenisearring. Direkt foardat de ultrasoan-ekstraksje wurdt iiskâlde lysis-buffer (mei protease-ynhibitoren DTT, leupeptin en aprotinine) rapper yn 'e probleem tube tafoege (per ~ 10 mg tissue ~ 600 μL fan buffer wurde oanrikkemandearre). Approx. 20-60mg fan tissue wurdt oanfrege per probleem.
Ultrasonyk homogenisaasje, lysis en ekstraksje wurdt útfierd mei in ultrasone homogenizer lykas de Uf200 ः t of UP200St, mei in micro-tip sonotrode. Sonication duration is 60-90 sek. by in ultrasone fytsmodus fan 15 sek. sonication en 10 sek. rêst tiid. De samling moat de iis yn 'e tiid hâlden wurde.
Nei ultrasjonele homogenisaasje / ôfwinning, wurdt it lysat op 27.000 g sintrifugearre foar ûngefear. 20 min. Hjirnei wurdt de supernaat sammele, sadat de protein-konsintraasje kin wurde bepaald troch in protein-test, lykas Pierce-protein-assay BCA.

Proteïne sonication is in wichtige metoade foar foarbereiding fan stekproef

Ultrasone proteine ekstraksje út sellen mei UP200St

Fersyk om ynformaasje




Notysje by ús Privacy Policy.


Protein ekstraksje fan bloedserum

Foar in homogene mingd fan it serum en de phosphate-puffer, wurdt de foarbyld fan 'e echte earst foardat de ultrasone-cell-lysis foarkomt. Foar de ultrasoanlike lysis wurdt de echte probleem oankundige mei in ultrasoan-laboratoarium homogenizer lykas de UP100H foar 8-siken by 20% amplitude, foar cycles fan elke 5 sekonden en en 15 sekonden ôf. Sonokaasje wurdt útfierd troch sonicationg yn cycles en troch de probleem op iis te pleatsen, sadat in overheating en thermyske degradaasje fan 'e echte problemen foarkomt. Sûnt sirum befettet in protte grutte molekulargewichtproteins (lykas albumin, α1-antitrypsin, transferrin, haptoglobulin, immunoglobulin G en immunoglobulin A), dy't ynterfiere mei it skieden fan miel molekulargewichtproteinen yn IEF, wurdt it oanbefelle om se te ferleegjen fan it serum mei in ferplichting kolom.

Protein ekstraksje fan plantgewebe

Frisse, sêfte plantige tissue, bygelyks moos ensfh., Kinne makliker trochbrekke wurde troch it ferdwûnen fan 'e ljeppe materiaal yn lysis-buffer foar sonication. Tûke, ligenige plantewissen, lykas sied, feestadels ensfh. Moatte grûn droegen wurde. Guon hurde, houtkrêftige materialen moatte frozen en grûn yn floeibere azogens foardat it oannommen wurdt troch sonication. Foar plant-cell-kultuerfermiddens is in ultrasoanlike behanneling tusken 30 en 150 sekonden yn in Lysypuffer meast genôch. Folle materiaal lykas boarstkernen sieden ferfange in mear yntinsive sonication as hjirûnder beskreaun.

Protokol foar ultrasonic ekstraksje fan albumin fan koarnensamen

Ultrasonic tissue homogenizer UP400St mei S24d40 - foar proteinferwikkeling fan plant en diergewebe (Klik om te fergrutsjen!)Foar de ultrasonicproteine-ekstraksje fan albumin fan it fine-ierd koartsamen siedpudding, wurde 10 g ûntweechde koarnpudding-siedpudding en 100 ml deionisearre wetter as folslein tafoege yn in 250mL glassbeverker. De eauwinning is yn twa stappen: Earst is de echte probleem oankundige mei in probe-type ultrasonicator UP400St (400W, 24kHz) mei montearre sonotrode S24d7. De glêzbrêker wurdt yn in kâld wetterbad pleatst yn 'e ultrasonic homogenisaasje. De ynstelling fan de ultrasonicator UP400St Mei de plugable temperatuer sensor soarge derfoar dat de temperatuertemperatuer altyd ûnder 30 ° C hâlden wurdt. Troch de krekte temperatuerkontrole by de sonication, wurdt in denaturation fan albumin ferwidere. Twadder waard ekstraksje mei in mingd op 200 rpm en 30 ° C foltôge. Hjirnei wurdt de beuker oerbrocht nei in thermostatyske shaker. Globulin wurdt troch dialysis mei destillearre wetter fuortsmiten. Nei de globulinsûntstekking kin de protein-ûntwerp foar it bepalen fan it albumin profyl focht wurde en wurdt dêrnei oanpast oan pI = 3.0 mei 0,1 M HCl foar albumin koagulaasje. De fêste fase wurdt ôfsletten troch sintrifugaasje op 5000 g, 20 ° C en opnij opwûn yn deionisearre wetter. Albumin koagulaasje wurdt twa kear dien om de proteinferliking te ferheegjen yn 'e albumin konsintraat.

Ultrasonyske alkalineproteine-ekstraksje foar it opstellen fan protein-konsintraat fan rice bran lit sjen dat de ultrasoanlike behanneling resultaat yn hegere proteïne-rendemint yn in folle koartere ekstraktiid – yn ferliking mei konvinsjonele ekstraktemetoaden.

Ultrasonic-apparaat VialTweeter foar proteinferwikkeling fan tissueproblemen (Klik om te fergrutsjen!)

VialTweeter foar yndirekte sonication.

foardielen

  • fluch
  • Hoare rendemint
  • heech effisjint
  • Sekuere kontrôle oer parameters
  • reproduzele resultaten
  • lineêre skalberheid

Sample preparation protocol foar funksjonele iNOS-enzyme

Om folslein funksjonele iNOS-enzyme te krijen (bgl. Foar drug-screening) wurdt it neikommende protokol oanbean: De seltsof suspension moat op iis pleatst wurde, UP100H by 10 μm amplitude yn fytsmodus fan 5 sek. sonication en 25 sek. rêst op iis. De proseduere moat opnij besprutsen wurde. 3 kear. De rêstende tiid yn tusken sinningsyncyklussen feroaret de temperatuerferheging en sil sadwaande it risiko fan de denaturaasje ferminderje.

Ultrasonic Protein Solubilisaasje

Sonication kin de probleem-solubilisaasjeproses fersiferje, wat normaal meardere oeren nedich is. Om de probe net te hurderjen en beskerming fan eagles en feroarings yn oplossings fan urea te foarkommen, moatte de ultrasone bursten net langer duorje as in pear sekonden.

Algemiene ynstruksjes

Temperatuer control: Om te garandearjen fan in hege proteïneaazje sûnder thermyske dematuering, moat temperatuer yntrekking kontrolearje. Hielscher's state-of-art ultrasone homogenisers – ek wol ultrasoan-desintegrator neamd – binne krekt regelbaarlik. Se komme mei in plugable temperatuer sensor. Yn de ynstellingsopsjes fan de ultrasoanlike homogenizer kin in maksimum temperatuer ynsteld wurde. As dizze temperatuermax berikt is, stopet de ultrasonicator automatysk oant it probleem ferdwûn is.
buffer: De keuze fan in gaadlike puffer en it rjochte volume fan puffer feroare fan tissue nei tissue en moat útfine wurde troch probearjen-en-flaterproses.
Isolaasje / wjerstân: Proteins lysates kinne befetsje fan eksimplaren fan biomolekulen lykas DNA of kohdhydraten, dy't kin wurde troch proteinefermienskip (deoxycholate-trichloroacetic acid) of bufferferwizings.

Chittapalo en Noomhorm (2009) melde dat proefine-rendemint mei help fan sonication te fergrutsjen en dat de ultrasone-tissue-homogenisaasje en lysisprosessen besteande ekstraasjeprosessen ferminderje kinne – it mooglik meitsjen foar nije kommersjele mooglikheden.

Sound beskerming mei Hielscher syn lûd omwâling SPB-L en ultrasone apparaat UP200St. (Klik om te vergroten!)

Ultrasone tissue homogenizer UP200St foar effisjoneel ekwinning

Precise control of the ultrasound treatment (click to enlarge!)

Blêderlike kontrôle foar prestiizje operaasje en kontrôle fan it oandwaningproses

Ultrasonyske foarsjenning foar protte ekstraksje

Hielscher Ultrasonics biedt in breed oanbod fan ultrasonyk homogenisers foar it ûntbrekken fan sellen, tissues, baktearjen, mikroorganismen, dierens en sporen.
Hielscher laboratlas ultrasonicators binne machtich en maklik te operearjen. Buurt foar 24/7 operaasje, wurde se ûntwurpen as robuste en effisjintelike labels en bank-top-apparaten. Foar alle apparaten kin de enerzjyútfier en de amplitude krekt regele wurde. It breedte fan accessoires Iepenje opsetige opsjes. De digitale apparaten lykas VialTweeter, Uf200 ः t, UP200St, en UP400St hawwe in yntegreare temperatuerkontrôle en in ynboude SD-kaart foar automatyske data opnaam.
Foar de yndirekte, cross-contamination-fergees en simultane sinifikaasje fan meardere samples, biede wy it VialTweeter of de ultrasone CupHorn.
Ofhinklik fan jo oanfraach, materiaal en probleemvolumin, jouw jo it meast geskikte opset foar jo probepop. Kontaktje ús hjoed!

Kontakt mei ús opnimme! / Freegje ús!

Brûk asjebleaft it formulier hjirûnder, as jo freegje om ekstra ynformaasje oer ultrasoan-homogenisaasje te freegjen. Wy sille bliid wêze dat jo in ultrasone systeem biede oan jo easken.









Besykje ús Privacy Policy.


Literatuer / Referinsjes

  • Chittapalo T, Noomhorm A (2009): Ultrasonyske assistint alkalêre ekstraksje fan eagje út defattearre reiskoers en eigenskippen fan de protein-konsintraasjes. Int J Food Sci Technol 44: 1843-1849.
  • Simões, André ES:; Pereira, Diane M .; Amaral, Joana D .; Nunes, Ana F .; Gomes, Sofia E .; Rodrigues, Pedro M .; Lo, Adrian C .; D'Hooge, Rudi; Steer, Clifford J .; Thibodeau, Stephen N .; Borralho, Pedro M .; Rodrigues, Cecilia MP (2013): Effiziente herinnering fan protinen út meardere boarne samples nei trizol of trizol LS RNA ekstraksje en lange termyn opslach. BMC Genomics 2013, 14: 181.


Facts Worth Knowing

Proteomics

Proteomics is it ûndersyksfjild dat ûndersiikret protivinen en it proteome. Proteins folje in protte fariant fan wichtige funksjes yn organismen. De proteome is de folsleine set fan eauwen dy't troch in genome tiid útdrukt wurdt troch in genom, sel, tissue, of organisme. De proteom ferfarret mei tiid en ûnderskate easken, of stressigens, dat in sel of orgisme ûndergie. Mear spesifyk is it set fan beskreaune protinen yn in beskate soarte of sel of organisme, op in bepaalde tiid, ûnder definiearde betingsten. De term is in mienskip fan protten en genom. Proteomics is de stúdzje fan 'e proteome.

Protein

Proteins binne grutte biomolekulen, saneamde makromolekulen – dy't komponearje fan ien of mear lange keamers fan amino-sûrreinsjes. Proteinen binne oanwêzich yn alle organismen fan sawol fegetarysk as dierlike oarsprong, en binne wichtich foar de measte biologyske funksjes. Om't protten in protte biologyske ynformaasje befetsje, wurde se útwreide foar analytyske doelen, bygelyks foar protomyk ûndersyk. De wichtichste funksje dy't troch proefprizen útfierd wurdt ûnder oaren de katalysis fan metabolike reaksjes, DNA-replikaasje, antwurd op stimulâns, en it transport fan molekulen fan ien lokaasje nei de oare. Proteinen ûnderskiede fan elkoar yn it foarste plak yn har folchoarder fan amino-aciden, dy't troch de nukleotide-seker fan har genen ôfdiktearre binne en dy't normaal in protte resultaat falle yn in spesifike trije-dimensionale struktuer dy't har aktiviteiten bepaalt. Proteins binne – neist peptiden – one of the key components of food. Dêrom is protomyomie in krêftich ynstrumint yn 'e fiedingswittenskip om prosessen, fiedselsfeiligens en nutrike evaluaasje te optimisearjen.

Gel elektrophoresis

Gel elektrophoresis is de wichtichste metoade foar skieding en analyze fan makromolekulen lykas DNA, RNA en proteins, lykas har fragminten, basearre op har grutte en fergoeding. It wurdt brûkt yn klinyske chemie om ûndersiken te ûnderskieden fan fragen en / of grutte (IEF agarose, yn essinsje grutte unabhängige) en yn biochemistry, molekulêre biology en proteomia om in mingde befolking fan DNA en RNA fragminen te ûnderskieden, om de grutte fan DNA te skatte en RNA-fragminten of om proteins los te meitsjen.

cell Kulturen

Cell-kultuer is it kontrolearjen groeiende proses dêr't de sellen ûnder kontrolearre betingsten kultiveare wurde. Selskultuerbeheardingen fariearje foar elke sertifikaat. Yn 't algemien bestiet it miljeu fan in sel kultuer fan in passende skip (bygelyks Petri dish) mei substrat of medium dat it wêzentlike nutringen leveret (amino-acids, kohohydraten, vitaminen, mineralen), groevenfaktoren, hormonen en gassen (CO2, De2), en regelet de fysio-gemyske omjouwing (pH-buffer, osmota-druk, temperatuer). De measte sellen hawwe in oerflak of keunstmjittich substrat nedich, wylst oare selskultueren fergees kultivearre wurde kinne yn kultuermienskip (opliedingkultuer, selsynstelling).
Massekultueren fan dierzellige linen wurde brûkt yn bedriuwsfiering fan virale vaccine en oare biotechnology-ôflaat produkten. Human stem-sellen wurde kulturearre om it oantal sellen út te wreidzjen en de sellen te ûnderskieden yn ferskate somatyske sellentypen foar transplantaasjedoelen.

tissue Samples

De term tissue beskriuwt in cellulêre tuskentiid, dêr't it selma materiaal op organisatoarynivo is tusken sellen en in folslein oargel. Yn tissue, fergelykbere sellen, fan deselde oarsprong dy't meiinoar in spesifike funksje útfiere, wurde gearbrocht. Troch it funksjonele groep fan meardere gewoazen binne de komplekse struktuer fan organen foarme.
Tissue wurdt samplearre foar ûndersyk yn biology, histology / histopathology, parasitology, biogemyst, immunhistochemyme en ek te kultivearjen en te ûntnimmen fan DNA. It kin ûnderskiede tusken dier (subdivision: sûchdekker) en plantgewicht. Animal tissues binne groepearre yn 'e fjouwer grûntypen fan konkurrint, muscle, nerveus, en epitheliale tissue. Plantsje is ûnderdield yn de neifolgjende trije tissue-systemen: de epidermis, it grûnwet, en it fassile tissue.
Tissueproblemen kinne fanwege bist of plantige stikken makke wurde, bygelyks bone, muscle, blêden, ensfh.

Body Fluids

Bloed, serum, plasma, serebrospinal fluid, spiis en synovial fluid binne lichaamfluids, dy't in grutte boarne foar diagnostysk relevante ynformaasje biede. Dêrom is in oprjochte tarieding fan lichaamfluidproblemen foar analyse wichtich. De earste swierrichheid is ferbûn mei it breed dynamysk oanbod fan komponinten dy't yn lichaamfluids oanwêzich binne.

Bestimming fan konsintraasje

Bradford assay, Lowry assay en bicinchoninic acid (BCA) assay binne gewoane assays om de konsintraasje fan eauwen te bepalen. Bovine serum albumin (BSA) is ien fan 'e meast brûkte proteinsternamme.

Lysis Buffer

Lysis-buffer moat keazen wurde neffens it sel of materiaal (tissuekultuer, plant, baktearje, fungi, ensfh.), En oft de sellen yn in struktuer binne en de type struktuer. In breed oanbod fan lysis-buffers foar ekstraksje fan protten, membranen en organen wurde formulearre mei ien of mear detergents. It spuitret wurdt meast keazen troch problemen-en-flater tests of – ynsafier beskikber – neffens in besteande eauwinningprotokol. It spiisgroep moat kompatibel wêze mei de tissue boarne en de proteins. Yn it algemien wurdt it meartstige spuitsapparat dy't wurket foar in spesifike tissue / protein, wurdt keazen om 't de maksimalisearjende funksjonaliteit fan' e extract bewarre wurde. Fierder hâldt in middel fan in middel fan membranen en organellen in mild reinigingsmiddel de membrane yntakt. Faak brûkte detergents yn lysis-buffers binne meast netionich of zwitterionich, lykas CHAPS, deoxycholate, Triton ™ X-100, NP40, en Tween 20.
Bygelyks kinne tissue lykas brain, lever, darm, nier, siel ensfh. Kinne gewoan bufferje mei RIPA – lykas protease-ynhibitoren en DTT (bygelyks foar gel elektrophoresis) wurde opnommen.
Lysis-buffer foar skeletaal muskelgewicht (iiskâld): 20 mM Tris (pH 7,8), 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 1 mM MgCl2, 1% Triton X-100, 10% (w / v) glycerol, 1 mM EDTA , 1 mM dithiothreitol, supplementearre mei protease- en phosphatase-inhibitor-cocktail
Tabel foar mienskiplike puffer en har pH-berik. Op it algemien wurde dizze pufferen normaal brûkt by konsintraasjes fan 20-50 mM.

buffer pH-berik
Sitroensoer – NaOH 2.2 – 6.5
natrium Col · limes – Sitroensoer 3.0 – 6.2
Sodiumacetat – jittiksoer 3.6 – 5.6
Cacodylsoarium sodium sâlt – HCL 5.0 – 7.4
MY – NaOH 5.6 – 6.8
Natrium dihydrogen fosfaat – disodium hydrogen fosfaat 5.8 – 8.0
Imidazole – HCL 6.2 – 7.8
MOPS – Koh 6.6 – 7.8
Triethanolaminehydrochloride – NaOH 6.8 – 8.8
Tris – HCL 7.0 – 9.0
HEPES – NaOH 7.2 – 8.2
Tricine – NaOH 7.6 – 8.6
natrium tetraborate – boarsoer 7.6 – 9.2
Bicine – NaOH 7.7 – 8.9
glycine – NaOH 8.6 – 10.6

De measte buffers jouwe in pH-ôfhannelje mei temperatuer. Dit is benammen wier foar Tris-buffers. De pKa feroaret fan 8.06 oant 25 ° C oant 8,85 by 0 ° C.
(pH en pKa fan in puffer: pH mjit de konsintraasje fan wetterstof-ionen yn in wittenskiplike oplossing. pKa (= sider dissociation konstante) is in relatearre, mar spesifike maat, om't it helpt om te praten hoe't in molekûl op in spesifike rjochte wurdt pH-wearde.)

TRIZOL

TRIZOL is in gemyske oplossing dy't brûkt wurdt om RNA / DNA / protein te ûntfangen yn 'e guonidinium-thiocyanat-phenol-chloroform-ekstraksje. It brûken fan ultrasjonele assistinte TRIzol-ekstraksje-resultaten yn hege DNA, RNA, en protein leveret út deselde echte sample en biedt dêrmei oare ekstraksjemetoaden.